西番莲中夜来香花叶病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

夜来香花叶病毒(telosma mosaic virus, TeMV)是对西番莲危害较大的一种病毒病原。根据病毒末端结合蛋白(VPg)序列设计引物,建立了以Vpg-334F/506R为特异性引物,退火温度54℃,引物浓度0.6μmol/L的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法。该方法可特异性扩增TeMV基因组6 483~6 675 nt区域,所得标准曲线扩增效率为10^(2).77%,决定系数为0.996 1,最低检测浓度为2.370×10^(2)拷贝/μL,灵敏度是普通PCR的1 000倍。应用该方法对接种TeMV的西番莲进行检测,发现接种3 d后可在叶片中检测到TeMV,定量分析不同温度下TeMV在叶片中的积累,发现26~28℃下病毒积累速度最快,且植株症状表现与病毒积累量密切相关。对赣南地区采集的76份西番莲田间样品进行检测,共检出71份阳性样品,检出率为93.4%。综上,本研究建立的实时荧光定量PCR方法特异性强,灵敏度高,适于TeMV的快速检测。

来自夜晚的芬芳——夜来香

夜来香是一类“文艺范儿”十足的植物,以其为题材的诗词及歌曲数不胜数,甚至还有一部电视剧名为《夜来香》的电视剧。其实“夜来香”并非单指一种植物,而是对几种夜晚开花,具有浓郁芳香气味植物的统称,除植物学中的夜来香外,夜香树、月见草、晚香玉、紫茉莉也都有“夜来香”的别名。

神秘的夜来香

清凉的晚风吹过,落在西边的太阳伯伯伸了个懒腰,缓缓走向夜幕。没多会儿,月亮姐姐戴着轻柔的面纱,出现在天空中。“咦?这股清幽的香气是从哪里飘过来的呢?”月亮姐姐拨开面纱,鼻子用力地呼吸着,闻着空气中的香甜。一只小夜莺飞过,月亮姐姐急忙拉住小夜莺。

华南地区特菜夜来香栽培技术

夜来香[Telosma cordala (Burm. f.) Merr.]是华南地区的一种特有菜品,具有观赏、食用和药用价值。然而,夜来香种植存在诸多问题,如命名混乱,缺乏统一的繁育体系,栽培技术不规范及病虫害防治不当等,导致其商品品质下降,市场竞争力不足,影响了种植效益。对夜来香的特征特性、栽培技术、采收和病虫害防治进行了系统总结和分析,以通过加强对夜来香的研究和科学管理,提高种植水平和产品品质,促进经济效益的提高。

夜来香花叶病毒江西分离物的分子特征与序列分析

夜来香花叶病毒(Telosma mosaic virus,TeMV)是侵染西番莲的重要植物病毒之一。通过RACE和RT-PCR技术获得3条TeMV江西分离物全基因组序列,除poly(A)尾外,3个分离物基因组全长均为10 069 nt。采用汁液摩擦接种法对分离物进行生物学特性研究,首次发现该病毒可侵染豌豆。对所获分离物全基因组进行序列一致性分析,结果表明,江西分离物间核苷酸与氨基酸序列一致性分别为98.1%~98.6%和98.8%~99.3%,与GenBank中报道西番莲TeMV分离物全基因组的核苷酸与氨基酸序列一致性分别为87.3%~98.9%和91.2%~99.5%,与武夷山分离物(MK340755)序列一致性最高。基于不同分离物CP基因的系统发育分析显示,寄主来源相同的分离物亲缘关系较近,推测TeMV的遗传进化与不同的植物寄主相关。

夜来香根茎水提取液局部麻醉作用的研究

目的 :研究夜来香 (CN)根茎水提取液的局部麻醉作用及其作用机制。方法 :采用蟾蜍离体坐骨神经动作电位法、豚鼠皮丘法、椎管麻醉法、表面麻醉法。结果 :2 0 %的CN水提取液对蟾蜍离体坐骨神经动作电位可完全消失 ,但较 1%的普鲁卡因稍弱。豚鼠皮丘实验表明 ,2 0 %CN提取液有浸润麻醉作用 ,其浸润麻醉效果与 1%的普鲁卡因相似 ,而且盐酸肾上腺素可增强其麻醉强度和明显延长局麻作用时间 ;家兔椎管麻醉实验表明CN提取液有明显的椎管麻醉作用 ;CN提取液对家兔角膜也有一定的表麻作用 ,只是作用强度及持续时间比 1%的普鲁卡因稍弱或稍短。结论

