雄激素受体抑制剂恩杂鲁胺对山羊卵泡颗粒细胞增殖凋亡的影响

旨在通过使用恩杂鲁胺探究雄激素受体(AR)对山羊卵泡颗粒细胞增殖凋亡的影响。本研究首先对山羊卵泡颗粒细胞进行体外分离培养,然后利用显微镜观察和CCK8探究颗粒细胞的恩杂鲁胺适合培养浓度;之后将试验分为3个组,即空白对照组(不做处理)、阴性对照组(DMSO处理)和试验组(恩杂鲁胺处理),每个组均设置3个重复;然后利用EDU检测颗粒细胞的增殖情况,使用Caspase3活性与细胞凋亡检测试剂盒检测颗粒细胞的凋亡情况,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测颗粒细胞增殖凋亡相关基因和蛋白的表达情况。结果表明,AR抑制剂恩杂鲁胺能够显著地抑制颗粒细胞的增殖和降低颗粒细胞中CCND1、PCNA和MKI67基因的mRNA水平,并且还能够显著抑制CCND1、PCNA和β-catenin蛋白的表达;此外,恩杂鲁胺还能够促进山羊卵泡颗粒细胞的凋亡,显著提高山羊卵泡颗粒细胞中BAX和BCL2的mRNA水平,但不影响BAX和BCL2的蛋白表达,另外恩杂鲁胺虽然没有影响CASP3基因的mRNA水平但能够提高Caspase 3的活性。这些结果表明,恩杂鲁胺抑制AR活性后能够影响颗粒细胞中β-catenin、PCNA、CCND1、Caspase 3等的表达,参与调控颗粒细胞的增殖凋亡。

和枢消积方对人肝癌细胞系HepG2增殖凋亡的影响

目的探讨和枢消积方对人肝癌细胞系HepG2增殖凋亡的影响,揭示可能的分子机制。方法使用和枢消积方作用于人肝癌细胞系HepG2,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)、平板克隆实验检测细胞增殖能力。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(BAX)、丙型肝炎病毒(HCV)非结构5A蛋白(NS5A)反式激活基因13(NS5ATP13)及蛋白激酶B(AKT)/糖原合酶激酶(GSK)/雷帕霉素靶蛋白(MTOR)相关通路蛋白的表达水平。结果和对照组相比,和枢消积方各组可使HepG2细胞活性、增殖率显著降低(P<0.05);同时可上调BAX的蛋白表达,下调BCL-2及磷酸(p)-AKT、p-GSK、p-MTOR及NS5ATP13的表达(P<0.05),呈浓度依赖性。结论和枢消积方可以抑制HepG2细胞的增殖并诱导凋亡,这可能与和枢消积方抑制NS5ATP13的表达,继而抑制AKT/GSK/MTOR信号转导通路的活化有关。

中草药复方制剂对青脚麻鸡法氏囊免疫功能、抗氧化性及增殖凋亡基因表达的影响

试验旨在研究由金银花、黄连、蒲公英等药材组成的中草药复方制剂,对青脚麻鸡法氏囊组织结构、抗氧化功能、细胞因子和抗体分泌及增殖凋亡相关基因(PCNA和Caspase-3)表达的影响。采用单因子试验设计,将400羽青脚麻鸡按照体重相近原则分为对照组(基础日粮)和试验Ⅰ-Ⅲ组(分别添加0.5%、1.0%和1.5%中草药复方制剂),每组5个重复(n=20),试验期56 d。结果表明,28日龄时,添加1.0%中草药复方制剂可增加青脚麻鸡法氏囊细胞因子(IL-2和IFN-γ)、IBDV抗体和GSH-Px含量及PCNA mRNA和蛋白表达量(P<0.05),降低Caspase-3 mRNA和蛋白表达量(P<0.05)。56日龄时,添加1.0%中草药复方制剂可增加青脚麻鸡法氏囊IFN-γ、IBDV抗体和GSH-Px含量(P<0.05),降低MDA含量及Caspase-3蛋白表达量(P<0.05)。显微观察可见,28和56日龄时,添加1.0%中草药复方制剂可显著增加法氏囊小叶和淋巴小结面积(P<0.05),降低法氏囊Caspas-3阳性细胞数量,说明日粮中添加1.0%中草药复方制剂对法氏囊组织结构及免疫抗氧化功能均有明显改善,对法氏囊增殖和凋亡相关基因表达有明显调控作用。文章分别从分子和组织水平揭示中草药复方制剂对青脚麻鸡法氏囊生长发育和免疫功能的影响及可能机制,为新型中草药复方制剂研发及其在青脚麻鸡生产中的应用提供科学依据。

