墨汁染色在组织切片中的应用

墨汁染色通常用于检查脑脊液或分泌物涂片中的隐球菌，具有方便、快速、节约成本等优点，是涂片中检查隐球菌感染的首选方法。本文把墨汁染色应用于组织切片检查隐球菌感染，获得了较满意的结果。

隐球菌性脑膜炎的临床表现及墨汁染色联合隐球菌抗原检测的诊断意义

目的探讨隐球菌性脑膜炎的临床表现及墨汁染色联合隐球菌抗原检测的诊断意义。方法选取2018年1月至2019年6月本院收治的中枢神经系统感染患者40例。其中10例隐球菌性脑膜炎患者作为观察组,其他30例中枢神经系统感染患者作为对照组,比较两组患者临床症状表现。采用墨汁染色法和墨汁染色联合隐球菌抗原检测(联合检测)患者脑脊液中隐球菌阳性率,比较两种方法的阳性检测结果及敏感度。结果两组患者头痛、呕吐、发热、视力下降、盗汗、听力下降及意识水平下降等临床症状表现比较差异无统计学意义;观察组中联合检测阳性率为90.00%,高于墨汁染色的50.00%(P<0.05);联合检测敏感度为90.00%,高于墨汁染色的50.00%(P<0.05),两种检测方法特异度、阳性预测值及阴性预测值比较差异均无统计学意义。结论墨汁染色联合隐球菌抗原检测隐球菌性脑膜炎的阳性率及敏感度高,临床诊断价值较高。

墨汁染色新型隐球菌需注意的几个环节

近年来随着抗生素和免疫抑制剂使用的增多，真菌感染率呈逐年上升的趋势，新型隐球菌性脑膜炎（下称隐脑）也在逐年增加，而隐脑和结核性脑膜炎、病毒性脑膜炎在临床表现上没有明显的区别，仅靠临床表现鉴别较为困难，易造成误诊。

隐球菌墨汁染色标本的创新制作法——优化染色法

目的观察隐球菌墨汁染色标本优化染色法的效果。方法传统法将菌液与墨汁混合后封片;优化法将菌液经动物增菌、培养后再与墨汁混合,封片。两法各制片100张,进行效果比较。结果试验组优片90张,良片10张;对照组优片10张,良片20张,差片70张。传统染色法镜下所见,隐球菌荚膜结构模糊,细菌分布不均匀,墨汁浓度过淡或过浓,影响观察;优化染色法染出的标本镜下观察,隐球菌荚膜结构清晰,细菌分布均匀,芽生孢子结构多。结论优化法制作的标本有保留时间长、操作简便和特适用于实验室大批制片及教学等优点。

皮肤镜联合墨汁染色法在疥疮诊断中的价值

目的探讨皮肤镜结合墨汁染色法在疥疮诊断中的价值。方法选取2020年1—12月本院皮肤科门诊符合疥疮流行病学史和临床表现的患者343例。所有患者均采用3种诊断方法进行检查:刮片后显微镜镜检(刮片法)、单纯皮肤镜镜检(皮肤镜法)和皮肤镜联合墨汁染色镜检(联合法)。以刮片法阳性作为“金标准”,根据不同诊断方式绘制ROC曲线,并运用Cohen′s kappa分别比较皮肤镜法和联合法在疥疮中的诊断效能。结果ROC曲线分析结果表明,联合法的曲线下面积(AUC=0.835±0.026,95%CI:0.785~0.885)大于皮肤镜法(AUC=0.780±0.026,95%CI:0.728~0.832)。Cohen′s kappa一致性分析结果表明:皮肤镜法与金标准结果为“中等一致性”(Kappa=0.540,P=0.045,95%CI:0.207~0.764);联合法与金标准结果为“高度一致性”(Kappa=0.702,P=0.040,95%CI:0.181~0.819)。结论两种分析结果均显示皮肤镜联合墨汁染色法的诊断效果优于单纯皮肤镜镜检法。对于符合疥疮流行病学史和临床表现的患者,优先采用皮肤镜联合墨汁染色法是一种切实可行的检查方法,可以用于对疑似疥疮患者的初步筛查和诊断。

