负载As_2O_3壳聚糖纳米粒的药代动力学及其毒性观察

背景:As2O3作为抗肿瘤药物具有不同程度的不良反应,目前尚没有可以较好降低As2O3不良反应的方法。目的:观察负载As2O3壳聚糖纳米粒在体内是否有缓释作用,是否可以延长药物作用时间,减低As2O3毒副作用。方法:将20只SD大鼠以抽签法随机分为As2O3组和壳聚糖纳米粒-As2O3组进行药代动力学测定,于给药前和给药后不同时间点测定血液中砷浓度;将40只SD大鼠随机分为壳聚糖纳米粒组、壳聚糖纳米粒-As2O3组、As2O3组、生理盐水组进行毒理学检测,检测血浆中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、肌酸激酶、肌酐、尿素氮水平,并结合苏木精-伊红染色形态学观察心、肝、肾组织形态学变化。结果与结论:壳聚糖纳米粒-As2O3组较As2O3组半衰期明显延长(P<0.05)。除肌酸激酶外,As2O3组其他各指标均高于其他各组(P<0.05);而含相同浓度As2O3的壳聚糖纳米粒As2O3组与壳聚糖纳米粒组、生理盐水组各项指标差异无显著性意义(P>0.05)。As2O3组大鼠肝脏和肾脏均有较明显的病理学改变,壳聚糖纳米粒-As2O3组未见明显形态学改变。4组大鼠心脏均未见明显形态学改变。说明负载As2O3壳聚糖纳米粒在体内有缓释作用,可以延长药物作用时间,减轻As2O3的毒副作用。

马钱子碱新型壳聚糖纳米粒体外肝癌细胞摄取特性的研究

以新型高分子材料N-glycyrrhetinic acid(GA)-polyethylene glycol(PEG)-chitosan(NGPC)为载体材料,采用离子交联法制备载马钱子碱(Brucine)的壳聚糖纳米粒(Brucine/NGPC-NPs)。以Hep G2细胞为模型细胞,考察药物作用时间、药物作用浓度、加入外源甘草次酸和细胞内吞抑制剂对细胞摄取的影响,并结合激光共聚焦显微镜成像技术观察纳米粒在细胞内的转运。结果显示,Brucine/NGPC-NPs平均粒径为(197.6±11.2)nm,包封率和载药量分别为(63.48±4.67)%和(5.49±0.38)%。Hep G2细胞对马钱子碱溶液剂和Brucine/NGPC-NPs的摄取均具有时间和浓度依赖性,其中对NGPC-NPs的摄取明显强于溶液剂,具有显著的主动转运特征,且摄取量随外源甘草次酸的加入而减少,其摄取途径主要依赖网格蛋白介导的内吞,之后被细胞内化。结果表明,NGPC-NPs可以作为肝细胞靶向的载体,显著提高药物进入肝癌细胞的量,达到减毒增效的目的。

α-生育酚壳聚糖纳米粒的制备、表征及体外缓释抗氧化性能

α-生育酚作为天然抗氧化剂和营养强化剂被广泛应用于食品领域,但由于其对氧气、光照、金属离子等环境敏感,易快速失活,且不溶于水,极大地限制了其应用范围。本研究采用乳化-离子凝胶两步法制备α-生育酚壳聚糖纳米粒,将α-生育酚进行包埋。以颗粒平均粒径、多分散系数、表面电位为参考指标,通过单因素及正交试验考察壳聚糖(chitosan,CS)质量浓度、α-生育酚质量浓度、CS与三聚磷酸钠(sodium tripolyphosphate,TPP)质量比、p H值、搅拌速率等因素对纳米颗粒平均粒径和包封率的影响,确定最优制备工艺。采用动态光散射仪、扫描电镜、傅里叶红外光谱对纳米颗粒进一步表征,并考察其体外释放性能和抗氧化效果,以期为α-生育酚在腌腊肉制品后期贮藏过中的脂质抗氧化应用提供理论基础。结果表明,α-生育酚壳聚糖纳米粒最优制备工艺条件为CS质量浓度1 mg/mL、α-生育酚质量浓度1 mg/mL、CS与TPP质量比7∶1、CS初始p H值为4.5、搅拌速率900 r/min。所得纳米颗粒平均粒径214 nm,包封率51.65%。红外光谱表明CS与三聚磷酸钠静电吸附,生育酚被包封。扫描电镜下形态学结构大小均匀,呈规则球形。体外释放实验和抗氧化实验表明α-生育酚壳聚糖纳米粒具有缓释抗氧化作用。

