天祝白牦牛全线粒体基因组母系遗传多样性

为从基因组水平上揭示天祝白牦牛的母系遗传多样性、群体遗传结构和母系遗传背景,本研究利用基因组重测序技术,测定42头天祝白牦牛的全基因组序列,获取其线粒体基因组全序列,并从GenBank中下载1条已公布的天祝白牦牛线粒体基因组全序列,对共计43条天祝白牦牛线粒体基因组全序列进行综合分析。结果表明:从43条天祝白牦牛线粒体基因组全序列中共识别出971个变异位点,包括25个单一多态位点和946个简约信息位点;通过序列间核苷酸变异确定了20种单倍型,单倍型多样度和核苷酸多样度分别为0.907和0.013,表明天祝白牦牛拥有较为丰富的母系遗传多样性。与野牦牛及环湖、雪多、玉树、青海高原、帕米尔等牦牛品种相比,天祝白牦牛母系遗传多样性相对较低。利用美洲野牛作为参考外群进行系统发育分析,20种单倍型分布于5种单倍型组(A、B、C、E和G)中,归属于3个母系遗传支系(Mt-Ⅰ、Mt-Ⅱ和Mt-Ⅲ),以Mt-Ⅰ支系为主,推测其有3个母系起源。

营养水平对舍饲天祝白牦牛冷季生产性能、营养物质表观消化率的影响

试验旨在探究冷季补饲不同营养水平日粮对天祝白牦牛生产性能和营养物质表观消化率及经济效益的影响。选择体况良好的0.5岁、2.5岁和4.5岁天祝白牦牛公牛各10头,各年龄随机分为高营养水平组(H组)和低营养水平组(L组)进行饲喂,每组5头。H组和L组饲料综合净能(NE_(mf))分别为97.84、81.54 MJ/kg,预试期15 d,正试期90 d。结果表明:三个年龄段牦牛的日增重、胴体重和屠宰率均无显著差异(P>0.05),但H组三个年龄段料重比均低于L组牦牛。0.5岁H组干物质、酸性洗涤纤维表观消化率极显著或显著低于L组(P<0.01或P<0.05),2.5岁H组干物质和酸性洗涤纤维养分表观消化率显著低于L组(P<0.05),4.5岁H组粗蛋白表观消化率极显著高于L组(P<0.01),而中性洗涤纤维表观消化率极显著低于L组(P<0.01)。不同年龄H组和L组牦牛干物质、粗蛋白、中性洗涤纤维表观消化率随年龄增长极显著或显著升高(P<0.01或P<0.05)。三个年龄阶段牦牛分别饲喂等量日粮,L组利润均高于H组。说明冷季补饲精粗比为35∶65的低营养水平日粮可显著提高天祝白牦牛的生产性能和经济效益。

补饲不同能量水平的精料对天祝白牦牛生长性能、瘤胃发酵参数和血清生化指标的影响

试验探究补饲不同能量水平精料对天祝白牦牛血清生化指标、生长性能以及瘤胃发酵参数的影响。试验共分两期,第一期为放牧的同时进行冬春季枯草期精料补饲,第二期为丰草期放牧,不进行补饲。试验选取6月龄、体重(46.62±4.37)kg、健康的天祝白牦牛公犊30只,根据随机区组设计分为3组,每组5个重复,每个重复两头牛。对照组正常放牧,不补饲精料;试验Ⅰ组和试验Ⅱ组在放牧后分别补饲代谢能为10.83、11.76 MJ/kg的精料,精料初始饲喂量为0.70 kg/头,每15 d增加0.05 kg,终期添加量为1.20 kg/头。试验期365 d,其中冬春季补饲期150 d,正常放牧期为215 d。结果显示,冷季补饲增加了牦牛在11、12和18月龄的体重和6~11月龄、12~18月龄的增重(P<0.05),且试验Ⅱ组各日龄的体重和增重高于试验Ⅰ组(P<0.05)。各组的Gompertz模型拟合度高于Bertalantty模型的拟合度,试验组拐点体重和拐点月龄高于对照组,试验Ⅱ组拐点体重和拐点月龄最大。试验Ⅰ组和试验Ⅱ组瘤胃液乙酸含量、乙酸/丙酸比值、pH值低于对照组(P<0.05),丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸、氨态氮含量高于对照组(P<0.05),且试验Ⅱ组的氨态氮含量高于试验Ⅰ组(P<0.05)。试验Ⅰ组和试验Ⅱ组血清葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯和总蛋白含量高于对照组(P<0.05)。研究表明,冷季补饲不同能量水平的精料促进了牦牛犊牛的生长发育,改变了瘤胃发酵模式和血清生化指标,补饲代谢能11.76 MJ/kg的精料效果较好。

