基于HPLC-Q-TOF-MS分析陈皮中多甲氧基黄酮部位的化学成分

目的采用D101大孔吸附树脂对陈皮中的多甲氧基黄酮部位进行富集,进一步采用高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法(HPLC-Q-TOF-MS)对其中的化学成分进行分析。方法陈皮提取物经D101大孔树脂吸附后,以不同浓度乙醇溶液洗脱,富集得到多甲氧基黄酮部位;采用高效液相色谱法分析测定其中的主要黄酮类成分含量;进一步采用HPLC-Q-TOF-MS结合多甲氧基黄酮类化合物的碎裂规律对其进行定性分析。结果建立的同时测定陈皮中7种黄酮类化合物的HPLC分析方法准确、可靠。富集后的多甲氧基黄酮类部位中,川陈皮素等化合物含量显著提高。采用高分辨质谱技术,分别从陈皮提取物和多甲氧基黄酮部位中鉴定出70和60个化合物,其中多甲氧基黄酮类化合物均为53种。结论研究结果为进一步辨识陈皮中多甲氧基黄酮部位的药效物质基础及质量控制方法的建立提供了实验依据。

贡柑皮多甲氧基黄酮的提取优化及其油脂抗氧化稳定性研究

目的 优化德庆贡柑皮多甲氧基黄酮的提取,并探究其对油脂抗氧化稳定性的影响。方法 在单因素实验基础上,根据Box-Benhnken的中心组合设计实验,采用响应面法对贡柑皮中多甲氧基黄酮(polymethoxy flavonoids,PMFs)的提取工艺进行优化;采用高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, HPLC-MS/MS)分析贡柑皮中PMFs组分。结果 提取的最佳工艺参数为:料液比1:3.23 (g:mL)、乙醇浓度87%、超声提取时间46 min,提取率为6.87%;贡柑皮中含有6种PMFs,分别为橘皮素、川陈皮素、5-羟基-2’,4’,7,8-四甲氧基黄酮、黄芩黄酮Ⅱ、栀子黄素B、5-去甲基川陈皮素,相对质量浓度分别为10494.1、8428.4、826.3、678.4、141.3、12.0μg/mL;贡柑皮PMFs提取物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)和2,2’-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐[2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonicacid)ammoniumsalt,ABTS]+自由基具有清除作用,当提取物质量浓度达到2.00 mg/mL时,对DPPH自由基清除率为83.44%,对ABTS+自由基清除率为77.56%;贡柑皮PMFs提取物对油炸油饼中的油脂氧化具有一定的抑制作用,在油炸时间5 h内,添加1.00%贡柑皮PMFs提取物的样品显著降低了油脂的过氧化值和酸价,而添加0.50%贡柑皮PMFs提取物的样品茴香胺值显著降低。结论 优化后的PMFs提取率为6.87%,贡柑皮种含有6种PMFs,对自由基有清除作用且对油脂氧化有抑制作用。

柑橘类多甲氧基黄酮对小鼠的急性毒性实验研究

目的探讨不同剂量的柑橘类多甲氧基黄酮对小鼠的急性毒性。方法分别给予氯化钠溶液和多甲氧基黄酮灌胃给药后,观察小鼠的活动、饮食、饮水、体质量、死亡等情况,用加权回归法(weighted regression method,Bliss)计算半数致死量(median lethal dose,LD_(50))及95%置信区间。结果多甲氧基黄酮对小鼠的毒性实验结果表明多甲氧基黄酮对存活小鼠饮食、饮水及体质量无明显影响。通过Bliss法计算得多甲氧基黄酮的LD_(50)为3.561 g/kg,表现出一定的毒性,LD_(50)的95%置信区间为2.258~6.451 g/kg;回归方程为Y(Probit)=-1.034+1.874 lgD。结论多甲氧基黄酮具有一定的毒性,且脏器指数与病理观察显示毒性主要表现在血液血管方面,主要作用在肝、脾和肾脏,其毒性与给药剂量相关,在一定剂量范围内可安全使用。

