苯甲酰胺类多巴胺D2受体显像剂^18F-Fallypride的制备和生物分布

以(s)-(-)-N-(1-烯丙基吡咯烷-2-氨基甲基)-5-(3-磺酰基)-2,3-二甲氧基苯甲酰胺为氟标记前体,用K222催化进行氟标记,合成了(s)-(-)-N-(1-烯丙基吡咯烷-2-氨基甲基)-5-(3-18F)-2,3-二甲氧基苯甲酰胺(18F-Fallypride)。考察标记物的放化纯度及稳定性,并进行ICR小鼠体内分布特性研究。结果显示,18F-Fallypride的放化产率为40.75%,合成时间40 min,放化纯度大于97%,标记物的生理盐水溶液室温放置4 h,放化纯大于95%。小鼠静脉注射18F-Fallypride后120 min,纹状体/小脑高达14.27。18F-Fallypride进入血液后很快被组织摄取,其中以肾的早期摄取最高(9.91±1.24)%ID.g-1,各脏器的清除均较快(T1/2<1 h),骨的摄取率随时间的延长而增加。

滋补肝肾、通络解毒中药对异动症大鼠行为学及纹状体多巴胺D2受体活性的影响

目的:观察滋补肝肾、通络解毒中药对异动症大鼠行为学和多巴胺D2受体活性的影响。方法:采用6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)注射于大鼠脑右侧黑质造成偏侧帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型,进一步对PD大鼠予以左旋多巴/苄丝肼制作异动症(levodopa-induced dyskinesias,LID)模型。实验设立正常对照组、模型组、中药干预组、中止给药对照组和中止给药+中药干预组,观察中药对LID大鼠异常不自主运动(abnormal involuntary movement,AIM)评分的影响,测定大鼠纹状体多巴胺D2受体的最大结合容量(maximum binding capacity,Bmax)和平衡解离常数(equilibrium dissociation constant,KD),来评价中药对LID大鼠多巴胺D2受体亲和力的影响。结果:与模型组和中止给药对照组比较,中药干预组可明显减少异动症大鼠的AI M积分(P<0.01);纹状体多巴胺D2受体亲和力检查示,中药可使Bmax显著上调(P<0.05,P<0.01),KD值下降(P<0.01),多巴胺D2受体亲和力显著提高。结论:滋补肝肾、通络解毒中药可以有效缓解异动症症状,明显改善纹状体多巴胺D2受体活性。

男性精神分裂症患者吸烟与多巴胺D2受体基因多态性的关联研究

目的:探讨多巴胺D_2受体基因(DRD2)多态性与精神分裂症及精神分裂症吸烟行为的关联。方法:选取符合美国精神障碍诊断与统计手册第4版(DSM-IV)精神分裂症诊断标准的男性精神分裂症患者773例(吸烟组567例,非吸烟组206例),男性正常对照302例(吸烟组168例,非吸烟组134例)。选取DRD2的rs1800497和rs1079597单核苷酸多态性(SNP)位点为候选基因位点。采用聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)方法,利用SHEsis遗传分析平台(http:∥analysis.biox.cn/my Analysis.php)分析精神分裂症组与对照组及吸烟与非吸烟候选基因位点基因型与等位基因分布频率。结果:两个SNPs的等位基因和基因型频率分布在精神分裂症组与对照组、精神分裂症的吸烟与非吸烟组、对照组的吸烟与非吸烟组间的差异均无统计学意义(均P>0.05);由两个SNPs组成的C-A和T-G单体型在精神分裂症组中的估计频率高于对照组(8.0%vs.5.2%、10.2%vs.4.1%,均P<0.05),T-A(34.6%vs 40.2%,P<0.05)单体型在精神分裂症组中的估计频率低于对照组;由两个SNPs组成的T-A单体型在正常对照吸烟组中的估计频率低于非吸烟组(2.5%vs.6.1%,P<0.05)。结论:DRD2多态性与精神分裂症的易感性可能存在关联,而与精神分裂症患者或正常人吸烟行为的形成可能无关。

