聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法对太白贝母鉴别检验的适用性探讨

目的:探讨聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)对于太白贝母的适用性。方法:采集太白贝母野生及栽培品,收集市场上太白贝母伪品,利用性状、PCR-RFLP鉴别法、DNA序列分析三种方法分析太白贝母与常见伪品的区别。结果:从性状上看,太白贝母栽培品与伪品往往非常相似,较难辨别;通过PCRRFLP方法可以正确、客观的鉴别太白贝母与常见伪品,基于ITS2的DNA条形码方法进一步验证了PCR-RFLP法的准确性。市场上太白贝母的伪品多为伊犁贝母。结论:PCR-RFLP鉴别法可准确鉴别太白贝母与其伪品;市场上太白贝母伪品较多,应加强监管。

聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性和芯片生物分析技术用于渤海地区鱼种鉴定

以渤海湾具有重要商业价值的9种海鱼(小黄鱼、花鲈、蓝点马鲛、鲐、钝吻黄盖鲽、棘头梅童鱼、许氏平鲉、高眼鲽和长蛇鲻)为研究对象,利用聚合酶链式反应(PCR)-限制性片段长度多态性(RFLP)和芯片生物分析技术对其进行鱼种鉴定。首先提取其基因组脱氧核糖核酸(DNA),对其细胞色素b的特定片段(464bp)进行扩增,然后选择DdeⅠ、HaeⅢ和NlaⅢ3种限制性内切酶进行酶切,并利用芯片生物分析技术得到酶切产物的特异图谱和确切的片段大小,从而有效区分了9种海鱼。研究结果表明,PCR-RFLP和芯片生物分析技术在鱼种鉴定上具有精确、鉴别和快速三大优势,可为鱼类食品检测提供科学依据。

鉴别猪瘟强毒和弱毒的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)检测方法的建立

【目的】建立一种能区分猪瘟病毒(classicalswinefever,CSFV)强毒和弱毒的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)检测方法。【方法】根据GenBank上登录的现有CSFV基因组全序列,选择高度保守区设计了一对CSFV通用引物,并在该对引物跨越区域的内部设计了猪瘟兔化弱毒疫苗和强毒特异性引物,建立了一种能区分猪瘟强毒和弱毒的RT-nPCR鉴别诊断方法。【结果】应用该方法从猪瘟兔化弱毒疫苗和石门强毒株基因组中扩增出了大小分别为447和343bp的一条特异性片段,从两种病毒基因组混合物中扩增出了大小为447和343bp的两条特异性片段,但对牛病毒性腹泻病毒和其它常见猪源病毒细胞培养物以及正常细胞基因组进行检测时均为阴性。该方法可以检测出0.04pg的CSFVRNA。对从黑龙江省采集的15份疑似猪瘟病料进行了检测,结果表明,有14份类似猪瘟强毒,1份类似弱毒疫苗。限制性片段长度多态性和种系发生分析证实了RT-nPCR的检测结果。【结论】本研究建立的RT-nPCR可以有效区分猪瘟强毒和弱毒,减少了未感染的免疫猪被误杀的可能性。

聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法用于检定川贝母掺伪情况的研究

目的:探讨聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法在检定川贝母掺伪中的应用。方法:将川贝母药材DNA与伊贝母药材DNA按不同比例混合,进行PCR扩增,限制性内切酶SmaI作用及琼脂糖凝胶电泳。通过这些实验,可以知道混合样品中伪品的检出限。接着,为了探究本实验中条带灰度与掺伪比例之间的关系,用Image J软件分析凝胶电泳图上的条带,根据未切割条带与切割条带的灰度比,得到标准化值。通过标准化值和掺伪比例2个参数,得到标准曲线,并进行准确性验证。结果:低至0.5%的掺伪比例即可通过该方法被检测。随着掺伪比例增加,未切割条带逐渐增强,切割条带逐渐减弱,两者条带的灰度比值也逐渐增加,到掺伪50%时,几乎没有肉眼可见的切割条带。根据不同掺伪比例对应的标准化值做出标准曲线,经验证该标准曲线的误差率约为0.94%。结论:PCR-RFLP法用于川贝母掺伪检测的检出限为0.5%,灵敏度高;且可通过条带灰度定量的方法反应掺伪比例大小。本研究为改变川贝母PCR-RFLP检验的取样方式和确定取样量提供了实验依据。

