多花黄精种子生理后熟过程的生理变化及基因表达模式分析

【目的】探明多花黄精种子生理后熟过程中生理生化变化规律及差异基因表达情况。【方法】以多花黄精种子生理后熟过程6个阶段的种子为材料,采用化学测定方法,分析每个阶段的超氧化物歧化酶、α淀粉酶、β淀粉酶、可溶性蛋白、粗脂肪、可溶性糖含量。采用高通量转录组测序技术,对6个阶段的差异表达基因进行分析,并用qRT-PCR法对关键差异基因的表达量进行验证。【结果】(1)多花黄精种子生理后熟过程中,可溶性糖含量在前4个时期逐渐增高后,在后两个时期稍有下降;粗脂肪、蛋白质整体呈下降趋势;α-淀粉酶活性及β-淀粉酶活性呈现增强趋势。(2)多花黄精种子生理后熟过程中,蔗糖和淀粉代谢途径、激素信号转导通路等显著富集差异表达基因。【结论】多花黄精种子生理后熟过程中,淀粉等营养物质的代谢、转化与内源激素的协调作用,促进多花黄精种子的生理后熟。

葛根纳米银的制备及对多花黄精种子萌发影响的初步研究

目的:以葛根淀粉和硝酸银为反应原料,制备葛根纳米银材料,考察其特征及对多花黄精种子萌发的影响。方法:通过微波加热合成纳米银水溶胶,并采用UV-Vis、TEM、FTIR、XRD和EDS对性能进行表征,在MS培养基中添加纳米银,研究不同浓度纳米银对多花黄精种子萌发的影响。结果:采用100 mL小烧杯(葛根淀粉液50 mL)的单因子优化实验表明,适宜的条件为:AgNO3浓度4.0 g/L、APG溶液0.4 mL、NaCl浓度0.04 g/L、pH值13、微波加热40 s。根据单因子优化条件,采用1 L大烧杯(葛根淀粉液500 mL)放大制备试验,得到的纳米银水溶胶在396.7 nm处出现特征吸收峰,纳米银颗粒为类球形,结晶度较高,含有C、O和Ag元素。在MS+6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.2 mg/L培养基中加入终浓度为5 mg/L的纳米银,选择沙藏50 d、GA3100 mg/L处理24 h的多花黄精种子接种在上述培养基中,与未添加纳米银的对照相比,种子开始萌发时间大大缩短,萌发率显著提高,达79.6%,根茎芽浓绿,根系发达。结论:以葛根淀粉和硝酸银为原料成功制备了类球形、粒径小、结晶度高的纳米银材料;在培养基中加入该纳米银5 mg/L时,能促进多花黄精种子的萌发。

响应面法优化超声提取多花黄精多糖工艺及其生物活性研究

通过响应面法和超声波辅助法优化多花黄精多糖的提取工艺,并研究多糖的抗氧化活性。采用单因素试验及Box-Behnken Design方法,以提取物中多糖的含量作为评估指标,以确定最佳提取工艺。结果显示,超声功率对多花黄精多糖含量影响有显著影响,液料比、超声波时间、超声波温度对实验结果影响不大。多花黄精多糖的最佳提取工艺条件为:液料比41 mL/g、超声时间40 min,超声功率151 W,超声温度59℃,最佳提取工艺条件下多花黄精多糖含量可达(16.67±0.53)%,且具有较强的抗氧化活性,30 mg/mL的多花黄精多糖对DPPH·的清除率为(61.35±0.96)%,对ABTS^(+)·的清除率为(97.58±0.70)%。因此,基于对多花黄精多糖的超声辅助进行响应面优化的提取工艺可靠、提取率高,可为进一步开发利用多花黄精提供依据。

