登革2型病毒在RAW264.7细胞和THP-1细胞中复制能力及免疫激活能力的比较

目的:比较登革2型病毒(DENV2)在RAW264.7细胞和THP-1细胞中的复制能力及DENV2对这两种靶细胞的免疫激活作用。方法:将DENV2病毒液与靶细胞(RAW264.7细胞和THP-1细胞)分别孵育6h、12h、24h,孵育结束后收集细胞,Trizol法提取不同时间的细胞总RNA,检测RNA纯度和浓度后逆转录为cDNA,使用qRT-PCR检测样本中病毒目的基因DENV2 E及细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-β、ISG15、CCL2的mRNA相对表达量。结果:DENV2感染RAW264.7细胞和THP-1细胞后,DENV2 E基因的表达量均显著上调(P<0.05),且呈现逐渐增加的趋势。6h、12h时,DENV2 E基因在两个靶细胞中的相对表达量一致;24h时,DENV2 E基因在RAW264.7细胞中的相对表达量显著高于THP-1细胞。与未感染DENV2组相比,DENV2感染RAW264.7细胞和THP-1细胞6h、12h、24h后,IL-1β、IL-6、TNF-α、ISG15、IFN-β、CCL2基因的相对表达量均显著升高(P<0.05),且在RAW264.7细胞中的相对表达量显著高于THP-1细胞。结论:DENV2在RAW264.7细胞中的复制能力强于THP-1细胞的复制能力,且DENV2在RAW264.7细胞中具有更强的免疫激活能力。

基因治疗研究中有复制能力逆转录病毒的检测

在反转录病毒介导的基因治疗研究的过程中，建立了有复制能力的反转录病毒（ＲＣＲ）的检测系统，包括ＤＮＡ聚合酶链式反应（ＰCＲ）、反转录ＰＣＲ（ＲＴ／ＰＣＲ）、Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交以及ｎｅｃ基因和β－ｇａｌ基因的补救分析（Ｒｅｓｃｕｅａｓｓａｙ）。从ＤＮＡ水平、ＲＮＡ水平和病毒活体水平对野生型病毒进行了灵敏而特异的检测，套式ＰＣＲ灵敏度达２．５个拷贝，并利用该检测系统检测了血友病Ｂ基因治疗和脑胶质瘤基因治疗的靶细胞及有关样品，所有结果均为阴性，没有检测到野生型反转录病毒。为基因治疗临床试验的安全进行奠定了基础。

env基因对J亚群禽白血病病毒体外感染和复制能力的影响

为探讨env基因对J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)体外感染和复制能力的影响,本研究利用反向遗传方法构建重组病毒,将血管瘤病变型ALV-J HN06株中env元件替换至髓细胞瘤病变型ALV-J NX0101株的相应位置,成功构建了重组质粒pNX-HNenv。重组毒株能在DF-1细胞上稳定增殖,并能被JE9特异性单抗识别,证明获得了具有感染性的重组病毒NX-HNenv株。结果显示,同一亚群内env基因的替换对病毒的体外感染和复制能力无明显影响。

急性髓细胞性白血病病人测定白血病原始祖细胞自我复制能力测定方法探讨

急性髓细胞性白血病病人的预后与其临床及生物学特性有关。测定病人白血病祖细胞自我复制能力可预测病人的预后，并可根据检测结果制定治疗方案。本报告通过实验说明白血病祖细胞自我复制能力低者预后较白血病祖细胞自我复制能力高者好。

古典H1N1亚型猪流感病毒PB2 K627E突变对病毒复制能力的影响

旨在探索古典H1N1亚型猪流感病毒A/Swine/Guangdong/1/2011(H1N1)PB2K627E突变对病毒复制能力的影响。利用反向遗传操作技术和点突变技术成功获得古典H1N1亚型猪流感病毒的拯救株(627K)和突变株(627E)后,分别在MDCK细胞和小鼠体内对拯救株和突变株的复制能力进行比较。体外MDCK细胞试验结果显示,突变株与拯救株相比,细胞病变(CPE)减小、空斑形态减小、生长曲线差异极其显著,表明突变株在MDCK细胞上的复制能力减弱。小鼠攻毒试验结果表明,突变株对小鼠体重变化的影响不明显,在小鼠肺中的病毒滴度明显下降,引起病理损伤较轻。体外MDCK细胞及小鼠攻毒试验结果均表明,突变株与拯救株相比复制能力降低。该结果不仅证实了猪流感病毒PB2 627位氨基酸是一种重要的毒力分子标记,同时还为进一步阐明其致病机制提供了条件。

