胶体金法与实时荧光定量PCR法检测甲乙型流感病毒的应用价值

目的 探讨胶体金法与实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测甲乙型流感病毒的应用价值。方法 选取2023年1月至2023年12月我中心进行检测的80例流感患者,均行胶体金法和PCR法检测,比较两种方法检查所用时间和检查结果。以综合检查结果为金标准,分析两种方法与金标准结果的一致性。结果 胶体金法检查所用时间(15.46±3.82)min短于PCR法(180.28±32.09)min,差异有统计学意义(P<0.05)。80例流感患者经综合检查发现甲型44例、乙型36例;胶体金法检出甲型42例、乙型31例,检出率为91.25%;PCR法检出甲型43例、乙型34例,检出率为96.25%。两种方法诊断效能对比,差异无统计学意义(P>0.05)。胶体金法、PCR法检查结果与金标准结果一致性均极好(Kappa=0.891、0.938,P<0.05)。结论 胶体金法、PCR法鉴别诊断甲、乙型流感病毒的准确度、灵敏度及特异度均较高,与临床综合检查结果一致性均较好,胶体金法检查所用时间更短,临床应用时可灵活选择检测方法,为临床鉴别诊断提供便利。

胶体硒法HIV快速检测与实时荧光定量PCR法检验的一致性研究

目的:探究胶体硒法人类免疫缺陷病毒(HIV)快速检测与实时荧光定量PCR法检验的一致性。方法:选取2020年1月—2021年1月到艾滋病自愿咨询检测(VCT)门诊就诊的987例患者为研究对象,均接受胶体硒法、实时荧光定量PCR法检验,以免疫印迹法为金标准,比较不同检测方式的诊断效能、不同检测方式之间检验的一致性,对比不同方式对“窗口期”弱阳性抗体检测情况及不同检测方式的一致性。结果:987例疑似HIV高感染风险患者中,经免疫印迹法检测发现,373例阳性,614例为阴性;胶体硒法与实时荧光定量PCR法比较无统计学差异(P>0.05)。胶体硒法诊断结果与免疫印迹法诊断结果之间具有一致性(Kappa值=0.539),等级为中度;实时荧光定量PCR法与免疫印迹法诊断结果之间具有一致性(Kappa值=0.872),等级为高度;经免疫印迹法检测45份“窗口期”弱阳性抗体实时荧光定量PCR法检测43例阳性,胶体硒法检测42例阳性,实时荧光定量PCR法的灵敏度、准确度均显著高于胶体硒法(P<0.05)。胶体硒法与实时荧光定量PCR法胶在“窗口期”弱阳性抗体诊断结果中的一致性较差(Kappa值=0.357)。结论:胶体硒法与实时荧光定量PCR法对HIV检测的效果具有一致性,实时荧光定量PCR法准确性略高;胶体硒法与实时荧光定量PCR法在“窗口期”弱阳性抗体诊断结果中的一致性较差,实时荧光定量PCR法在“窗口期”弱阳性抗体血清检测中具有较高的检测价值。

采用实时荧光定量PCR法检测大曲中的3种高温放线菌

建立实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)方法对大曲中3种高温放线菌(Thermoactinomyces vulgaris、T.intermedius和T.daqus)进行特异性定量检测。根据T.vulgaris、T.intermedius、T.daqus全基因组中特异性单拷贝核心基因recA、mdH、gyrA为参考序列分别设计了一对可扩增278、233、291 bp片段的引物;经特异性、有效性、准确性实验显示,在常见的13种白酒酿造微生物中,引物TV、TI、TD分别可特异性检测T.vulgaris、T.intermedius、T.daqus,检测范围为2.82~8.82 lg copies/μL,加标回收率95%~105%。进一步对大曲发酵过程样品检测,结果显示,T.vulgaris含量在呈现波动趋势,在第5天达到最高,为(6.06±0.02)lg copies/g;T.intermedius含量呈现先上升后下降的趋势,在第7天达到最高,为(6.33±0.13)lg copies/g;T.daqus含量在0~12 d呈现波动趋势,在12~14 d下降,随后一直上升,发酵结束时含量最高,为(7.62±0.02)lg copies/g。该研究建立的RT-qPCR方法可对大曲发酵过程中3种高温放线菌进行特异性鉴定和快速定量,为进一步监测高温放线菌在白酒酿造过程中的功能提供了方法。

