非繁殖季节中国美利奴羊血清E_2、P4、FSH、LH激素变化规律研究

为了在非繁殖季节判断绵羊的发情状况,试验以新疆高海拔地区中国美利奴羊为研究对象,采用酶联免疫测定(ELISA)法测定绵羊血清中雌二醇(E2)、孕酮(P4)、促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)的含量,研究激素诱导发情羊、发情症状不明显羊、不发情羊体内激素分泌规律的差异。结果表明:激素诱导发情羊的E2含量比不发情羊高,差异显著(P<0.05);但是在P4、FSH、LH水平上,激素诱导发情羊要低于不发情羊,差异不显著(P>0.05)。发情羊与发情不明显羊在4种激素含量上差异不显著(P>0.05),说明公羊试情存在一定缺陷,而通过测定E2含量判定绵羊发情状态将成为未来研究的重点。

巴美肉羊发情期外周血E_2和P_4浓度变化规律与排卵数关系研究

绵羊在发情周期中各生殖激素浓度变化与卵泡发育、成熟和排卵有着密切的关系。为了研究巴美肉羊血清生殖激素的动态变化及其与排卵数关系,试验采用电化学法,测定了12只成年母羊发情期血清中2种类固醇激素(E2和P4)的浓度水平,分析其动态变化规律,并用SAS 9.0的方差分析程序分析激素浓度与排卵数的关系。结果表明,两种激素在排单卵组和排双卵组绵羊间变化规律不同,E2在排单卵组表现为先下降后升高的变化趋势,在排双卵组表现为持续下降趋势;P4在排单卵组表现为持续上升的趋势,在排双卵组为先上升后下降的变化趋势。排单卵和排双卵组绵羊在各时间点的E2和P4激素浓度差异均不显著(P>0.05)。

定时人工授精后通过不同方法增加P4浓度对奶牛妊娠率的影响

为提高奶牛繁殖力,在定时人工授精后早期采用不同处理方法增加P4浓度以期提高奶牛妊娠率。本研究随机选择285头定时人工授精后的健康荷斯坦牛,分为5组,分别为:定时人工授精后4~9d采用P4阴道栓(CIDR)处理组(CIDR P4D组)、定时人工授精后13~18d采用CIDR处理组(CIDR P13D组)、定时人工授精后5d一次肌注20mg P4组(P4 P20组)、定时人工授精后5d一次肌注40mg P4组(P4 P40组)以及对照组。使用B超于定时人工授精后32d进行妊娠检测,统计妊娠率、返情率和未妊娠率,用SAS对各数据之间差异显著性采用卡方检验。结果显示,CIDR P4D组妊娠率和返情率显著高于对照组(P<0.05),其中妊娠率高了22.80%,未妊娠率显著低于对照组(P<0.05);CIDR P4D组、P4 P20组和P4 P40组与对照组相比返情率差异显著(P<0.05)。综上表明:定时人工授精后第4天采用CIDR处理能显著提高奶牛妊娠率。定时人工授精后第4天采用CIDR处理和第5天注射不同剂量P4有利于提高奶牛返情率。

黄体酮在防治德州驴妊娠早期流产症状中应用效果的观察

为了观察黄体酮注射液在防治德州驴妊娠早期流产症状中的效果,试验选取妊娠1545 d（孕检到定胎）有多次流产记录的母驴20头,进行人工授精直至怀孕,随机选取10头作为试验组,从妊娠15天开始,每2 d进行肌肉注射黄体酮2 mL直至妊娠45天,另外10头作为对照组不做处理,观察定胎时怀孕率,并对20头试验驴从妊娠15天开始,每7 d进行1次颈静脉采血,并用放射免疫法测定血液中孕酮（P4）、雌二醇（E2）浓度,并对其浓度和E2/P4值进行相关性分析。结果表明:试验组妊娠驴定胎时怀孕率为80%,高于对照组（60%）,试验组妊娠驴P4水平、E2水平和E2/P4值均高于对照组,其中P4水平差异不显著（P>0.05）,E2水平与E2/P4值在妊娠15天时差异显著（P<0.05）,其他时间差异不显著（P>0.05）。根据定胎时怀孕率和相关性分析,黄体酮注射液对防治德州驴妊娠早期流产症状有一定效果。

延长光照与饲喂外源孕酮对母貂繁殖性能的影响

为了研究延长光照、饲喂外源孕酮（P4）以及二者共同作用对母貂繁殖性能的影响,为缩短母貂胚胎滞育期方法的研究提供理论基础和技术参考,试验采用测定母貂繁殖性能（妊娠期、胎平均产仔数、仔貂3日龄成活率及群平均育成数）的方法,选取2周岁龄健康母貂240只,随机均分为4组,即延长光照组（A）、饲喂外源P4组（B）、延长光照同时饲喂外源P4组（C）和对照组（D）进行试验。结果表明：C组母貂产仔日期最为集中且提前（4月20日—27日）、妊娠期最短（47.60 d）,较A、B、D三组分别缩短3.65 d（P〈0.01）、2.00 d（P〈0.05）和4.06 d（P〈0.01）,其次为B组,较A、D组分别缩短1.65 d（P〈0.05）和2.06 d（P〈0.05）;A、B、C三组的胎平均产仔数和群平均育成数分别在5.6~6.1只和5.5~5.7只范围内,均显著高于D组（P〈0.05）,3组间差异均不显著（P〉0.05）;各组间仔貂3日龄成活率差异不显著（P〉0.05）,但以C组最高（98.10%）。可见在本试验条件下,延长光照与饲喂外源P4对母貂繁殖性能的影响是积极的,但以延长光照同时饲喂外源P4组效果最好。

