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大肠杆菌细胞膜固定相萃取辣木籽抗菌肽
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作者 和丽 许映月 +2 位作者 陈凤敏 黄艾祥 王雪峰 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期65-69,95,共6页
制备大肠杆菌细胞膜固定相(E.coli cell membrane stationary phase,ECMSP),研究其对辣木籽抗菌肽的萃取效果。研究超声时间、超声功率对大肠杆菌破壁效果的影响,分析大肠杆菌细胞膜与大孔硅胶的吸附特征及ECMSP对辣木籽抗菌肽的吸附效... 制备大肠杆菌细胞膜固定相(E.coli cell membrane stationary phase,ECMSP),研究其对辣木籽抗菌肽的萃取效果。研究超声时间、超声功率对大肠杆菌破壁效果的影响,分析大肠杆菌细胞膜与大孔硅胶的吸附特征及ECMSP对辣木籽抗菌肽的吸附效果,明确萃取前后抑菌活力变化及反相-高效液相色谱(RP-HPLC)差异峰。结果表明:在超声功率500 W、超声时间30 min条件下,大肠杆菌破壁效果较好;大孔硅胶对大肠杆菌细胞膜的饱和吸附值(C_(s)^(max))为9.98μg/mg、吸附常数(K^(*))为171.02μg/mL;萃取前后抗菌肽对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制效果差异明显,RP-HPLC分析表明萃取前后出现了3个差异峰。研究结果可为辣木籽抗菌肽的后续开发利用提供理论基础和应用参考。 展开更多
关键词 大肠杆菌 大肠杆菌细胞膜固定相 辣木籽抗菌肽 萃取 抑菌率
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毒素共轭化合物法筛选表达重组抗体的大肠杆菌细胞
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作者 龚桂花 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期487-487,共1页
半抗原-毒素共轭体的毒性可因抗体或其它可与之结合的物质所产生的空间位阻作用而被中和。如使用抗荧光素抗体B13-DE1和抗生物素蛋白链菌素(streptavidin)结合到相应的共轭化合物——荧光素-氨苄西林和生物素-氨苄西林后,这两种化合... 半抗原-毒素共轭体的毒性可因抗体或其它可与之结合的物质所产生的空间位阻作用而被中和。如使用抗荧光素抗体B13-DE1和抗生物素蛋白链菌素(streptavidin)结合到相应的共轭化合物——荧光素-氨苄西林和生物素-氨苄西林后,这两种化合物对E.coli细胞的生长抑制作用被中和,采用这一方法可从大量细胞中筛出表达单链抗体片段或其他结合分子的大肠杆菌细胞。 展开更多
关键词 大肠杆菌细胞 单链抗体 化合物法 共轭 毒素 抗生物素蛋白 重组 筛选
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古细菌Pyrococcus furiosus嗜热α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的表达 被引量:2
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作者 沈微 王正祥 +1 位作者 刘吉泉 诸葛健 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期10-14,共5页
用PCR方法从嗜热古细菌Pyrococcusfuriosus的基因组DNA中扩增出胞外α 淀粉酶完整结构基因 ,插入表达载体pET2 8a中构建成质粒 pET amy(sig+) ,以质粒pET amy(sig +)为底物扩增出不含信号序列的α 淀粉酶成熟肽基因片断 ,获得质粒 pET a... 用PCR方法从嗜热古细菌Pyrococcusfuriosus的基因组DNA中扩增出胞外α 淀粉酶完整结构基因 ,插入表达载体pET2 8a中构建成质粒 pET amy(sig+) ,以质粒pET amy(sig +)为底物扩增出不含信号序列的α 淀粉酶成熟肽基因片断 ,获得质粒 pET amy(sig ) ,将重组质粒分别转化大肠杆菌BL2 1 (DE3)。在T7启动子和lac操纵子控制下 ,通过IPTG的诱导在重组大肠杆菌细胞内分别表达出含信号肽和不含信号肽的融合蛋白。其中不含信号肽的融合蛋白具有与P .furio sus产生的胞外α 淀粉酶相似的酶学性质 :最适pH为 5 .0 ,最适温度约为 95℃ ,在 1 2 1℃下热处理 1h酶活仍能保持 50 %以上 ; 展开更多
关键词 “Pyrococcus furiosus” 嗜热α-淀粉酶 基因 PCR方法 融合表达 大肠杆菌细胞 酶学性质
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美国研制出快速检测食品中大肠杆菌的装置
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《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第3期95-95,共1页
美国研究人员成功研制出一种能快速检测食品中致病大肠杆菌的手持检测装置。这种装置使用方便且灵敏度高,消费者能借助它轻松了解食品安全性。利用传统方法检测食品中的大肠杆菌既耗时又费事,不仅需要大量样本,而且检测结果通常需要... 美国研究人员成功研制出一种能快速检测食品中致病大肠杆菌的手持检测装置。这种装置使用方便且灵敏度高,消费者能借助它轻松了解食品安全性。利用传统方法检测食品中的大肠杆菌既耗时又费事,不仅需要大量样本,而且检测结果通常需要等上24小时甚至更长时间。美国德雷克塞尔大学研究人员研制出的新装置,不仅10分钟内就可令致病大肠杆菌“原形毕露”,而且灵敏度很高,在浓度为每毫升4个大肠杆菌细胞的食品样本中仍能发现“目标”。 展开更多
关键词 大肠杆菌细胞 食品安全性 快速检测 检测装置 美国 研究人员 传统方法 检测结果 灵敏度 消费者