TaqMan实时荧光定量PCR法检测对虾肝肠胞虫(EHP)步骤优化

优化虾肝肠胞虫(EHP)的TaqMan实时荧光定量PCR检测流程,目的是更准确、快速地检测出虾苗,饵料,亲虾体内携带的EHP。本研究采用酚/氯仿抽提法与水生动物病原体核酸提取试剂盒两种DNA提取方法,对等量的病原组织样本进行了对比提取。此外,还设置不同浓度的裂解液以探究其对病原组织裂解效果的影响,并设定不同裂解时间以优化裂解步骤。最后,通过调整qPCR反应的循环数,确定最佳的检测条件。结果显示,水生动物病原体试剂盒提取的DNA检出率高于酚/氯仿抽提法提取,裂解液浓度90%时检测出的EHP含量最高;裂解时间30 min时检测出的EHP含量较高;循环数在40次时足以检测出EHP。综上,优化后的检测流程为用水生动物病原体核酸提取试剂盒提取病原组织DNA,裂解液浓度90%,裂解时间30 min及qPCR检测条件的循环数控制在40次。

实时荧光定量PCR法检测HCV-RNA测量不确定度评价

目的探讨对实时荧光定量PCR法测HCV-RNA测量不确定度评定的合理方式。方法依据Nordtest准则,利用实时荧光定量PCR法检测HCV-RNA室内质控及室间质评标本,收集2012年4～9月的HCV-RNA室内质控数据及2010～2012年室间质评结果。计算其批内及批间变异系数、系统偏倚变异系数,确定其相应的标准不确定度分量,进而计算出其扩展不确定度。结果同一天内12次HCV-RNA室内质控的检测批内变异系数为2.55%,2012年4～9月共155个工作日的HCV-RNA检测批间变异系数为5.80%;2010～2012年卫生部临检中心室间质评共30个检测数据的系统偏倚变异系数为5.04%,剔除8个检测为零的数据后重新计算变异系数为5.97%。批内、批间及系统偏倚的因素合成后,扩展不确定度为16.18%,剔除8个检测为零的数据后为17.16%。结论对实时荧光定量PCR法测HCV-RNA测量不确定度的评价,利用现有室内外质控数据,无须额外测试,简单易行,是医学检验实验室较为实用的一种测量不确定度评价方式,但数据的纳入应考虑方法的特殊性。

改良多重实时荧光定量PCR法测定抑癌基因MGMT、p16、CDH13和RASSF1A甲基化在肺癌早期诊断中的作用

目的:建立改良多重实时荧光定量PCR法,检测抑癌基因MGMR、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化,探讨其在肺癌早期诊断中的应用。方法:选取30例病理确诊为肺癌的患者作为肺癌组,30例病理确诊为良性病变的患者作为对照组。建立改良实时荧光定量PCR体系。检测受试者血清MGMT、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化,对比两组基因甲基化阳性率,计算四项基因甲基化单独及联合用于肺癌早期诊断的敏感度和特异度。结果:肺癌组受试者血清MGMT、p16、CDH13和RASSF1A显著高于对照组(P<0.05);MGMT、p16、CDH13和RASSF1A四项基因甲基化联合检测用于肺癌早期诊断的敏感度和特异度显著高于单项指标检测(P<0.05)。结论:建立了多重实时荧光定量PCR法用于MGMT、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化检测,联合检测用于肺癌早期诊断具有较高的敏感度和特异度。

实时荧光定量PCR法在食源性致病菌检测中的应用效果

目的探讨实时荧光定量PCR法在食源性致病菌检测中的临床应用效果。方法选取2021年1月至2023年11月医院送检的300例食源性腹泻患者的粪便样本,以传统分离培养法为金标准,均采用实时荧光定量PCR技术检测所有样本的致病菌情况,比较阳性率,评价实时荧光定量PCR法的灵敏度和特异度。结果实时荧光定量PCR法对食源性腹泻患者粪便样本中沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌的检出率高于分离培养法(P<0.05),实时荧光定量PCR法检测沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌具有特异性,可达到10-8cfu/ml的检测水平。结论实时荧光定量PCR法的检出率、灵敏度高,可达到10-8cfu/ml的检测水平,具有特异性,在食源性疾病致病菌的检测中具有应用价值。

