姜酚和百里香酚对白羽肉鸡小肠形态结构和屏障功能的影响

[目的]本试验旨在研究日粮添加姜酚、百里香酚及其组合对白羽肉鸡小肠形态、免疫功能及肠道屏障的影响。[方法]将200只1日龄AA白羽肉鸡随机分为4组,每组5个重复,每个重复10只,试验期为42 d。4个处理组如下:对照组(Con组,基础日粮)、姜酚组(Gin组,基础日粮+60 mg·kg^(-1)姜酚)、百里香酚组(Thy组,基础日粮+30 mg·kg^(-1)百里香酚)及姜百组(Gin+Thy组,基础日粮+30 mg·kg^(-1)姜酚+15 mg·kg^(-1)百里香酚)。在试验期第42天,采集肉鸡的空肠和回肠制作切片并观察,取空肠和回肠黏膜以测定免疫球蛋白含量、细胞因子含量、抗氧化酶活性、紧密连接和抗氧化相关基因表达。[结果]与对照组相比,姜百组肉鸡回肠绒毛高度(VH)有增加的趋势(P=0.063),绒毛高度/隐窝深度(V/C)值显著提高(P<0.05);姜百组肉鸡空肠和回肠黏膜中分泌性免疫球蛋白A(sIgA)含量显著提高(P<0.05),空肠黏膜中白介素6(IL-6)和干扰素γ(IFN-γ)含量以及回肠黏膜中IL-6和白介素1β(IL-1β)含量显著降低(P<0.05);姜百组肉鸡空肠和回肠黏膜中总抗氧化能力(T-AOC)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著升高(P<0.05);姜百组肉鸡空肠黏膜中核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX4)和回肠黏膜中Nrf2、超氧化物歧化酶1(SOD1)、GPX4的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05),空肠和回肠黏膜中的Occludin mRNA相对表达量显著增加(P<0.05)。[结论]日粮添加姜酚和百里香酚组合可以提高肉鸡的抗氧化能力和免疫功能,并通过改善肠道形态和肠道屏障促进肠道健康。

HPLC法测定母姜与子姜中的6-姜酚,8-姜酚和10-姜酚

利用高效液相色谱(HPLC)法测定母姜与子姜中6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚的含量。采用Inertsil ODS-SP色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分析,二元线性梯度洗脱,紫外检测器在280 nm波长下检测。结果表明本实验样品母姜中6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚含量分别是子姜的2倍、1.5倍和2倍。

6-姜酚肟裂解规律的质谱研究

用干姜提取的姜酚合成了6-姜酚肟,采用气质联用仪测定了所获结晶姜酚肟的色谱与质谱行为,并根据6-姜酚肟的电离质谱图分析了其开裂过程.分析结果表明6-姜酚肟没有C4与C5间的热解脱水反应,肟基具有α-开裂、麦氏重排等开裂特点,反式6-姜酚肟具有数量多、峰强度高的奇数碎片离子峰.这些结果表明,所获得的结晶为6-姜酚肟的差向异构体的混合物,6-姜酚肟比反应物6-姜酚更为稳定.

脉冲电场强化生姜姜酚提取及工艺优化

脉冲电场(PEF)作为一种新型的物理场非热加工技术,其在流体食品的杀菌、灭酶等方面已开展大量的应用研究。近年来,基于PEF“电穿孔”对细胞优越的破壁效果,其在细胞的穿孔、强化胞内功能性成分的提取已逐渐成为研究热点。该文以生姜为对象,首先对比了不同提取工艺[传统溶剂浸提法(TET)、超声辅助提取法(UET)、索氏提取法(SET)、脉冲电场辅助提取法(PEF)]对生姜姜酚提取量的影响,然后利用响应面法优化了PEF强化生姜姜酚的提取参数。结果表明,与TET、UET、SET相比,PEF处理对生姜姜酚提取量最高,达13.36mg/g·DW。进一步通过单因素和响应面试验设计,获得的最佳工艺参数为电场强度:2.0kV/cm,脉冲次数:22个,脉冲宽度:19μs。此优化条件下,姜酚提取量为14.69 mg/g·DW,比传统溶剂浸提法的9.81 mg/g·DW,提高了49.75%。该研究表明PEF在强化生姜姜酚提取优于其它提取工艺,且具有良好的应用前景。