柑橘多甲氧基黄酮的检测及分离纯化技术研究进展

多甲氧基黄酮(polymethoxylated flavones,PMFs)是柑橘属水果中特有的类黄酮,主要存在于柑橘果皮的油胞层,比其他植物类黄酮有更强的生理活性,尤其是其抗癌活性。由于PMFs的重要功能,它已成为目前柑橘精深加工研究方面的霞点和热点之一。本文简要概述了柑橘PMFs的性质、结构、含量与分布,综述了PMFs的检测及分离纯化技术研究进展,并对未来研究开发趋势进行了展望。

柑橘中多甲氧基黄酮生物活性及应用研究进展

芸香科柑橘属中的多甲氧基黄酮(PMFs),由于具有抗炎、抗氧化、抗诱变、抗癌等生物活性而备受青睐。而且PMFs的提取使得柑橘果汁加工中的果皮得到充分利用,对其深入研究具有重大的经济效益和社会效益。本文对PMFs的结构及其生物活性,在柑橘分类学研究、柑橘果汁掺假和保健食品中的应用进行了综述。

多甲氧基黄酮提取物对冷却肉保鲜效果的影响

通过将多甲氧基黄酮提取物(PMFs)对鲜猪肉进行涂膜处理,并采用PE有氧包装形式,以色价、pH值、挥发性盐基氮值(TVB-N值)、细菌总数和假单胞菌数的变化为指标,评价PMFs对冷却肉的保鲜效果。结果表明,PMFs对冷却肉具有一定的保鲜效果,与乙醇对照组相比,经PMFs处理后的冷却肉其pH值、TVB-N值、细菌总数和假单胞菌数等指标均变化缓慢,且对肉色无不良影响,可使冷却肉保质期延长至8d。

11个品种来源陈皮中多甲氧基黄酮的测定

目的测定11个品种来源陈皮Citri Reticulatae Pericarpium中多甲氧基黄酮的含有量。方法 HPLC法筛选提取溶剂(甲醇、无水乙醇、95%乙醇、乙酸乙酯、石油醚)。紫外-可见分光光度法测定18批样品中该类成分的含有量,以川陈皮素为对照品,检测波长330 nm。结果乙酸乙酯提取效果最好,故选择其作为提取溶剂。川陈皮素在3.024~13.104μg/mL范围内线性关系良好(R^2=0.999 8),平均加样回收率101.37%,RSD1.34%。不同品种来源样品中多甲氧基黄酮含有量有明显差异,以茶枝柑、大红袍、福橘、芦柑、南丰蜜橘、砂糖桔为高,均在0.4%以上。结论该方法简单准确,可有效克服其他黄酮类成分的干扰,适用于陈皮中多甲氧基黄酮含有量的测定。

高速逆流色谱法分离纯化青皮中六种多甲氧基黄酮

应用高速逆流色谱法(HSCCC)分离制备了青皮中6种多甲氧基黄酮类(Polymethoxyflavones,PMFs)化合物。以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(体积比为4∶6∶4∶6)为两相溶剂系统,在主机转速800 r/min、流动相流速2mL/min、检测波长254 nm条件下进行分离制备,460 min内从270 mg青皮粗提物中一步分离制备得到甜橙素(1,sinensetin)3.5 mg,5,7,8,4-四甲氧基黄酮(2)13.9 mg,川陈皮素(3,Nobiletin)51.3 mg,3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮(4)9.5 mg,橘皮素(5,Tangeretin)44.7 mg,5-去甲川陈皮素(6,5-O-DesmethylNobiletin)11.2 mg,纯度均达97%以上,各化合物结构经质谱和核磁共振氢谱、碳谱鉴定。利用该方法可以对青皮中的黄酮类化合物进行快速的分离和纯化。