酶联免疫吸附测定法和实时荧光定量PCR法对乙型肝炎的诊断价值比较

目的比较酶联免疫吸附测定法和实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法在乙型肝炎诊断中的应用价值。方法选取120例疑似乙型肝炎患者作为本次研究对象,分别进行酶联免疫吸附测定法以及实时荧光定量PCR法检验。以病理检查为金标准,分析酶联免疫吸附测定法和实时荧光定量PCR法的检查结果,对比两种检查方法的诊断效能,包括特异度、灵敏度以及准确度。结果120例疑似患者经病理检查确诊75例为乙型肝炎。酶联免疫吸附测定法检出阳性74例,阴性46例;实时荧光定量PCR法检出阳性75例,阴性45例。实时荧光定量PCR法检测乙型肝炎的特异度、灵敏度以及准确度分别为93.33%、96.00%、95.00%,均明显高于酶联免疫吸附测定法的73.33%、82.67%、79.17%,差异有统计学意义(χ^(2)=6.4800、6.9963、13.3724,P<0.05)。结论采用实时荧光定量PCR法进行乙型肝炎的检测具有较高的准确率,可以为医生诊断和治疗方案的制定及调整提供良好的依据。

实时荧光定量PCR法在结核性脑膜炎诊断中的应用

结核性脑膜炎（以下简称结脑）是最常见和最严重的肺外结核病之一，由于结核杆菌（TB）的变异和耐药菌的增多，本病的临床表现可不典型，导致诊断难度加大。

实时荧光定量PCR法快速测定水中微囊藻

以铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)16S rRNA基因片段为靶序列设计一对特异性引物,采用Real-time PCR法,对铜绿微囊藻进行定性、定量检测。试验表明,仅含铜绿微囊藻DNA模板的样品有特异性扩增,扩增产物熔解曲线平稳,峰尖且窄,熔解温度为(87±1)℃。以重组质粒pMD-18T-16S为标准品,检测区间为1.1×102copies/mL～1.1×108copies/mL,所得标准曲线符合制备实时定量PCR标准曲线的要求,对标准品进行测定,方法检出限为11 copies/mL。用该标准曲线对实验室培养获得的铜绿微囊藻DNA样品进行定量检测,与显微镜计数结果基本一致。

实时荧光定量PCR法检测淋病奈瑟菌感染的效果

①目的 应用实时荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)技术准确定量检测临床标本中淋病奈瑟菌基因 ,同时与金标准———细菌培养法比较其灵敏度和特异度 ,为临床淋病的诊疗提供依据。②方法 采集 173例病人临床标本 ,以PE5 70 0全自动PCR扩增分析仪和淋病奈瑟菌实时荧光定量PCR检测试剂盒进行核酸检测。同时 ,用含PolyViteX的巧克力板对淋病奈瑟菌进行分离 ,用ATBExpression自动细菌鉴定仪及配套的APINH进行鉴定。③结果 173份临床标本中 ,荧光定量PCR法示 4 7例淋病奈瑟菌阳性 ,阳性率为 2 7.2 % ;细菌培养法示 4 1例淋病奈瑟菌阳性 ,阳性率为 2 3.7%。与细菌培养法相比 ,荧光定量PCR法的灵敏度为 10 0 % ,特异度为 95 .5 % ,两者的符合率为 96 .5 %。④结论 荧光定量PCR技术具有简便、快捷、灵敏度高、特异度高、定量准确等优点 。