基于分子对接技术验证6-姜酚通过USP49抑制软骨退行性改变

目的了解6-姜酚对骨关节炎软骨细胞凋亡及软骨降解的影响及其具体机制。方法筛选出可显著上调USP49表达的中药活性成分(6-姜酚)并进行分子对接。随后,使用不同浓度的6-姜酚处理白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞,检测软骨细胞凋亡与泛素特异性蛋白酶49(ubiquitin specific proteases 49,USP49)、β-catenin及软骨降解相关蛋白[基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)]的表达。结果经过筛选,发现6-姜酚可显著促进USP49表达,分子对接显示6-姜酚与USP49可高效结合。不同浓度的6-姜酚处理IL-1β诱导的软骨细胞后,可显著上调USP49表达,抑制细胞凋亡及β-catenin、MMP-1与MMP-13表达。结论6-姜酚通过上调USP49表达调控Wnt/β-catenin信号转导通路,抑制软骨细胞凋亡及软骨降解相关蛋白MMP-1,MMP-13的表达,进而缓解IL-1β诱导的软骨退行性改变。

关于统一生姜中姜酚及姜烯酚等成分中文名称的建议

生姜主要含有挥发性和非挥发性两大类成分,其中非挥发性的姜辣素是生姜中辛辣物质的总称,主要含有姜酚(gingerols)、姜烯酚(shogaols)等成分,药理作用非常广泛。通过查阅2020年版《中华人民共和国药典》以及中国知网、万方数据知识服务平台等中文数据库中的相关文献,发现姜酚和姜烯酚的中文名称使用混乱,给研究者造成一定困扰,也给学术交流造成一定障碍。根据中药提取物的命名原则,建议将gingerols、6-gingerol、8-gingerol和10-gingerol分别统一命名为姜酚类、6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚,将shogaols、6-shogaol统一命名为姜烯酚类和6-姜烯酚。规范使用姜酚和姜烯酚的中文名称有助于对生姜、干姜、炮姜等姜类中药的深入研究和学术交流。

生姜中姜酚的提取工艺及其生物活性研究

姜酚是生姜中的化合物,具有抗炎、抗氧化、抑制微生物和缓解消化不良等多种生物活性功效。传统提取姜酚的方法通常采用乙醚或者乙酸乙酯等有机溶剂,提取后会有有机溶剂残留在姜酚中,并对姜酚的纯度和质量造成影响。该研究基于此,采用传统溶剂提取法、索氏提取法、超声辅助提取法和脉冲电场辅助法4种提取工艺对姜酚提取量的影响进行研究;再研究加工工艺在不同条件下对生姜中姜酚提取量的影响。研究结果表明,采用脉冲电场辅助法提取生姜中的姜酚时提取量最高、所需时间最短、提取温度最低,是一种绿色和低成本的技术;此外,利用脉冲电场辅助法提取生姜中姜酚的最佳加工工艺为乙醇浓度80%、脉冲宽度20μs、脉冲次数20次和电场强度2.0 kV/cm。