墨汁染色在肺泡灌洗液隐球菌检测中的应用

目的将印度墨汁染色用于检查肺泡灌洗液中的隐球菌感染,以提高呼吸道标本中隐球菌的涂片阳性率。方法采集患者血液及肺泡灌洗液,将血液直接接种血培养瓶,将肺泡灌洗液充分振荡呈液化状态,有利于隐球菌从包裹的黏液中游离出来,分别进行真菌培养和涂片,涂片经墨汁负染后光学显微镜检查,来检测肺泡灌洗液中隐球菌。结果血培养真菌阳性,经Vitek 2全自动微生物分析系统鉴定为新型隐球菌。肺泡灌洗液经印度墨汁染色后,在低倍镜下观察,黑色背景中可见透明荚膜包绕的酵母细胞,但肺泡灌洗液真菌培养未见生长。结论将墨汁染色用于肺泡灌洗液隐球菌感染检测,可获得满意的结果,具有很好的诊断价值。

直接墨汁染色在脑脊液培养阳性液中隐球菌检测的应用

目的将印度墨汁染色用于检查脑脊液培养阳性瓶中的隐球菌,以提高隐球菌的检测速度。方法将分离自浙江省丽水市人民医院2016年1月-2017年11月送检的23份脑脊液阳性培养液进行涂片革兰染色,对涂片检测疑似隐球菌阳性的培养标本,分别进行沙氏真菌培养和墨汁负染光学显微镜检查,比较两者的一致性,以提高隐球菌的检测速度。结果阳性培养液接种沙保罗培养皿的菌落经德国Bruker微生物质谱(MALDI-TOF)鉴定仪鉴定为新型隐球菌。阳性标本涂片经印度墨汁染色后,在低倍镜下观察,黑色背景中可见透明荚膜包绕的酵母细胞为隐球菌,与培养结果一致。结论将墨汁染色用于脑脊液培养阳性瓶中的隐球菌检测,可获得满意结果,可以提高检测速度,具有很好的诊断价值。

荧光染色法在真菌检测中的应用

目的探讨荧光染色法在真菌检测中的应用价值。方法选取232份临床样本,采用荧光染色、直接涂片、革兰染色、墨汁染色、真菌培养及KOH湿片法同步检测。结果在175份痰、咽拭子、白带、尿液和粪便等深部样本中,荧光染色法真菌阳性检出率(87.43%)高于直接涂片法(78.86%)和革兰染色法(74.29%)(P<0.05)。在27份皮屑和甲屑浅表样本中,荧光染色法真菌阳性检出率(85.19%)高于KOH湿片法(59.26%)和真菌培养法(55.56%),差异有统计学意义(P<0.05)。在30份脑脊液样本中,荧光染色法与墨汁染色法真菌阳性检出率差异无统计学意义(P>0.05)。结论荧光染色法简便、快速、特异性高,在真菌检测中具有一定的价值。

脑脊液细胞学迈-格-姬染色在隐球菌脑膜炎诊断中的价值

目的探讨脑脊液细胞学迈-格-姬(MGG)染色在隐球菌脑膜炎诊断中的价值。方法对笔者所在医院诊治的48例隐球菌脑膜炎患者脑脊液涂片墨汁染色、细胞学MGG染色检查结果及诊断进行分析。结果 48例隐脑患者首次脑脊液常规墨汁染色发现隐球菌33例,首次检出率为68.8%;MGG染色发现46例,首次检出率为95.8%。MGG染色诊断隐球菌脑膜炎的敏感度高于墨汁染色,差别有统计学意义(P<0.05)。结论脑脊液MGG染色检查对隐球菌的检出率可达95.8%,且可在脑脊液细胞学检查时一次完成,无需特殊染色,可作为中枢神经系统感染患者常规脑脊液细胞学检查。

