大海马消化系统胚后发育的形态学及组织学研究

大海马Hippocampus kuda为卵胎生海洋硬骨鱼类。利用解剖和连续组织切片技术,对孵化后2、5、9日龄、1月龄和3月龄几个特殊时期大海马消化系统的形态和组织学特征进行了报道。结果表明,大海马仔鱼孵化后1日,其消化系统已经明显分化为口咽腔、食道、小肠、直肠以及肝胰脏、胆囊等器官,但是仔鱼仍然以内源与外源混合性营养为主,至5日龄仔鱼变为完全的外源性营养;仔鱼孵化后9日左右是大海马的死亡"临界点",其消化系统的组织结构更趋于复杂;1月龄大海马的消化系统在结构和功能上进一步完善,小肠前端呈"z"型结构,管壁变厚,纵、环肌发达,肝脏组织充满大部分体腔,但在小肠周围仍然不能辨认独立的胰脏实体结构;3月龄成海马已经有了成熟的消化系统组织结构,保证了最大限度地消化和吸收动物性饵料。整个胚后发育阶段大海马没有形成胃,鱼体的形态和组织结构的变化与食性的变化紧密适应。

大海马在人工养殖条件下的生长速率

报道了在人工养殖条件下 ,大海马 (HippocampuskudaBleeker)的体长与体重的相对生长率、生长比率及生长速度与饵料、水温等环境因子的关系。结果表明 ,大海马生长高峰期为 5～ 11月 ,群体体长月平均增长率为 12 .2 0 % ,体长特定增长率为 15.92 % ;体重月平均增重率为 15.87% ,体重特定增重率为 2 7.70 % ,群体增重倍数为 13.8。大海马体长呈逻辑斯蒂曲线增长 ,关系式为 :L =192 .346 0 / (1+e2 .4 96 4- 0 .6 0 51M)。大海马的饵料系数为 1.18,饵料转化率为 0 .85,体重与体长生长关系式为 :W =3.16 99× 10 - 3L1.6 76 7。

有益微生物在大海马健康养殖中的应用研究

实验用复合微生物由芽孢杆菌(Bacillusspp.)、红螺菌(Rhodospirillumspp.)、硝化细菌(Nitrobacterspp.)和硫化细菌(Thiobacillusspp.)组成,菌量比例分别为61.5%、27.3%、5.8%和5.4%。向大海马养殖池每10d使用1次,用量5mL/m3,菌液密度(2.0～2.5)×109/mL。结果表明,应用复合微生物的试验组溶解氧比对照组(不加菌)提高了32.7%,氨氮、亚硝酸盐和硫化物含量则分别降低了76.9%、97.1%和93.3%。对照池的浮游藻类优势种为蓝藻、甲藻和隐藻,分别占浮游植物总量的35.3%、22.3%和19.6%;试验池的浮游藻类优势种为绿藻和硅藻,分别占69.0%和26.8%,其藻类多样性指数比对照组增大了1.2倍。试验池的异养菌增长率为55.3%,而对照池的异养菌增长率达274.6%。试验期间,水温23～26℃,试验组的芽孢杆菌的数量从0.15×103CFU/mL急剧增至55.63×103CFU/mL,但对照组的仍保持在(0.13～0.38)×103CFU/mL的水平。而试验组弧菌数量比对照池的降低了2个数量级。

池养大海马的摄食、生长和生态转换效率

对大海马 (平均体长 92 .82± 2 .0 5 2 6mm ,平均体重 6 .6 9± 0 .4 5 70g)在养殖条件下 (放养密度为 2 0 0ind·m-3 ,溶解氧保持在 5 .5mg·L-1以上 ,生物耗氧量低于 3mg·L-1,pH值 7.5～ 8.2 ,透明度 5 0～ 85cm ,盐度 15 .2～ 2 6 .5 )的摄食、生长和食物生态转换效率进行了定量研究。通过系统取样 ,测量海马的全长、体重和消化道内食物重量 ,计算其增长速度、摄食率、消化道排空率、生态转换效率等数值 ,发现大海马的摄食每天有两个摄食高峰 ,即 12 :0 0和 18:0 0 ,晚上不摄食或很少摄食。大海马的日摄食量为 16 .6 342± 0 .782 0g·(10 0g) -1,日摄食率为 1177.2 5cal·ind-1,排空率 0 .14 4 4g·(10 0g) -1·h-1,食物转换效率 2 0 .0 4 % ,能量转换效率 31.4 2 %。体长日平均增长速度和日均增长率分别为 1.176 6mm和 1.2 7% ;体重日平均增重速度和日均增重率分别为0 .182 0g和 2 .2 7%。通过多元回归分析建立摄食率与体重及温度的相关关系 ,得出下列关系式 :C =6 .75 4 4+0 .30 14T +0 .2 190W (F =83.5 96 3,F0 .0 1=18.0 0 ,F >F0 .0 1)。