侵染西番莲的夜来香花叶病毒的分子鉴定及特异性检测

【目的】鉴定福建果园西番莲上的夜来香花叶病毒(Telosma mosaic virus,Te MV),并建立用于该病毒特异性检测的分子快速检测方法,为该病毒的防治提供参考依据。【方法】采用血清学检测、电镜观察、通用简并引物RT-PCR、特异性引物RT-PCR对福建西番莲样品进行病毒检测,并对阳性样品的PCR产物进行克隆、测序;根据已报道的夜来香花叶病毒基因序列和本研究的序列测定结果,设计一对用于扩增Te MV外壳蛋白(coat protein,CP)基因全长的特异性引物,通过反应条件优化,建立该病毒的特异性RT-PCR检测方法;序列测定结果利用BLAST程序和DNAMAN软件进行比对,同时对获得的CP基因序列采用Mr Bayes软件的贝叶斯法(Bayesian inference,BI)构建系统发育树并进行系统发育分析。【结果】血清学检测发现,一株表现有花叶、皱缩症状的西番莲样品与马铃薯Y病毒属(Potyvirus)通用抗体反应呈阳性;电镜观察结果表明,该株疑似带毒样品中含有大小约750 nm×12 nm的弯曲线状病毒粒子;Potyvirus通用简并引物RT-PCR从该样品中扩增到一条与预期大小相符的目的片段,克隆、测序获得长度为680 bp的序列,该序列与已报道的Te MV核苷酸序列一致性最高(98.2%)。特异性引物扩增获得的CP基因序列全长为816 bp(命名为BXGFJ-13分离物),与已报道的Te MV核苷酸序列、氨基酸序列一致性分别为86.2%—98.4%和88.2%—97.8%。系统发育分析结果表明,13个Te MV分离物共形成3个类群,相同地区或寄主来源的分离物优先相聚成簇,表现出很强的地理和寄主特异性。本研究获得的BXGFJ-13分离物与中国广西分离物(KJ789129)先以较高的后验概率聚为一个分支,再与泰国2个分离物(AM409188、AM409187)聚为第2类群(Group II),表明其在系统发育关系上与中国广西分离物的亲缘关系最近。利用特异性引物Te MV-CPf/Te MV-CPr建立的RT-PCR方法,具有良好的特异性,仅能从感染Te MV的西番莲样品上扩增出目的片段,而从黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、甜菜花叶病毒(Beet mosaic virus,Bt MV)、大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)、虎眼万年青花叶病毒(Ornithogalum mosaic virus,Or MV)、洋葱黄矮病毒(Onion yellow dwarf virus,OYDV)、东亚西番莲病毒(East Asian Passiflora virus,EAPV)等其他病毒样品及阴性对照上均未扩增出目的片段。灵敏度测定结果显示,该方法能从稀释102倍的RNA上扩增出目的片段。【结论】根据国际病毒分类委员会(ICTV)关于Potyvirus病毒不同成员的分类标准,同时结合血清学检测、电镜观察结果,证实福建果园表现花叶、皱缩症状的西番莲上携带有Te MV;建立的特异性RT-PCR方法能够用于Te MV的快速检测。