高效液相色谱法测定陈皮多甲氧基黄酮部位中3种黄酮的含量

目的:建立陈皮多甲氧基黄酮部位中3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮、川陈皮素和 Natusdaidai 的高效液相色谱含量测定方法,并测定检测波长下各成分的响应因子,建立以3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮为单指标测定3种多甲氧基黄酮总含量的方法。方法:采用 Kromasil C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.2%醋酸溶液(1:1);流速为1 mL·min^(-1),柱温为25℃,检测波长347 nm。结果:3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮、川陈皮素、Natusdaidai 的线性范围分别为0.0732～0.732,0.0654～0.654,0.07～0.700μg,相关系数均为0.9999。加样回收率(n=5)分别为97.80%,96.71%,98.52%;RSD 分别为1.9%,1.2%,2.1%。3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮、川陈皮素和 Natusdaidai 的响应因子(RF 值)分别为3283.6,3331.8,2503.4。结论:该方法简便、准确,可用于陈皮多甲氧基黄酮部位中3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮等3种成分的含量测定。

过岗龙多甲氧基黄酮类成分的研究

目的对过岗龙[Entada phaseoloides（L.）Merr.]的化学成分进行研究。方法综合运用硅胶、反相硅胶、SephadexLH-20等色谱法进行分离,NMR、MS等波谱学方法进行结构鉴定。结果从过岗龙甲醇提取物中分离得到了5个黄酮类化合物,通过波谱分析鉴定为：3′,4′,5′,5,7-五甲氧基黄酮（1）、5,6,7,3′,4′,5′-六甲氧基黄酮（2）、5,7,3′,4′-四甲氧基黄酮（3）、3′,4′-亚甲二氧基-5′,5,6,7-四甲氧基黄酮（5）、5,5′,7-三甲氧基-3′,4′-亚甲二氧基-黄酮（4）。结论化合物1~5均是从该植物中首次分离得到。

陈皮多甲氧基黄酮类成分对人肝癌SMMC-7721、HepG_2细胞株增殖的影响

目的:研究陈皮多甲氧基黄酮类成分(CM)对人肝癌株增殖的影响。方法:采用MTT法观察CM对人肝癌株SMMC-7721、HepG2的生长抑制作用;采用Wright-Giemsa染色观察CM作用于SMMC-7721、HepG2细胞株的形态变化。结果:CM20 mg/L、40 mg/L作用于SMMC-7721细胞株48 h,细胞抑制率分别为21.84%、44.83%,72 h细胞抑制率分别为40.00%、60.00%;CM20 mg/L、40 mg/LHepG2细胞株48 h,细胞抑制率分别为38.54%、51.04%,72 h细胞抑制率分别为43.40%、55.67%;CM与SMMC-7721、HepG2细胞株共同作用48 h,大部分细胞出现明显凋亡特征。结论:CM可以抑制人肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2的生长并对两株细胞的增殖呈现时间、浓度依赖性。

RP-HPLC-DAD法测定陈皮中3种多甲氧基黄酮的质量分数

利用高效液相色谱法（RP-HPLC-DAD）,建立同时测定陈皮中3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮、8-羟基-3,5,6,7,3′,4′-六甲氧基黄酮和5-羟基-3,6,7,8,3′,4′-六甲氧基黄酮质量分数的定量分析法,并采用 Cosmosil C18-Ar-Ⅱ（4.6 mm ×250 mm,5μm ）色谱柱, V （乙腈）∶V （ρ（醋酸）=0.2%）为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为258 nm,柱温25℃.结果表明：3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮的线性范围为0.01~10.0μg （r 2=0.9992）,平均回收率为99.7%,相对标准偏差（RSD）为0.50%；8-羟基-3,5,6,7,3′,4′-六甲氧基黄酮的线性范围为0.05~10.0μg （r 2=0.9994）,平均回收率为101.8%, RSD为2.0%；5-羟基-3,6,7,8,3′,4′-六甲氧基黄酮的线性范围为0.025~5.0μg （r 2=0.9998）,平均回收率为100.2%,RSD为1.7%.