温度突变对大海马(Hippocampus kuda)幼体生长、组分及酶活力的影响

以大海马幼体为实验材料,通过设置不同的温度突变组(温度从23℃突变至15℃、28℃和33℃)的方法,对其生长、生化组分以及酶活力的影响进行了研究。结果表明,实验结束后,28℃温度组的大海马幼体生长指标、蛋白含量、能值显著高于23℃对照组(P<0.05),而15℃、33℃温度组的各项指标则显著低于对照组(P<0.05);此外,温度突变组的大海马幼体的酶活力均有先升后降的趋势,在1d后出现峰值,4—6d各个温度组趋于稳定,到实验第15天时,28℃温度组的SOD、ACP活力和MDA的含量已处于23℃对照组水平(P>0.05),CAT、AKP活力显著高于23℃对照组(P<0.05)。而15℃、33℃温度组的SOD、CAT活力降至低于23℃对照组水平(P<0.05),15℃温度组的ACP、AKP活力则低于23℃对照组水平(P<0.05),MDA的含量在15℃、33℃温度组随时间延长而增加。

盐度胁迫对大海马(Hippocampus kuda)幼体生长、组分及酶活力的影响

在盐度为25的条件下,以大海马幼体为实验材料,通过设置不同的盐度胁迫组(盐度从25胁迫至5、15和35)的方法,对其生长、生化组分以及酶活力的影响进行了研究。结果表明:15盐度组大海马幼体的体重、生化组分、能值与对照组(盐度25)相比差异不显著(P>0.05),体长、成活率指标则显著高于对照组(P<0.05),然而5、35盐度组的生长指标、成活率、生化组分等则显著低于对照组(P<0.05)。15盐度组的SOD、CAT酶活性低于对照组水平(P<0.05),MDA的含量变化不显著(P>0.05);而5、35盐度组SOD、CAT和MDA含量与对照组相比,随着时间的延长,呈现逐渐升高的趋势(P<0.05);随着盐度的升高,AKP酶活性具有逐渐升高的趋势,而ACP酶活性则呈现降低趋势。

大海马育苗池水华发生期间细菌动态及相关理化参数

大海马(HippocampuskudaBleeker)育苗池为水泥池,规格为4.0m×6.0m×1.6m,分设正常池与水华发生池,各设3个平行池,每池养殖幼海马约1000尾,测定水体水华发生时水体细菌数量和理化因子变化的规律。结果显示,当水温高于24℃时,育苗池易发生水华,形成水华的优势藻为铜绿微囊藻(Microcysticaeruginosa)。正常育苗池水体中异养细菌总量平均比水华池的高出近1个数量级。正常池和水华池表层异养细菌变动范围分别为2.50×103～7.23×104CFU/mL和4.75×102～6.90×103CFU/mL,水华池比正常池减少了60%～99%;底层异养细菌变动范围则分别为4.75×103～7.53×104CFU/mL和6.25×102～1.50×104CFU/mL,水华池比正常池降低了73%～97%。水华池与正常池底层异养细菌数量的差异极显著(P<0.01)。两组池表层弧菌数量变动范围分别为0.85×102～7.19×103CFU/mL和0.33×102～8.92×102CFU/mL,水华池比正常池减少5%～93%;底层弧菌数量变动范围则分别为8.30×102～1.16×104CFU/mL和0.53×102～2.04×103CFU/mL,水华池比正常池降低2%～97%。水华发生池的底层和表层的细菌数量与正常池的差异均显著(P<0.05)。同时,水华池平均水温比正常池约低1℃,溶解氧(DO)比正常池的降低了22%～33%;而水华池中的氨氮含量则为正常育苗池的1.41～2.34倍。水华发生时,育苗池表层和底层水体中弧菌数量比正常池的分别减少了61%～87%和82%～93%。