两种白茅根聚合酶链式反应法-限制性片段长度多态性分析鉴别方法的研究

目的从分子水平鉴别2种不同性状的白茅根。方法采用植物通用DNA条形码ITS1、ITS2、psb A-trnH、rbc L和mat K对30份白茅根样品的序列进行比较研究,分析2种不同性状白茅根的多个位点差异。结果 30批白茅根的psb A-trnH、rbc L和mat K基因序列无位点差异,ITS1序列含3个关键差异位点,ITS2序列含1个关键差异位点,且ITS2序列上的关键差异位点可被限制性内切酶Hpy CH4Ⅲ识别。结论 ITS1和ITS2序列可作为2种不同性状白茅根鉴别用的DNA条形码序列,且利用ITS2序列上可被限制性内切酶Hpy CH4Ⅲ识别的关键差异位点可建立2种不同性状白茅根的PCR-PFLP鉴别方法。

性别和检测方法对乙醛脱氢酶2基因多态性的影响

目的考察性别因素和两种不同检测方法对乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因遗传多态性的影响。方法应用基因芯片法对271例来院就诊患者进行ALDH2基因检测,按性别分类进行基因多态性分析;应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析法,对其中61例进行检测以比较两种方法的差异。结果基因芯片法中野生型占55.0%(149/271),突变型占45.0%(122/271);男性中GG型占54.5%(91/167),GL型占38.3%(64/167),LL型占7.2%(12/167);而女性中GG型占55.8%(58/104),GL型占35.6%(37/104),LL型占8.7%(9/104),在男性和女性中,ALDH2各基因型的发生率无显著差异;PCR-RFLP法中GG型占65.6%(40/61),GL型占32.8%(20/61),LL型占1.6%(1/61),与基因芯片法结果相比各基因型的发生率无显著差异。结论性别及检测方法(PCR-RFLP与基因芯片法)对ALDH2基因多态性的影响在统计学上无显著差异。

肿瘤坏死因子α基因(TNFα)-G308A多态性与精神分裂症的关联

目的 :探讨肿瘤坏死因子α基因 (TNFα) -G3 0 8A多态性与精神分裂症的关系。方法 :收集14 1个核心家系 ,每家有 1名符合ICD -10精神分裂症诊断标准的患者 ,患者的生物学父母均健在 ;用聚合酶链式反应 -限制性片段长度多态性 (PCR -basedRFLP)分析方法检测所有研究对象的TNFα -G3 0 8A基因型。结果 :传递不平衡检验 (TDT)显示等位基因的传递具有统计学显著性差异 ( χ2TDT=7 70 44 ,P =0 0 0 5 )。结论 :肿瘤坏死因子α基因 (TNFα) -G3 0 8A多态性与精神分裂症相关联 ,支持肿瘤坏死因子α基因(TNFα)是精神分裂症的候选基因。

药物代谢酶CYP3A在中国肾移植人群的遗传多态性

目的:建立药物代谢酶CYP3A4、CYP3A5的多个等位基因分型方法,为进一步从基因水平研究CYP3A与机 体对药物反应的个体差异本质及其与药物代谢的相关性提供分子生物学实验方法;探讨药物代谢酶CYP3A在中 国肾移植人群的遗传多态性。 方法:用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性(PCR RFLP)法及特异性等位基因 扩增(PCR ASA)法分别建立了CYP3A的CYP3A4亚型三个新突变点(CYP3A4 4、 5、 6)及CYP3A5亚型的 CYP3A5 3基因分型方法,并对中国肾移植人群进行基因分型。 结果:CYP3A4 4、 5、 6、CYP3A5 3在中 国肾移植人群的基因频率分别为0.75%、0.76%、0.75%和27.83%;个体突变率分别为2/133、3/197、3/200和 55/115。 结论:研究结果提示,中国肾移植人群中CYP3A4 4、 5、 6、CYP3A5 3的存在可能使其表达的药 物代谢酶活性改变,从而影响药物在体内的代谢过程。