多元回归综合优化去甲基斑蝥素壳聚糖纳米粒的制备工艺

目的以去甲基斑蝥素为模型药物,运用正交设计及多元回归分析多指标综合优化其低相对分子质量壳聚糖纳米粒制备工艺。方法采用离子诱导法制备去甲基斑蝥素低相对分子质量壳聚糖纳米粒,以粒径、包封率为评价指标,以低相对分子质量壳聚糖(LCS)、三聚磷酸钠(TPP)浓度和温度为3个因素,选用L9(34)正交实验设计结合多元回归筛选纳米粒的制备工艺,并根据多指标权重对其线性加权和进行优化,推断优化方案。同时,应用数学模型,绘出各指标随因素变化的趋势图,预测优化结果。结果根据优化条件验证制备工艺,所得纳米粒粒径为(131±6)nm,包封率45.12%,载药量7.3%。优化处方工艺具有粒径小、包封率高特性。结论该数据处理方法用于制备工艺优化结果精确、高效,预测结果准确,具有推广应用价值。

PEG化壳聚糖纳米粒介导的hTERT反义寡核苷酸对HepG2细胞的抑制作用

目的以PEG化壳聚糖(PEG-Chitoson)纳米粒作为端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸的载体转染HepG2细胞,研究其对HepG2细胞的增殖影响;方法采用MTT法检测PEG-CSNPs的细胞毒性和细胞增殖情况;以脂质体转染试剂作为对照,倒置荧光显微镜和流式细胞仪(FCM)检测FITC标记的ASODN转染细胞后胞内荧光强度,转染效率和ASODN各组转染细胞后细胞周期的变化。结果NPs质量浓度超过3.0μg/mL时细胞毒性较大。转染24h后,ASODN纳米粒组和ASODN脂质体组细胞内荧光明显增强,且ASODN纳米粒组的转染效率要高于ASODN脂质体组。与空白对照组相比,ASODN处理后HepG2细胞生长受到明显抑制(P<0.01),且抑制率随时间延长而增高,72h时达到最高值;细胞周期改变,细胞被阻滞于G1期,S期细胞明显减少(P<0.01);结论PEG-CSNPs介导的hTERT ASODN能有效抑制HepG2细胞增殖、改变细胞周期,对该细胞生长有明显抑制作用。

卵清蛋白模型疫苗/壳聚糖纳米粒鼻腔递送的研究

目的 研究壳聚糖纳米粒作为蛋白类疫苗的新载体,并评价其鼻腔给药后所产生的免疫效果。方法使用离子胶凝法来制备亲水性壳聚糖纳米粒,选用卵清蛋白（OVA）为模型蛋白,考察其粒径、表面电位和蛋白包封率。并比较不同剂型鼻腔免疫BALB/c小鼠后产生的不同免疫效果。结果壳聚糖载药纳米粒最佳粒径大约360nm,表面电位为＋40mV,卵清蛋白的包封率可达到80%-90%。OVA/壳聚糖纳米粒鼻腔给药后能诱导更高更长期的体液免疫反应（IgG水平）,和肌注高剂量卵清蛋白溶液产生的免疫效果相当;并且能诱导比可溶性抗原显著提高的黏膜免疫反应（IgA水平）。结论壳聚糖纳米粒制备方法温和,对蛋白等具有较高的包封率,鼻腔给药后能诱导较强的免疫反应,因此有望成为蛋白类疫苗鼻腔给药的新载体。

载高乌甲素壳聚糖纳米粒的制备及其体外释药特性

目的制备载高乌甲素壳聚糖纳米粒,并考察其体外释药特性。方法以壳聚糖为载体材料,以三聚磷酸钠为交联剂,采用微乳液-离子交联法制备纳米粒。以包封产率和载药量为主要评价指标,通过正交设计试验优化其制备工艺。结果纳米粒呈球形或类球形,平均粒径为334 nm,在30 h内稳定。高乌甲素的包封产率和载药量分别为(35.34±0.94)%、(2.25±0.08)%。结论该工艺简便可靠,制备的纳米粒具有明显的缓释特征。

