用套式PCR法检测犬冠状病毒的研究

根据 Gen Bank中 Wesseling发表的犬冠状病毒 K378株纤突蛋白基因序列 ,设计合成了能扩增 372 bp基因片段的套式引物。用异硫氰酸胍—酚—仿一步抽取法提取细胞总 RNA进行反转录 ,再以此产物进行套式 PCR扩增 ,并筛选出最佳套式 PCR扩增条件。结果经套式 PCR扩增能得到与设计大小相同的产物 ,并且不扩增犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬 型腺病毒、狂犬病病毒的核酸。敏感性试验表明 ,此法能扩增出犬冠状病毒强毒细胞培养物 (毒价为 1 0 -4.2 TCID5 0 / 0 .1 ml) 1 0 -6稀释的反转录产物 ,远高于常规 RT PCR。经初步应用表明 。

液体培养法与套式PCR法检测解脲脲原体比较研究

目的 :评价解脲脲原体 (Ureaplasmaurealyticum ,Uu )液体培养技术的准确性。方法 :应用被认为是目前检测临床标本中支原体最为灵敏、特异的套式PCR技术 ,并辅以DNA全自动测序技术 ,对 15 4例男性STD者的尿道拭子和 83例女性STD者的阴道拭子配对进行Uu液体培养法和套式PCR法检测。并以套式PCR检测为参照系进行统计分析。结果 :一 ,男性STD者Uu液体培养准确率为 63.0 % ,假阴性和假阳性率分别为 2 8.5 7%和 8.44 % ;二、女性STD者Uu液体培养准确率仅为 38.5 5 % ,假阴性和假阳性率分别 49.40 %和 12 .0 5 %。三、男、女性STD者合并观察Uu液体培养准确率为 5 4.43% ,假阴性和假阳性率分别为 35 .86 %和 9.7%。四、Uu套式PCR产物经DNA全自动测序与Uu标准株 (960 T)完全一致。结论 :Uu液体培养法不宜作临床诊断 ,尤其是女性患者。Uu套式PCR因灵敏、特异、准确是一种可靠的Uu感染诊断技术。

比较PCR酶免法与套式PCR法在不孕症中沙眼衣原体的临床检测

目的 比较PCR酶免法 (PCR -ELISA)与套式PCR法 (nPCR)法检测沙眼衣原体 (CT)在不孕症宫颈分泌物中的临床意义。方法 应用PCR -ELISA法对 185份宫颈分泌物进行CT检测 ,nPCR法对 112份宫颈分泌物进行CT检测 ,两种方法同时对 38份宫颈分泌物进行检测 ,两种方法的检测结果进行对比分析。结果 PCR -ELISA法 ,CT阳性率为 36 .2 2 % ,(6 7/ 185 )。nPCR法检测法CT阳性率为 19.6 4 % (2 2 / 112 )两种方法同时检测的CT阳性率分别为 34.2 1%及 13.16 %。PCR -ELISA与nPCR法比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 PCR -ELISA法检测CT比nPCR法更敏感 ,特异 ,简单 ,并且没有EB污染等优点 ,结合临床治疗结果分析更适用于对长期慢性CT感染不孕症的诊断。

套式PCR检测细菌16SrRNA基因

目的 应用套式PCR建立快速检查方法来检测血液中是否含有细菌。方法 采用细菌 1 6SrRNA基因通用引物 ,通过套式PCR方法对细菌进行扩增 ,并对其灵敏度、特异性作一评价。结果 临床常见细菌扩增反应为阳性 ,其他病原微生物及人类基因组DNA为阴性。结论 本法具有敏感、快速、特异、准确的优点 。

用套式PCR检测牛疱疹病毒1和5型

美国研究人员研制了一种敏感的套式PCR法,可以同时检测和区分牛疱疹病毒1和5型(BHV—1和BHV—5)。本法用源于gC顺序的型通用引物扩增后,用型特异的套式引物扩增产生与相应型特异的不同大小的带和印迹杂交证实病毒型。本法可以常规检出每种病毒不足0.

PCR法检测WSSV出现假阳性和非特异性条带的原因分析及解决方法

套式PCR法检测白斑综合征病毒(WSSV)因操作简便、灵敏度高等优点而被县级实验室广泛应用。但基层实验室由于缺少专职实验操作员、管理较为松散等原因,经常出现假阳性和非特异性条带问题。

两种检测传染性造血器官坏死病(IHNV)方法的比较

传染性造血器官坏死病(IHNV)是一种危害极其严重的鱼类疾病。本实验用一步RT-PCR法和套式PCR法对IHNV的基因进行扩增,通过扩增片段的琼脂糖电泳分析,来判定病鱼是否携带IHNV。实验结果表明,通过一步法RT-PCR可扩增出IHNV的693bp片段;通过套式PCR法可扩增出IHNV的786bp片段和323bp片段。两种方法均能够检测待测样品中含有IHNV。比较发现一步RT-PCR法比套式PCR法更加快速、简便、敏感,减少了被污染机会。

乙型肝炎病毒通过口腔印模污染医院环境的调查分析

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)通过口腔印模污染医院环境的可能性.方法检测印模和血液标本的HBsAg,HBeAg和HBV DNA,以确定HBV污染的程度和传染性强度.结果206份印模标本中8份(3.9%)有肉眼血液,185份(89.8%)潜血试验阳性,19份(9.2%)HBsAg阳性;在HB-sAg阳性标本中4份(21.1%)HBeAg阳性,15份(78.9%)HBV DNA阳性;31份HBsAg和HBeAg双阳性血液标本中HBV DNA均为阳性,HBV传染性范围为102～109感染剂量/ml.结论口腔印模受到严重的HBV污染,这种污染可作为乙型肝炎病毒污染医院环境的来源.

TT病毒核酸的检测

据《中华医学检验杂志》1998年10月21卷第5期报道 自1997年国际上报道了一个新发现的与人类肝炎相关的DNA病毒—TT病毒以来,徐州医学院附属医院魏来等,以聚合酶链反应(PCR)方法检测了献血员和肝炎患者血清,以套式PCR法测定了TT病毒核酸;以双脱氧核苷酸链终止法对20例献血员(TX1)、