锦橙皮中多甲氧基黄酮提取物的抗氧化活性和抗DNA损伤作用

利用化学发光法研究锦橙皮中多甲氧基黄酮提取物(PMFs)的体外抗氧化活性及其对DNA损伤的保护作用。分别采用Pyrogallol-Luminol化学发光体系、CuSO4-Phen-VC-H2O2化学发光体系和H2O2-Luminol化学发光体系测定PMFs对超氧阴离子自由基、羟基自由基及过氧化氢的清除能力。采用CuSO4-Phen-VC-H2O2-DNA化学发光体系衡量PMFs对DNA损伤的保护作用。结果表明:PMFs可有效清除超氧阴离子自由基、羟基自由基和过氧化氢的半数抑制率(IC50)分别为6.1、7.8、0.6μg/ml;PMFs对DNA损伤能产生较好的保护作用,其保护机制属于抑制型,IC50为4.0μg/ml。

枳实中多甲氧基黄酮类化合物的研究

目的研究枳实中的多甲氧基黄酮类化合物。方法对枳实95%乙醇提取物的醋酸乙酯部分和正丁醇部分进行色谱分离,通过核磁共振和质谱分析鉴定其化合物的结构。结果从枳实中分离鉴定出4个多甲氧基黄酮类化学成分,分别为桔皮晶(Tangeretin,Ⅰ),蜜桔黄素(Nobiletin,Ⅱ),4',5,7,8-四甲氧基黄酮(4',5,7,8-Tetramethoxyflavone,Ⅲ),5-降甲基蜜桔黄素(5-Demethylnobiletin,Ⅳ)。结论Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ化合物均为首次从枳实中分离得到。

高效液相色谱法测定不同品种来源陈皮中多甲氧基黄酮含量

目的测定19个品种来源陈皮中多甲氧基黄酮川陈皮素和桔皮素的含量。方法色谱柱为Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为水(A)-甲醇(B)二元梯度洗脱(0~6 min时60%B,6~18 min时60%B→100%B),流速为1.0 mL/min,柱温为25℃,检测波长为326 nm。结果川陈皮素和桔皮素进样量分别在27.04~1 352.01 ng(r=0.999 9)和14.286~714.320 ng(r=0.999 6)范围内与峰面积线性关系良好,平均回收率分别为98.02%和98.60%,RSD为1.59%和2.75%(n=6);19批陈皮样品中川陈皮素和桔皮素含量测定结果分别为0.031%~0.968%,0.011%~0.546%,表明不同品种来源陈皮中多甲氧基黄酮含量有明显差异,江西南丰蜜桔、四川红橘和重庆江津大红袍含量较高,川陈皮素均在0.4%以上,桔皮素均在0.2%以上。结论经方法学验证,该方法可用于陈皮药材中川陈皮素和桔皮素的含量测定。

生物活性多甲氧基黄酮羧酸和氨基酸衍生物的合成及其结构表征

多甲氧基黄酮(PMFs)是一类存在于柑橘属植物中具有显著抗癌、抗炎和抗氧化等生物活性的天然产物。为了提高多甲氧基黄酮类化合物的水溶性和药用价值,以2种来源丰富且抗癌活性高的多甲氧基黄酮橘皮素和川陈皮素为底物,分别经过氧丙酮氧化得到多甲氧基黄酮醇[3-羟基橘皮素(7)和3-羟基川陈皮素(8)],化合物7和化合物8分别在K2CO3和N,N-二甲基甲酰胺条件下与氯乙酸乙酯进行Williamson反应,生成了多甲氧基黄酮羧酸酯类衍生物,再经碱性水解合成了2种未见文献报道的多甲氧基黄酮羧酸衍生物[橘皮素-3-O-乙酸(1)和川陈皮素-3-O-乙酸(2)]。化合物1和化合物2在CH2Cl2作溶剂、1-(3-二甲基丙胺)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐为缩合剂和4-N,N-二甲氨基吡啶为辅助剂的条件下,分别与2种不同的氨基酸甲酯盐酸盐发生缩合反应,得橘皮素和川陈皮素的氨基酸甲酯衍生物,然后经水解反应得到了4种新型多甲氧基黄酮氨基酸衍生物3~6。对所合成的化合物用1H NMR、13C NMR和MS等方法进行了结构表征。