天祝白牦牛ADIPOQ基因的克隆及生物信息学分析

脂联素(ADIPOQ)是一种主要由脂肪组织分泌的内源性细胞因子,在调节脂类代谢中发挥重要作用,该基因通过调控脂质代谢影响动物机体脂肪沉积。为探讨ADIPOQ基因编码蛋白序列特征及组织表达模式,试验对天祝白牦牛ADIPOQ基因编码序列(CDS)进行克隆测序,获得天祝白牦牛ADIPOQ基因CDS区,利用生物信息学软件预测天祝白牦牛ADIPOQ基因及其编码氨基酸序列特征。结果表明:天祝白牦牛ADIPOQ基因CDS区全长723 bp,编码240个氨基酸,其中甘氨酸含量(14.17%)最高,具有亲水性,蛋白质二级结构和三级结构以无规则卷曲和延伸链为主。ADIPOQ基因编码蛋白具有一个信号肽,无跨膜结构,属于分泌蛋白,其可能与ADIPOR1、ADIPORZ、RETN、PLIN1和LEP等10个蛋白质存在相互作用,与山羊的氨基酸序列相似性为91.6%,与绵羊、山羊亲缘关系最近,具有一定的保守性。说明试验成功克隆了天祝白牦牛ADIPOQ基因的CDS区,ADIPOQ基因可能在脂肪沉积过程中发挥重要作用。

天祝白牦牛NGB基因的克隆及生物信息学分析

为探讨天祝白牦牛NGB基因的分子结构特征,通过PCR扩增和测序技术,以及生物信息学分析工具,对NGB基因进行克隆、测序及相关生物信息学分析。结果表明:天祝白牦牛NGB基因长3 840bp,含有4个外显子和3个内含子,可编码151个氨基酸。氨基酸编码存在明显的密码子偏倚现象。与黄牛相比较,白牦牛NGB基因第3内含子存在2个碱基的缺失,氨基酸序列的第83和第97位分别发生(S→P)和(R→Q)的改变。天祝白牦牛NGB基因的成功克隆为进一步研究牦牛NGB的遗传特性和生理机制奠定了基础。

天祝白牦牛肾组织成纤维细胞系的建立与生物学特性研究

采集天祝白牦牛胚胎肾组织,用胰蛋白酶热消化法制备原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法继代培养和细胞纯化,扩增至F3代后冷冻保存,并对复苏细胞的形态、活力、生长曲线、荧光蛋白质粒转染表达、核型以及乳酸脱氢酶同工酶等生物学特性进行了分析。结果显示,原代和传代细胞生长形态良好,群体倍增时间为27.2 h;染色体2n=60;二倍体为74%,占主体;乳酸脱氢酶同工酶电泳图谱有明显特征,LDH5浓度较高,活性较强;外源质粒在该细胞中能进行复制和表达;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性。表明本研究已成功建立天祝白牦牛肾组织成纤维细胞系,该细胞系的建立,使天祝白牦牛这一国家重要种质资源在细胞水平上得以保存,也为基因组文库和体细胞克隆等研究提供了理想的生物材料。

天祝白牦牛MSTN基因编码区克隆及生物信息学分析

为探讨天祝白牦牛MSTN基因的分子结构特征,通过PCR扩增和测序技术以及生物信息学分析工具对天祝白牦牛MSTN基因进行克隆、测序及相关生物信息学分析。结果表明,天祝白牦牛MSTN基因编码区序列全长1 128 bp,编码375个氨基酸残基;天祝白牦牛MSTN基因编码蛋白分子量42.55 ku,理论等电点为6.14;生物信息学预测发现,天祝白牦牛MSTN蛋白是不稳定的亲水蛋白,mRNA二级结构的最小自由能为-1 135.16 k J·mol^(-1),蛋白质二、三级结构均是以无规卷曲和延伸链为主的混合型蛋白。天祝白牦牛MSTN基因的成功克隆为进一步研究牦牛MSTN的遗传特性和生理机制奠定了基础。