6-姜酚基于PKB/KIF14信号通路对大鼠口腔黏膜愈合的作用

目的探讨生姜提取物6-姜酚对实验性口腔溃疡大鼠黏膜愈合的促进作用,及其对蛋白激酶B(PKB)/驱动蛋白家族成员14(KIF14)信号通路的调节作用。方法将50只大鼠随机分为正常组、模型组、6-姜酚组、信号通路抑制剂(LY294002)组和LY294002联合6-姜酚组,每组10只,除正常组外,其余组大鼠用冰醋酸烧灼法建立口腔溃疡模型,6-姜酚组大鼠尾静脉注射6-姜酚6 mg·kg^(−1),LY294002组大鼠尾静脉注射LY2940020.3 mg·kg^(−1),LY294002联合6-姜酚组大鼠尾静脉注射LY2940020.3 mg·kg^(−1),30 min后,尾静脉注射6-姜酚6 mg·kg^(−1);每日1次,连续7 d。计算溃疡面积,HE染色观察病理学变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)水平,实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)水平,蛋白印迹法(Western blotting)检测磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)、PKB和KIF14蛋白的相对表达量。结果模型组大量炎性细胞浸润,黏膜上皮细胞坏死脱落,无新生成纤维细胞;6-姜酚组黏膜上皮覆盖,溃疡趋于愈合;LY294002组大量炎性细胞浸润,上皮结构被破坏,黏膜上皮细胞脱落坏死;LY294002联合6-姜酚组炎性细胞浸润减少,病变较6-姜酚组减轻。与模型组比较,6-姜酚组大鼠溃疡面积减小,IL-6、TNF-α、IL-1β水平及MMP-2、MMP-9 mRNA的相对表达量降低,p-PI3K、p-PKB以及KIF14的相对表达量升高;LY294002组溃疡面积增加,IL-6、TNF-α、IL-1β水平以及MMP-2、MMP-9 mRNA的相对表达量升高,p-PI3K、p-PKB及KIF14的相对表达量降低(P<0.05);与LY294002联合6-姜酚组比较,6-姜酚组大鼠溃疡面积减小,IL-6、TNF-α、IL-1β水平及MMP-2、MMP-9 mRNA的相对表达量降低,p-PI3K、p-PKB及KIF14的相对表达量升高;LY294002组溃疡面积增加,IL-6、TNF-α、IL-1β水平及MMP-2、MMP-9 mRNA相对表达量升高,p-PI3K、p-PKB及KIF14的相对表达量降低(P<0.05)。结论生姜提取物6-姜酚可促进口腔溃疡大鼠创面愈合,其可能是通过激活蛋白激酶B/驱动蛋白家族成员14信号通路发挥作用的。

响应面法优化上蔡小黄姜中6-姜酚的超声提取工艺

为了优化上蔡小黄姜中6-姜酚的超声提取工艺,提高6-姜酚的提取率,对影响6-姜酚提取率的提取溶剂、液料比、浸提温度、提取时间、超声功率、溶剂浓度等6个因素进行单因素试验;在单因素试验的基础上,进一步选取液料比、溶剂浓度、提取时间为影响因子,应用Box-Behnken中心组合设计建立数学模型,以6-姜酚的提取率为响应值,进行响应面分析。结果表明,超声波法提取上蔡小黄姜中6-姜酚的最优条件为:以乙醇为提取溶剂,提取时间24.12 min,液料比15.98∶1(mL∶g)和乙醇浓度62.97%。模型预测上蔡小黄姜6-姜酚提取率理论值可达到0.621%,验证值为0.619%,理论值与验证值相对误差为0.3%。本试验通过响应面法对上蔡小黄姜中6-姜酚进行提取工艺优化,可有效提升6-姜酚提取效率,为后期的开发应用提供参考依据。

姜酚和姜酚肟对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究生姜活性成分姜酚及其衍生物姜酚肟对慢性粒细胞系K562细胞的增殖活性、细胞周期及凋亡的影响。方法:采用CCK-8法检测姜酚和姜酚肟对K562细胞增殖活性的影响,PI单染检测其对K562细胞周期的影响,Annexin V-PI双染检测早期细胞凋亡,Hochest 33258染色观察细胞形态学的变化。结果:(1)姜酚作用于K562细胞48、72 h后,显著抑制K562细胞增殖,48 h的IC50值为15.75μg/mL,且具有时间及剂量依赖性。姜酚肟的抑制作用亦有时间及剂量依赖性,但较姜酚抑制作用弱。(2)姜酚15μg/mL组细胞周期阻滞于S期,姜酚肟作用组细胞周期与对照组比较无明显差异(P>0.05)。(3)姜酚和姜酚肟作用48 h后出现早期凋亡群,姜酚各浓度组间的早期凋亡率差异显著(P>0.05),随着药物浓度的增加凋亡率升高。(4)荧光显微间观察出现少量的细胞胞核固缩,核边集,出现凋亡小体。结论:姜酚和姜酚肟对K562细胞有显著的抑制作用,姜酚较姜酚肟抑制作用强,姜酚的抑制机制可能与影响细胞周期及诱导细胞凋亡有关,姜酚肟的抑制机制可能与诱导细胞凋亡有关。