伊文思蓝特异性染色技术快速鉴定新型隐球菌

目的探讨伊文思蓝特异性染色技术快速鉴定新型隐球菌在临床检验医学诊断工作中的应用。方法配制伊文思蓝特异性染色液,评估伊文思蓝特异性染色液的稳定性及特异性;用伊文思蓝特异性染色液对新型隐球菌、白色念珠菌等常见真菌及白细胞染色,综合评价其染色效果,进一步比较伊文思蓝特异性染色液、阿利新蓝染色液、墨汁对新型隐球菌的染色效果。结果新型隐球菌被伊文思蓝特异性染色液染成蓝色或深蓝色,白细胞及其他常见真菌不着色,易于将新型隐球菌与白细胞及其他常见真菌区分;伊文思蓝特异性染色液稳定性好,染色效果稳定,优于阿利新蓝染色和墨汁染色,伊文思蓝特异性染色能在计数板中计数新型隐球菌,阿利新蓝染色易凝集对计数有一定的影响,而墨汁染色则无法计数。结论伊文思蓝特异性染色技术快速鉴定新型隐球菌设备要求简单、方法快速敏感,有很好的特异性和稳定性,适合各类医院推广应用。

后交叉韧带断裂继发关节软骨退行性变的实验研究

目的 :通过实验观察单纯后交叉韧带 (PCL)断裂对膝关节骨与软骨的影响。方法 :新西兰大白兔 2 1只 ,分为实验组和对照组 ,每组 2 1个膝关节。实验组将一侧膝关节后交叉韧带切断 ,对照组为对侧膝关节单纯行关节切开术。术后分别于 6周、3个月、6个月取材 ,每个时间段 7只。通过墨汁染色、常规组织学、免疫组化及扫描电镜观察各组膝关节软骨退变的情况。结果 :实验组术后 6个月有明显膝关节退行性改变 ,墨汁染色显示实验组关节软骨退变程度手术后 6个月明显重于手术后 6周 (Hc =5 4 440 ,P =0 0 2 0 0 )。组织学改变显示 ,实验组术后 6个月内髁软骨可见范围较大的软骨纤维化 ,且达深层 ,细胞数量减少 ,Mankin评分平均 7 7。胫骨骨赘发生率高达10 0 % ,而且最大宽度均 >2mm。结论 :单纯切断后交叉韧带后膝关节退行性变随时间延长有逐渐加重的趋势 ,晚期预后不好 ,关节出现严重的骨性关节炎表现。

脑脊液细胞学检查在隐球菌性脑膜炎诊断中的应用

目的：探讨脑脊液细胞学检查在隐球菌性脑膜炎早期诊断中的应用价值。方法：对25例经病原学确诊的隐球菌性脑膜炎患者进行回顾性分析。结果：25例隐球菌性脑膜炎患者入院前有20例被误诊,其中误诊为结核性脑膜炎15例。采用脑脊液细胞学瑞吉染色法、直接涂片墨汁染色法、离心涂片墨汁染色法和培养法4种方法首次的阳性率分别为88%、48%、72%和40%;治疗后18例好转,3例恶化,4例死亡。经统计学比较,4组阳性率不完全相同（χ~2=15.45,P=0.001）。其中,脑脊液细胞学瑞吉染色法与直接涂片墨汁染色法比较有统计学意义,与离心涂片墨汁染色法比较无统计学意义。结论：隐球菌性脑膜炎的误诊率高,脑脊液细胞学技术首次病原学检测阳性率最高。另外,该技术还可评估患者的免疫反应状态,值得临床推广应用。

新型隐球菌性脑膜炎38例

目的 分析隐球菌性脑膜炎误诊的原因 ,探讨早期诊断方法。方法 采用回顾性方法对 38例新型隐球菌性脑膜炎临床进行分析 ,并对其中 2 5例误诊者原因进行探讨。结果 38例隐球菌性脑膜炎有 2 5例误诊。结论 隐球菌性脑膜炎早期易误诊 ,多次脑脊液离心涂片墨汁染色镜检是防止漏诊、误诊的关键。

