黄芪影响缺氧微环境中骨髓间充质干细胞增殖活性的PI3K-AKT信号通路分析

基于PI3K/AKT信号通路研究黄芪对缺氧环境中骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的细胞活性的影响。分别以黄芪冻干粉溶液低、中、高剂量(100、200和300μg·mL^(-1))干预低氧浓度(10%)环境中成骨分化培养的BMSCs,通过高内涵实时成像系统观察BMSCs动态增殖情况及分化代数;进行无标记示踪模拟细胞运动轨迹,分析各组细胞运动速度、位移距离和路程的情况;通过激光共聚焦显微镜观察细胞线粒体膜电位,通过免疫荧光和RT-PCR检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白和基因表达水平的变化。结果显示:与对照组相比,10%低氧浓度条件下BMSCs增殖减慢、分化代数减少,运动速度减慢,位移距离和路程减少,线粒体膜电位活性降低,p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低,PI3K和AKT基因表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.01);与低氧组相比,黄芪冻干粉溶液干预后,能显著维持缺氧环境中BMSCs增殖和分化活性,运动活力升高,线粒体膜电位活性提高,p-JAK2、p-STAT3蛋白和PI3K、AKT基因表达升高,差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。黄芪可能通过激活PI3K/AKT信号通路维持缺氧条件下BMSCs的增殖活性。

软骨胶原蛋白肽的制备、特性及其成骨细胞增殖活性研究

为充分利用鲨鱼软骨资源,本研究以成骨细胞增殖率为指标,在优化促成骨细胞增殖胶原蛋白肽酶解工艺的基础上,分析酶解物的相对分子质量、氨基酸组成及稳定性等。结果表明,酸性蛋白酶为最优蛋白酶,且在酶添加量5 100 U·g^(-1)、料液比1∶50(g·mL^(-1))、酶解时间4.14 h和温度55℃条件下,得率为91.23%。所制酶解物促成骨细胞增殖率与水解度分别为141.23%与25.03%;鲨鱼软骨胶原蛋白肽具有一定的稳定性且对紫外光不敏感,适当加热可以提升其促成骨细胞增殖率,但温度过高会使增殖率显著下降;经胃肠模拟消化后,酶解物促成骨细胞增殖率显著下降;所制酶解物以疏水氨基酸为主,其蛋白肽分子量一般小于3 kDa,具有促进成骨细胞增殖、分化及矿化作用,以浓度1.0 mg·mL^(-1)时效果较佳。本研究可为鲨鱼资源精深加工和高值化利用提供一定理论依据。

含噻吩并[3,2-d]嘧啶的查尔酮类化合物的合成及其抗增殖活性

运用药物分子片段原理及拼合原理,设计并以70.1%~83.9%的收率合成了10个含噻吩并[3,2-d]嘧啶的查尔酮类衍生物,并对该类化合物的体外抗肿瘤细胞增殖活性进行初步研究。通过1HNMR、13CNMR和HRMS(ESI)确证了目标化合物的结构。以人肺腺癌细胞株A549、人肝癌细胞株HepG2和人前列腺癌细胞株PC-33种肿瘤细胞为测试细胞株,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法评价了目标化合物的抗增殖活性。结果表明,10个化合物对3种肿瘤细胞株均具有很好的抑制活性。其中,3-{4-[4-(2-氯噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羰基]苯基}-1-(3,4-二甲氧基苯基)丙基-2-烯-1-酮(Ⅶh)活性突出,对A549、HepG2和PC-33种肿瘤细胞株的半抑制浓度(IC_(50))分别为(0.87±0.05)、(2.43±0.16)和(2.02±0.10)μmol/L,优于阳性对照药索拉非尼。