腐殖质对干旱胁迫下多花黄精叶片生理生化特性的影响

【目的】通过研究干旱胁迫下多花黄精生理生化指标的变化,综合评价腐殖质对其抵御干旱胁迫的影响,为多花黄精节水栽培提供理论依据。【方法】采用盆栽实验,分别以腐殖质土和黄土(对照基质)为培养基质,设置正常供水(土壤含水量80%~85%)、轻度干旱(土壤含水量60%~65%)、中度干旱(土壤含水量40%~45%)、重度干旱(土壤含水量20%~25%)4个控水梯度,测定多花黄精叶片相对电导率、丙二醛含量、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、超氧化物歧化酶活性和过氧化物酶活性等生理生化指标的变化。【结果】轻度干旱胁迫不会导致多花黄精叶片生理生化抗旱指标发生明显变化;中度干旱胁迫对多花黄精叶片生理生化产生较明显影响,腐殖质土基质中多花黄精叶片相对含水量、叶绿素含量、SOD活性、POD活性比对照基质分别少下降0.34%、4.99%、18.37%、2.90%,相对电导率、MDA含量分别少增加10.30%、9.12%,可溶性糖含量、可溶性蛋白含量分别多增加3.60%、1.79%;重度干旱胁迫对多花黄精叶片生理生化产生明显影响,腐殖质土基质下多花黄精叶片的相对含水量、叶绿素含量、SOD活性、POD活性比对照基质分别少降低2.16%、5.14%、19.92%、8.56%,相对电导率、MDA含量分别少增加14.16%、16.86%,可溶性糖含量、可溶性蛋白含量分别多增加4.06%、2.35%。隶属函数法综合评判得出腐殖质土基质栽培下多花黄精抗旱隶属函数值比对照基质提高了151%。【结论】腐殖质作为多花黄精促生长的栽培基质,在干旱胁迫下可提高多花黄精生理生化抗旱指标的稳定性,并通过增加渗透调节物质含量的方式在一定程度上抵御干旱胁迫。

多花黄精根须皂苷的提取工艺及其抗氧化活性研究

多花黄精根须一直以来被认为是利用价值低的加工副产物,极少有相关研究报道。该研究旨在明确多花黄精根须皂苷的较优提取工艺,并了解其抗氧化活性。响应面分析表明,最佳提取工艺为:72%乙醇体积分数,1∶25 g·mL^(-1)料液比,41 min提取时间。通过拟合分析得到提取率(Y)与乙醇体积分数(A)、料液比(B)、提取时间(C)的关系方程为:Y=5.58+0.5162A+0.0788B+0.05C-0.02AB-0.0075AC-0.0025BC-1.38A2-0.4395B2-0.257C2。通过验证表明,最优条件下皂苷提取率为5.62%,与理论最高值5.628%非常接近。体外抗氧化试验结果表明,皂苷IC50DPPH值为0.87 mg·mL^(-1),IC50ABTS值为0.68 mg·mL^(-1),具有良好的抗氧化性。综上,多花黄精根须中的皂苷成分具有可观的利用价值。研究结果可为多花黄精根须综合利用提供重要依据,也为其他副产物活性成分提取提供参考。

基于体外消化与发酵模型的多花黄精多糖对肠道菌群的影响

本研究采用模拟消化模型结合体外粪便菌群厌氧发酵模型,通过16S rDNA基因高通量测序分析肠道菌群结构,并通过GC-MS法测定短链脂肪酸含量的变化,从而探究多花黄精多糖(Polyonatum cyrtonema Hua.Polysaccharide,PCP)的益生元活性。结果显示:PCP经体外口腔、胃、小肠模拟消化,其未发生明显的变化。PCP经体外发酵能够迅速降低发酵液的pH。肠道菌群PCoA分析表明,PCP具有改变肠道菌群结构作用,且与菊粉具有一定类似性。在门水平上,相对于空白对照组PCP能显著(P<0.05)增加厚壁菌门(Firmicutes)和放线菌门(Actinomycetes)的相对丰度,显著(P<0.05)降低变形菌门(Proteobacteria)的相对丰度;在属水平上,PCP能显著(P<0.05)增加有益菌双歧杆菌(Bifidobacterium)和巨单胞菌(Megamonas)等菌群相对丰度,显著(P<0.05)降低条件致病菌肠球菌属(Enterobacter)和志贺氏菌(Escherichia-Shigella)的相对丰度。同时,PCP促进短链脂肪酸的产生,其中,乙酸和丙酸含量显著(P<0.05)增加。本研究表明多花黄精多糖可能通过调节肠道菌群,促进短链脂肪酸产生。