水禽H6N6亚型禽流感病毒在猪和人的肺组织中的复制能力的体外研究

目的研究水禽H6N6亚型禽流感病毒(AIV)在体外猪和人的肺组织中的复制能力。方法选取两株分离自鸭或鹅的H6N6亚型AIV(A/DK/GX/750/2010和A/GS/GX/399/2010),行基因测序和遗传进化分析了解其基因来源。将每株病毒分别体外接种于猪肺和人肺组织,接种后24 h、48 h、72 h收集组织,取组织匀浆液和培养上清液在10 d鸡胚中分离培养病毒,并行苏木精-伊红染色观察组织病理改变,采用免疫组化法检测病毒核蛋白的表达。结果基因进化分析显示H6N6亚型AIV A/DK/GX/750/2010、A/GS/GX/399/2010属于欧亚谱系的Group-Ⅱ(ST2853-like),为同一重配病毒的不同变型。两株H6N6亚型AIV体外接种于猪肺和人肺组织后,组织匀浆液和培养上清液中均可分离到病毒,免疫组化检测提示病毒核蛋白呈阳性,其主要表达在肺泡细胞和肺泡巨噬细胞,苏木精-伊红染色显示肺组织内出现肺泡细胞坏死和肺泡破坏,人肺组织还伴有炎性细胞浸润。结论水禽H6N6亚型AIV能在体外猪和人的肺组织中有效地复制,提示该病毒具有感染哺乳动物猪及人类的潜能,必须密切监测其流行及进化演变情况,以防止其感染人类。

有复制能力的逆转录病毒的检测

运用逆转录病毒作为外源基因导入的载体，在实际临床运用时需要检测包装细胞在表达目的基因的同时，是否会产生有复制能力的逆转录病毒．本实验运用了Marker Rescue Assay(补救分析)和RT／PCR(逆转录PCR)两种方法。补救分析可检测到6×10^7CFU／ml(Colony Forming Units／m1)的有复制能力的逆转录病毒．RT／PCR的灵敏度为1CFU／10^3ml．这两种检测方法的建立，为逆转录病毒载体用于临床基因治疗的安全性提供一定的保证。

茵陈贞芪六君子汤加减联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎肝硬化的疗效及对肝功能、病毒复制能力的影响

目的:观察茵陈贞芪六君子汤加减联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎肝硬化的效果及对肝功能、病毒复制能力的影响。方法:选取2016年2月~2019年12月就诊于我院的慢性乙型肝炎肝硬化患者85例,根据其治疗方法不同,分为观察组(n=43)和对照组(n=42)。对照组采用恩替卡韦治疗,观察组在其基础上采用茵陈贞芪六君子汤加减治疗,连续治疗12w。比较两组临床疗效;检测并比较两组治疗前后谷丙转氨酶(AlanineAminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate Aminotransferase,AST)、总胆红素(Total Bilirubin,TBIL)、直接胆红素(Direct Bilirubin,DBIL)水平;检测并比较治疗12w后两组乙肝病毒-脱氧核糖核酸(Hepatitis B Virus-Deoxyribonucleic Acid,HBV-DNA)、乙型肝炎e抗原(Hepatitis B e-Antigen,HBeAg)变化情况。结果:治疗12w后,观察组临床总有效率(95.35%)显著高于对照组(80.95%),差异有统计学意义(P<0.05);治疗12w后,与对照组相比,观察组ALT、AST、TBIL、DBIL水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);治疗12w后,与对照组相比,观察组HBV-DNA转阴率(97.67%)和HBeAg转阴率(65.12%)显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:茵陈贞芪六君子汤加减联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎肝硬化能够明显提高其临床疗效,改善肝功能,抑制病毒复制能力。