GCN2/ATF4/BNIP3通路介导线粒体自噬对子宫内膜癌细胞增殖活性的影响

探究GCN2 /ATF4 /BNIP3通路介导线粒体自噬对子宫内膜癌细胞增殖活性的影响。方法 人子宫内膜癌细胞株Ishikawa为研究对象,随机分为四组,A组:为对照,不做任何干预,B 组:线粒体诱导(10μM CCCP)、C组:线粒体诱导+GCN2过表达(10μM CCCP+GCN2慢病毒转染), D组:线粒体诱导组线粒体诱导+GCN2-siRNA(10μM CCCP+GCN2-siRNA转染)。CCK-8法检测各组细胞增殖活性,qRT-PCR和Western blot分别检测GCN2、ATF4、BNIP3、LC3、PINK1的表达水平的变化。结果 与A组相比,B组在24h、48h和72h各时间点增殖活力均明显减少(P<0.05),与B组相比,C组在各时间点增殖活力均明显增加(P<0.05),D组在各时间点增殖活力均明显减少(P<0.05)。Western blot和qRT-PCR检测结果显示,与A组相比,B组细胞LC3、PINK1蛋白和mRNA均明显增加(P<0.05),GCN2、ATF4、BNIP3蛋白和mRNA表达无明显差异(P<0.05),与B组相比,C组GCN2、ATF4、BNIP3蛋白和mRNA表达均明显增加(P<0.05),LC3、PINK1蛋白和mRNA表达均明显下降(P<0.05),D组(P<0.05),GCN2、ATF4、BNIP3蛋白和mRNA表达均明显下降(P<0.05),LC3、PINK1蛋白和mRNA表达均明显增加(P<0.05)。结论 抑制GCN2 /ATF4 /BNIP3通路可通过激活线粒体自噬抑制子宫内膜癌细胞增殖。

半枝莲化学成分及其体外抑制乳腺癌细胞增殖活性

目的研究半枝莲Scutellaria barbata D.Don化学成分及其体外乳腺癌细胞增殖活性。方法半枝莲95%乙醇提取物采用聚酰胺、Sephadex LH-20、HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用MTT法对半枝莲各乙醇洗脱部位进行抗乳腺癌活性筛选,并评价各化合物对人乳腺癌细胞MDA-MB-231和人乳腺导管癌细胞株HCC38体外增殖的影响。结果从中分离得到9个化合物,分别鉴定为毛蕊花糖苷(1)、异毛蕊花糖苷(2)、白杨素(3)、野黄芩苷(4)、6-羟基木犀草素(5)、野黄芩素(6)、木犀草素(7)、异野黄芩素(8)、芹菜素(9)。大孔树脂50%乙醇洗脱部分抗乳腺癌活性最好。化合物7对MDA-MB-231细胞和HCC38细胞株体外增殖的抑制作用最好,其次为化合物5,而化合物4、6、9则表现出较弱的抑制作用。同时,化合物3、8对MDA-MB-231细胞体外增殖有较弱的抑制作用。结论化合物1~3为首次从该植物中分离。化合物5、7可以作为乳腺癌药物研究的潜在分子。

新型二硫醚蛇床子素衍生物的合成及抗增殖活性

为寻找高效低毒的抗肿瘤先导化合物,依据药物分子设计中的拼合原理,设计合成系列含二硫醚单元的蛇床子素衍生物,利用核磁共振氢谱和碳谱对其结构及性质进行表征和分析。采用MTT法对目标化合物进行体外抗肿瘤活性测试,结果显示目标化合物对各肿瘤细胞均具有一定的抑制活性。其中,对MCF-7细胞最为敏感,化合物的IC50值在10.8~17.1μmol·L^(-1)之间,其中5a的IC_(50)为10.8μmol·L^(-1),强于氟脲嘧啶(20.8μmol·L^(-1))和顺铂(13.9μmol·L^(-1))。初步构效关系表明,目标化合物对各肿瘤细胞增殖的抑制活性随着R直链烷烃上碳原子的增多而逐渐降低,当R为甲基时,目标化合物的抗增殖活性显著提高。