子宫内膜癌患者病灶超声造影成像检查结果、增殖凋亡基因编码蛋白表达及其相关性分析

目的探讨子宫内膜癌病灶超声造影参数、病灶组织增殖凋亡蛋白表达变化及其相关性。方法选择79例子宫内膜癌患者为子宫内膜癌组,53例子宫肌瘤患者为子宫肌瘤组。两组患者均行超声造影成像检查,记录病灶峰值强度(Peak)、达峰时间(TTP)和造影剂平均渡越时间(MMT)。均行子宫切除术,留取病灶组织,采用Western blotting法测算两组病灶组织Survivin、Bcl-2、Bax、Beclin1、CDK4、CDK6蛋白相对表达量。结果子宫内膜癌组病灶Peak、MTT、TTP均高于子宫肌瘤组病灶(P均<0.05)。子宫内膜癌组病灶组织Survivin、Bcl-2、CDK4、CDK6表达量高于子宫肌瘤组(P均<0.05),Bax和Beclin1蛋白表达量低于子宫肌瘤组(P均<0.05)。子宫内膜癌患者病灶Peak与病灶组织Survivin、Bcl-2、CDK4、CDK6表达量均呈正相关(r分别为0.704、0.692、0.737、0.730,P均<0.05),与Bax和Beclin1蛋白表达量均呈负相关(r分别为-0.687、-0.709,P均<0.05);MTT与病灶组织Survivin、Bcl-2、CDK4、CDK6表达量均呈正相关(r分别为0.689、0.731、0.725、0.694,P均<0.05),与Bax和Beclin1蛋白表达量均呈负相关(r分别为-0.714、-0.698,P均<0.05);TTP与病灶组织Survivin、Bcl-2、CDK4、CDK6表达量均呈负相关(r分别为-0.706、-0.725、-0.723、-0.701,P均<0.05),与Bax和Beclin1蛋白表达量均呈正相关(r分别为-0.696、-0.719,P均<0.05)。结论与子宫肌瘤患者相比,子宫内膜癌患者病灶超声造影参数Peak、MTT、TTP较高,病灶组织Survivin、Bcl-2、CDK4、CDK6表达量较高,Bax、Beclin1表达量较低。子宫内膜癌患者病灶Peak、MTT、TTP与病灶组织增殖、凋亡蛋白Survivin、Bcl-2、Bax、Beclin1、CDK4、CDK6表达量有关。对子宫内膜癌患者病灶行超声造影成像检查有助于判断患者细胞凋亡相关蛋白表达情况。