胸腺五肽三甲基壳聚糖纳米粒包封率的测定

目的 建立胸腺五肽三甲基壳聚糖纳米粒中胸腺五肽包封率的测定方法。方法 将纳米粒超速冷冻离心后,用HPLC法测定胸腺五肽的含量,分析柱为C1 8柱,流动相为0 . 1mol·L-1 磷酸盐缓冲液(pH 7.0 ) -乙腈(94∶6 ) ,检测波长2 75nm。结果 线性范围5～4 0 0 μg·ml-1 ,回收率98.8%,RSD =2 %。结论 方法方便、灵敏、准确,可测定三甲基壳聚糖纳米粒中胸腺五肽的包封率。

甘草酸表面修饰阿霉素壳聚糖纳米粒的制备及特性研究

目的:制备具有肝细胞靶向的甘草酸表面修饰阿霉素壳聚糖纳米粒,并考察其理化特性。方法:采用离子凝胶法制备阿霉素壳聚糖纳米粒,再以高碘酸盐氧化法制备甘草酸表面修饰阿霉素壳聚糖纳米粒。激光透射电子显微镜观察纳米粒的形态,马尔文激光粒度仪测定其粒径。RP-HPLC法间接测定纳米粒中甘草酸结合率和阿霉素包封率,并初步研究体外甘草酸的结合稳定性和阿霉素释药特性。结果:电镜显示纳米粒呈类球形,平均粒径为179.5 nm,甘草酸结合率达到80%以上,在释放介质中,12 h的甘草酸结合率仍保持(65.2±3.4)%;纳米粒中阿霉素包封率达90%以上,体外释药缓慢,无明显的"突释"现象,72 h的累计释放百分率为(28±4.6)%。结论:本方法制备的甘草酸表面修饰阿霉素纳米粒工艺简单,包封率高,且甘草酸表面结合稳定,有望提高阿霉素的肝细胞靶向性。

不同产地壳聚糖纳米粒体外抗肿瘤作用的比较

目的:由于不同产地、来源的壳聚糖产品,其化学结构可能不同,因而生物学效应也会不同。将纳米技术引入壳聚糖研究,通过体外抗肿瘤细胞增殖抑制试验,比较不同来源壳聚糖纳米粒制剂的体外抗肿瘤活性。方法:实验于2006-10/2007-06在浙江省医学科学院生物工程研究所完成。①实验材料:肝癌SMMC-7721、胃癌BGC-823、宫颈癌Hela和乳腺癌MCF-7细胞株从中国科学院上海细胞所引入,由本研究所液氮保存。A壳聚糖由浙江金壳生物化学有限公司提供(批号:YK060329131);B壳聚糖由浙江奥兴生物科技有限公司提供(批号:200603200);C壳聚糖由青岛利中甲壳原公司提供(批号:020622)。②细胞培养:4种肿瘤细胞株均用含10%新生牛血清的DMEM培养基,在体积分数为0.05的CO2的37℃培养箱中培养,2.0～3.0d传代1次。③壳聚糖纳米粒制备:A,B,C壳聚糖应用离子交联法制备相应壳聚糖纳米粒,其纳米粒径分别为228,228和218nm。④MTT法测定壳聚糖纳米粒体外抗肿瘤活性:按3种壳聚糖纳米粒类别和4个质量浓度梯度设壳聚糖纳米粒组(62.5,125,250,500mg/L)、阳性对照组(氟尿嘧啶500mg/L)和阴性对照组(DMEM培养液),按常规方法进行MTT实验。结果:不同产地壳聚糖制备的A,B,C纳米粒分别作用于SMMC-772细胞,其500mg/L剂量组的生长抑制率分别为9.93%,7.91%和25.76%;作用于BGC-823细胞,其生长抑制率分别为8.96%,6.68%和29.94%;作用于Hela细胞,其生长抑制率分别为9.50%,9.23%和27.16%;作用于MCF-7细胞,其生长抑制率分别为7.56%,8.64%和52.86%。而抗肿瘤药物氟尿嘧啶500mg/L对SMMC-7721、BGC-823、Hela和MCF-7细胞生长抑制率分别为79.36%,78.83%、78.70%和82.20%。结果显示,A,B壳聚糖纳米粒对体外培养的SMMC-772、BGC-823、Hela、MCF-7细胞的抑制作用较弱,而C壳聚糖纳米粒对上述4种肿瘤细胞均具有较强的抑制作用,尤其对MCF-7细胞生长抑制作用最强。结论:体外实验条件下,壳聚糖纳米粒均显示一定的抗肿瘤活性。不同产地壳聚糖制备的纳米粒,其抗肿瘤活性存在明显的差异,并且壳聚糖纳米粒抗肿瘤活性具有一定的肿瘤细胞选择性。