大海马幼苗人工养殖条件的研究

研究了在人工养殖条件下,大海马幼苗在不同的温度、盐度、光照强度和放养密度下的生长状况及其成活率。实验在室内进行,分别对每一个环境因子设置不同的梯度,每15 d测量记录1次大海马幼苗的体长和成活率,共记录4次,并做了3次重复,最后进行统计分析。结果表明,大海马幼苗生长的最适温度为28℃,水体温度在24~32℃时,其生长速率没有明显的差异;大海马幼苗较喜欢高盐度且盐度较稳定的海水环境（20以上）,至60d时,盐度为30的幼苗生长速率最快,成活率也最高;阴暗的环境较适宜幼苗生长,但光照强度过低会降低其成活率;最佳的放养密度为250ind/m3。

海马幼苗成活率的研究Ⅲ.大海马幼苗死亡类型

本文通过研究50组大海马幼苗死亡表现,总结出大海马幼苗至少存在着5种基本的死亡类型,并指出造成幼苗死亡的最重要养殖因素集是水体环境因素集,良好的水体环境可保证80%以上的成活率.

大海马幼苗成活率的研究——Ⅱ.幼苗死亡的危险期

本文研究了大海马幼苗生长发育过程中的死亡危险期和气候季节死亡危险期,确定前者期限为2至60日龄,后者存在两个时期,即5月至8月中旬和12月至翌年3月。并指出一年中3月底至5月初和8月中旬至11月下旬为幼苗成活率高峰期。

大海马昼夜活动节律与缠绕物偏好的观察

对大海马的昼夜活动规律及缠绕物偏好等行为进行了观察.大海马白天活动,晚上休息(Q≥3.59,P<0.05).成熟类群以游泳(S)或身体快速运动(Af)摄食,光弱时,游动少,仅头部运动(Ah)、身体缓慢摆动(As)或休息(R);未成熟类群白天活动强烈,表现为2次摄食活动.大海马对细竹丝、聚乙烯绳、聚乙烯充气管等缠绕物类型偏好无差异(P>0.05),与规格无关(P>0.05);较喜好垂直或倾斜的缠绕物,喜好程度相似(P>0.05),而不喜水平放置缠绕物,也与规格无关(P>0.05);成熟个体喜欢在容器底部活动,未成熟个体以中上层活动为主(P<0.01).

2种复合微生态制剂对大海马幼鱼生长存活及水质影响

以体长为(1.13±0.07)cm的大海马幼鱼为研究对象,观察复合微生态制剂AQ菌和EM菌对大海马幼鱼生长与存活及水中pH、化学需氧量(COD)、氨氮(NH_+~4-N)和亚硝酸盐氮(NO_2^--N)含量的影响。实验设二个处理组AQ菌组(A)和EM菌组(B),均保持养殖水体中有益菌浓度约1×10~4 CFU/mL,另设对照组C(不加复合微生态制剂)。经过35 d实验,结果表明:AQ菌和EM菌对幼鱼的生长及水质影响效果相差不大(P>0.05),都可促进幼鱼生长和提高成活率;能够提高水中的pH值,维持在7.7~8.2的适宜范围;有效降低水中COD、NH_4^+-N和NO_2^--N含量,与对照组相比,分别降低了31.0%、51.8%和68.3%,表现出显著性差异(P<0.05)。