乙肝病毒YMDD突变小鼠模型的建立及复制能力研究

目的:建立乙肝病毒YMDD突变小鼠模型,并对其体内HBV-DNA复制能力进行研究。方法:建立乙肝病毒多聚酶区(P区)rtM204I位点突变质粒,BALB/c小鼠分为两组,经尾静脉分别注射野生型和突变型HBV质粒,然后给予生理盐水(空白对照)和拉米夫定灌胃处理连续3 d。检测两组小鼠肝组织内HBV-DNA复制能力以及拉米夫定处理对HBV-DNA复制能力的影响。结果:测序鉴定rtM204I质粒构建成功。Southern杂交显示,突变型组HBV-DNA复制水平较野生型组降低;在拉米夫定灌胃处理后,野生型组HBV-DNA复制中间体水平较空白对照组明显下降(P<0.05),但突变型组HBV-DNA复制中间体水平与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:乙肝病毒多聚酶区(P区)rtM204I位点突变降低HBV-DNA复制能力,并影响拉米夫定对HBV-DNA复制的抑制作用。

HIV复制能力的减弱意昧着较好的治疗转归

据Medscape．com8月29日报道（原载J Acquir Immune Defic Syndr2007；45：411-417），意大利研究人员最近在回顾AIDS补救治疗方案后指出，HIV的复制能力值得考虑。

市场份额向头部企业集中 运营经验跨行业复制能力欠缺

十四五规划明确提出"分行业做好供应链战略设计和精准施策,形成具有更强创新力、更高附加值、更安全可靠的产业链供应链。以服务制造业高质量发展为导向,推动生产性服务业向专业化和价值链高端延伸。聚焦增强全产业链优势,推动现代服务业与先进制造业深度融合"。冷链物流被再次提升到国家战略层面高度,将会迎来新一轮历史发展机遇。回顾过去一年,作为服务产业链供应链的合同物流发展呈现出很多新特征。

猪塞内卡病毒及口蹄疫病毒在不同猪源细胞系中复制能力差异形成的机制被揭示

IBRS-2细胞和PK-15细胞均为猪源肾上皮细胞,是猪小RNA病毒研究中最常用的两种细胞系。作为原生型RNA病毒的代表,猪塞内卡病毒和口蹄疫病毒在IBRS-2细胞和PK-15细胞中表现出明显的复制水平差异,但其分子机制并不清楚。近日,中国农业科学院兰州兽医研究所口蹄疫与新发病流行病学创新团队在猪塞内卡病毒及口蹄疫病毒感染致病机制研究方面取得新进展。

HIV-1逆转录酶H221Y突变对Y181C突变株复制能力影响研究

目的明确中国经抗病毒治疗HIV-1感染者中Y181c突变与H221Y突变发生情况及H221Y突变对Y181C突变株复制能力的影响。方法选取河南省经高效抗逆转录病毒治疗出现Y181C和H221Y双突变的B’亚型HIV-1感染者3例。回顾性检测其2004--2006年间抗病毒治疗后每6个月一次的随访血样，从血浆中扩增病毒pol区基因，克隆人T载体并测序，分析克隆中Y181C及H221Y突变的存在情况。构建Y181C单突变质粒及Y181C和H221Y双突变质粒，分别与包膜蛋白质粒pVSV-G共转染HEK293T细胞，包装两种突变型假病毒。分别单轮感染TZM—b1细胞，分析两种突变型假病毒单轮复制能力差异。结果共获得3例患者来自6个随访点的57条TA克隆序列，其中Y181C单突变克隆46个，Y181C和H221Y双突变克隆35个，H221Y突变均出现于已经存在Y181C突变的克隆中。在2例患者的两组假病毒中，携带Y181C和H221Y双突变假病毒的复制能力分别是Y181C单突变假病毒的1．42倍和1．62倍。结论在经抗病毒治疗的B’亚型HIV-1感染者中，H221Y突变很可能为Y181C突变的补偿突变，提高Y181C突变株复制能力。这一发现对中国B’亚型HIV-1感染者耐药基因型检测结果的解读及指导临床进行抗病毒治疗具有重要意义。