线粒体ATPase-6基因多态性与男性精子活力的关系

目的探讨线粒体ATP合成酶6亚基(ATPase-6)基因多态性与男性精子活力的关系。方法选择弱精子症患者319例(观察组)及精子活力正常者344例(对照组),采用聚合酶链式反应—限制性片段长度多态性分析技术检测其线粒体ATPase-6基因(+9 052 bp)的HaeⅡ酶切位点多态性,并对两组的基因型分布及等位基因频率进行Hardy-Weinberg平衡检测,分析ATPase-6突变基因频率与精子活力的关系。结果观察组的hh、Hh、HH基因型分布分别为19.74%、1.25%、79.01%,对照组分别为4.94%、0.58%、94.45%,两组基因型分布均处于Hardy-Weinberg平衡范围;但观察组的突变型基因(h)频率明显高于对照组(P<0.01)。结论 ATPase-6基因(+9 052bp)HaeⅡ酶切位点突变可能影响ATPase-6基因的翻译效率,进而影响男性精子活力,引起弱精子症。

转化生长因子β1启动子区C-509T位点基因多态性与肝纤维化关系

目的:建立多聚酶链式反应-限制性片段长度多态分析(PCR-RFLP)法检测转化生长因子β1(TGF-β1)启动子区C-509T位点的变异并探讨其在肝纤维化中的作用．方法:根据TGF-β1启动子区基因设计引物, 在C-509T位设计Bsu36 I酶切位点,根据PCR 产物酶切结果判断该位点为C或T．观察对象为慢性乙型肝炎患者50例,乙型肝炎后肝硬化患者46例．结果:测序显示本文两株纯合子与TGF-β1启动子区序列同源性在99％以上,并在C-509T 位点出现预期变异:乙型肝炎和乙型肝炎后肝硬化两组都是以CT基因型为主,但是肝硬化组CC基因型(28.3％)高于TT基因型(19．6％), 而肝炎组TT基因型(22％)高于CC基因型(4％), 几组之间有显著性差异(P<0．01)．结论:本文建立的方法可用于TGF-β1启动子区C-509T住点基因多态性的检测,该位点CC 基因型可能与肝纤维化有关．

MCP-1基因启动子区-2518位G/A多态性与瘢痕疙瘩的相关性分析

背景与目的：探讨单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）基因启动子区-2518G/A多态性与瘢痕疙瘩发病风险的关系。材料与方法：以92例瘢痕疙瘩患者和180例性别、年龄匹配的正常人为对象进行病例-对照研究,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP）技术结合DNA测序对MCP-1基因启动子区-2518G/A多态性进行分析。结果：MCP-1基因-2518G/A等位基因和基因型频率在瘢痕疙瘩组和正常对照组间的分布无显著性差异（P值分别为0.419和0.415）。瘢痕疙瘩组分层后显示,多发性瘢痕疙瘩患者中A等位基因携带者频率为83.8%,明显高于皮损单发者（63.6%）（P=0.035,OR=2.952,95%CI：1.051~8.290）。结论：MCP-1基因-2518位A等位基因的存在可能与多发性瘢痕疙瘩的形成和发展有一定的相关性。

不同强迫症状的临床特点及与5-HT2A/T102C多态性的关系

目的探讨强迫症、伴强迫症状的精神分裂症和氯氮平导致强迫症状的精神分裂症三者的症状学差异及与5-HT2A/T102C多态性之间的关系。方法使用Yolle-Brown强迫量表(YBOCS)、汉密顿焦虑量表(HAMA)、汉密顿抑郁量表(HAMD)及阳性和阴性症状量表(PANSS)量表进行临床症状评定;采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测5-HT2A/T102C多态性。结果3组的强迫思维和强迫行为发生率差异具有显著性:强迫症组71.4%和57.1%;精神分裂症伴强迫组66.7%和66.7%;氯氮平导致强迫组33.3%和73.3%;各组5-HT2A/T102C多态性的基因型(TT、TC、CC)和等位基因(T、C)频率间差异无显著性:强迫症组45.7%、40%、14.3%、65.7%和34.3%;精神分裂症伴强迫组46.7%、40%、13.3%、66.7%和33.3%;氯氮平导致强迫组46.7%、40%、13.3%、66.7%和33.3%;正常对照组56.3%、31.3%、12.5%、71.9%和28.1%。结论此三种情况下的强迫症状之间存在症状学差异;5-HT2A/T102C多态性可能不是这三种强迫症状发生的易感因子。