不同产地多花黄精中农残、重金属含量及砷测定方法改进研究

目的:分析不同产地多花黄精的有机氯农药残留量、重金属元素含量,改进砷测定方法。方法:以11个产地的多花黄精细粉为研究对象,采用气质联用法分析多花黄精中五氯硝基苯、六六六、滴滴涕等成分含量,采用微波消解-石墨炉/冷蒸汽/火焰-原子吸收光谱法测定多花黄精中砷、铅、镉、汞、铜元素含量。结果:11个不同产地的多花黄精中,五氯硝基苯、六六六、滴滴涕含量皆<0.1 mg/kg,符合《药用植物及制剂外经贸绿色行业标准(WM/T2-2004)》有关限量规定,铅、镉、砷、汞、铜含量皆符合《中华人民共和国药典》2020版一部有关限量规定。结论:可参考《药用植物及制剂外经贸绿色行业标准(WM/T2-2004)》有关限量规定建立多花黄精有机氯农残限量标准,采用微波消解-石墨炉-原子吸收光谱法测定多花黄精中砷的含量,方法更简单。

不同种植方式及生长年限的铜鼓多花黄精营养品质分析及其评价体系的构建

为了系统探究铜鼓多花黄精的营养品质并构建其评价体系,本文比较分析了不同种植方式和生长年限的铜鼓多花黄精23种营养品质指标,并通过相关性、因子和聚类分析构建了其营养品质评价体系。结果显示大棚种植(GP)多花黄精中的醇溶性浸出物、蛋白质、必需氨基酸、药用氨基酸、灰分及5种常量矿物元素含量均最高,且必需氨基酸营养评分也最高。露天种植(OP)多花黄精中的多糖和皂苷含量最高。林下种植(UP)4种微量元素(Fe、Mn、Zn和Se)含量最高。而野生(W)多花黄精的黄酮和总酚含量最高。随着多花黄精生长年限的延长,多花黄精中醇溶性浸出物、脂肪和多糖含量逐渐增加,而皂苷、黄酮和总酚含量无显著性变化(P>0.05)。但多花黄精的淀粉、粗纤维、蛋白质、灰分、必需氨基酸营养评分、矿物元素等物质含量均与生长年限呈负相关性,其中以GP下降趋势最为明显。通过相关性分析、因子分析和聚类分析将22项营养品质指标简化为13项指标,进而采用主成分分析建立了多花黄精营养品质综合评价模型,发现8种铜鼓多花黄精样品营养品质综合评分(-1.331~1.161)大小顺序为GP-3>UP-3>W-4>GP-5>GP-4>OP-3>UP-4>OP-4,即GP-3的营养品质最佳,并在此基础上建立了铜鼓多花黄精营养品质综合评分6级标准。本研究成果将为筛选最佳营养品质的铜鼓多花黄精原料进行高价值产品开发或品种改良提供理论依据。

福建省多花黄精根腐病的病原菌鉴定

【目的】明确福建地区多花黄精根腐病的发病率和病原菌种类,并为该病害的防治提供理论依据。【方法】调查福建省3个多花黄精种植基地的根腐病发病率,并采集具有典型根腐病症状的植株和块根病样,分离纯化获得病原菌,利用形态学特征、分子生物学特征及致病性测定对其进行鉴定。【结果】福建省多花黄精种苗的根腐病平均发病率为10.50%,采收时根茎的根腐病平均发病率为17.65%。分离纯化获得98株菌株,结合菌株的形态学特征、特异性引物FOF1/FOR1和F8/R8、tef-1α基因序列分析,分别鉴定为尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum、腐皮镰刀菌F.solani和藤仓镰刀菌F.fujikuroi,三者的分离频率依次为75.51%、20.41%和4.08%。代表性菌株经回接根茎进行致病性检测发现其发病症状与田间表现一致,符合柯赫氏法则。【结论】尖孢镰刀菌、腐皮镰刀菌和藤仓镰刀菌是福建地区多花黄精根腐病的主要病原菌,首次报道藤仓镰刀菌可引起我国多花黄精根腐病。