微小RNA-145-5p对结肠癌细胞增殖凋亡和FSCN1表达的影响

目的探讨微小RNA-145-5p(miR-145-5p)对结肠癌细胞增殖、凋亡和Fascin-1(FSCN1)表达的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测人正常结肠上皮NCM460细胞和结肠癌HCT116细胞的miR-145-5p水平;体外常规培养HCT116细胞并分为对照组、过表达组和抑制组,过表达组转染miR-145-5p模拟物mimics,抑制组则转染miR-145-5p抑制物inhibitor,而对照组不作特殊处理。采用QPCR、活细胞计数CCK-8、AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术和Western blotting检测miR-145-5p水平、增殖活力、凋亡率和FSCN1水平;构建FSCN1基因3’端非翻译区(3’UTR)野生型和突变型重组psiCHECK2荧光素酶报告载体并通过双荧光素酶报告基因系统验证miR-145-5p与FSCN1的靶向关系。结果HCT116细胞的miR-145-5p水平为0.281±0.072,低于NCM460细胞的1.062±0.226(P<0.05)。与对照组的1.103±0.214相比,过表达组的miR-145-5p水平升高至4.159±1.080,而抑制组则降低至0.348±0.052;与对照组相比,过表达组转染48、72 h后的增殖活力降低,而抑制组则升高;与对照组的(7.539±1.413)%相比,过表达组的凋亡率升高至(17.126±4.274)%,而抑制组则降低至(2.658±0.725)%;与对照组的0.521±0.078相比,过表达组的FSCN1水平降低至0.243±0.034,而抑制组则升高至0.769±0.092;以上组间差异均有统计学意义(P<0.05)。与转染突变型FSCN13’UTR的荧光素酶报告载体相比,miR-145-5p mimics能降低FSCN13’UTR野生型的荧光素酶活性(P<0.05),但对突变型无影响(P>0.05)。结论miR-145-5p在结肠癌细胞中低表达并发挥抑癌作用,该miRNA可能通过靶向FSCN1来调控癌细胞的增殖并促进其凋亡,有望成为结肠癌的新型生物诊治靶点。

慢病毒介导的FoxA1高表达对乳腺癌MCF-7细胞株增殖凋亡探究

目的利用慢病毒载体,构建乳腺癌MCF-7高表达Fox A1细胞株,并初步探究Fox A1对乳腺癌MCF-7细胞株增殖凋亡的影响。方法将Fox A1基因重组构建慢病毒载体穿梭质粒EX-Z1010-LV201,经PCR和测序后在脂质体Lipofectamine2000介导下转染293T细胞包装慢病毒,嘌呤霉素筛选出稳定转染的细胞,Real-Time PCR法检测稳定转染MCF-7细胞株中Fox A1基因的表达水平,MTT及流式细胞术对比高表达Fox A1细胞株与对照细胞株增殖凋亡差异。结果 PCR扩增和测序结果证实成功构建Fox A1慢病毒载体并包装慢病毒,成功筛选出Fox A1高表达的乳腺癌MCF-7细胞系。MTT及流式细胞术结果显示:与对照组比较,上调Fox A1乳腺癌MCF-7细胞株增殖下降,凋亡率增加。结论成功构建了重组慢病毒载体,并筛选出稳定高表达Fox A1的MCF-7细胞株,Fox A1可能参与了乳腺癌MCF-7细胞株增殖凋亡调控,为下一步进行其机制探讨提供了依据。

桑葚花青素对S180移植瘤抑制效应及对细胞增殖凋亡影响的初步研究

目的研究桑葚花青素的体内外抗肿瘤作用。方法体内考察不同剂量的桑葚花青素对荷S180瘤小鼠体重抑瘤率及脾指数、胸腺指数和肝指数的影响。体外考察应用MTT法计算不同剂量的桑葚花青素对S180细胞株的生长抑制情况;采用流式细胞术检测桑葚花青素对S180细胞株的细胞周期与细胞凋亡的影响。结果 (1)不同浓度的桑葚花青素均有一定的抑制肿瘤的作用;桑葚花青素高剂量组与低剂量组比较,P<0.05;桑葚花青素高剂量组与阳性药组比较P<0.05。(2)阳性药物组和高剂量桑葚花青素组的脾指数及胸腺指数均明显高于空白对照组。(3)通过形态学观察,5-Fu阳性对照组和不同浓度桑葚花青素肿瘤细胞数量明显减少;且MTT实验表明,阳性药物组、低剂量组及高剂量组的肿瘤细胞生长抑制率分别为66.7%、54.2%及32.1%,阳性药物组与高剂量高于低剂量组(P<0.05)。(4)流式细胞术结果表明,桑葚花青素高剂量组、低剂量组及阳性药物组的肿瘤细胞处于S期的比例显著增高(P<0.05),而且各给药组细胞凋亡率也显著增高,与空白对照组相比,具有显著性差异(P<0.01)。结论桑葚花青素在体内外均有抗S180肉瘤的作用,值得更深入的研究。