以6-姜酚肟为内标测定生姜及其制品中6-姜酚的含量

建立了一种以6-姜酚肟代替6-姜酚为标样,采用高效液相色谱法,精确测定生姜及其制品中6-姜酚的方法。采用的色谱柱为Diamonsil C_(18)柱,流动相为乙腈-水系统梯度洗脱,流速1mL/min,检测波长280nm。结果表明:6-姜酚在10.55～2700βg/mL、6-姜酚肟在10.43～2670μg/mL时峰面积与浓度呈良好的线性关系,相关系数分别为0.9983和0.9998。6-姜酚的检测限为2.12μg/mL,6-姜酚肟的检测限为2.09μg/mL。6-姜酚对6-姜酚肟的相对校正因子为1.285,相对保留时间为1.728。6-姜酚肟的加标回收率为96.3%～102.2%,相对标准偏差<2.4%。用内标法和外标法测得的结果无显著差异,测得鲜姜、干姜和姜酒中6-姜酚含量分别为1.86、3.04、0.115 mg/g。用6-姜酚肟做内标测定6-姜酚的方法准确可靠,可用于生姜及其制品中6-姜酚的测定。

姜酚的提取分离及[6]-姜酚含量测定

目的提取分离姜酚并测定其中[6]-姜酚的含量。方法用干柱层析法,以乙醚-正己烷(7∶3)为展开剂,从姜二氧化碳超临界提取物中提取分离姜酚类物质,并采用高效液相色谱法测定其中[6]-姜酚的含量。结果用干柱层析法能有效地将姜酚与姜提取物中其他物质分离,制得的姜酚中[6]-姜酚的含量达52.87%(m/m)。HPLC法测定[6]-姜酚,[6]-姜酚在0.512～3.075μg范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为99.19%,RSD为1.58%。结论干柱层析法能快速、简便、高效地提取分离姜酚,所制得的姜酚中[6]-姜酚含量高,可较好地为姜酚的进一步研究提供试材。测定[6]-姜酚的HPLC方法简便可靠,重复性好,可用于控制姜酚的质量。

HPLC-UV法测定大鼠血中[6]-姜酚的浓度

目的建立测定大鼠血浆中[6]-姜酚浓度的HPLC-UV法,为进一步研究[6]-姜酚的药代动力学提供可靠的方法。方法大鼠血浆样品以液-液萃取法提取后,采用HPLC-UV测定大鼠血浆中[6]-姜酚的浓度。HPLC条件:Hypersil C18柱(250mm×4.6mm,5μm),乙腈-水(45:55)为流动相,进样量:20μL,流速:1.0mL/min,紫外检测波长:280nm。结果[6]-姜酚线性范围为0.25～5.0μg/mL,最低检测限为0.1μg/mL,日内精密度RSD<5.5%,日间精密度RSD<6.8%。结论该测定方法具有灵敏、专一和快速的优点,可用于测定大鼠灌胃给药后[6]-姜酚的血浆浓度。

高速逆流色谱结合硅胶柱色谱法分离制备干姜中的6-姜酚、8-姜酚、6-姜烯酚

通过实验建立了高速逆流色谱(HSCCC)结合硅胶柱色谱法分离制备干姜中6-姜酚、8-姜酚和6-姜烯酚的方法。干姜样品采用乙酸乙酯超声提取,提取物经过硅胶柱色谱粗分,选取其中A3和A4两个馏分进行高速逆流色谱分离,所得单一成分采用高效液相色谱(HPLC)检测纯度,并采用电喷雾质谱(ESI-MS)、核磁共振氢谱(1H NMR)对所得化合物的结构进行鉴定。研究结果表明,该方法简便快捷,所得产物纯度高、制备量大、分离效率好。