多花黄精种子物理特性试验研究

为获得多花黄精播种机设计参数,以贵州省多花黄精种子为研究对象,进行千粒重、比重、三维尺寸、含水率、种子活力,滑动摩擦角、滑动摩擦因数、休止角等物理特性试验研究。试验结果表明:多花黄精种子的含水率为34.46%,长宽厚平均尺寸分别为4.65 mm、4.04 mm、3.52 mm,球度为86.95%,平均千粒质量为44.98 g,休止角为26.29°,滑动摩擦角(不锈钢、有机玻璃、铝合金和塑料)分别为15°、13.7°、16°和17.3°,种子活力为97.25%。该研究填补了多花黄精种子重要特性参数研究的空白,为多花黄精播种机装置结构和性能参数设计提供理论依据。

多花黄精对少弱精子症大鼠生精细胞凋亡的保护作用及药效物质基础研究

目的阐明多花黄精对少弱精子症大鼠模型生精细胞凋亡的保护作用及药效物质基础。方法采用UHPLC-Q Exactive Focus HRMS技术鉴定多花黄精化学成分,及其提取物灌胃给予大鼠后在血清和睾丸组织中的化学成分。设置空白组、模型组、阳性药组(左卡尼汀300 mg/kg)及多花黄精高、中、低剂量组(10、5和2.5 g/kg),考察其改善少弱精子症的药理作用,每组6只大鼠。通过HE染色观察大鼠睾丸组织病理形态,TUNEL染色观察大鼠睾丸生精细胞的凋亡情况,免疫荧光法检测DNMT3A和PIWIL1蛋白表达。结果从多花黄精提取物、大鼠血清、大鼠睾丸中分别鉴定出138种、23种、30种化学成分。模型组大鼠睾丸曲细精管中大量生精细胞凋亡,DNMT3A和PIWIL1蛋白低表达,而多花黄精高、中剂量组大鼠睾丸曲细精管中TUNEL阳性生精细胞数量减少,DNMT3A和PIWIL1蛋白表达显著升高。结论多花黄精对少弱精子症大鼠具有保护作用,其可能是通过上调大鼠睾丸中DNMT3A和PIWIL1的表达,逆转生精细胞的凋亡。

多花黄精中果聚糖产物的抗疲劳与改善肠道菌作用研究

目的研究多花黄精精制多糖的结构特征并探究其抗疲劳及改善肠道菌作用,为以多花黄精精制多糖为功能性成分的产品开发提供理论依据。方法采用PMP柱前衍生化-高效液相色谱法、三甲基硅醚衍生化-气相色谱法等方法对多花黄精精制多糖进行化学表征;采用小鼠负重游泳试验结合生化指标评价其抗疲劳作用;采用16S rRNA肠道菌群测序研究多花黄精精制多糖的改善肠道菌作用。结果获得的多花黄精精制多糖是一种果聚糖产物,且含有少量葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、阿拉伯糖(Ara)、甘露糖(Man)、鼠李糖(Rha)和半乳糖醛酸(GalA),其相对分子质量在0.4~285 kDa内,主要组分的分子量在3 kDa左右。与模型组比较,多花黄精精制多糖高剂量组能明显延长小鼠的力竭游泳时间(P<0.01),降低血清中BUN、UA水平,显著降低肌肉组织中LA(P<0.01)和MDA水平(P<0.05);显著提高肝脏组织中SOD(P<0.01)活性,GSH-Px(P<0.001)和CAT(P<0.05)水平。与空白对照组相比,多花黄精精制多糖低剂量组能够上调小鼠粪便微生物中益生菌伊格尔兹氏菌属(g_unclassified_f_Eggerthelaceae)和魏斯氏菌属(g_Weissella)相对丰度(P<0.05)。结论确定了多花黄精精制多糖的化学组成,并证明了该多糖具有较好的抗疲劳功效,能促进肠道中益生菌生长,为以多花黄精精制多糖作为功能性成分的产品开发提供依据。