雷公藤甲素壳聚糖纳米粒的制备与初步评价

目的:制备包载雷公藤甲素的壳聚糖纳米粒系统(triptolide-chitosan nanoparticles,TP-CS NPs),并考察其理化性质及体外释药性能。方法:采用非溶剂辅助络合-化学交联法制备壳聚糖纳米粒。利用透射电镜、粒度仪、HPLC法等对制备的纳米粒性质进行表征。结果:制得的纳米粒呈球形,平均粒径为(151.2±5.4)nm,Zeta电位(20.1±1.2)m V,纳米粒收率(78.0±3.3)%,包封率(77.0±1.2)%,载药量(2.0±0.4)%,体外模拟释药结果表明载药纳米粒药物释放速率在24 h内持续稳定。结论:非溶剂辅助络合-化学交联法制备的雷公藤甲素壳聚糖纳米粒简便可靠,体外释药具有明显的缓释作用。

正交试验法优选咪喹莫特壳聚糖纳米粒的制备工艺

目的:优选简便且重现性好的咪喹莫特壳聚糖纳米粒的制备工艺条件。方法:采用壳聚糖交联法制备;用正交试验法对影响制备的三个因素进行优选;用紫外分光光度法测定载药量。结果:制备工艺中采用搅拌时间1h,滴注速度5滴·S^(-1),药物/材料比为1:2,所得咪喹莫特壳聚糖纳米粒载药量最高为5.81％,粒径为543nm,跨距为0.96。结论:优选的制备工艺简便,重现性好,可制得载药量高、形态圆整、分布均匀的咪喹莫特壳聚糖纳米粒。

载报告基因壳聚糖纳米粒制剂体外转染活性考察

目的 考察壳聚糖纳米粒体外基因转染活性及壳聚糖纳米粒经表面修饰的体外转染活性变化。方法 用复凝聚法制备纳米粒 ,透射电镜观察粒子形态 ,体外基因转染实验评价纳米粒的体外转染活性 ,用倒置荧光显微镜观察和流式细胞仪测定转染结果。通过考察递送不同剂量的基因和转染后不同时间的转染效率 ,寻找本递送系统较好的转染条件。用纳米粒表面连接PEG以及半乳糖基白蛋白 ,对纳米粒进行修饰 ,通过体外转染实验 ,评价表面修饰对其转染活性的影响。结果 未经表面修饰的载基因纳米粒能够转染人胚胎肾细胞 (HEK2 93)和肝癌细胞 (HepG2 ) ,但转染效率仍不如脂质体转染试剂 ,且在转染实验后约 72h较高 ,递送基因较佳的剂量是 4 μg ,在以上两种细胞中 ,转染效率也不同。经PEG表面修饰的纳米粒仍保持纳米粒的体外转染活性。连接半乳糖基牛血清白蛋白的纳米粒转染活性却反而略有下降。结论 壳聚糖纳米粒能将基因递送到细胞内 ,并且报告基因能在细胞内表达。因此 ,可以用作基因递送的载体系统 ,值得进一步研究。经PEG表面修饰和冷冻干燥处理 ,保持生物活性 ,为基因药物制剂化的可能性提供了证据。对于靶向配基的选择 ,宜继续进行筛选。