海洛因成瘾易感性与腹侧被盖区多巴胺D2受体及多巴胺转运体的关系

目的建立大鼠海洛因成瘾易感性差异模型,探讨其可能的腹侧被盖区(VTA)D2受体(D2R)及多巴胺转运体(DAT)机制。方法 130只雄性SD大鼠随机分为海洛因成瘾组(n=100)和对照组(n=30)接受7d的条件性位置偏爱(CPP)训练和2d的测评,期间两组分别给予海洛因和生理盐水注射处理。此后,成瘾组根据海洛因诱导的CPP强度挑选出高CPP组(n=30)和低CPP组(n=30)。各组大鼠再随机分为5组,在接受末次处理后分别于成瘾期、戒断第1、3、7、14天检测VTA区D2R和DAT的蛋白表达,蛋白检测采用免疫组织化学法。结果与对照组相比,高CPP组和低CPP组大鼠在成瘾期VTA区D2R和DAT蛋白表达均下降(P<0.05);戒断后第1、3、7、14天D2R及戒断第1、3天DAT仍低于对照组(P<0.05),而戒断第7、14天高、低CPP组分别与对照组的DAT差异均已无统计学意义(P<0.05);在所有检测时点,高CPP组VTA区D2R下调均比低CPP组大鼠更为明显(P<0.05),而两组的DAT表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论海洛因慢性处理可诱导大鼠VTA区D2R和DAT下调;而海洛因成瘾易感性可能与VTA区低D2R有关,但未见与DAT相关。

多巴胺D2受体基因多态性与利培酮疗效、锥体外系副反应及治疗前后泌乳素水平变化的关联分析

目的探讨多巴胺D2受体基因Taq1A多态性与利培酮的疗效、锥体外系副反应及治疗前后泌乳素水平变化的相关性。方法纳入198例首发精神分裂症患者和198名健康对照,给予患者利培酮治疗8周;采用阳性和阴性症状量表和修改的Samp-son氏锥体外系反应量表分别评定患者的疗效和锥体外系副反应(EPS);测定患者治疗前后泌乳素水平;检测所有受试者的D2受体基因Taq1A多态性。结果不同疗效组、有无EPS组的Taq1A多态性基因型和等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05),不同基因型组和不同等位基因组患者之间治疗前后泌乳素升高的差异无统计学意义(P>0.05)。结论未发现D2受体基因Taq1A多态性与利培酮的疗效、锥体外系副反应及治疗前后泌乳素变化存在关联。

多巴胺D2受体基因C957T多态性与抑郁症的关系

目的探讨汉族人群多巴胺D2受体基因C957T多态性与抑郁症的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)和直接测序法,对99例抑郁症患者(抑郁组)和99例正常对照者(对照组)多巴胺D2受体基因C957T多态性的基因型进行检测;采用HAMD评定抑郁组的症状表型,分析抑郁症症状表型与基因型的关联性。结果抑郁组与对照组的基因型分布比较差异有统计学意义(2=2.994,P=0.048);C957T等位基因频率在两组之间的差异无统计学意义(x2=2.851,P=0.054);抑郁组多巴胺D2受体基因C957T等位基因、基因型在HAMD各因子分上差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论抑郁症患者的多巴胺D2受体基因C957T多态性与抑郁症的发病有一定的相关性。

帕金森病大鼠模型尾壳核多巴胺D2受体活性变化研究

目的 探讨帕金森病病程中多巴胺D2受体的活性变化及其规律。方法 在建立6-羟基多巴胺毁损的帕金森病大鼠模型基础上,应用放射配基结合分析法结合Scanchard作图,测定不同时间点模型大鼠及对照大鼠尾壳核多巴胺D2受体的最大结合容量（Bmax）和平衡解离常数（KD）。结果 大鼠模型毁损侧尾壳核多巴胺D2受体Bmax显著升高,而KD值显著降低,在1个月时达到高峰,受体的亲合力显著增高。结论 帕金森病大鼠模型毁损侧尾壳核存在D2受体上行调节,D2受体明显超敏。