天祝白牦牛被毛组织结构及超微结构

为合理开发利用天祝白牦牛被毛纤维,用光学显微镜与扫描电子显微镜相结合的方法,对天祝白牦牛被毛各类型纤维的组织结构和超微结构进行观察研究。结果表明:天祝白牦牛身体不同部位的绒毛与两型毛纤维组织结构和超微结构基本相似,不同部位粗毛纤维的组织结构存在一定的差异,特别是髓质层结构差异较大;不同类型纤维鳞片层结构有所差异,鳞片密度排序为粗毛>两型毛>绒毛,且绒毛与粗毛差异极显著(P<0.01);鳞片高度和厚度的变化均为绒毛>两型毛>粗毛,且绒毛与粗毛间差异显著(P<0.05)。

天祝白牦牛被毛品质特性的研究

本研究对140头1～7周岁天祝白牦牛股、背、肩、侧、腹5个部位生长1年的被毛进行了品质特性研究。结果表明:天祝白牦牛3～6岁被毛品质相对稳定,各项物理性能差异不显著(P<0.05),是毛用、绒用性能最佳的阶段;7岁后被毛品质变差,毛用、绒用性能降低。身体不同部位物理性能相比较,体侧部各类纤维平均直径最小,长度、强力和伸长率较大,综合品质较好;背部各类纤维粗短,强力和伸长率小,综合品质较差;腹部的粗毛纤维粗、长,强力和伸长率较大。

天祝白牦牛裙毛、尾毛与人发的结构及性能比较

研究天祝白牦牛裙毛和尾毛的性能结构及其与人发的异同，为合理开发利用天祝白牦牛尾毛和裙毛提供科学依据。利用光学显微镜、扫描电镜、氨基酸分析仪、能谱分析仪等对天祝白牦牛裙毛、尾毛和人发的超微结构及各项性能进行观测。结果发现3种纤维的细度范围52．5-109．8μm，有髓毛含量1．8％-17．0％；单纤维断裂强力≥60cN、伸长率≥50％；3种纤维均由18种氨基酸组成，鳞片呈杂波状排列、横切面为椭圆或近圆形。天祝白牦牛裙毛、尾毛与人发的结构及各项性能比较相似，是制作高档假发和西服里衬的理想原料。

天祝白牦牛三个功能基因部分序列的PCR-RFLP研究

采用PCR-RFLP技术,检测了天祝白牦牛αS1-酪蛋白(αS1-casein,αS1-CN)基因、κ-酪蛋白(κ-casein,κ-CN)基因和生长激素(growthhormone,GH)基因部分序列的遗传多态性。结果表明,天祝白牦牛群体中αS1-CN基因PCR-RFLP位点呈单态;κ-CN基因和GH基因两个PCR-RFLP位点均呈多态性。κ-CN基因PCR-RFLP位点等位基因A和B的基因频率分别为0.0745和0.9255,GH基因PCR-RFLP位点等位基因A和B的基因频率分别为0.1277和0.8723;该3个位点平均基因一致度和基因多样度分别为0.8798和0.1202。

天祝白牦牛超排过程中卵泡闭锁的初步研究

[目的]全面监测天祝母白牦牛超排过程中卵巢的变化情况。[方法]对12头健康成年天祝母白牦牛采用CIDR+FSH+PG的超数排卵处理,并运用超声探测技术对超排过程中卵巢的变化情况做了全程监测。[结果]在处理的12头牛中有5头监测到明显的卵泡闭锁现象。在超排处理前期,这5头的卵巢直径逐渐增大,到第10天达到最大值,平均(3.39±0.65)cm,之后又开始逐渐缩小;卵巢上最大卵泡的直径也在第10天达到最大值,平均13.6±2.6 mm;优势卵泡从第8天开始大量出现,到第10天达到最多,平均每个卵巢有6.5±2.3个;此后这些优势卵泡的直径逐渐缩小,在B超图上未看到黄体影像,说明这类卵泡没有正常排卵,而是最终走向了闭锁。[结论]该研究为评价及优化超排处理方案提供准确可靠的依据。