夜来香SAMT基因的分离与原核表达

为探究夜来香(Cestrum nocturnum)花香基因SAMT在花香代谢中的调控作用,以花瓣为材料,采用RTPCR和RACE技术相结合,克隆夜来香SAMT基因的全长c DNA。结果表明:该c DNA的序列长度为1 493 bp,编码365个氨基酸,其中包含1 098 bp ORF、130 bp 5′UTR和265 bp 3′UTR,将其命名为Cn SAMT;生物信息学分析结果表明:该基因所编码的氨基酸序列与烟草、番茄的同源性分别为98%和98%,属于甲基转移酶-7家族;原核表达结果表明:Cn SAMT的蛋白表达产物约为42 ku,与软件预测的结果大致相同。采用染色体步移技术,克隆夜来香Cn SAMT的5′端调控序列,结果表明:该序列长度为993 bp,且该序列除了含有TATA-box、CAAT-box等启动子核心元件外,还含有光、生长素、脱落酸、热胁迫、缺氧胁迫等外界环境条件响应的顺式作用元件。

夜来香夜间嫩枝挥发油化学成分分析

采用 ＧＣ－ＭＳ－计算机联用技术，对夜间采集的夜来香嫩枝挥发油进行成分分析。从夜间嫩枝的挥发油中鉴定出４９种化合物，占总量的８０．９８％，主要含甲酸二十一酯（１１．２８％）、沉香烷（９．７０％）、２－亚油酸甘油酯（７．８９％）及驱蚊叮、二十一烯、１，３－二甲苯、１，２，３－三甲苯、４－乙基－１，２－二甲苯、二十四烷、２，４－二叔丁基苯酚、３－乙基甲苯等。对照夜间花朵挥发油成分，夜间嫩枝挥发油成分有近三分之一成分相同； 相同成分含量约占挥发油含量的４５％；且嫩枝含油量也较高，约２．２２％；可为夜来香的全面开发利用提供更多依据。

夜来香多糖镇静催眠作用的研究

目的探讨夜来香多糖对小鼠镇静催眠作用的影响。方法将小鼠随机分为生理盐水组(戊巴比妥钠组)、1.0 mg/kg夜来香多糖组、2.0 mg/kg夜来香多糖组、4.0 mg/kg夜来香多糖组。观察夜来香多糖对小鼠自发活动的影响、对阈上剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠时间的影响、对阈下剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠时间的影响。结果与生理盐水组比较,2.0、4.0 mg/kg的夜来香多糖能显著抑制小鼠自发活动(P<0.05,P<0.01);与戊巴比妥钠组比较,2.0、4.0 mg/kg的夜来香多糖能显著加速阈上剂量戊巴比妥钠的入睡时间和延长戊巴比妥钠的睡眠时间(P<0.05,P<0.01);与戊巴比妥钠组比较,1.0、2.0、4.0 mg/kg的夜来香多糖能显著加速阈下剂量戊巴比妥钠的入睡时间和延长戊巴比妥钠的睡眠时间(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。结论夜来香多糖具有明显的镇静催眠作用。

夜来香Dof基因及其启动子的克隆

为探究夜来香生物钟的调控机制,本研究从花瓣均一化cDNA文库EST序列中获得Dof基因的部分cDNA序列,通过RACE获得Dof基因的全长cDNA,命名为CnDof,在此基础上,采用APA-Genomic walking技术,分离获得该基因的启动子,启动子长度为2 054 bp,通过在线软件PlantCare分析顺式作用元件。结果表明:该基因全长cDNA为2 087 bp,ORF为1 530 bp,编码一条含510个氨基酸的多肽链,在该多肽链的N端有典型Dof结构域,可初步推断,该基因是Dof的同源基因;所获得的启动子中含有大量与光反应相关的元件,可初步推测,Dof基因可能参与夜来香生物钟的调控。

对夜来香生物活性的研究

[目的]为研制和开发夜来香源绿色农药、夜来香多功能产品提供依据。[方法]采用超声波提取获得夜来香乙醇提取液,研究提取液对果蝇的熏蒸作用、驱避作用和触杀作用。[结果]果蝇在夜来香乙醇提取液和夜来香稀溶液中经过1 h的熏蒸,全部死去,说明夜来香乙醇提取液和夜来香稀溶液对果蝇有较好的驱避作用,30 min内驱避效果达100%。夜来香稀溶液和夜来香乙醇提取液对果蝇的触杀作用都很弱,触杀效果仅为10%。在受到夜来香乙醇提取液和夜来香稀溶液的熏蒸时,果蝇有局促不安的症状,并渐渐失去活力直至死亡,30 min内熏蒸效果达100%。[结论]夜来香对果蝇有较好的熏蒸作用和驱避作用,但触杀作用较弱。