环氧合酶-2抑制剂对人肝癌细胞增殖凋亡的研究

目的:评价分析环氧合酶-2(COX-2)抑制剂对人肝癌细胞的增殖凋亡作用。方法:采用免疫细胞学、逆转录聚合酶链反应对COX-2在肝癌细胞株中的表达进行检测,经MTT法观察COX-2抑制剂对肝癌细胞增殖的影响;经透射电镜、流式细胞仪对塞来昔布(Celecoxib)诱导肝癌细胞凋亡的作用、对细胞周期的影响进行研究。结果:Celecoxib对肝癌细胞抑制增殖、诱导凋亡呈现出明显的时间、剂量依赖性。Celecoxib作用于HepG2、Bel-7402时间为24 h和48 h的抑制率差异具有统计学意义(P<0.05)。相同浓度时,Celecoxib作用24 h、48 h、72 h肝癌细胞凋亡率差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:COX-2抑制剂Celecoxib对肝癌细胞抑制增殖、诱导凋亡呈现出剂量、时间依赖性。在今后的临床诊疗工作中,应对其给予足够的重视。

三种药物对体外培养子宫肌瘤细胞增殖凋亡及调控因子影响

目的 :探讨化瘤方、桂枝茯苓胶囊、RU4 86药物血清在体外培养的子宫肌瘤细胞中的作用机制。方法 :制作化瘤方、桂枝茯苓胶囊、RU4 86药物血清作用于体外培养的子宫肌瘤细胞 ,观察药物作用后子宫肌瘤细胞增殖、凋亡及其对调控因子的影响。结果 :在体外培养的子宫肌瘤细胞中应用化瘤方、桂枝茯苓胶囊、RU4 86药物血清后均能够使细胞的凋亡率增加 ,出现亚G1峰 ,降低S -M期的细胞比例 ,其作用以化瘤方最明显。此外三种药物血清均能降低体外培养的子宫肌瘤细胞的Bcl- 2表达 ,并增强Fas、Fas -L的表达。从基础实验中为药物的疗效性提供了客观依据。

Survivin在头颈鳞癌中对细胞增殖凋亡作用的研究现状

细胞增殖与凋亡是细胞进程中必需而又相互对立的机制.增殖与凋亡的平衡保障了成人正常发育和组织水平的体内平衡（homeostasis）.增殖和凋亡的失衡是肿瘤发生发展的重要机制.Survivin是凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein,IAP）家族成员之一,具有抑制细胞凋亡和促进细胞有丝分裂和细胞增殖的作用,与许多肿瘤关系密切[1～3].头颈部鳞癌（squamous cell carcinoma of the head and neck, SCCHN）是人类常见的恶性肿瘤之一,全世界发病率约为14/10万,占全身恶性肿瘤的16%～40%,每年的新发病例约为50万.在我国亦比较常见,约占全身恶性肿瘤的10%[4].本研究综述了Survivin的结构和生物学特性,着重阐述了其在头颈鳞癌中对细胞增殖凋亡的作用及治疗意义,并提出了目前存在的问题与展望.

增殖凋亡失衡与胃癌前病变的关系及中医药干预治疗

肿瘤的发生通常被认为是由于细胞原癌基因的激活和抑癌基因的失活，扰乱了正常的增生、分化的调控，并可导致细胞凋亡异常，从而促进肿瘤的发生。胃黏膜凭借凋亡与增殖之间的平衡维持其完整性，研究认为增殖和凋亡失衡与胃癌的发生密切相关。胃癌的发生是一个多步骤模式，经典模式认为其前期要经历慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生等胃癌前病变阶段。