环氧化酶2启动子区基因多态性与慢性牙周炎的关系

目的:研究环氧化酶2启动子区-765位点、-1195位点单核苷酸多态性与慢性牙周炎遗传易感性的关系.方法:根据慢性牙周炎的诊断及纳入标准收集150例慢性牙周炎患者及143名健康对照者,检查牙周状况并根据牙周附着丧失的程度进行分类,用问卷调查了解受试者的一般情况.取患者的颊黏膜拭子提取其基因组DNA,采用多聚酶链反应?限制性内切酶片段长度多态性的方法检测环氧化酶2-765位点G>C及-1195位点G>A的基因型分布并分析其基因多态性与慢性牙周炎易感性的关系.结果:环氧化酶2-765位点G>C基因型频率在各组间无显著性差异,但-1195位点G>A的基因型分布在中、重度牙周炎患者较健康对照者之间有统计学差异(P<0.05),携带GA或AA基因型可使牙周病的患病风险增加(OR3.3,95%CI 1.6～6.9或OR3.7,95%CI 1.5～9.5),中、重度牙周炎患者AA或GA基因型频率较健康对照者显著增加.结论:环氧化酶2启动子区-1195位点单核苷酸多态性与慢性牙周炎的易感性有关.

皮肤癌与锰超氧化物歧化酶信号肽基因多态性关系的研究

利用聚合酶链式反应与限制性片段长度多态性 (PCR- RFLP)，检测了 52例皮肤癌和 50名正常人锰超氧化物歧化酶 (MnSOD)信号肽基因的多态性位点 V- 9A。结果，皮肤癌患者与正常对照相比具有较高的- 9A等位基因频率和 A/A基因型频率，表明 MnSOD信号肽基因的多态性位点 V- 9A与皮肤癌发病相关。

新疆维吾尔族人群细胞色素P450酶同工酶2C19基因多态性：与汉族人群的比较(英文)

背景:研究已证实细胞色素P450酶同工酶2C19,其代谢表型呈现遗传多态性,表现为强、弱代谢型,而且存在显著的种族间和个体间差异。目的:观察新疆维吾尔族人群胞色素P450酶同工酶2C19基因多态性分布情况。方法:纳入144例新疆维吾尔族和156例汉族健康志愿者,采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性法进行细胞色素P450酶同工酶2C19基因多态性分析,进一步观察维吾尔族和汉族人基因表型和基因频率的差异。结果与结论:新疆维吾尔族人群强代谢型基因wt/wt,wt/m1,wt/m1+wt/m2的总频率明显高于汉族(P<0.05),而弱代谢型基因m1/m1的总频率明显低于汉族(P<0.05)。维吾尔族和汉族的wt,m1,m2的等位基因频率差异均有显著性意义(P<0.05),其中m1等位基因频率为m2的58倍(P<0.01)。结果显示,中国新疆维吾尔族人群胞色素P450酶同工酶2C19弱代谢型(m1/m1)频率低于汉族,由于m1等位基因频率远高于汉族人群,因此维吾尔族胞色素P450酶同工酶2C19基因突变以m1型为主。

IL-23R rs17375018单核苷酸多态性与广西肝癌人群的相关性

目的探讨IL-23R基因单核苷酸多态性与广西肝癌人群的关系。方法采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法对270例肝癌患者和251例对照者的IL-23R rs17375018位点进行基因分型，分析其基因型、等位基因频率与肝癌的关系。结果IL-23R rs17375018位点G等位基因频率在肝癌组与对照组中的分布差异有统计学意义（OR=1．362，95％C／：1．002—1．851，P=0．049）。结论1L-23R rs17375018位点的G等位基因可能与广西肝癌人群发病相关。