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产葡萄糖异构酶细胞的固定化 被引量:5
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作者 邓辉 陈晟 +1 位作者 陈坚 吴敬 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第9期164-169,共6页
采用壳聚糖絮凝和戊二醛交联的方法,对表达生产Thermobifida fusca葡萄糖异构酶(GIase)的重组大肠杆菌细胞进行固定化工艺研究,以期获得高性能和低成本的固定化产酶细胞方法。考察影响细胞絮凝和交联的各种因素,并对固定化酶制剂的理化... 采用壳聚糖絮凝和戊二醛交联的方法,对表达生产Thermobifida fusca葡萄糖异构酶(GIase)的重组大肠杆菌细胞进行固定化工艺研究,以期获得高性能和低成本的固定化产酶细胞方法。考察影响细胞絮凝和交联的各种因素,并对固定化酶制剂的理化性质、动力学常数进行测定。结果表明:最佳的固定化条件为在高密度发酵液中添加0.6%硅藻土和5mmol/L Mg2+,经60℃热处理30min后,在壳聚糖终质量分数0.1‰、pH5.5、充分搅拌条件下絮凝,酶活回收率达98%;絮凝产物在戊二醛体积分数0.25%、pH6.5、轻微搅拌条件下交联3h,以未交联的样品作参照(100%),交联样品的酶活保留率达80%。相对于游离GIase,此条件下制备的固定化GIase的最适温度仍为80℃、最适pH值从10降低至9;在工业生产应用条件下,固定化GIase的初始酶活力达到356U/g,半衰期为61d,能够满足高果糖浆工业的生产要求。 展开更多
关键词 葡萄糖异构酶 重组大肠杆菌细胞 固定化 壳聚糖絮凝 戊二醛交联
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β_2肾上腺素受体基因的改造及在无细胞合成体系中的表达
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作者 王健 刘媛 +5 位作者 王玮 刘洋 韩正政 曲丽洁 杨立亭 王若敏 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第12期179-184,共6页
依据大肠杆菌密码子偏好性,设计合成β_2肾上腺素受体(β_2 adrenergic receptor,β_2AR)基因序列,应用大肠杆菌无细胞系统对其进行高效表达,经负载镍离子的顺磁颗粒Magne His?Ni-Particles纯化后,对受体蛋白进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯... 依据大肠杆菌密码子偏好性,设计合成β_2肾上腺素受体(β_2 adrenergic receptor,β_2AR)基因序列,应用大肠杆菌无细胞系统对其进行高效表达,经负载镍离子的顺磁颗粒Magne His?Ni-Particles纯化后,对受体蛋白进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和活性鉴定。结果表明:改造后的β_2AR基因密码子适应指数(codon adaptation index,CAI)为0.96,GC含量从58%降低到46.17%,更有利于该基因在大肠杆菌系统中的表达。表达体系中优化后的Mg^(2+)浓度为22 mmol/L,此时表达量为1 250μg/mL。SDS-PAGE分析显示,纯化蛋白在47 k Da左右出现清晰的特异性条带,与预期结果一致,纯度大于90%。直接酶受体分析检测结果显示,当纯化受体蛋白1∶500稀释包被时,该重组受体与盐酸克伦特罗、沙丁胺醇及莱克多巴胺的酶标记物结合的OD值分别为0.976、0.836和0.728,亲和活性依次降低。β_2AR蛋白在无细胞体系中的成功表达,为研发基于受体的β激动剂多残留快速检测技术提供了理论支持。 展开更多
关键词 Β2肾上腺素受体 密码子优化 大肠杆菌细胞合成体系 表达 β激动剂检测
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关于遗传毒物的细菌测试系统 被引量:7
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作者 陈中孚 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 1990年第1期62-68,共7页
一系列物理和化学因素能直接或间接地引起生物细胞中遗传物质DNA发生损伤或阻断DNA复制,这些因素被总称为遗传毒性因子(Genotoxic agent)或遗传毒物(Genotoxin)。遗传毒物之所以受到人们重视,因为有证据表明环境中存在的遗传毒物不但能... 一系列物理和化学因素能直接或间接地引起生物细胞中遗传物质DNA发生损伤或阻断DNA复制,这些因素被总称为遗传毒性因子(Genotoxic agent)或遗传毒物(Genotoxin)。遗传毒物之所以受到人们重视,因为有证据表明环境中存在的遗传毒物不但能引起生物发生遗传性变异,有些还能致癌(据估计人类的癌症中70%以上是由环境中存在的致癌因子所引起)。 展开更多
关键词 大肠杆菌细胞 原噬菌体诱导 测试系统 半乳糖苷酶 诱变作用 生物发生 转座子 基因克隆 DNA 致癌因子
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人类错配修复基因突变在肿瘤发生中的作用研究新进展 被引量:7
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作者 刘晓蓉 单祥年 《国外医学(遗传学分册)》 2001年第6期301-303,共3页
近年来 ,相继有 6种人类错配修复基因被分离克隆并定位 ,进一步的研究表明人类错配修复基因的变异在肿瘤发生中有重要的作用 ,尤其是在 HNPCC肿瘤发生中 ,起到了主要作用。而这些基因的变异不仅仅是原先所知的结构突变 ,如点突变、移码... 近年来 ,相继有 6种人类错配修复基因被分离克隆并定位 ,进一步的研究表明人类错配修复基因的变异在肿瘤发生中有重要的作用 ,尤其是在 HNPCC肿瘤发生中 ,起到了主要作用。而这些基因的变异不仅仅是原先所知的结构突变 ,如点突变、移码突变、错义突变等 ,还包括了启动子过甲基化造成的基因不表达 。 展开更多