大麻素CB1受体和纹状体多巴胺D2受体参与电针镇痛机制

目的:研究大麻素CB1受体和多巴胺D2受体是否参与单次或反复电针镇痛机制。方法:以完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)造成佐剂性关节炎大鼠模型,分别对单次及反复电针后的大鼠进行痛阈和纹状体D2受体mRNA表达水平检测。同时用CB1受体拮抗剂或激动剂干预。结果:①单次和反复电针后痛阈均升高,且关节炎痛+电针+拮抗剂组的镇痛效果弱于关节炎痛+电针组(P<0.01);关节炎痛+激动剂组与关节炎痛+电针组镇痛效果比较,差异无统计学意义。②无论是单次或反复电针,关节炎痛+电针+拮抗剂组大鼠纹状体D2受体mRNA表达水平显著低于电针组(P<0.01)。③在反复电针观察组中,关节炎痛+激动剂组大鼠纹状体D2受体mRNA表达水平与关节炎痛组相比,差异无统计学意义,显著低于关节炎痛+电针组(P<0.01)。结论:在本实验条件下,单次和反复电针产生的镇痛作用可能部分通过大麻素受体CB1介导,纹状体D2受体可能也参与其中。

补肾活血饮对帕金森病大鼠脑内多巴胺D2受体含量的影响

目的探讨补肾活血饮治疗帕金森病(PD)的作用机制。方法用直接向脑组织内注入6-羟基多巴损毁脑黑质致密部的方法建立PD大鼠模型。将120只SD大鼠随机分为正常对照组、生理盐水模型组和补肾活血饮治疗组,观察各组PD大鼠异常不自主运动变化;用放射免疫法测定治疗后大鼠脑组织多巴胺D2受体(DRD2)平衡解离常数(KD)和最大结合量(Bmax)的变化;免疫组化法观察脑组织DRD2受体阳性细胞数。结果补肾活血饮组大鼠的异常不自主运动较模型组减少。补肾活血饮治疗组大鼠损毁侧脑组织DRD2 Bmax较模型组显著增高(P<0.01),KD值较模型组下降(P<0.01);DRD2受体阳性细胞数(80.9±13.59)较模型组(11.15±6.78)明显升高(P<0.01),但与对照组无显著差异(P>0.05)。结论补肾活血饮能改善PD大鼠不自主运动,促进PD模型大鼠脑组织DRD2表达,提高DRD2亲和力。

SD大鼠吗啡条件性位置偏爱易感性差异的内侧前额皮质多巴胺D2受体和多巴胺转运体机制

目的：通过研究高低吗啡条件性位置偏爱（conditioned place preference,CPP）易感性大鼠内侧前额皮质区（mPFC）的多巴胺D2受体和多巴胺转运体差异,以探讨吗啡精神依赖易感性差异的多巴胺D2受体和多巴胺转运体机制。方法：160只雄性大鼠随机分为实验组（n=130）和对照组（n=30）。建立大鼠吗啡CPP动物模型,根据吗啡处理后CPP值将大鼠分为高、中、低偏爱组。其中高、低偏爱组大鼠进入以下研究。分别于末次注射后3 h,72 h和第14天处死高偏爱组、低偏爱组和对照组各8只大鼠,利用组织原位杂交技术检测mPFC脑区多巴胺D2受体（dopamine D2recepter,D2R）mRNA和多巴胺转运体（dopamine transporter,DAT）mRNA的表达。结果：高偏爱组、低偏爱组和对照组的CPP预测试值无统计学差异（P=0.470）;CPP训练后,末次注射后3 h、末次注射后72 h和第14天,高偏爱组的CPP值与预测试值的差值均高于低偏爱组（P=0.000）。mPFC的D2RmRNA灰度值：末次用药后3 h,72 h和第14天,高偏爱组（125.43±2.90-142.92±3.32）均高于低偏爱组（122.25±2.20-136.67±5.39）（P=0.000）。DATmRNA灰度值：末次注射后3 h,高偏爱组（157.00±3.55）高于低偏爱组（150.69±3.12）（P=0.000）;在末次注射后72 h,高偏爱组（145.15±3.69）高于低偏爱组（138.84±3.99）（P=0.000）;在末次注射后第14天,高偏爱组、低偏爱组及对照组的mPFC区DATmRNA灰度值无统计学差异（P=0.458）。结论：mPFC的D2RmRNA和DATmRNA低表达可能与吗啡高易感性有关。