陈皮多甲氧基黄酮类成分对人乳腺癌MCF-7、肝癌HepG2细胞株增殖抑制作用及其敏感性比较

目的:研究陈皮多甲氧基黄酮类成分(CM)对人乳腺癌、肝癌细胞株的增殖抑制作用并对其敏感性进行比较。方法:采用MTT法观察CM对人乳腺癌MCF-7、肝癌HepG2细胞株的增殖抑制作用。结果:不同剂量CM(10mg/L、20mg/L、40mg/L)作用于MCF-7细胞株,24h细胞抑制率分别为18.75%、19.79%、34.38%,48h细胞抑制率分别为17.39%、36.96%、40.22%,72h细胞抑制率分别为35.57%、47.08%、50.69%;作用于HepG2细胞株,24h细胞抑制率分别为5.51%、11.81%、29.92%,48h细胞抑制率分别为13.54%、38.54%、51.04%,72h细胞抑制率分别为13.21%、43.40%、55.67%。结论:CM可以抑制人乳腺癌MCF-7、肝癌HepG2细胞株的生长并对两细胞株的增殖抑制呈现时间、浓度依赖性。同等条件下,在小剂量、短时间作用时,MCF-7对于CM作用的敏感性较高;在大剂量、长时间作用时,HepG2表现出比MCF-7更高的敏感性。

HPLC-ESI-MS/MS快速鉴定蜜橘中4种多甲氧基黄酮

通过HPLC-ESI-MS/MS技术分离鉴定出蜜橘中4种多甲氧基黄酮,分别为蜜橘黄素、35,,6,7,83,’,4’-七甲氧基黄酮、5-降甲基蜜橘黄素、橘皮晶。干燥蜜橘幼果粉碎后用95%乙醇热回流提取,石油醚萃取。HPLC条件为色谱柱:XBridgeTM C18(4.6×250 mm,5μm);流动相:甲醇:水=60:40(体积比);流速:0.8 mL/min;检测波长:330 nm。MS条件:ESI+,鞘气、辅助气为N2,喷雾电压4.5 kV。

DAD-HPLC法同时测定龙须藤总黄酮中5种多甲氧基黄酮

目的建立DAD-HPLC法同时测定龙须藤总黄酮中5种多甲氧基黄酮的含有量。方法总黄酮甲醇提取液的分析采用Phenomenex Luna C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈-水为流动相,等度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长332、320、338、328 nm。结果 5,6,7,5’-四甲氧基-3’,4’-亚甲二氧基黄酮(PMF1)在69.44~416.64 ng(R^2=0.999 97)、5,6,7,3’,4’,5’-六甲氧基黄酮(PMF2)在119.28~715.68 ng(R^2=0.999 98)、5,6,7,3’,4’-五甲氧基黄酮(PMF3)在51~306 ng(R^2=0.999 95)、3’,4’-亚甲二氧基-5,7,3’-三甲氧基黄酮(PMF4)在29.91~179.46 ng(R^2=0.999 89)、5,7,3’,4’,5’-五甲氧基黄酮(PMF5)在98.4~590.4 ng(R^2=0.999 99)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为100.17%、99.81%、99.80%、100.09%、99.54%,RSD分别为1.15%、1.46%、1.29%、1.80%、1.81%。结论该方法快速简便,灵敏度高,可用于龙须藤总黄酮的质量控制。