关键词 人类错配修复基因 过甲基化 肿瘤发生 大肠杆菌细胞
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人组织因子途径抑制因子重组蛋白表达菌株的建立
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作者 冷希岗 王传华 +3 位作者 宋丽萍 李晓征 马洁 王彭延 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2003年第2期314-317,共4页
组织因子途径抑制因子是机体凝血过程的主要抑制因子 ,在血栓形成性疾病的防治中具有广阔的应用前景。本研究采用 p GEX- 2 T为表达载体、大肠杆菌细胞为表达宿主进行了人组织因子途径抑制因子重组蛋白的制备。制备的重组蛋白产量较高 ... 组织因子途径抑制因子是机体凝血过程的主要抑制因子 ,在血栓形成性疾病的防治中具有广阔的应用前景。本研究采用 p GEX- 2 T为表达载体、大肠杆菌细胞为表达宿主进行了人组织因子途径抑制因子重组蛋白的制备。制备的重组蛋白产量较高 ,纯化过程简单 。 展开更多
关键词 组织因子途径抑制因子 血栓形成性疾病 凝血系统 表达载体 大肠杆菌细胞 跨膜糖蛋白
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基因文库的构建与使用 被引量:4
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作者 王德枝 《生物学教学》 北大核心 2010年第12期65-66,共2页
基因工程中,需要将某种生物的遗传信息贮存在可以长期保存的稳定的重组体中,通常是将目的基因用适当的工具酶连接到低等微生物如细菌的质粒、噬菌体等载体上,克隆得到重组DNA,由此构成该生物的基因文库。例如,带有人类所有基因克... 基因工程中,需要将某种生物的遗传信息贮存在可以长期保存的稳定的重组体中,通常是将目的基因用适当的工具酶连接到低等微生物如细菌的质粒、噬菌体等载体上,克隆得到重组DNA,由此构成该生物的基因文库。例如,带有人类所有基因克隆的大肠杆菌细胞构成了人类基因文库,可从这个文库中筛选、鉴定和研究人类的各种基因。 展开更多
关键词 基因文库 大肠杆菌细胞 基因克隆 重组DNA 微生物 基因工程 长期保存 信息贮存
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Morphological Changes of Hemocytes of Musca domestica Larva in vitro Infected by Escherichia coli 被引量:4
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作者 晏容 刘晖 +1 位作者 贺莉芳 刘流 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2010年第3期115-117,共3页
[Objective] The research aimed to observe the effects of Escherichia coli infection on the morphology of hemocytes of the 3rd stage larva of Musca domestica in vitro and understand the hemocytes types that take part i... [Objective] The research aimed to observe the effects of Escherichia coli infection on the morphology of hemocytes of the 3rd stage larva of Musca domestica in vitro and understand the hemocytes types that take part in the cell immunity of Musca domestica larval.[Method] The hemcytes of the 3rd stage larva of Musca domestica were cultured in vitro and the hemocyte morphology was observed about 2,4,6,8 h after culture in vitro.After Escherichia coli were injected into the hemocytes of the 3rd stage larva of Musca domestica in vitro,the morphology changes of hemocytes were observed at different time after infection.[Result] The hemocytes of of the 3rd stage larva of Musca domestica was divided into five types about 2 h after hemoculture.The hemocytes partly adherence was seen about 6 h after hemoculture.The vacuolation and morpholysis was found in plasmatocytes after being infected by E.coli and a great quantity bacterium were gathered around granulocyte,but the morphology changes of hemocytes were not found in the prohemocyte,shprulocyte and oenocytoid.[Conclusion] The plasmatocyte and granulocyte were primary participants of the cell immunity of Musca domestica larval,but the prohemocyte,sphrulocyte and oenocytoid do not participate in the cell immune reactions. 展开更多