Ⅱ型登革病毒前膜抗体对该病毒在THP-1细胞中复制能力的影响

目的探讨Ⅱ型登革病毒(dengue virusⅡ,DENVⅡ)前膜(presynaptic membrane,prM)抗体对DENVⅡ在THP-1细胞中复制能力的影响。方法采用不同稀释度(1/4~1/16 384)的DENVⅡanti-pr M单克隆抗体分别与不同MOI的DENVⅡ(MOI分别为3、0.75及0.19)复合感染THP-1细胞。建立DENVⅡ荧光定量PCR检测标准曲线,检测THP-1细胞培养上清液的病毒拷贝数。结果 DENVⅡ按MOI=3感染THP-1细胞,当prM稀释度为1/16和1/16 384时诱发THP-1细胞产生病毒的载量较高,prM稀释度为1/64和1/256时抑制病毒生长;DENVⅡ按MOI=0.75感染THP-1细胞,当prM稀释度1/16时可诱发更高浓度病毒载量;DENVⅡ按MOI=0.19感染THP-1细胞时,不会诱导产生高浓度的病毒载量。结论中浓度pr M抗体可抑制DENVⅡ在THP-1细胞中的复制能力,而高及低浓度prM抗体可促进DENVⅡ在THP-1细胞中的复制能力。

TAM类突变对B'亚型HIV病毒耐药和复制能力的影响

目的研究T215Y和L210W等TAM类突变在B'亚型pol区遗传背景下对HIV病毒的耐药程度和复制适应性的影响。方法血浆样本来自我国中部地区1名已接受抗病毒治疗且耐药的患者,利用SGA方法获得其3个病毒准种的含TAM突变的pol基因片段,采用PCR引入点突变分别将T215Y和L210W回复突变为野生型密码子,将突变前后的pol区片段替换pNL4-3-BstII感染性克隆的相应片段,构建重组感染性克隆,利用荧光素酶和P24抗原检测分别评价重组病毒的耐药程度和复制能力。结果成功构建了3个重组感染性克隆pNL-PAT-1、pNL-PAT-2、pNL-PAT-3,TAM类突变分别为:T215Y、M41L/L210W/T215Y和M41L/L210W/T215Y,回复突变后的重组感染性克隆分别为pNL-PAT-1-T215Y(-)、pNL-PAT-2-L210W(-)和pNL-PAT-3-L210W(-);与原始重组病毒比较,T215Y和L210W回复突变后的重组病毒对AZT的IC50分别下降4.9、8.1和2.7倍,感染pNL-PAT-1-T215Y(-)的培养上清中P24含量较原始毒株pNL-PAT-1高,而两株含M41L/T215Y的病毒与含M41L/L210W/T215Y突变病毒的复制能力比较结果并不一致,其中pNL-PAT-2-L210W(-)感染上清的P24含量较原始毒株略有降低,而pNL-PAT1-3-L210W(-)的P24含量则较原始毒株明显升高。结论在B'亚型pol区遗传背景下,T215Y和L210W均可引起HIV病毒对AZT的耐药程度升高,T215Y还可造成病毒复制能力的下降,但是L210W对复制能力的影响不一,基因多态性可能对病毒的耐药和复制能力具有一定的影响。

信息化帮助成长企业建立“复制能力”——访用友软件总裁何经华

麦当劳在全世界开店跟切蛋糕似的,其实它是在复制管理流程。

3～5岁儿童模式认知能力发展的研究

选取北京市10所幼儿园的249名3～5岁儿童为被试,采用概括抽象程度不同的任务对儿童的模式复制和扩展能力进行个别测查。结果表明:(1)儿童早期模式认知能力发展的年龄主效应显著,性别主效应显著,年龄与性别的交互作用显著。(2)儿童模式复制能力在3 5～4 5岁之间发展较为迅速,模式扩展能力在4～5岁之间发展较为迅速。(3)儿童的模式复制能力无显著性别差异,但女孩的模式扩展能力显著高于男孩。(4)儿童的模式复制能力显著高于模式扩展能力,随着年龄的增长它们之间的差距有减小的趋势。(5)随着年龄的增长,儿童在模式复制和模式扩展任务中所犯错误水平在下降。