天祝白牦牛α_(S1)-酪蛋白基因和κ-酪蛋白基因的PCR-RFLP研究

利用PCR—RFLP技术熏检测了天祝白牦牛αS1-酪蛋白(αS1-casein,αS1-CN)基因和κ-酪蛋白(κ-casein,κ-CN)基因部分序列的遗传多态性熏结果表明:天祝白牦牛群体αS1-CN基因表现单态,κ-CN基因存在遗传多态性。κ-CN基因PCR-RFLP位点等位基因A和B的基因频率分别为0.0745和0.9255。κ-CN基因PCR-RFLP位点的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定理(P>0.05)。天祝白牦牛群体内平均基因一致度、基因多样度和有效等位基因数分别为0.9311、0.0689和1.0739。

不同超数排卵方法对天祝白牦牛超排效果的影响

为探索天祝白牦牛超数排卵的有效方法,选择54头纯种天祝白牦牛,利用国产促卵泡素(FSH)和进口FSH分别等量法和减量法进行超数排卵处理,比较其超数排卵效果。结果显示,应用等量法注射国产FSH超排的有效率为40%,减量注射法超数排卵的总有效率为50%;等量法和减量法注射进口FSH的超排有效率均为50%;使用大剂量FSH进行超排处理的有效率为50%;而应用FSH重复进行超数排卵处理的有效率为67%。结果表明,国产FSH与进口FSH在处理供体白牦牛进行超数排卵时,其效果差异不显著(P>0.05),等量注射法和减量注射法对超排效果也无显著影响(P>0.05)。在同等条件下,使用大剂量的FSH对供体进行超数排卵,其有效率与使用正常剂量FSH处理的有效率没有显著差异(P>0.05),但重复超数排卵处理的效果显著高于一次处理的效果(P<0.05),平均每头牛的排卵数也明显高于其他试验组。

天祝白牦牛IGF-1基因克隆、生物信息学及差异表达分析

旨在获得天祝白牦牛 IGF-1基因序列,分析其分子结构特征及在牦牛毛囊发育周期中的表达规律,为解析白牦牛毛囊发育及被毛生长提供理论依据。以天祝白牦牛体侧皮肤为试验材料,通过PCR扩增及测序技术克隆 IGF-1基因CDS区序列,并与黄牛序列比对,进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测天祝白牦牛毛囊发育不同时期 IGF-1基因的mRNA表达水平。结果表明,天祝白牦牛 IGF-1基因的CDS区长465 bp,编码154个氨基酸;IGF-1基因编码蛋白的分子质量为17 065. 81 ku,理论等电点为9.36;蛋白质二级结构以无规卷曲(57.79%)和α-螺旋(27.27%)为主,序列分析表明,天祝白牦牛IGF-1蛋白为不稳定亲水蛋白;qPCR检测结果表明, IGF-1基因在牦牛毛囊发育的生长期、退行期和休止期均有表达,生长期和退行期表达量显著高于休止期。

天祝白牦牛HSP60基因的克隆及其在下丘脑-垂体-睾丸中的表达定位研究

热休克蛋白60(HSP60)不仅在细胞保护方面发挥作用,也参与雄性动物生殖生理的调控。为研究HSP60基因序列特性及其在天祝白牦牛下丘脑-垂体-睾丸轴(HPT-axis)上的表达情况,探寻其在白牦牛睾丸发育、精子发生过程中的作用机制,本研究采用RT-PCR和RACE技术获得白牦牛HSP60基因全长cDNA序列,采用生物信息学方法分析HSP60蛋白的理化性质、结构及不同物种之间的同源性等,并利用qPCR、Western blotting、免疫组化法分析HSP60在白牦牛下丘脑-垂体-睾丸轴中的表达及定位。结果表明,白牦牛HSP60基因cDNA全长为2 300 bp,开放阅读框为1 722 bp,编码572个氨基酸;其理论分子量为60.977k Da、等电点为5.69,编码的蛋白为非跨膜可溶性蛋白。氨基酸序列比对结果显示,白牦牛HSP60氨基酸序列与牛、瘤牛、绵羊、藏羚羊、骆驼、白犀牛、兔和黑猩猩的氨基酸序列同源性高、进化水平相近。HSP60基因及蛋白在白牦牛的下丘脑、垂体及睾丸组织中均有表达,其中下丘脑及垂体组织表达量显著高于睾丸,下丘脑和垂体之间差异不显著。免疫组化结果显示,HSP60蛋白定位表达于白牦牛下丘脑组织的室旁核大细胞、室旁核小细胞和神经角演网、垂体组织的腺细胞、睾丸组织的精原细胞、精母细胞、支持细胞和间质细胞,而精子细胞中表达较弱。通过对健康成年白牦牛HSP60在下丘脑-垂体-睾丸轴的表达与定位检测,推断HSP60参与雄性白牦牛生殖轴调控,并参与睾丸发育与精子发生。本研究结果为进一步研究HSP60对雄性生殖调控奠定了基础。