关键词 Musca domestica larval Escherichia coli HEMOCYTE Morphology Cell immunity
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人可溶性APRIL基因的克隆、表达及生物学活性检测 被引量:5
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作者 戴双双 何凤田 +4 位作者 杨朝辉 彭家和 李蓉芬 张艳 陈麟凤 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期61-64,共4页
为探索人可溶性增殖诱导配体 (sAPRIL)在多种肿瘤细胞的增殖和存活以及促肿瘤形成中的作用 ,用RT PCR从扁桃体总RNA中扩增出人sAPRIL基因 .经克隆测序后进行同源性比较 ,证实所克隆的基因即为sAPRIL .将克隆载体经酶切并构建表达载体 ,... 为探索人可溶性增殖诱导配体 (sAPRIL)在多种肿瘤细胞的增殖和存活以及促肿瘤形成中的作用 ,用RT PCR从扁桃体总RNA中扩增出人sAPRIL基因 .经克隆测序后进行同源性比较 ,证实所克隆的基因即为sAPRIL .将克隆载体经酶切并构建表达载体 ,在大肠杆菌中表达 ,表达量达4 3 6 % .纯化蛋白后进行3 H TdR参入实验 ,表明sAPRIL有明显促进肿瘤的形成及肿瘤细胞的增殖与存活的作用 . 展开更多
关键词 增殖诱导配体 基因克隆 大肠杆菌表达 肿瘤细胞增殖
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Adhesive Patterns of Escherichia coli F4 in Piglets of Three Breeds 被引量:3
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作者 李玉华 邱小田 +1 位作者 李何君 张勤 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第7期591-599,共9页
Escherichia coli expressing F4 fimbriae is the major pathogenic bacteria that causes diarrhea in piglets before weaning. The adhesion of E. coli to the brush borders of the epithelial cells of piglets is the precondit... Escherichia coli expressing F4 fimbriae is the major pathogenic bacteria that causes diarrhea in piglets before weaning. The adhesion of E. coli to the brush borders of the epithelial cells of piglets is the precondition leading to diarrhea, which in turn is due to the presence of the F4 receptors determined by an autosomal recessive gene on the brush borders of the epithelial cells. In order to clarify the genetic mechanism of the adhesion, an in vitro adhesion experiment was carded out for three variants of E. coli F4 (ab, ac, and ad) in 366 piglets of three pig breeds [Landrace (LR), Large White (LW), and Songliao Black (SB)]. The results showed that there existed significant differences (P〈0.001) in the adhesion percentage among the three breeds. Most SB piglets were nonadhesive for all the three variants, whereas most LR piglets were adhesive. Within each breed except for LR, the proportions of the three F4 variants adhering to the brush borders differed significantly. According to the patterns of the adhesion of the three F4 variants in the three breeds, it is very likely that the three F4 variants F4ab, F4ac, and F4ad have different receptors that are controlled by three different loci. 展开更多
关键词 E. coli F4 PIGLETS adhesion patterns RECEPTORS
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一种检测生活饮用水和污水中生物有效性铜离子的微生物报告菌株的构建 被引量:1