大海马垂体糖蛋白激素α亚基的cDNA克隆和序列分析

大海马(Hippocampus kudaBleeker)隶属鱼纲海龙目,是一种名贵的海产中药材,也是重要的海洋保护鱼类。我们通过快速扩增cDNA末端(rapid amplification of cDNA ends,RACE)的方法,首次从大海马的垂体总RNA中扩增出其垂体糖蛋白激素α亚基(pituitary glycoprotein hormoneαsubunit,PGHα)全长cDNA,其cDNA全长741bp(不包括polyA尾),5′和3′非编码区分别含有76和314bp,开放读码框为351bp,编码117aa的PGHα亚基前体(包括23aa的信号肽和94aa的成熟肽)。和其他脊椎动物一样,大海马PGHα亚基含有10个半胱氨酸残基,2个脯氨酸残基和2个N-糖基化位点。序列分析发现,大海马PGHα亚基的成熟肽与其他物种的同源性为50%—61.7%,其中与鲈形目和合鳃目的同源性最高(61.7%),而其信号肽与其他物种的同源性仅为8.7%—39.1%左右。这些结果表明大海马与已知的脊椎动物PGHα亚基同源性都比较低,是一种比较独特的鱼类。大海马PGHα亚基的全长cDNA克隆对海马垂体糖蛋白激素的结构和功能研究以及海马的养殖和保护有着重要的意义。

人工养殖条件下大海马幼鱼的生长

在人工养殖条件下 ,研究大海马 (HippocampuskudaBleeker)幼鱼的生长特性及其成活率。结果表明 ,大海马幼鱼的最大增长率为 1 5 88% ,最大增重率为 52 94% ,最小增长率为 2 80 % ,最小增重率为 8 0 5 % ,群体增重倍数为 7 2 0 ,幼鱼的平均日增长率和日增重率分别为 0 44mm/d和0 0 0 5 2g/d。大海马幼鱼体长与日龄的关系式为L =1 5 2 8+0 40 6 5T ,体重与日龄的关系式为W=1 865× 1 0 -4 T1 6872 ,体重与体长的关系式为W =6 884× 1 0 -6L2 762 2 。大海马幼鱼的成活率为90 4%。

大海马ACE抑制肽制备及其抗氧化能力的测定

为了从大海马蛋白中制备出ACE抑制肽及分析肽的抗氧化能力,本文通过比较小分子肽与ACE间的关系对蛋白酶进行了选择,筛选出木瓜蛋白酶作为海马蛋白的水解酶。然后,在单因素实验基础上采用响应面法对木瓜蛋白酶制备ACE抑制肽的关键参数进行了优化,结果为酶底比(E/S)为5%、时间7.5 h、p H7.7、温度59℃,测得其水解度为20.41%±0.12%,ACEIPs的IC_(50)值为1.897±0.072 mg/m L。经Sephadex G-15分离纯化后,得到五个组分,其中第三个组分(PH-I3)、第4个组分(PH-I4)和第5个组分(PH-I5)的活性最好,IC_(50)分别为0.896、0.982、0.814 mg/m L;并对这五个组分进行了抗氧化实验,各组分均能显著的清除DPPH自由基、羟基自由基,具备与Fe2+的螯合能力。所以,由PH-I制备的ACE抑制肽同时具有降血压和抗氧化的功能,在功能性食品开发中具有重要的意义。

大海马交配和孵化适宜环境条件研究

从繁殖行为的角度出发,探讨了水深、温度、盐度、噪声、光强等环境因素对大海马交配成功率与孵幼功率的影响。结果表明:大海马交配与孵幼养殖水位最好在70 cm以上,适宜水温在25—30℃间,盐度为15—30;大海马喜安静且晴好天气应避免直射阳光,海马生活需要有光线,表现较安逸,也能专心孵幼,所产生的幼体数量也较多、质量较好。上述这些环境因素的研究可以为大海马人工育苗的成功提供适宜水深、温度和盐度等范围的参考数据,对构建大海马的择偶、交配与孵幼的环境条件及大海马的人工育苗有指导作用。

基于D-loop和Cyt b序列的大海马遗传变异分析

[目的]对大海马D-loop和Cyt b序列进行遗传变异分析。[方法]基于D-loop和Cyt b部分序列对东山岛(20尾)和泉州市(20尾)养殖场大海马进行遗传变异分析。[结果]获得的D-loop和Cyt b序列分别为707~709 bp和404 bp,且2种序列在2个大海马群体之间极其保守。D-loop和Cyt b序列G+C含量明显低于A+T含量,C含量也低于G含量,Cyt b序列第3位密码子G含量最少。东山岛和泉州市的大海马(各20条)D-loop序列的平均核苷酸差异数分别为0.489和0.958,且分别定义了3种和6种单倍型,东山岛和泉州市的大海马(各20条)Cyt b序列在2个群体之间相似度为100%,只定义了1种单倍型。[结论]研究表明D-loop和Cyt b序列在2个大海马群体中变异较小。