测定6-姜酚标样物质——6-姜酚肟的制取与鉴定

为了获得高纯度的6-姜酚肟,以姜油树脂为原料,通过溶剂萃取、肟化反应和硅胶柱真空层析,获得白色晶体,通过紫外光谱、红外光谱、核磁共振谱、质谱等测定所得白色晶体为6-姜酚肟,并证实了其存在顺反异构。

Lineweaver-Burk双倒数法研究姜酚对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的动力学抑制活性

用Lineweaver-Burk双倒数法研究姜酚对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的动力学抑制类型。结果表明,姜酚对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶均有明显的抑制效果,抑制类型分别为竞争型抑制和混合型抑制,其抑制常数K_(ic1)、K_(ic2)分别为3.88和2.67。与α-淀粉酶相比,姜酚与α-葡萄糖苷酶结合的亲和力更好。

10-姜酚的质谱分析

通过层析方法获得了１０－姜酚，并根据１０－姜酚的ＥＩ质谱图（ＭＳ）分析了其开裂过程。

HPLC内标法同时测定十三香中胡椒碱和6-姜酚的含量

目的:建立快速、准确并同时测定十三香中姜酚和胡椒碱含量的方法。方法:采用HPLC法,色谱柱为Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水梯度洗脱,流速1mL/min,检测波长280nm。结果:内标法与标准曲线法的测定结果一致;胡椒碱在5～160μg/mL、姜酚和姜酚肟在20～640μg/mL时,峰面积与浓度呈良好线性关系;相关系数分别为0.9995、0.9997、0.9995。十三香中胡椒碱和姜酚的含量分别为:20.23、4.33mg/g。结论:用姜酚肟做内标测定产品中姜酚和胡椒碱的方法既不用重复做标准曲线,又可同时测定两种成分的含量。

干姜中3种姜酚类成分提取工艺研究

目的:建立干姜中姜酚的提取工艺。方法:采用超声辅助提取法考察乙醇浓度、提取时间、料液比3个因素对6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚总提取率的影响,并利用响应面法优选姜酚最佳提取工艺。结果:优化后最佳提取条件设定为乙醇浓度为61%,提取时间为41 min,料液比为1∶34(g/mL)。结论:本方法简便,具备可行性,可用于干姜中姜酚提取物的提取、分离及纯化。

生姜中姜酚类活性成分的抗肿瘤作用及其机制

目的从生姜中提取、分离和鉴定姜酚类物质,初步研究其抗肿瘤作用的分子机制。方法采用CO_2超临界流体对生姜原料进行提取,通过硅胶、RP-C_(18)、Sephadex LH-20和HPLC等色谱方法进行分离和纯化,进而借助MS和NMR等光谱方法鉴定化合物结构,然后采用MTT法检测化合物对不同肿瘤细胞活性的抑制作用,采用流式细胞术及Western blot检测其抑制肿瘤细胞活性的变化。结果从生姜中提取分离得到5个姜酚类化合物,分别为4,6,8,10-姜酚和5'-羟基-6-姜酚。其中8-姜酚和10-姜酚对多种肿瘤细胞的活性均有较好的抑制作用,尤以10-姜酚作用最强,给药72 h后其对乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞的IC_(50)分别为(25.80±1.39)、(35.29±2.70)μmol/L。流式细胞术检测发现8-姜酚和10-姜酚可导致乳腺癌细胞的G_1期阻滞,其中10-姜酚作用于MDA-MB-231和MCF-7细胞24 h后G_1期细胞的百分比分别为(66.73±2.93)%、(66.59±2.49)%,相对于对照组的(47.39±1.97)%和(49.17±3.52)%,差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot检测结果显示,8-姜酚和10-姜酚可下调MDA-MB-231和MCF-7细胞中G_1期相关蛋白Cyclin D1和CDK4的表达;并可降低MAPK信号通路中ERK的磷酸化水平,增强P38的磷酸化水平。结论从生姜中提取出的8-姜酚和10-姜酚具有明显的抑制肿瘤细胞活性的作用,其机制可能与其影响MAPK通路中ERK、P38磷酸化水平,导致细胞G_1期阻滞有关。