卡瑞利珠单抗联合mFOLFIRI方案对结肠癌的疗效及其对血管新生指标及恶性细胞增殖活性的影响

目的探讨卡瑞利珠单抗联合mFOLFIRI方案治疗结肠癌对血管新生指标及恶性细胞增殖活性的影响。方法选取结肠癌患者106例进行前瞻性研究,采用简单随机化法分为观察组(n=53)、对照组(n=53)。对照组采用mFOLFIRI方案治疗,观察组采用卡瑞利珠单抗联合mFOLFIRI方案治疗。比较两组疗效、不良反应、生活质量状况及治疗前后血清肿瘤标志物水平、血管新生指标、恶性细胞增殖活性。结果观察组疾病控制率(88.68%)高于对照组(73.58%)(P<0.05);两组不良反应发生率无显著差异(P>0.05);治疗后观察组血清CEA、CCSA-2、CA199、VEGF、VEGFR-2、Ang-2、PI3K、Akt水平低于对照组(P<0.05);观察组生活质量提高稳定率(83.02%)高于对照组(64.15%)(P<0.05)。结论卡瑞利珠单抗联合mFOLFIRI方案治疗结肠癌效果确切,不良反应可控,利于提高患者生活质量,其机制可能与调节血管生长因子VEGF、VEGFR-2、Ang-2表达及抑制PI3K/Akt通路过度激活有关。

山豆根多糖对猪圆环病毒Ⅱ型感染3D4/2细胞增殖活性及炎症信号通路基因调控作用的研究

试验旨在探讨山豆根多糖(Sophora subprostrate polysaccharide,SSP)对猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus type 2,PCV2)体外感染3D4/2细胞增殖活性及炎症信号通路相关基因的调节作用。试验设细胞对照组、PCV2模型组和不同浓度SSP作用组(SSP25组、SSP50组、SSP100组、SSP200组及SSP400组),采用CCK8法测定SSP作用12、24和48 h后各组细胞的增殖活性。设细胞对照组、PCV2模型组、SSP100组、SSP200组及SSP400组,采用qRT-PCR法测定SSP作用24 h时各组细胞内p38及p65 mRNA表达水平。结果显示,PCV2感染3D4/2细胞12、24、48 h后,与细胞对照组相比,PCV2模型组细胞活性极显著降低(P<0.01)。与PCV2模型组相比,PCV2感染3D4/2细胞12 h后,SSP200组及SSP400组细胞活性显著升高(P<0.05);PCV2感染3D4/2细胞24、48 h后,SSP100组及SSP200组细胞活性显著升高(P<0.05),SSP400组细胞活性极显著升高(P<0.01)。与细胞对照组相比,PCV2感染24 h后3D4/2细胞MAPK p38 mRNA、NF-κB p65 mRNA表达水平显著上升(P<0.05);与PCV2模型组相比,不同浓度SSP作用后,MAPK p38 mRNA、NF-κB p65 mRNA表达水平极显著下降(P<0.01)。研究表明,SSP能够升高PCV2感染3D4/2细胞活性,降低p38和p65通路基因表达,提示SSP可能通过调节NF-κB和MAPK等相关通路发挥抗炎抗病毒作用。

异黄酮Mannich碱衍生物的合成与抗增殖活性研究

本文以间苯三酚和对羟基苯乙酸为原料,经Friedel-Crafts酰基化、增碳关环以及选择性O-甲基化反应合成得到4’,7-二甲氧基金雀异黄酮(1)。再以4’,7-二甲氧基金雀异黄酮(1)为底物,在其C-6位与多种仲胺进行Mannich反应,合成了8个未见文献报道的4’,7-二甲氧基金雀异黄酮Mannich碱衍生物2~9。将化合物1~9对人宫颈癌细胞(Hela)、人乳腺癌细胞(HCC1954)和人卵巢癌(SK-OV-3)细胞进行抗增殖活性测试,结果表明部分4’,7-二甲氧基金雀异黄酮Mannich碱衍生物具有一定的抗癌细胞增殖生物活性。