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作者 周怀彬 王娟娟 +4 位作者 赵建国 洪旭芬 庞一林 李江辉 谭国强 《温州医科大学学报》 CAS 2020年第5期345-355,共11页
目的:构建一种能够检测生活饮用水和污水中生物有效性铜离子的微生物报告菌株。方法:首先采用交叉PCR将增强型绿色荧光蛋白与铜离子“外排泵”基因copA的启动子融合构建响应铜离子的CopAp::gfpmut2-pET28a感应元件。然后利用Red重组系... 目的:构建一种能够检测生活饮用水和污水中生物有效性铜离子的微生物报告菌株。方法:首先采用交叉PCR将增强型绿色荧光蛋白与铜离子“外排泵”基因copA的启动子融合构建响应铜离子的CopAp::gfpmut2-pET28a感应元件。然后利用Red重组系统分别敲除野生型大肠杆菌(E.coli)MC4100体内负责外排转运铜离子的基因,并将感应元件转化至突变菌中完成菌株的构建。最后优化出最佳检测条件,并将其初步应用于检测水环境中铜离子。结果:相对野生型菌株,E.coliΔcusA-ΔcopA-ΔcueO突变菌对铜离子的敏感性提高了64倍,从而使报告菌株的荧光信号显著增强,且荧光信号强度与铜离子浓度呈剂量依赖关系;报告菌株的线性检测范围为0.05~2.5μmol/L(0.0032~0.16 mg/L)Cu2+;与原子吸收光谱法相比,其对生活饮用水中0.05 mg/L和1 mg/L铜离子的回收率分别为87.90%和104.37%。结论:本研究构建报告菌株的灵敏度能够有效覆盖国标中针对生活饮用水和污水中铜离子的限制,从而为报告菌株的应用奠定了技术基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌细胞报告菌株 铜离子检测 增强型绿色荧光蛋白 RED重组系统
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氨基酸发酵近年来的进展 被引量:2
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作者 冯容保 《发酵科技通讯》 CAS 1990年第4期21-24,43,共5页
1.谷氨酸钠世界生产能力已达60万吨/年,其中中国20万吨,台湾省14万吨,日本11.6万吨,南朝鲜8.3万吨,泰国4.68万吨,法国4.3万吨。
关键词 谷氨酸钠 半胧氨酸 甲酸脱氢酶 发酵罐 盐酸硫胺素 种子培养基 水物 大肠杆菌细胞 盐酸盐 美国孟山都
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天津工生所探索丁二酸合成新途径
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《石油化工》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1355-1355,共1页
中科院天津工业生物技术研究所结合理性遗传改造和进化代谢技术,构建高效生产丁二酸的微生物细胞工厂,将可再生的生物质资源高效转化为丁二酸,在丁二酸细胞工厂构建及高效合成机制解析上取得进展。该所构建出高效生产丁二酸的大肠杆... 中科院天津工业生物技术研究所结合理性遗传改造和进化代谢技术,构建高效生产丁二酸的微生物细胞工厂,将可再生的生物质资源高效转化为丁二酸,在丁二酸细胞工厂构建及高效合成机制解析上取得进展。该所构建出高效生产丁二酸的大肠杆菌细胞工厂HX024,并在此基础上,通过使用反向代谢工程技术,将丁二酸的糖酸转化率从1.12mol/mol提高到1.5mol/mol(理论最大转化率的88%),并在国际上提出了以NADPH酶为还原力的丁二酸合成新途径。 展开更多
关键词 合成机制 丁二酸 天津 工业生物技术 微生物细胞 最大转化率 大肠杆菌细胞 生物质资源
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医药其它
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《生物技术通报》 CAS CSCD 1990年第1期95-98,共4页
编码HIV病毒一l或HIV病毒一2蛋白质的DNA序列是新的.含上述新序列的表达载体质粒也是新的.这些新的表达载体质粒转化大肠杆菌细胞后能在其中表达.
关键词 表达载体质粒 大肠杆菌细胞 七叶树素 病毒培养 陈玉梅 融合蛋白 分子克隆 链霉菌 克隆载体 SEPHAROSE
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激素和活性多肽
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《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第4期47-48,共2页
关键词 大肠杆菌细胞 活性多肽 还原酶 折射体 生物学活性 融合蛋白 表达载体 转染细胞 异源表达 单加氧酶
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核酸及蛋白质合成、提取、纯化
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《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第9期20-21,共2页
关键词 蛋白质合成 大肠杆菌细胞 操纵子 同聚物 基因组文库 克隆基因 BamHI 操纵基因 重组蛋白 克隆载体
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DNA分析与扩增
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《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第10期25-29,共5页
关键词 DNA分析 基因克隆 酵母人工染色体 定序 编码序列 染色体步移 聚合酶 大肠杆菌细胞 缺失突变株 RNA
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