丹酚酸B壳聚糖纳米粒制备与大鼠心脏缺血/再灌注损伤保护作用研究

目的:制备丹酚酸B壳聚糖纳米粒,并考察对大鼠心脏缺血/再灌注损伤的保护作用。方法:采用离子凝胶化法制备丹酚酸B壳聚糖纳米粒,并以包封率(EE%)和粒径分布(nm)为评价指标,对丹酚酸B壳聚糖纳米粒处方进行优化;采用Malvern粒度仪测定纳米粒的粒径分布和Zeta电位,透射电镜考察其形态;并考察丹酚酸B壳聚糖纳米粒的体外释药行为;考察丹酚酸B壳聚糖纳米粒对大鼠心脏缺血/再灌注损伤的保护作用。结果:丹酚酸B壳聚糖纳米粒的包封率为85.8%±3.1%;粒径为(166.1±42.4)nm,Pd I为(0.189±0.032),Zeta电位为(+24.9±4.5)m V;透射电镜显示丹酚酸B壳聚糖纳米粒粒径均一,成球状;纳米粒在24 h内平稳缓慢释药;丹酚酸B壳聚糖纳米粒可以增加大鼠心脏缺血/再灌注损伤的保护作用。结论:丹酚酸B壳聚糖纳米粒对大鼠心脏缺血/再灌注损伤具有良好的保护作用。

阿苯达唑壳聚糖纳米粒包封率的测定

背景:在纳米粒研究过程中,包封率是纳米粒质量评定的重要指标。目的:建立阿苯达唑壳聚糖纳米粒包封率的测定方法。方法:采用紫外分光光度法测定阿苯达唑的含量,反相透析法分离纳米粒和游离药物阿苯达唑,测定阿苯达唑的包封率。考察药物加样回收率、透析平衡时间和透析体积比。结果与结论:反相透析法能将纳米粒和游离药物阿苯达唑有效分离,药物加样回收率是(99.59±0.36)%,透析法平衡时间为9h,透析体积比为1∶15,阿苯达唑壳聚糖纳米粒的平均包封率为(51.73±0.18)%。提示反透析法便捷、准确,适用于阿苯达唑壳聚糖纳米粒包封率的测定。

壳聚糖纳米粒介导的CD基因对前列腺癌的体外杀伤作用

目的考察壳聚糖(Chitosan)纳米粒作为自杀基因载体进行前列腺癌自杀基因治疗的可行性,为前列腺癌的基因治疗寻找新的基因载体。方法将壳聚糖纳米粒包裹含报告基因质粒pEGFP-C1转染至前列腺癌细胞系PC-3和22Rvl,观察EGFP的表达情况,再将含胞嘧啶脱氨酶(Cytosinedeamiase,CD)自杀基因的真核表达质粒pcDNA3-CD转染至该2种前列腺癌细胞,转染48h后,以RT-PCR检测CD基因的表达。对转染的两种细胞给予不同浓度的前体药5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)24h后,采用MTT比色法测定药物对细胞增殖的影响,并进行统计学处理。结果表明壳聚糖纳米粒能够将质粒pEGFP-C1转入2种前列腺癌细胞,并表达EGFP,在PC-3细胞其转染效率高于脂质体转染试剂。采用壳聚糖纳米粒转染pcDNA3-CD于2种前列腺癌细胞后,RT-PCR证明在癌细胞中有CD基因的表达。给予前体药物5-FC后,实验组细胞生长抑制率与只给壳聚糖或裸质粒的对照组相比明显增高,说明壳聚糖纳米粒可将CD自杀基因递送至前列腺癌细胞中,并在细胞中进行表达,从而使CD/5-FC自杀基因系统发挥杀伤细胞的作用。结论壳聚糖纳米粒能将质粒基因转入前列腺癌细胞并表达,可做为前列腺癌自杀基因治疗的基因载体,有良好的应用前景。