夜来香正丁醇提取物镇痛作用的研究

目的 :探讨夜来香正丁醇提取物对小鼠的镇痛作用。方法 :采用醋酸扭体法、热板致痛法、电刺激致痛法研究夜来香正丁醇提取物对小鼠镇痛作用的影响。结果 :夜来香正丁醇提取物对醋酸诱发小鼠扭体反应 ,热板致痛、电刺激致痛诱发的疼痛有显著的镇痛作用 ,且呈剂量依赖性。但纳洛酮不能对抗其镇痛作用。结论

夜来香正丁醇提取物的中枢抑制作用

目的 :研究夜来香正丁醇提取物的中枢抑制作用。方法 :观察夜来香正丁醇提取物对小鼠自发活动和戊巴比妥钠阈上和阈下催眠剂量对小鼠睡眠时间的影响。结果 :夜来香正丁醇提取物对小鼠自发活动有明显抑制作用 ,能加速戊巴比妥钠的入睡和延长其睡眠时间 ,与戊巴比妥钠有协同的中枢抑制作用。结论 :夜来香正丁醇提取物有明显的中枢抑制作用。

夜来香花浸膏同时蒸馏萃取工艺优化研究

以夜来香干花为试验材料,通过同时蒸馏萃取工艺,利用均匀试验设计优化夜来香浸膏的萃取工艺条件,并分析了浸膏的挥发性成分。试验设计结果表明,同时蒸馏萃取法提取夜来香浸膏的最佳工艺为:料液比1∶15,萃取时间4.5 h,萃取剂体积61 m L,Na Cl质量20 g。最优条件下夜来香浸膏理论提取率为1.54%,实测平均提取率为1.52%。夜来香浸膏挥发性成分分析表明,浸膏中共鉴定出23种挥发性香气成分,主要含有烯类、酸类和醇类化合物,其中质量分数最高的是双戊烯,为41.94%。

夜来香片改善睡眠功能研究

目的:研究夜来香片对改善睡眠功能的影响。方法:以夜来香片0.2、0.4、1.2 g·kg-1·d-1三个剂量组给予小鼠30 d,进行直接睡眠实验、延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验。结果:夜来香片0.2、0.4、1.2 g·kg-1·d-1组对小鼠均无直接睡眠作用;1.2 g·kg-1·d-1组小鼠戊巴比妥钠睡眠时间长于0 g·kg-1·d-1组;0.4、1.2 g·kg-1·d-1组小鼠巴比妥钠睡眠潜伏期短于0 g·kg-1·d-1组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:在本研究条件下,夜来香片对小鼠具有改善睡眠的功能。

夜来香根茎多糖超声提取工艺

目的:研究超声提取夜来香多糖的工艺。方法:通过单因素实验和L9(34)正交实验,分析提取温度、料液比和提取时间对夜来香根茎多糖得率的影响。结果:夜来香多糖的最佳提取工艺条件为提取温度60℃,提取时间35 min,料液比1:40 g·mL-1。结论:采用超声法提取得率高,操作简单,可用于夜来香根茎中多糖的提取.

夜来香水提取物对豚鼠心房肌收缩性的影响

目的:观察夜来香水提取物对豚鼠心房肌收缩性的影响。方法:采用豚鼠左右心房测定夜来香水提取物对其自动节律、收缩力、兴奋性、功能不应期的影响。结果:夜来香水提取物对豚鼠右心房肌的收缩性产生双相作用,夜来香水提取物对右心房肌的收缩力在低剂量时具有剂量依赖性的增强作用,但在高剂量时却表现为抑制现象;同时还明显减慢心率;夜来香水提取物还可提高豚鼠左心房肌的兴奋阈值,降低其兴奋性;高浓度夜来香水提取物缩短左心房的功能不应期。结论:夜来香水提取物抑制豚鼠心房肌的作用可能与其抑制心肌细胞膜电压依赖性钙通道、钠通道有关。