多花黄精水提物成分分析及抗肿瘤活性研究

目的分析多花黄精水提物成分,并对其体内外抗肿瘤活性进行评价,为进一步开发利用多花黄精提供理论基础。方法(1)通过水提法制备多花黄精水提物,利用UPLC-Q-TOF/MS、苯酚硫酸法等方法分析多花黄精水提物化学成分,并通过CCK-8法检测多花黄精水提物对多种肿瘤细胞增殖抑制活性,采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,用Western Blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达情况,利用多花黄精水提物含药血清检测入血成分对细胞增殖抑制活性。(2)构建荷瘤小鼠模型,随机分为模型组(予以生理盐水)、阳性药环磷酰胺组(50 mg·kg^(-1))以及多花黄精水提物低、中、高剂量组(55.9、111.8、223.6 mg·kg^(-1)),灌胃治疗7 d。治疗期间,观察小鼠体质量及肿瘤体积变化情况。治疗结束后处死小鼠,采用苏木素-伊红(HE)染色观察心、肝、脾、肺、肾以及肿瘤组织病理学变化;免疫组化(IHC)检测肿瘤组织Bcl-2及Bax蛋白表达情况。结果多花黄精水提物多糖含量达到(10.07±1.3)%,黄酮含量为(0.044±0.004)%,并且通过UPLC-Q-TOF/MS检测出39种成分,包含黄酮类的黄芩素、槲皮素、木犀草素、芦丁,有机酸类的阿魏酸及多酚类的没食子酸等抗肿瘤成分。多花黄精水提物对Hela、A549、4T1、B16、MFC和HepG2细胞均有抑制作用(P<0.001),其中对B16细胞抑制作用最为明显,且多花黄精水提物可诱导B16细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.001)。流式双染和Western Blot结果显示多花黄精水提物明显促进B16细胞凋亡,降低Bcl-2的表达,且促进Bax的表达(P<0.01,P<0.001)。多花黄精水提物入血成分对B16细胞也具有抑制作用(P<0.001)。此外,多花黄精水提物体内活性实验结果显示,与模型组比较,不同剂量的多花黄精水提物能够抑制肿瘤生长,诱导肿瘤细胞坏死,降低Bcl-2表达,提高Bax的表达。结论多花黄精水提物成分丰富,含有多种抗肿瘤活性成分,能抑制肿瘤生长,诱导肿瘤细胞凋亡,显示较强的抗肿瘤作用,值得深入研究。

拮抗多花黄精根腐病的内生真菌鉴定及发酵条件研究

多花黄精Polygonatum cyrtonema根腐病是制约其产量和质量的重要因素。为探索该病害绿色有效的生物防控途径,采用组织分离法获得多花黄精根茎内生真菌菌株HJ-53和多花黄精根腐病病原真菌。结合形态学特征和ITS/TEF序列分析对真菌菌株进行鉴定,确定内生真菌HJ-53为桔青霉Penicillium citrinum;多花黄精根腐病病原为尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum,并通过科赫法则验证。采用平皿对峙培养和生长速率法初步测定了菌株HJ-53及发酵液乙酸乙酯提取物的抑菌活性,利用单因素及正交试验筛选了该菌株最适基础培养基和最适发酵条件。结果表明,内生真菌HJ-53具有较强的抗菌活性,其两点对峙培养和五点对峙培养的抑菌率分别达到了54.81%和61.04%;浓度为10 g·L^(-1)的菌株发酵液乙酸乙酯提取物,其抑菌率高达73.20%。该菌最佳发酵培养基为葡萄糖30 g·L^(-1)、蛋白胨15 g·L^(-1)和氯化钙1.5 g·L^(-1);最适发酵条件为发酵5 d,发酵温度25℃,摇床转速180 r·min-1,pH值为7。研究表明,内生真菌菌株HJ-53具有一定的生防潜力,可为多花黄精根腐病的生物防治菌剂的研究提供理论基础和菌种资源。