多巴胺D2受体显像剂^(125)I-DMAIBZM的合成及生物分布实验

许多中枢神经系统的疾病如帕金森病等,与脑内多巴胺神经递质异常有关.利用放射性脑受体显像技术可以了解多巴胺受体信息,进而获得多巴胺的信息变化.苯甲酰胺类衍生物125I-(S)-N-(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基-4-氨基-2-甲氧基苯酰胺(125I-AIBZM)与多巴胺D2受体具有很高的亲和力,但其入脑量很低.为提高125I-AIBZM的入脑量,本文对其标记前体(S)-N-(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基-4-氨基-2-甲氧基苯酰胺(ABZM)的结构进行改造,得到了新的化合物(S)-4-二甲氨基-N-(1-乙基-2-吡咯烷基)甲基-2-甲氧基苯酰胺(DMABZM).通过Idogen法对DMABZM进行标记得到标记化合物125I-DMAIBZM,标记率为74%,放化纯度达到99%.125I-DMAIBZM的脂溶性显著大于125I-AIBZM,入脑量有较大的提高.体外放射配基结合实验测得DMABZM的IC50为2.9589×10-7mol/L,表明其与多巴胺D2受体特异性结合且具有较高的亲和力,小鼠体内的分布实验表明,该标记物纹状体/小脑的放射性计数比可达6.5左右,说明该标记化合物可特异性介导到纹状体.本文结果表明,125I(123I)-DMAIBZM有望用于多巴胺D2受体的显像.

多巴胺D2受体-141C Ins/Del多态与海洛因渴求的关系

目的:探讨多巴胺D2受体-141CIns/Del基因多态与线索诱发海洛因渴求程度的关系。方法:对戒断期380名海洛因依赖者实施线索诱发渴求实验,采用PCR-RFLP技术检测其DRD2-141CIns/Del基因多态,比较不同基因型与线索诱发海洛因渴求程度的关系。结果:DRD2-141CIns/Del三种多态基因型中,线索暴露前后海洛因渴求程度的差异均无显著性(P>0.05)。结论:DRD2-141CIns/Del基因多态可能与线索诱发海洛因渴求的易感性无关。

多巴胺D2受体在创伤后应激障碍样大鼠伏隔核内的表达

目的：研究创伤后应激障碍（PTSD）样大鼠伏隔核神经元内多巴胺D2受体表达变化.方法：用连续单一刺激（SPS）方法刺激大鼠制作PTSD模型,取SPS后12h、1d、7d大鼠脑组织;非刺激的脑组织为对照组,分别用免疫组织化学和免疫印迹进行各组伏隔核中神经元多巴胺D2受体表达的观察.结果：免疫组织化学和免疫印迹结果显示,经SPS处理后,伏隔核神经元多巴胺D2受体表达于刺激后12h低于正常组,1d时可见高于正常,7d时仍处于较高水平.结论：大鼠经SPS处理后,伏隔核内多巴胺D2受体表达先降低后升高,提示该受体表达与PTSD血浆糖皮质激素变化有关,进而促进PTSD的精神症状的产生.

慢传输型便秘大鼠胃肠道多巴胺D2受体表达

目的:研究多巴胺D2受体(dopamine D2 receptor,Drd2)在慢传输型便秘(slow transit constipation,STC)大鼠消化系组织表达情况,探讨引发STC大鼠便秘发病的可能机制.方法:选取24只健康Wistar大鼠随机分成2组,实验组和对照组.实验组每天予以复方苯乙哌啶混悬液(8 mg/kg)灌胃制造慢传输便秘大鼠模型,对照组给予相等剂量的生理盐水灌胃.每5 d记录1次大便粒数、大便干质量及大鼠体质量.饲养90 d后停药1 wk,判断造模成功与否.大鼠解剖后分别选取胃窦、小肠及结肠组织,采用实时荧光聚合酶链反应法(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测组织中Drd2的表达情况.结果:通过测定比较实验组与对照组大鼠的日均粪便粒数、日均粪便质量及首粒黑便排出时间,差异均有统计学意义,判断STC大鼠造模成功.RT-PCR能特异性扩增Drd2,Drd2在S T C大鼠胃、小肠组织中的表达与对照组的表达差异无统计学意义(3.97±1.21,P>0.05;3.12±1.14,P>0.05),而在结肠组织中的表达明显高于对照组(1.93±0.78,P<0.05),差异有统计学意义.结论:STC大鼠Drd2在胃、小肠组织表达与正常大鼠的表达差异无统计学意义,在结肠组织表达显著上调,提示Drd2可能参与STC大鼠的发病机制.