miR-483-5p通过靶基因ERK1调控人类颗粒细胞增殖凋亡平衡

目的证明miR-483-5p及其靶基因ERK1参与调控人类颗粒细胞增殖凋亡平衡。方法 1体外培养人正常颗粒细胞,调控其miR-483-5p超表达,聚合酶链反应(PCR)及Western blot法检测ERK1的mRNA及蛋白表达情况;将包含野生型或突变型的ERK1 mRNA 3'UTR的DNA片段克隆在荧光素酶标记的质粒,共转染miR-483-5p mimics、controlmiR mimics和野生型、突变型重组质粒,检测其颗粒细胞相对荧光素酶活性;2将miR-483-5p mimics及ERK1 siRNAs单独及共同转染颗粒细胞,MTT法及TUNEL法分别检测三种情况下卵巢颗粒细胞的增殖、凋亡情况。结果 1 miR-483-5p超表达后,ERK1基因及蛋白表达均下降;与controlWt(野生型)转染组相比,miR-483-Wt组的荧光素酶活性显著降低;miR-483-Mut(突变型)与control-Mut转染组间荧光素酶活性的比较差异无统计学意义;2 miR-483-5p mimics与ERK1 siRNAs单独及共同转染颗粒细胞,三种转染条件下颗粒细胞增殖均显著受抑制、凋亡率显著升高,且三种作用效果差异无统计学意义。结论 miR-483-5p通过直接与靶基因ERK1结合,参与调控人类颗粒细胞增殖凋亡平衡。

Nucleostemin与卵巢癌增殖凋亡及化疗敏感性的研究进展

卵巢癌一直高居妇科恶性肿瘤病死率之首。卵巢癌细胞化疗耐药成为其临床治疗效果欠佳、病死率增加的根本性原因,因此寻找卵巢癌铂类药物耐药相关的机制对于提高卵巢癌化疗疗效至关重要。核干细胞因子(Nucleostemin)的病理生理作用主要涉及细胞的增殖及凋亡等方面。Nucleostemin信使RNA以及Nucleostemin蛋白在卵巢癌实体瘤中特异性高表达,并且与病理分级呈正相关。因此,深入研究Nucleostemin与卵巢癌化疗敏感性及分子机制十分关键。

同步热放化疗治疗中晚期宫颈癌的效果及对细胞增殖凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨中晚期宫颈癌患者应用同步热放化疗对其细胞增殖凋亡相关蛋白表达产生的影响。方法随机抽取64例中晚期宫颈癌患者,根据患者就诊顺序将其随机分为2组,参照组(n=32)患者接受同步放化疗,研究组(n=32)患者接受同步热放化疗。结果研究组患者治疗总有效率为65.62%,参照组患者治疗总有效率为46.87%,2组疗效差异有统计学意义(P<0.05)。治疗中研究组患者VEGF蛋白阳性表达强度明显较参照组患者VEGF蛋白阳性表达强度分布情况减弱(P<0.05)。治疗中研究组患者C-myc蛋白阳性率表达强度明显较参照组患者C-mycVEGF蛋白阳性率表达强度分布情况减弱(P<0.05)。结论中晚期宫颈癌患者应用同步热放化疗,可使肿瘤VEGF表达强度得到明显降低,使肿瘤血管形成减少,并可发挥肿瘤增殖及转移抑制效果,而且还可使C-myc蛋白阳性表达强度减弱。此外同步热放化疗还能够发挥协同增强作用,进而提升临床治疗效果。

大黄素对人肺腺癌A549细胞体外增殖凋亡及VEGF和TNF-α分泌的影响

目的为大黄素抗肺腺癌的临床应用提供理论依据。方法MTT实验检测大黄素不同浓度梯度(5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L,80μmol/L)和时间梯度(12,24,48和72h)处理后A549细胞的增殖活力;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术和Hoechst 33258染色法检测大黄素作用A549细胞后引起的细胞凋亡程度;应用酶联免疫吸附分析(ELISA)实验检测大黄素各处理组培养上清液中所含的VEGF、TNF-α的浓度。结果大黄素体外可浓度和时间依赖性地抑制人肺腺癌A549细胞的增殖活力及促进细胞凋亡,抑制A549细胞VEGF的表达和分泌,促进TNF-α的表达和分泌。结论大黄素具有抗增殖、促凋亡、抗血管生成等多种潜能,具有良好的抗人非小细胞肺癌特别是肺腺癌的临床应用前景。

