多维液相色谱 bottom-up top-down 阵列式 完整蛋白质 蛋白质分离

蛋白质组学出现之后,多维高效液相色谱（multidimensional HPLC,MD-HPLC）系统以其快速、高效、自动化程度高以及容易与质谱等其他技术联用等优势而成为蛋白质组学相关分析技术中研究应用的热点。本文主要以本实验室在蛋白质组学研究中的技术进展为主线,介绍了多维高效液相色谱技术的发展,包括经典的“bottom-up”技术和“top-down”式的多维高效液相色谱技术路线,以及为了提高系统的分离通量而自行设计搭建的阵列式多维高效液相色谱平台,这些技术路线在蛋白质组学研究中有着极大的潜在应用价值。

饲粮完整蛋白质比例对肉雏鸡整体、组织蛋白质周转代谢的影响

试验用４～１５日龄艾维茵母系公鸡分为３组，饲喂按理想氨基酸模式配制成含不同蛋清蛋白与游离氨基酸比例的饲粮（蛋清蛋白氨基酸占８８．６％、４４．３％、０％），研究饲粮完整蛋白质比例对肉雏鸡整体、组织蛋白质周转代谢的影响。结果表明：饲喂游离氨基酸饲粮的第３组鸡整体、胸肌蛋白质生长率（ＦＧＲ）显著（Ｐ＜０．０５）低于第１、２组；其中，蛋白质合成率（ＦＳＲ）以第２组最高，２、３组极显著高于（Ｐ＜０．０１）第１组；降解率（ＦＤＲ）第１组显著（Ｐ＜０．０５～０．０１）低于第２和第３组。整体和胸肌ＦＧＲ的提高，主要是由于蛋白质降解率的相对降低。肝脏蛋白质ＦＧＲ３组间差异不显著（Ｐ＞０．０５），依次为３组＞１组＞２组。血浆寡肽量与整体和组织蛋白质ＦＳＲ、ＦＤＲ、ＦＧＲ间存在显著（Ｐ＜０．０５）的相关关系。结果表明，饲粮完整蛋白质比例影响肉仔鸡血液循环中的某些寡肽和整体与组织的蛋白质周转代谢。

猪、禽日粮需要“完整蛋白质”

随着发酵技术的提高使得合成氨基酸成本逐年下降,饲养者有在猪、禽日粮中不断增加合成氨基酸添加量的倾向,以提高动物的生产力和降低饲料成本.然而最新研究成果显示,低蛋白日粮条件下大量补加合成氨基酸,使猪、禽生产率和饲料利用率明显下降.

小麦生理型和遗传型雄性不育系及其保持系小花完整叶绿体蛋白质组分比较研究

采用固相pH梯度SDS聚丙烯酰胺双向凝胶电泳技术,以小麦遗传型雄性不育系ms(S)-1376、杀雄剂SQ-1诱导的生理型雄性不育系ms(A)-1376,以及对应的保持系(A)-1376(杀雄剂诱导前的正常可育系)所构建的等基因和等生理差异系为试材,比较分析了2种分离纯化完整叶绿体的方法。在确立了一套适用的技术方法的基础上,研究了三者在花粉小孢子萌发单核早期小花完整叶绿体蛋白之间的差异。采用30%、45%和60%的不连续蔗糖密度梯度离心的方法能够获得完整且纯度较高的叶绿体,经TCA-丙酮提取蛋白质后,PDQuest软件分析,在分子量14.4～66.2kD,等电点4～7的线性范围内可分辨出2-DE图谱上239个较为清晰的蛋白质点,对其中的6个差异表达蛋白质点进行MALDI-TOF肽质量指纹图谱分析,从生物信息学数据库检索鉴定出6个差异蛋白质点分别是酰基辅酶A脱氢酶结构域蛋白、钙调结合蛋白磷酸酶、多催化功能肽酶、热休克蛋白60、光受体蛋白2及1个未知功能的表达蛋白质。这些蛋白质在供试小麦叶绿体物质能量代谢、叶绿体防卫抵御机制、叶绿体细胞内信号转导及植物极性生长等生理应答反应中起调控作用,它们能在本研究供试两不育系和对应可育系中差异表达,可能与雄性不育相关。