刺五加对颈性眩晕患者多巴胺D2受体基因CpG岛甲基化及体外小胶质细胞的M1/M2极性的影响

目的研究刺五加对颈性眩晕(CV)患者多巴胺D2受体(DRD2)基因CpG岛甲基化及体外小胶质细胞hmc-3的M1/M2极性的影响。方法收集30例未经治疗的CV患者、30例经刺五加治疗的CV患者、30例健康者的血液,样本分别分为CV组、治疗组、健康组。培养hmc-3小胶质细胞,分别应用20μg、40μg、80μg刺五加处理hmc-3细胞,分为对照组和刺五加组。提取血液全基因组DNA,提取血液或小胶质细胞中的总RNA。RT-qPCR检测DRD2、M1表型标志物CD16、CD32、CD86和M2表型标志物Arginase 1、CD206的mRNA水平。应用亚硫酸氢盐修饰后测序法检测CV组、治疗组、健康组、对照组及刺五加组的DRD2甲基化。CCK-8法检测hmc-3细胞的增殖率变化。蛋白免疫印迹法检测DRD2、CD16、CD32、CD86、Arginase 1、CD206的蛋白水平。细胞免疫荧光法检测hmc-3细胞中的DRD2表达。结果与健康组比较,CV组DRD2的mRNA表达下调且甲基化率上调(P<0.05),但与CV组比较,治疗组的mRNA表达上调且甲基化率下调(P<0.05)。40μg、80μg的刺五加上调小胶质细胞hmc-3的增殖率和DRD2表达(P<0.05)。与对照组比较,刺五加下调M1表型CD16、CD32、CD86的mRNA和蛋白水平(P<0.05),但上调M2表型Arginase 1、CD206的表达(P<0.05)。结论刺五加抑制CV患者DRD2基因CpG岛的甲基化率,促进体外小胶质细胞的M2极性表型。

多巴胺D2受体基因Taq1A多态性与利培酮、帕利哌酮所致高泌乳素血症的关系

目的：探讨多巴胺2（D2）受体基因Taq1A多态性与利培酮、帕利哌酮所致高泌乳素血症（HPRL）的关联性。方法：92例女性精神分裂症患者给予利培酮或帕利哌酮治疗4周,于治疗前后测定血清PRL水平及治疗后的9-羟利培酮血药浓度;并检测所有受试者的D2受体基因Taq1A多态性。结果：HPRL组（治疗后PRL水平≥3 500 mIU/L者,n=30例）与LPRL组（治疗后PRL水平〈3 500m IU/L者,n=37例）Taq1A基因型等位基因频率组间差异无统计学意义（χ^2=1.73,P=0.42）;Taq1A 3种基因型（A1/A1,A1/A2及A2/A2）患者血清PRL水平治疗后均明显增高,但治疗前后差值比较,组间差异无统计学意义（F=1.40,P=0.26）。结论：未发现D2受体基因Taq1A多态性与利培酮、帕利哌酮所致HPRL存在关联。

多巴胺D2受体显像剂^(99)Tc^m-MBZM的合成及生物性能评价

本工作以舒必利 (Sulpiride)为分子模型 ,在芳环的 5位上引入巯基 (替代磺酰胺基 )合成了 (S) -(- ) - 5-巯基 - N- [(1 -乙基 - 2 -吡咯烷基 )甲基 ] - 2 -甲氧基苯甲酰胺 [简写为 MBZM ]左旋异构体。通过“3+1”(二元混合配体络合 )方案 ,合成了一种新的 D2受体显像剂 99Tcm - MBZM。其在大鼠体内的生物分布实验结果显示 ,99Tcm- MBZM在血液中的清除较快 ,30 min后降到 0 .444% ID/ g;在肝和肾脏中的放射性则持续较高 ,30 min后仍分别达 2 .1 4 8和 2 .1 84% ID/ g;在脑中的摄取量偏低 ,2 min时仅为 0 .1 4 5 % ID/ g。因此 99Tcm - MBZM不能作为脑受体显像剂。