三种检查方法对新型隐球菌性脑膜炎的诊断意义

目的探讨如何提高脑脊液中新型隐球菌的检出率,防止漏诊和误诊。方法脑脊液常规检查采用细胞计数板直接观察、墨汁染色涂片和真菌培养。结果 25例隐脑患者脑脊液常规检查中细胞计数板直接观察发现疑似隐球菌20例,经墨汁染色涂片发现22例,真菌培养出25例。结论三种检查方法如能有机地结合起来,就能对新型隐球菌性脑膜炎患者及早快速的加以确诊,在一定程度上减少漏诊、误诊。

严重免疫缺陷小鼠皮层脑梗死模型的制作

目的介绍严重免疫缺陷(SCID)小鼠皮层脑梗死模型的制作和相对梗死体积测量计算方法.方法 SCID小鼠嗅束外缘外侧1～2 mm范围内电凝并切断左侧大脑中动脉,术后24 h麻醉后经心脏灌注碳素墨汁染色以及取脑TTC染色进行大体观察;术后1个月经心脏灌注固定后取脑,中线部分处左侧皮层宽度除以右侧皮层宽度得出皮层梗死宽度指数(CWI)作为相对梗死体积的观察值.结果模型制作成功率达到90%,梗死部位固定在左侧大脑皮层.SCID小鼠的CWI为0.34±0.03,变异系数为8.8%.结论使用SCID小鼠制作的皮层脑梗死模型有很高的成功率和稳定性.CWI作为梗死体积的观察指标,测量方便,变异小.

21例CNM脑脊液新生隐球菌的实验检测分析

目的检测新生隐球菌性脑膜炎(CNM)患者脑脊液(CSF)中的新生隐球菌,探讨几个方法的形态特征。方法对21例CNM患者CSF应用细胞计数器直接观察、瑞氏染色、印度墨汁涂片、革兰染色及培养后等实验室方法检测,并比较其阳性率和形态特征。结果隐球菌检测阳性率分别为真菌培养90.5%,印度墨汁染色81.0%,瑞氏染色和细胞学计数各为61.9%,革兰染色42.9%;墨汁涂片检测可显示荚膜和出芽;瑞氏染色可发现其周围毛刺;革兰染色仅现菌体深染。结论在基层医院细胞镜检计数、瑞氏染色、革兰染色及墨汁涂片法与真菌培养的正确、灵活结合可提高CSF中隐球菌的阳性检出率。

新型隐球菌感染实验室检测方法的比较

目的比较不同检测方法、不同来源标本在诊断隐球菌感染中的价值,并对两种胶体金抗原试剂的检验效能进行比对。方法回顾性分析2016年1月至2019年6月首都医科大学附属北京佑安医院AIDS合并隐球菌感染者的墨汁染色、真菌培养和隐球菌抗原检测结果;对两种隐球菌抗原试剂的同期检测结果进行比对。结果490份血液样本,隐球菌抗原阳性率为17.1%;培养阳性率为6.7%。390份脑脊液标本,隐球菌抗原阳性率为16.2%,培养阳性率为12.3%,墨汁染色阳性率为13.8%。64例隐球菌脑膜炎病例,血清隐球菌抗原阳性率为96.9%,培养阳性率为32.8%;脑脊液隐球菌抗原阳性率为98.4%,培养阳性率为75.0%;墨汁染色阳性率为85.9%。两种隐球菌抗原试剂的阳性符合率、阴性符合率均为100%。结论不同检测方法在隐球菌感染的诊断中均有一定的局限性,送检多种来源样本,多种方法联合检测,更有利于隐球菌感染的早期筛查;两种胶体金法抗原试剂的检测结果高度一致。