紫杉醇/比伐卢定球囊涂层复合物对HCASMC和HCAEC体外增殖活性的影响

目的探讨紫杉醇/比伐卢定复合物(络风宁0号)对体外培养的人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)和人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)增殖的影响,为新一代中药单体复合药物涂层球囊(DCB)的研发提供依据。方法将HCASMC和HCAEC体外培养并传代至4~6代,根据药物干预分为紫杉醇(1μmol/L)组和紫杉醇/比伐卢定(PB)组,其中PB组所采用为1μmol/L紫杉醇配伍不同浓度比伐卢定(1/256、1/128、1/64、1/32、1/16、1/8、1/4、1/2和1 mg/ml),48 h后用MTT法检测各组HCASMC和HCAEC细胞的增殖活力,以筛选出紫杉醇与比伐卢定之间的最佳配比,抑制HCASMC增殖的同时不影响甚至促进HCAEC增殖,为内皮友好型中药单体复合DCB的研发提供实验数据支持。结果同紫杉醇组相比,PB组中紫杉醇配伍低浓度比伐卢定(1/256 mg/ml)即可增强紫杉醇对HCASMC增殖的抑制作用,该作用随比伐卢定浓度增高而增强,呈浓度依赖关系,差异有统计学意义(P<0.05);紫杉醇配伍低浓度比伐卢定(1/256和1/128 mg/ml)时对HCAEC增殖无影响(P>0.05),但比伐卢定浓度>1/128 mg/ml时对HCAEC的抑制作用较紫杉醇组增强,呈浓度依赖关系,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1μmol/L紫杉醇配伍1/128 mg/ml比伐卢定相较于单纯应用紫杉醇,体外培养的HCASMC相对增殖活性进一步下降至75%左右,同时HCAEC增殖活性不受影响,二者合用体现了中药配伍增效减毒的作用,可为新型内皮友好型中药单体复合DCB的研发提供思路和依据。

米糠多糖对环磷酰胺诱导免疫抑制鸡外周血T淋巴细胞增殖活性及疫苗免疫效果的影响

为探讨米糠多糖(RBS)对鸡免疫抑制状态的调节作用,将100只7日龄健康蛋用公雏鸡随机分为对照组、环磷酰胺(CTX)组和CTX+RBS低、中、高3个剂量组。从7日龄起,肌肉注射CTX,1日1次,连注3 d,从10日龄起,CTX+RBS组灌服RBS,1日1次,连续5 d。14日龄时各组鸡进行新城疫疫苗免疫。在10,21,28,35日龄,测定外周血T淋巴细胞增殖反应活性和ND HI抗体效价。结果显示,CTX组鸡的外周血T淋巴细胞增殖活性和ND HI抗体效价均显著低于对照组(P<0.01);CTX+RBS中、高剂量组鸡外周血T淋巴细胞的增殖活性均显著高于CTX组(P<0.05或P<0.01),但低于对照组(P<0.05或P<0.01);CTX+RBS中、高剂量组鸡的血清ND抗体效价均显著高于CTX组(P<0.05或P<0.01),且与对照组差异不显著(P>0.05)。证实,肌肉注射CTX可使健康雏鸡外周血T淋巴细胞的增殖反应活性和NDHI抗体效价显著降低,导致受试鸡免疫抑制;雏鸡口服一定剂量的RBS对CTX引起的细胞免疫和体液免疫抑制具有一定的拮抗作用。

续随子中千金二萜烷化合物抑制人妇科肿瘤细胞增殖活性的研究

目的检测大戟科植物续随子中分离纯化的3种千金二萜烷化合物Euphorbia Factor L1(1)、Euphorbia Factor L2(2)和Euphorbia Factor L3(3)对子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢透明癌和卵巢囊腺癌等5种人妇科肿瘤细胞增殖的影响,探讨了千金二萜烷化合物结构与抑制肿瘤细胞增殖活性之间的构-效关系。方法利用四唑盐(MTT)比色法测定阳性对照顺铂和3种化合物对子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢透明癌和卵巢囊腺癌等5种人妇科肿瘤细胞增殖的影响。结果发现Euphorbia Factor L1(1)和Euphorbia Factor L3(3)对子宫颈癌细胞的增殖具有抑制作用,EC50分别为16.74和1.01μmol.L-1;Euphorbia Factor L3(3)对人卵巢透明癌和人卵巢囊腺癌细胞的增殖显示中等程度的抑制活性;Eu-phorbia Factor L2(2)即使在100μmol.L-1的高浓度下,对5种肿瘤细胞的增殖不显示抑制活性。结论 Euphorbia Fac-tor L3(3)对人妇科肿瘤细胞的增殖显示抑制活性,推测千金二萜烷化合物抑制肿瘤细胞增殖活性与母核上的环外双键及邻位取代基有关。