红藻氨酸癫痫大鼠前额叶皮层多巴胺D2受体的变化及意义

利用红藻氨酸颈部皮下注射 ,诱发大鼠癫痫发作 ,用免疫组化和原位杂交方法 ,观察前额叶皮层多巴胺 D2 受体蛋白和m RNA的变化。在诱发 4,5级癫痫发作后 4周 ,模型大鼠前额叶皮层 层细胞多巴胺 D2 受体免疫反应活性及其 m RNA明显下降 ,而在 、 层则有明显上升。多巴胺 D2 受体蛋白及其 m RNA在 层的下调可能导致该层锥体细胞的脱抑制 ,从而导致其往皮层下核团如尾壳核和伏隔核的谷氨酸能输入增加。而 层的上调则可能导致该层输出信息的障碍 ,引起皮层间信息联系的改变 ,这种变化对于探讨癫痫并发的认知障碍可能具有一定的意义。

白术七物颗粒对结肠慢传输便秘大鼠结肠组织多巴胺D2受体的影响

目的研究白术七物颗粒对结肠慢传输便秘(slow transit constipation,STC)大鼠结肠组织多巴胺D2受体(Drd2)的影响,初步探讨白术七物颗粒对STC的治疗作用及作用机制。方法采用随机数字表法将60只SD大鼠分为空白组、模型组、阳性组、白术七物颗粒低、中、高剂量组,每组各10只,模型组、阳性组、白术七物颗粒低、中、高剂量组予以皮下注射盐酸吗啡注射液建立STC模型,空白组给予等量生理盐水皮下注射。记录造模期间大鼠的一般情况,造模前后各组大鼠24h粪便干重、肠道墨汁推进率。造模成功后,白术七物颗粒低、中、高剂量组大鼠灌服白术七物颗粒水溶液,阳性组大鼠灌服伊托必利片水溶液,模型组、空白组灌服等量等渗生理盐水。给药14d后检测各组大鼠结肠组织Drd2的表达水平。结果空白组大鼠运动灵活,饮食、饮水及大小便正常,其余各组大鼠造模后出现毛发枯黄、懒动、大便次数减少、颗粒粗大质硬等情况。造模前24h 6组大鼠粪便干重比较,差异无统计学意义(P>0.05),造模后,模型组、阳性组、白术七物颗粒低、中、高剂量组大鼠粪便干重、肠道墨汁推进率均低于空白组(P<0.05),模型组、阳性组、白术七物颗粒低、中、高剂量组大鼠结肠组织Drd2表达水平高于空白组(P<0.05),阳性组、白术七物颗粒低、中、高剂量组大鼠结肠组织Drd2表达水平低于模型组(P<0.05),白术七物颗粒低剂量组(白低组)大鼠结肠组织Drd2表达水平与阳性组相比,差异无统计学意义(P>0.05),白术七物颗粒中剂量组(白中组)大鼠、白术七物颗粒高剂量组(白高组)大鼠结肠组织Drd2表达水平均低于阳性组(P<0.05)。结论白术七物颗粒能有效治疗STC,其作用可能与降低结肠组织Drd2的表达水平有关。

多巴胺D2受体PET成像在制备帕金森病大鼠模型中的作用

将23只帕金森病(PD)成功模型大鼠分别进行11C-Raclopride PET显像,ROI方法测量模型大鼠两侧纹状体/小脑比值并进行统计分析,比较两侧有无显著性差异。正常与模型大鼠分别进行TH免疫组化染色。结果表明,模型大鼠毁损侧纹状体放射性明显上升,两侧纹状体/小脑比值统计比较,p值为0.000,具有显著性差异;同时,模型大鼠TH染色黑质处阳性神经元数量减少。通过PET多巴胺D2受体成像在体显示PD模型大鼠毁损侧纹状体D2受体状态,再结合行为学观察可作为证实模型成功的标准之一,为基础研究和临床诊断PD提供了一种分子成像工具。