环孢素A壳聚糖纳米粒修饰人工晶状体表面的实验研究

背景 白内障囊外摘出术后发生后囊膜混浊（PCO）是影响患者术后视力的主要原因,目前探讨药物的局部应用来预防PCO已成为研究的热点. 目的 采用离子交联法制备环孢素A壳聚糖纳米粒（CyA-CS-NP）,观察其体外释放性能及修饰聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）人工晶状体（IOL）边缘的可行性.方法 制备壳聚糖纳米粒（CS-NP）和CyA-CS-NP,用透射电子显微镜观察纳米粒的形态学特征,用高效液相色谱仪（HPLC）观察纳米粒的形态学特征、载药率、包载率及体外释药性能,并测定CyA-CS-NP修饰后IOL表面CyA的含量.CyA-CS-NP修饰经等离子处理PMMA IOL边缘,并用扫描电子显微镜观察IOL的表面特征.用X射线光电子能谱仪（XPS）检测单纯等离子体处理过的IOL和CyA-CS-NP修饰过的IOL边缘,分析并比较两种修饰方法处理的IOL表面的元素组成及化学键类型改变；用后焦距法和分光光度计分别测定IOL的屈光度和波长360～ 490 nm内的透光率,并参照ISO/CD 11979-2进行有效分辨率测试,检测IOL的光学性能；参照国际标准ISO/CD 11979-3测定IOL襻抗疲劳度测试. 结果 CS-NP和CyA-CS-NP呈单分散性、形状规则的类球形,粒径分别为（158±18）nm和（219±29） nm.CyA-CS-NP的平均包载率为64.2％,平均载药率为7.6％.体外缓释实验表明,第1天的快速释放阶段释药量达46.6％,此后为缓释阶段,在第12天时释药量达到77.7％.修饰后的IOL边缘存在CyA-CS-NP涂层,XPS检测显示IOL边缘存在CyA-CS-NP的特定元素及官能团,而等离子体处理的IOL未出现类似元素及官能团.3枚IOL表面负载CyA的平均质量为171.88 μg,修饰后的IOL屈光度、分辨率和透光率分别为（16.64±0.23）D、（90.28±0.25）％及（73.57±0.62）％,与修饰前的（16.62±0.29）D、（90.28±0.21）％及（73.61±0.60）％相比差异均无统计学意义（t=0.381、0.078、2.291,均P＞0.05）.IOL襻符合国际标准. 结论 与修饰前相比,经CyA-CS-NP边缘修饰的IOL光学性能和襻抗疲劳强度均无明显变化,符合国际标准,满足IOL的临床使用要求,可能成为眼内缓释给药的理想途径.

负载pVAX1-wapA的壳聚糖及季铵化壳聚糖纳米粒的制备研究

目的制备负载抗龋DNA疫苗pVAX1-wapA质粒的壳聚糖和季铵化壳聚糖纳米粒,优化其制备工艺,测定其细胞转染效率。方法以包封率和粒径为主要指标,单因素法考察载体浓度、pH值、N/P、TPP浓度等因素的影响,RealtimePCR检测细胞对质粒编码蛋白的转录表达水平以评价载质粒纳米粒的促转染作用。结果制得的载DNA疫苗纳米粒粒径均一,形态圆整。壳聚糖(CS)纳米粒粒径为(219.2±18.2)nm,Zeta电位为(24.7±3.5)mV,包封率为91.24%。季铵化壳聚糖(CSTM)纳米粒粒径为(222.5±15.6)nm,Zeta电位为(19.6±1.2)mV,包封率为87.66%。纳米粒可以促进pVAX1-wapA进入细胞,并成功被转录。结论制备的包载pVAX1-wapA的季铵化壳聚糖纳米粒可用于重组基因疫苗的运送。

乌苯美司-壳聚糖纳米粒的制备及质量评价

目的制备乌苯美司-壳聚糖纳米粒（Uben-CS-NP）,并利用现代科学技术对其进行质量评价。方法采用离子交联法制备Uben-CS-NP,并研究其形态、粒径、电势、pH值、包封率、载药量及体外释药行为。结果 Uben-CS-NP的制备方法可行,其形态圆整规则,粒径为300∽600 nm,平均粒径为442 nm,zeta电势为＋37.8 mV,pH值为6.0,包封率为69.1%,载药量为31.4%;体外释药：在1 h内突释,累积释药量达28.77%,之后缓慢释放,第12、24 h时累积释药量分别为42.56%、50.93%。结论 Uben-CS-NP的质量可控,体外释药符合Higuchi方程,缓释作用明显。