小米米糠中抗癌细胞增殖活性蛋白的分离纯化

采用丙酮沉淀、硫酸铵沉淀、Q阴离子交换柱、SP阳离子交换柱、蛋白热变性法对小米米糠蛋白进行逐步分离纯化,并结合细胞增殖抑制实验(MTT法),筛选纯化出小米米糠中抗肿瘤活性蛋白(FMB)。体外抗肿瘤活性实验表明:不同质量浓度(0.025、0.05、0.075、0.1μg/μL)的FMB均可抑制人结肠癌细胞株DLD1和人宫颈癌细胞株HeLa的增殖,并且具有明显的剂量依赖性;而对正常人肝细胞HL-7702无明显抑制作用。倒置显微镜下观察细胞形态特征发现:经FMB处理48h后,DLD1和HeLa细胞出现细胞核明显皱缩、部分细胞漂浮死亡等凋亡特征;而对正常肝细胞株HL-7702无明显影响。

基于HepG2细胞模型的香菇柄粉多酚抗氧化及抗增殖活性

以人肝癌细胞HepG2为细胞模型,经过不同粉碎条件处理香菇柄粉后,研究香菇柄粉游离酚的细胞抗氧化及多酚抗增殖活性.结果表明：香菇柄粉游离酚的细胞抗氧化活性（cellular antioxidant activity,CAA）值为9.90～24.22 μmol QE/100 g,普通粉碎组最高,纳米超微粉碎组最低,CAA值随粉体粒径减小而降低（不经磷酸盐缓冲液（phosphate buffer saline,PBS）清洗）;气流超微粉碎组CAA值为0.65 μmol QE/100 g,普通粉碎组和纳米超微粉碎组未表现出细胞抗氧化活性（PBS清洗）.香菇柄粉游离酚的抗增殖活性（半数有效浓度（medianeffective concentration,EC50）值）为1.888～5.213 mg/mL,结合酚的抗增殖活性（EC50值）为2.225～4.751 mg/mL,气流超微粉碎处理对香菇柄粉结合酚的抗增殖活性有增强作用.

过氧化氢对骨髓间充质干细胞增殖活性的影响

目的观察过氧化氢(H2O2)对骨髓间充质干细胞的增殖活性的影响。方法使用密度梯度法分离大鼠骨髓间充质干细胞进行培养,以CD44鉴定后以不同浓度H2O2作用于MSC,建立MSC氧化损伤模型,通过MTT法检测MSC细胞损伤程度。结果在0.02%,0.04%,0.06%,0.1%,0.12%,0.17%,0.21%(V/V)浓度H2O2作用1h对MSC活性无影响,与对照组比较,差异无显著性(P>0.05);0.1%～0.21%浓度H2O2分别作用3,6和12h引起MSC增殖活性降低,呈量效依赖关系。结论0.1%～0.21%浓度H2O2作用3h后对MSC增殖起抑制作用,最佳H2O2作用浓度为0.12%和3h作用时间。

胃癌及癌前病变DNA含量与细胞增殖活性检测的临床意义

目的:探讨胃癌及癌前病变DNA检测对胃癌早期诊断的临床意义。方法:应用流式细胞术(FCM)检测了240例胃癌、癌前病变及对照组的胃粘膜细胞DNA含量(DI)、倍体和细胞增殖活性(PI)。结果:DI在重度肠上皮化生、Ⅲ级不典型增生及胃癌显著增加;重度肠上皮化生20%出现异倍体,Ⅲ级不典型增生及胃癌中分别有52.17%与71.42%出现异倍体;慢性萎缩性胃炎、重度肠上皮化生、不典型增生及胃癌PI显著增高。81例癌前病变者随访2年,15例病理诊断证实癌变,其中11例为DNA异倍体,4例为DNA二倍体,PI值也相应较高。结论:DNA检测对胃癌早期诊断是很有价值的临床生物学指标,有助于胃癌的早期诊断。