天祝白牦牛的毛绒生产性能

[目的]分析天祝白牦牛的毛绒生产性能,为天祝白牦牛的遗传育种和毛绒产品开发提供条件。[方法]检测1～6岁不同性别的天祝白牦牛的毛绒产量和产绒率,计算其产绒量,并对这些毛绒生产性能评价指标进行统计分析。[结果]天祝白牦牛1～2岁时毛绒产量低,被毛含绒率和产绒量较高;3～6岁时毛绒产量、被毛含绒率、产绒量均较高;7岁以后毛绒产量、被毛含绒率和产绒量均明显降低。公牦牛的毛绒产量显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于母牦牛;5～7岁母牦牛的被毛含绒率极显著(P<0.01)高于同龄公牦牛。[结论]1～2岁的天祝白牦牛绒用性能最好;3～6岁是生产毛绒的主要阶段;7岁后的天祝白牦牛不适于用于毛绒生产。

天祝白牦牛胚胎成纤维细胞分离培养与鉴定

为了研究牦牛胚胎成纤维细胞分离培养及鉴定方法,试验采取60日龄白牦牛胚胎,用组织块法分离纯化、传代培养,用免疫组织化学方法进行鉴定。结果表明:用组织块培养的成纤维细胞呈梭形,属典型成纤维细胞,免疫组织化学染色有95%以上细胞中间丝波形蛋白呈棕色着染(阳性)。说明所培养的细胞为比较纯净的成纤维细胞。

天祝白牦牛犊牛腹泻的发病规律调查

为了精准防控天祝白牦牛腹泻疾病的发生,笔者采取问卷调查、现场调查及临床症状检查等方法对甘肃省天祝县松山镇、西大滩镇、华藏寺镇、打柴沟镇、抓喜秀龙镇、安远镇、朵什镇和毛藏乡等8个乡镇天祝白牦牛腹泻的发病情况进行了调查研究。结果表明,天祝白牦牛腹泻发病率达3.8%(99/2649),以西大滩镇牦牛腹泻率最高(5.5%),华藏寺镇和毛藏乡牦牛腹泻率最低(2.9%)。因腹泻引起的犊牛死亡率达1.3%。春秋两季(3、4、10月)是天祝白牦牛腹泻发生的高峰期,尤其在春季发病率高达7.3%。随着年龄的增长,天祝白牦牛的腹泻发病率呈降低趋势,2周龄以内的犊牛腹泻发病率最高,达10.5%。

天祝白牦牛GDF-10基因CDS区的多态性及生物信息学分析

采用DNA混合池测序法检测天祝白牦牛生长分化因子-10(Growth differentiation factor 10,GDF-10)基因编码区的多态性,应用生物信息学方法分析天祝白牦牛生长分化因子-10编码蛋白质特性。结果表明,天祝白牦牛生长分化因子-10基因编码区序列存在8个突变位点,其中90C→G、124C→G、1005G→A和1232G→C为错义突变,导致了编码氨基酸的改变,132T→C、822A→G、873G→T和888T→C为同义突变;天祝白牦牛生长分化因子-10编码蛋白质的氨基酸序列没有明显的疏水性区域和跨膜螺旋区;其存在信号肽,说明可能在细胞质中发挥生物学作用;天祝白牦牛生长分化因子-10编码产物二级结构是以α-螺旋和β-折叠为主;氨基酸序列与普通牛的同源性为99.4%,与人、小鼠、大鼠4个物种间同源性较高。