雄激素对小鼠前列腺细胞增殖凋亡及相关增殖因子的影响

目的探讨外源性雄激素对小鼠前列腺细胞增殖凋亡及部分相关生长因子表达的影响,了解雄激素在前列腺生长发育中的作用。方法对20例睾酮处理的,以及20例空白对照昆明种雄鼠前列腺标本,采用流式细胞术检测细胞增殖指数、凋亡率及表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达水平。结果经雄激素处理后,小鼠前列腺细胞增殖指数明显升高(P<0.01),凋亡率明显降低(P<0.01),EGF标记率和表达水平显著升高(P<0.01),bFGF标记率和表达水平也明显升高(P<0.05)。结论雄激素可促进前列腺细胞增殖、凋亡的严重失衡以及促增生生长因子的高表达是导致小鼠前列腺增生的重要原因。

花姜酮对胃癌7901细胞株增殖凋亡的影响研究

目的:研究花姜酮对人胃癌7901细胞株增殖凋亡的影响及凋亡过程中B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和Bcl-2表达的变化。方法:胃癌7901细胞株培养接种,分为不给药的对照组和不同质量浓度花姜酮的给药组进行研究。通过四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验观察不同质量浓度花姜酮和时间对细胞增殖抑制的影响,不同花姜酮质量浓度下倒置显微镜观察7901细胞株细胞形态学变化,采用4',6-二脒基-2-苯基吲哚染色法检测细胞凋亡情况,采用逆转录聚合酶链式反应检测Fas mRNA和FasL mRNA的表达,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bax和Bcl-2的表达。结果:与对照组比较,不同质量浓度花姜酮均可抑制7901细胞的活性,且随着质量浓度和时间的增加,细胞增殖抑制率明显升高,具浓度依赖性;不同质量浓度花姜酮组中细胞形态均有明显改变,细胞逐渐皱缩、贴壁不牢,随着浓度增加其变化越明显,具浓度依赖性;不同质量浓度花姜酮组的细胞核染色质凝聚,逐渐出现凋亡,且随着浓度增加,细胞凋亡数目增多,具浓度依赖性;不同质量浓度花姜酮组中Fas、Fas L mRNA的表达显著升高,且随着浓度增加,Fas mRNA、Fas L mRNA的表达水平升高,具浓度依赖性;不同质量浓度花姜酮组中Bax的表达随花姜酮浓度增加显著升高,Bcl-2的表达随浓度增加显著下降,具浓度依赖性。结论:花姜酮可以抑制人胃癌7901细胞株增殖以及诱导7901细胞凋亡,其诱导细胞凋亡可能是通过上调Fas mRNA和Fas L mRNA表达,并上调Bax的表达、下调Bcl-2的表达来实现的。

基于对SGC-7901细胞Survivin、Bcl-2基因的调控探讨益气化瘀散结方影响胃癌细胞增殖凋亡的作用机制

目的:观察益气化瘀散结方对胃癌SGC-7901细胞增殖凋亡的影响,并通过益气化瘀散结方干预后凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2的表达变化探讨其相关作用机制。方法:体外培养SGC-7901细胞,采用益气化瘀散结方含药血清干预,细胞分为空白血清组及5%、10%、20%益气化瘀散结方含药血清组,药物干预后,CCK_8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Western-blot、Real-time PCR技术检测Survivin、Bcl-2蛋白及mRNA的表达变化。结果:5%、10%、20%益气化瘀散结方含药血清组SGC-7901细胞的增殖明显下降,与空白血清组比较,10%、20%浓度组差异显著(P<0.05),48 h为实验最佳干预时间点;5%、10%、20%益气化瘀散结方含药血清均能不同程度促进SGC-7901细胞凋亡,尤以10%、20%含药血清组差异显著(P<0.05);10%、20%浓度益气化瘀散结方含药血清组Survivin、Bcl-2蛋白及mRNA表达水平下降,与空白血清组比较差异显著(P<0.05)。结论:益气化瘀散结方能抑制胃癌SGC-7901细胞增殖、促进胃癌SGC-7901细胞凋亡,其机制可能与降低凋亡抑制蛋白Survivin、Bcl-2的表达相关。