露天和不同林分栽培多花黄精产量和品质特征分析

目的:系统分析露天和不同林分栽培的多花黄精产量特征、活性成分含量和抗氧化特征,为不同栽培模式下黄精的区分应用提供参考。方法:以多花黄精新品种‘丽精1号’Polygonatum cyrtonema‘Lijing No.1’为实验材料,在浙江省松阳县和景宁县两地,选择土壤类型和肥力水平相近的山田地栽培,郁闭度不同的毛竹林、杉木林、香榧林套作栽培。在相同的栽培管理条件下,测量不同栽培处理多花黄精根茎的表型和产量特征;测定不同处理材料的浸出物、多糖、总皂苷、总酚、总黄酮含量;应用DPPH法、ABTS法和FRAP法测定不同处理材料的体外抗氧化活性。结果:郁闭度是影响多花黄精产量的关键因素,本研究中当郁闭度为50%时,林下栽培4年生多花黄精单株干质量可超过100 g,其产量与露天栽培组无显著差异;郁闭度70%林分栽培的多花黄精产量较露天栽培组显著下降。多花黄精栽培第4年增产显著,不同栽培条件下4年生较3年生组根茎同比增产达150%以上。在露天和低郁闭度(50%)下栽培的多花黄精根茎浸出物和多糖含量均显著升高;高郁闭度(≥70%)下栽培的多花黄精根茎总皂苷、总酚和总黄酮含量相对较高,同时抗氧化能力显著升高。结论:在同等肥力和种源前提下,郁闭度对黄精产量和品质影响最为显著,低郁闭度(50%)栽培的黄精产量与露天栽培无显著差异,多糖和浸出物积累充足;高郁闭度(≥70%)栽培的黄精产量显著下降,但其所产药材总皂苷、总黄酮和总酚含量相对升高,同时抗氧化活性也显著升高。建议以实际生产中林分郁闭度情况作为黄精区分应用的重要参考。

黔东南不同产地多花黄精多糖含量的比较研究

多花黄精是中药材黄精的基源物种之一,在贵州省黔东南地区分布广泛,为食药同源的常用中药材。文章通过以黄精多糖为指标物,对采集于黔东南地区16个县市不同产地的野生多花黄精样品进行分析。结果表明,多糖以无水葡萄糖(C_(6)H_(12)O_(6))计,黄精多糖含量平均约11.66%,均高于《中国药典》(2020版)的标准(>7.0%)。由此表明,黔东南州分布的多花黄精质地优,具道地性,有良好的品质资源,为进一步筛选出质优的多花黄精品种资源提供支撑,以及为当地中药材产业发展和拓展林下种植黄精提供了科学数据。

薄壳山核桃林下多花黄精套种技术研究

为了探究薄壳山核桃林下多花黄精套种的最佳技术,从多花黄精种苗类型、种植密度、种植坡位、摘花打顶技术等4个方面开展试验,分析了块茎栽培方式、籽育苗繁育方式对多花黄精生长及块茎产量的影响。试验结果表明,多花黄精块茎栽培方式的地径、株高等形态学指标,以及保存率、块茎产量等指标均显著优于籽育苗繁育方式,块茎栽培方式、籽育苗繁育方式收获时块茎折合产量分别为4981 kg/hm^(2)、3767 kg/hm^(2);株间距35 cm、行间距30 cm是最理想的种植模式,1 a生块茎折合产量为2923.81 kg/hm^(2);下坡位多花黄精的生长指标均显著高于上坡位和中坡位,下坡位多花黄精的块茎鲜重比上坡位、中坡位分别增加了18.1%和15.7%;摘花打顶处理后,多花黄精的地径、株高、块茎产量等指标分别增加了28.6%、20.2%和15.6%。