孕酮处理树突状细胞诱导同种移植免疫耐受的研究

目的:探讨孕酮(P4)处理的树突状细胞(dendritic cell,DC)在诱导同种异基因移植免疫耐受中的作用。方法:实验小鼠分为4组,每组动物供体为C57BL/6雄性小鼠8只,受体为BALB/c雄性小鼠8只。体外培养供体小鼠骨髓来源DC,然后用P4处理。受体小鼠在皮肤移植前经尾静脉分别输注体外培养且经P4处理的供体小鼠DC、供体小鼠成熟DC以及不成熟DC,输注磷酸盐缓冲液为对照组。1周后受体小鼠进行同种异基因皮肤移植,手术后观察皮肤存活情况,应用流式细胞术检测手术前后受体小鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+T)百分率的变化。结果:在同种异基因皮肤移植中,受体小鼠尾静脉输注经P4处理的DC组分别与成熟DC组、不成熟DC组和对照组比较,移植皮肤存活时间显著延长(P<0.01);与成熟DC组、不成熟DC组和对照组比较,P4处理组外周血中CD4+CD25+T百分率显著升高(P<0.01)。结论:P4处理的DC可以延长同种异基因移植物存活时间。

甾体激素对绒毛外滋养细胞表达HLA-G蛋白的影响

目的:探讨甾体激素(E_2、P_4)对绒毛外滋养细胞表达HLA-G的影响。方法:将分离培养的绒毛外滋养细胞(EVT)分成E_2组、孕酮(P_4)组、E_2+P_4组和空白对照组,分别向各组EVT培养液中加入不同浓度的17β-雌二醇、孕酮及17β-雌二醇+孕酮,空白对照组则不加任何激素,48h后,流式细胞仪检测各组HLA-G蛋白的表达。结果:①单独使用E_2或P_4均能上调EVT表达HLA- G蛋白,上调作用与其浓度关系密切,与对照组相比,差异有显著性(P＜0．01);②联合应用E_2+P_4亦上调EVT表达HLA-G蛋白,1000 nmol/L的E_2+P_4组HLA-G蛋白的表达,明显高于低浓度组(1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L),差异有显著性(P＜0．01);③低浓度的E_2+P_4组(1nmol/L)HLA- G蛋白的表达高于同浓度的P_4组(P＜0．05),而低于同浓度的E_2组(P＜0．001);1000nmol/L,E_2+P_4组HLA-G表达显著高于单纯的E_2、P_4组(P＜0．01)。结论:①低浓度的E_2、P_4对HLA-G调节呈拮抗作用,高浓度E_2和P_4则以协同作用调节HLA-G的表达;②HLA-G可能参与了卵巢甾体激素调节胚胎植入进程。

Tgfβ信号通路介导孕酮注射导致的初生仔鼠子宫腺体缺失

为探索小鼠子宫内膜上皮细胞中的Tgfβ信号通路是否能够介导孕酮(P4)注射导致的新生仔鼠子宫腺体缺失,本研究检测了P4处理的仔鼠子宫上皮细胞中Tgfβ信号通路受体基因Tgfbr1、Tgfbr2、Tgfbr3及靶基因的mRNA表达水平。结果显示,P4处理的仔鼠子宫内膜上皮细胞中Tgfbr2和Tgfbr3及靶基因Ctgf和Mmp9的表达水平明显上升,说明Tgfβ信号通路在仔鼠子宫上皮中被P4激活。此外,在注射P4的同时给仔鼠注射Tgfβ受体抑制剂,结果发现该抑制剂可以部分挽救因P4注射导致的小鼠子宫腺体缺失。这些结果说明Tgfβ信号通路部分介导了P4注射导致的初生仔鼠子宫腺体缺失。

雌、孕激素对人早孕蜕膜基质细胞中B淋巴细胞激活因子受体(BAFFR)表达的影响

目的:初步探讨B淋巴细胞激活因子受体(Bcells-activating factor receptor,BAFFR)在胚胎植入调控中的作用。方法:选取正常早孕妇女人工流产蜕膜组织,分离、提纯早孕蜕膜基质细胞(decidual stromal cells,DSC),培养于含10%去激素胎牛血清培养基内,分为雌二醇(E2)组、孕酮(P4)组、E2+P4组和空白对照(C)组,培养96h。MTT检测细胞的增殖能力;Real-time PCR检测BAFFR mRNA;流式细胞仪检测BAFFR蛋白表达。结果:与C组比较,各实验组DSC增殖能力及BAFFR mRNA水平均无明显变化(P>0.05);BAFFR蛋白定位于DSC胞内,且E2+P4可显著上调其表达(P<0.05)。结论:正常人早孕DSC表达高水平的BAFFR,雌、孕激素联合对其有显著的上调作用,提示BAFFR可能参与胚胎植入的调控及早孕期母-胎界面的免疫调节。