三种倍半萜类化合物体外抗肿瘤细胞增殖活性研究

利用四唑盐(MTT)比色法检测观察菊科植物中分离出的三种倍半萜类化合物,异土木香内酯(1),1氧--乙酰大花旋覆花内酯(2)和大花旋覆花内酯(3)对人脑神经胶质瘤细胞、肝癌细胞、人黑色素瘤和人乳腺癌脑转移肿瘤细胞生长的影响,探讨这三种倍半萜类化合物的体外抗肿瘤细胞增殖作用以及化合物结构与活性之间的构效关系。结果发现异土木香内酯对人脑神经胶质瘤细胞、人肝癌细胞、人和色素瘤细胞和人乳腺癌脑转移肿瘤细胞的增殖均有明显的抑制作用,1氧--乙酰大花旋覆花内酯和大花旋覆花内酯即使在100μmol/L的高浓度下,对四种肿瘤细胞的增殖不显示抑制活性,推测A环-开环可能是导致桉叶烷型倍半萜内酯的体外抗肿瘤细胞增殖作用消失或减弱的原因。

土木香中纯化的五种倍半萜类化合物抑制肿瘤增殖活性的研究

目的检测土木香中纯化的五种倍半萜化合物抑制肿瘤增殖的活性,并探讨化合物结构与活性之间的关系。方法应用MTT法测定五种倍半萜类化合物对体外培养人肿瘤细胞增殖的影响;应用小鼠移植性肝癌模型测定了异土木香内酯的抗肿瘤活性。结果化合物1(异土木香内酯)对U251SP细胞、HLE细胞和MM1-CB细胞的增殖显示较强的抑制活性;化合物2～5对各种实验用肿瘤细胞的增殖不显示抑制活性;化合物1对移植性肿瘤(肝癌H22)具有明显的抑制作用,并呈现较好的剂量依赖关系。结论异土木香内酯具有较强的肿瘤抑制活性;化合物2～5对肿瘤细胞增殖抑制活性丧失可能由于A-环和B-环之间的键裂开,形成一个大10元环,改变了原来的构象所致。

磁性附着体模拟静磁场对成骨细胞增殖活性和周期分布及凋亡率的影响

目的研究不同强度磁性附着体模拟静磁场对成骨细胞增殖活性、细胞周期及细胞凋亡的影响。方法通过模拟Magnedisc 800磁性附着体静磁场,对体外培养的SD大鼠成骨细胞进行3种强度(12.5、125、250mT)、持续不同时间的静磁场加载,检测成骨细胞的增殖活性,流式细胞术分析细胞周期分布和细胞凋亡率。结果成骨细胞加载3种强度的静磁场1、3、5、7、9d后,细胞增殖活性未发生明显改变,各组细胞生长趋势基本一致,静磁场作用无明显的剂量-效应关系。成骨细胞加载1、3、5、7d后,未发现静磁场对G0/G1期、S期、G2/M期细胞百分比、增殖指数及细胞凋亡率产生明显影响。结论磁性附着体静磁场在闭合磁路、磁体和衔铁的闭合过程中以及开放磁路下,对成骨细胞的增殖均无明显的促进和抑制作用,未改变细胞的周期分布和促进细胞凋亡的发生。

猪白细胞介素-6基因在大肠杆菌中的表达及其产物的促淋巴细胞增殖活性

为研究猪白细胞介素-6(IL-6)作为免疫佐剂的可行性,用IPTG诱导含有猪IL-6基因的BL21(DE3)LysS工程菌,表达的目的蛋白经超声波破碎,洗涤,8mol/L尿素变性溶解后,用固化金属亲和层析法纯化后用谷胱甘肽再氧化还原法进行复性,并用MTT法对复性的重组蛋白的生物学活性进行分析。结果显示,复性的重组猪IL-6具有良好的刺激淋巴细胞体外增殖的活性。说明重组猪IL-6在作为免疫佐剂方面有一定的应用价值。