SKA1对肾细胞癌细胞增殖凋亡的影响及其分子机制研究

目的研究SKA1在肾细胞癌中的表达情况,探讨其表达对肾细胞癌细胞增殖凋亡的影响及其分子机制。方法从癌症基因组图谱(TCGA)数据库收集肾细胞癌数据集,分析SKA1在肾细胞癌组织和正常肾组织中的表达差异及其与临床病理特征的关系和对预后的影响。收集2016年1月—2018年9月在新疆医科大学附属肿瘤医院就诊的72例肾透明细胞癌患者切除的肿瘤组织及癌旁组织,利用实时荧光定量PCR法检测SKA1的表达水平。体外培养的人肾细胞癌细胞系786-O和ACHN分别用shSKA1干扰慢病毒和对照病毒载体感染。CCK-8法检测细胞增殖活性;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;Annexin V-FITC检测细胞凋亡率。运用IPA@在线生物信息学软件,对基因表达谱芯片检测的差异基因进行信号传导通路及生物学功能分析。Western blot法检测各组细胞TNF-α、cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 9、p-Akt、p-mTOR蛋白水平变化。结果在各病理亚型肾细胞癌组织中SKA1的表达水平明显高于正常肾组织(P<0.01),与肾透明细胞癌和肾乳头状细胞癌患者的T、N、M(TNM)及AJCC分期有关(P<0.01)。SKA1高表达患者总生存期明显短于低表达患者(P<0.001)。组织样本研究结果证实,SKA1在肾透明细胞癌组织中表达水平高于癌旁组织,与TCGA数据库分析结果一致。与对照组相比,感染shSKA1慢病毒的肾细胞癌细胞增殖能力明显下降,凋亡细胞比例增加(P<0.01)。IPA@分析发现,生物功能富集排名第一的是细胞生长与增殖,TNF被强烈激活,PI3K/Akt/mTOR通路信号分子被显著抑制。Western blot实验结果证实,SKA1干扰组中TNF-α、Caspase 3和Caspase 9表达水平显著上升,而与细胞增殖相关的通路信号分子Akt和mTOR的磷酸化表达水平显著下调,与富集分析结果相一致。结论SKA1是肾细胞癌预后不良因素。降低肾细胞癌中SKA1表达能减弱肾细胞癌细胞增殖,同时促进凋亡,其机制可能与TNF-α激活和PI3K/Akt/mTOR通路分子磷酸化水平抑制有关。

TWIST1基因通过调节mTOR信号通路对口腔鳞癌Tca8113细胞增殖凋亡的影响

目的:研究TWIST1基因对口腔鳞癌细胞增殖、凋亡的影响以及mTOR信号通路的调控作用。方法:构建shTWIST1质粒(sh-TWIST1)和阴性对照质粒(shRNA),利用Lipofectamine 3000转染试剂分别将构建好的两种质粒转染至口腔鳞癌Tca8113细胞中,以只加入转染试剂的Tca8113细胞作为空白对照(Control)。QRT-PCR法检测Tca8113细胞中TWIST1mRNA水平;CCK-8法检测TWIST1对Tca8113细胞活力的影响;Edu染色法检测TWIST1对Tca8113细胞增殖的影响;TUNEL染色法检测TWIST1对Tca8113细胞凋亡的影响;ELISA法检测TWIST1对Tca8113细胞中Beclin1、LC3水平的影响;Western blot法检测TWIST1对Tca8113细胞中p-mTOR和P-P70S6K蛋白表达情况的影响。结果:与阴性对照组和空白对照组相比,shTWIST1质粒组Tca8113细胞中TWIST1 mRNA水平下降,细胞活力和增殖能力明显提高,其凋亡能力随之下降;Tca8113细胞中Beclin1水平下降、LC3水平升高;且p-mTOR和P-P70S6K蛋白升高;而阴性对照组与空白对照组之间无差异。结论:TWIST1沉默后过度激活Tca8113细胞自噬反应,导致Tca8113细胞增殖,并抑制凋亡,其机制可能与激活mTOR信号通路有关。