大海马转化生长因子β1(TGF-β1)基因的克隆鉴定及功能研究

转化生长因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)是一种多效应细胞因子,在免疫系统中,成熟的TGF-β1多肽是一种强有力的细胞分化调节剂和免疫调节剂。本研究通过基因克隆得到了大海马(Hippocampus kuda)TGF-β1 cDNA全长序列(GenBank登录号为HM564035),全长为1 941 bp,开放阅读框为1 161 bp,编码1种含386个氨基酸的多肽。同源性分析表明,大海马TGF-β1与斜带石斑鱼TGF-β1的亲缘关系最近。Real-time PCR结果显示,TGF-β1基因在健康大海马肾中表达量最高,其次是肝、大脑、小脑、皮肤、中脑、卵巢,在鳃和肠道中表达很少,在心脏和肌肉中检测不到表达。大海马TGF-β1重组蛋白在TNT快速偶联的转录/翻译系统中高效表达,用BS3交联后形成了大量的可溶性二聚体蛋白,Western blot检测结果显示该重组蛋白具有良好的免疫学活性。利用得到的大海马rTGF-β1刺激HeLa细胞,结果显示刺激细胞中TGF-β1下游Smad信号通路中的Smad3、Smad4基因表达量上升,Smad7基因表达量下降,表明所得到的大海马TGF-β1重组蛋白具有特定的生物活性,能够诱导人细胞中Smad信号通路的活化,延续了TGF-β1蛋白功能的保守性。

温度对大海马摄食行为及生长速率的影响

选取体质良好、活力强的大海马(Hippocampus kuda Bleeker),体重(3.075 g±0.16 g)、体全长(11.55 cm±0.31cm)。设置18℃、23℃、28 3℃个实验组和1个对照组(CT组:自然变温),每组3个重复,实验周期28 d。结果显示,大海马在23℃时生长速率最快,摄食活跃;28℃大海马反应最迅速(5.8 s±0.74 s),摄食量最大(153.92 g±10.33 g),活动频繁,泳速大;而18℃和自然变温条件下对食物的反应不敏感,多缠绕在附着物上,摄食时呈聚集式分布;23℃和28℃时,相对活跃,会主动游向饵料摄食,摄食效率较高。综上所述,温度的改变对大海马的生长速率及摄食行为均有一定影响;在适宜温度下,大海马的活力大,摄食量多,生长速率相对较快。本研究旨在为大海马饵料开发和养殖环境优化提供科学数据。

有益微生物在大海马健康养殖中的应用研究

实验研究了定期定量投放由芽孢杆菌、红螺菌、硝化细菌和硫化细菌组成的复合微生物,对大海马健康养殖过程中产生的有机污物的降解作用、浮游藻类生长,菌相以及对大海马成活率的影响.结果表明,应用复合微生物的试验组溶解氧比对照组提高了32.7%,氨氮、亚硝酸盐和硫化物含量则分别降低了76.9%、97.1%和93.3%.对照池的浮游藻类优势种为蓝藻、甲藻和隐藻,分别各占35.3%、22.3%和19.6%;试验池的浮游藻类优势种为绿藻和硅藻,分别各占69.0%和26.8%,其藻类多样性指数比对照组的增大了1.2倍.试验池的异养菌的增长率为55.3%,而对照池的异养菌增长速度达274.6%.试验期间内,芽孢杆菌的数量从0.15×103 cfu/ml,急剧增至55.63×103 cfu/ml,但对照组的仍保持在(0.13～0.38)×103 cfu·ml-1的水平上.而弧菌数量比对照池的降低了2个数量级.试验海马体长生长速率、体重增重率和平均成活率比对照组分别提高了64.9%、72.3%和78.8%.