不同林地多花黄精多糖含量差异分析

为探究不同林地多花黄精品质的差异,对湖南省内不同林下多花黄精进行抽样,采用均值—极差控制图、K-均值聚类法并参照《中华人民共和国药典》(2020版)进行多糖含量分析。结果显示:71批次不同林下多花黄精的多糖含量为6.99%~15.14%,均值—极差控制图将其分为Ⅰ区(6.69%~7.99%)、Ⅱ区(7.99%~11.99%)、Ⅲ区(11.99%~15.14%)3个区域,各区域样品数分别为8批次、53批次、10批次,占比分别为11.26%、74.64%、14.08%;K-均值聚类图则将其划分为A类(6.69%~7.00%)、B类(7.20%~7.97%)、C类(8.05%~8.97%)、D类(8.99%~11.79%)、E类(12.44%~14.96%),各区域样品数分别为2批次、7批次、12批次、34批次、10批次,占比分别为2.81%、9.85%、16.90%、47.88%、14.08%。杉木林下多花黄精多糖含量显著高于其他林地类型和大田种植。

不同杀青方式对多花黄精嫩芽茶品质的影响

以多花黄精嫩芽为研究对象,采用扁形绿茶加工工艺制备黄精嫩芽茶,分别利用微波、锅炒、蒸汽三种杀青方式进行杀青,并通过理化成分、茶汤色泽、挥发性香气成分及感官评价分析,探究不同杀青方式对黄精嫩芽茶品质的影响。结果表明:利用微波杀青工艺所制黄精嫩芽茶不仅具有较好的感官品质,且水浸出物、可溶性糖、茶多酚及总黄酮含量均最高,分别为48.04%、14.49%、1.32%、1.66%。三种杀青方式所制黄精嫩芽茶中共检测出84种有嗅感的挥发性成分,以醛类(12种)、酮类(11种)、烯烃类(10种)、醇类(8种)及酯类(8种)等化合物为主;微波、锅炒、蒸汽杀青分别有10、12、7种关键香气成分,其中丁酸乙酯为微波杀青工艺特有的关键香气成分,庚醛、戊醛、己醛、1-戊醇为锅炒杀青工艺特有的关键香气成分。不同杀青方式制作的黄精嫩芽茶品质存在差异性,其中微波杀青更适合黄精嫩芽茶的制备。

多花黄精查尔酮合酶PcCHS的原核表达、亚细胞定位及表达分析

【目的】探究查尔酮合酶(chalcone synthase,PcCHS)基因在多花黄精类黄酮合成中的作用,为后续解析PcCHS功能以及多花黄精新品种选育提供可靠的理论依据。【方法】以多花黄精为cDNA模板,克隆多花黄精PcCHS基因的编码序列,对该基因进行生物信息学分析。通过构建PcCHS的原核表达载体,纯化目的重组蛋白,验证该酶的体外表达活性。利用瞬时超表达体系探究该基因过表达后总黄酮的含量变化。利用Gateway技术构建亚细胞定位载体35S::PcCHS-GFP,通过本氏烟草表达系统确定目的蛋白亚细胞定位情况。【结果】PcCHS基因的开放阅读框为1 251 bp,理论分子量为44.63 kD,等电点为5.89,属于亲水蛋白,与石刁柏(Asparagus officinalis)CHS亲缘关系较近。原核表达实验表明,pET28a-PcCHS经IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导表达可溶性重组蛋白,Western-blot显示大小约为45 kD,与预期大小一致,且纯化的目的蛋白具有一定的酶活性,能催化对香豆酰辅酶A和丙二酰辅酶A转化为柚皮素查尔酮。此外,PcCHS瞬时超表达中,PcCHS组的表达量显著高于空载K组,总黄酮含量也显著高于空载K组,最高可达1.83倍。亚细胞定位结果显示,该基因在细胞膜和细胞核中发挥作用。【结论】PcCHS基因原核表达的酶具有体外酶活性,其亚细胞定位于细胞膜和细胞核,且瞬时超表达能够显著提高多花黄精叶片总黄酮含量。