西藏藏族人群白细胞介素1β基因-511C／T多态性

目的：研究白细胞介素1β（IL-1β）启动子-511位点C／T单核苷酸多态性（SNP）在西藏藏族健康人群中的分布特点。方法：采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）的方法，对144名西藏拉萨市藏族人群IL-1β-511位点SNP进行检测，计算其基因型频率和等位基因频率。结果：西藏拉萨市藏族人群IL-1β-511点基因型以CT杂合子型最为多见（52．72％），TT纯合子型次之（36．11％），CC纯合子型较少（11．11％）；其等位基因分布也是以T等位基因最为多见（62．50％），其次为C等位基因（37．50％）。西藏藏族人群的等位基因频率分布与奥地利人、非洲黑人、非洲白人、日本人差异均有统计学意义。结论：西藏拉萨市藏族人群中IL-1^-511位点基因型以CT和TT型为主，等位基因以T为主，其SNP分布与其他种族之间存在差异。

TGF-β1-509C/T基因多态性与不同中医证型原发性膝骨关节炎的关系

目的探讨TGF-β1-509C/T基因多态性与不同中医证型原发性膝骨关节炎（primary knee osteoarthritis,PKOA）遗传易感性的关系。方法采用关联分析,严格按照病例纳入标准,随机选取湖南地区PKOA患者88例（瘀血阻滞组52例,肾虚亏髓组36例）,应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）对所选对象TGF-β1-509位点基因和基因型进行检测。结果瘀血阻滞型PKOA组携带CC基因型的频率明显要高于对照组（50.0%vs 13.5%;χ~2=15.996,P〈0.05）,差异有统计学意义;Logistic回归分析结果显示,与TGF-β1-509位点TT基因型相比,携带TGF-β1-509位点CC基因型有患瘀血阻滞型PKOA风险（OR=9.75,95%CI=7.10-13.46））。结论 TGF-β1-509位点与瘀血阻滞型PKOA相关,CC基因型是瘀血阻滞型PKOA易感基因型。

叶酸代谢酶基因多态性与胚胎停止发育的相关性

目的探讨叶酸代谢酶基因多态性与胚胎停止发育的相关性。方法选取有胚胎停育史114例(胚胎停育组)和正常妊娠妇女125例(对照组),采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术检测两组亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)、还原叶酸载体及蛋氨酸合酶等叶酸代谢酶的基因多态性,并对其叶酸利用能力风险进行分级评定。结果胚胎停育组MTHFR C677T的T等位基因分布与对照组比较有统计学差异(P<0.05);胚胎停育组MTHFR C677T TT基因型和MTRR A66G GG基因型占比高于对照组(P均<0.05)。Logistic回归分析显示,MTHFR C677T位点的TT基因型和MTRR A66G位点的GG基因型是发生胚胎停育的危险因素,其发生风险分别是对照组的4.127和4.528倍(P均<0.05)。胚胎停育组叶酸利用能力中度风险和高度风险的分布比例高于对照组(P均<0.05)。结论MTHFR C677T位点和MTRR A66G位点的突变与胚胎停止发育有关。

BIC/miR-155基因及毗连区多态性与中国汉族人群支气管哮喘相关性

目的探讨BIC/miR-155基因及毗连区rs1893650、rs2829803、rs2282471和rs2829806位点多态性与中国汉族人群支气管哮喘的相关性。方法采用病例-对照的方法,用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法分析比较了508例支气管哮喘患者与491例正常人之间基因型、等位基因频率,用Logistic回归分析它们对哮喘危险度的影响。结果 4个SNPs的等位基因频率与对照组相比,差异均无统计学意义(P> 0. 05)。相对TT基因型,rs1893650位点的CT基因型(OR=0. 650,95%CI=0. 466～0. 906,P=0. 011)和CC+CT基因型(OR=0. 695,95%CI=0. 508～0. 952,P=0. 023)均降低了哮喘发生的风险;同样,相对TT基因型,rs2829806位点的TG基因型(OR=0. 666,95%CI=0. 474～0. 936,P=0. 019)和GG+TG基因型(OR=0. 710,95%CI=0. 515～0. 979,P=0. 037)也均降低了哮喘发生的风险。而rs2829803和rs2282471位点的基因型与哮喘发生的危险性均无关(P> 0. 05)。结论 BIC/miR-155基因及毗连区的单核苷酸多态性可能与中国汉族人群哮喘易感性有关。但BIC/miR-155基因及毗连区中的这种遗传变异对哮喘易感性的影响需要进一步的研究。