实时荧光定量PCR法检测乙肝病毒DNA的价值分析与研究

目的探讨选择实时荧光定量PCR法对乙肝病毒DNA实施检测的临床价值。方法 250例乙型肝炎患者作为此次实验对象,临床选择血清学标志物的方法实施疾病检测后最终有效确诊。对所有乙型肝炎患者临床均选择实时荧光定量PCR法实施疾病检测,对最终检测结果进行分析。结果乙型肝炎患者分别选择荧光PCR法以及血清学标志物方法实施疾病检测,最终获得的检测结果基本表现一致。临床选择实时荧光定量PCR法完成疾病检测后,最终获得的病毒DNA数据更为准确。实时荧光定量PCR法对大三阳临床最终检测阳性率达到了96%;对小三阳,临床最终检测阳性率达到了69%;而对Hbs Ag(-)、乙型肝炎表面抗体(Hbs Ab)(-)以及Hbe Ab(-)以及乙型肝炎E抗原(Hbe Ag)(-)最终检测阳性率只为2.21%。对于大三阳患者以及小三阳患者的血清PCR检测结果进行观察发现,均表现出较高的拷贝数。结论乙型肝炎患者临床选择实时荧光定量PCR法实施疾病检测,针对乙肝病毒以及相关数据完成检测后可以获得准确结果 ,从而证明对乙型肝炎患者在实施疾病检测的过程中,选择实时荧光定量PCR法以及乙肝病毒DNA方法均可以获得较为理想的效果,临床均可以广泛普及应用。

实时荧光定量PCR法在检测3种泌尿生殖道病原微生物中的应用

目的探讨实时荧光定量PCR法在检测3种泌尿生殖道病原微生物(沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(UU)、淋病奈瑟菌(NG))中的应用。方法 512例门诊和住院疑似泌尿生殖道感染女性患者阴道宫颈分泌物标本,采用实时荧光定量PCR法检测CT、NG、UU,同时用胶体金法检测CT,用培养法进行NG、UU检测。结果 512例疑似泌尿生殖道感染女性患者中,实时荧光定量PCR法和胶体金法检测CT的阳性率分别为10.1%和7.4%。实时荧光定量PCR法和培养法检测UU的阳性率分别为33.4%和23.9%。实时荧光定量PCR法和培养法检测NG的阳性率分别为8.7%和6.1%。阳性检出率为UU>CT>NG,阳性率比较,差异均有统计学意义,实时荧光定量PCR法对CT、NG、UU的检出率高于胶体金法和培养法。结论实时荧光定量PCR法在敏感度、特异度及报告周期上均优于胶体金法和培养法,对STD诊断提供了重要依据,但无法提供药敏报告,可与常规检测方法互相补充。

细菌培养法、免疫层析法及实时荧光定量PCR法在孕晚期B族链球菌筛查中的应用对比研究

目的:研究细菌培养法、免疫层析法及实时荧光定量PCR法在孕晚期B族链球菌(Group B Streptococcus,GBS)筛查中的应用价值。方法:选取2021年3月至2023年5月在我院接受产检的孕晚期孕妇154例。以病理活检为金标准,分析GBS筛查结果;对比细菌培养法、免疫层析法及实时荧光定量PCR法单独及联合诊断孕晚期GBS的效能;分析细菌培养法、免疫层析法及实时荧光定量PCR法单独及联合筛查与病理筛查结果的一致性。结果:154例孕晚期孕妇中,经病理活检检出39例孕妇GBS为阳性;三者联合诊断GBS的灵敏度、特异度、准确率、阳性预测值以及阴性预测值均高于细菌培养法、免疫层析法与实时荧光定量PCR法单独检测(P<0.05);三者联合检测与病理结果的Kappa值为0.936,均高于细菌培养法、免疫层析法、实时荧光定量PCR法单独检测。结论:在筛查孕晚期孕妇GBS中,实时荧光定量PCR法联合细菌培养法、免疫层析法诊断效能高于单独检测,可通过三者联合检测为早期诊断孕妇是否感染GBS提供依据。

探讨实时荧光定量PCR法检测血液新生隐球菌的临床意义

目的探讨实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-FQ-PCR)法检测新生隐球菌感染的临床应用价值。方法选择2014年2月-2014年7月就诊的47例疑似新生隐球菌感染患者的血液标本,采用常规培养基培养方法以及RT-FQ-PCR法进行检测,计算检测新生隐球菌的阳性率,并进行统计学分析。采用RT-FQ-PCR法对新生隐球菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、烟曲霉、黑曲霉、大肠杆菌、肺炎球菌、金黄色葡萄球菌和链球菌这些常见真菌和细菌的DNA进行检测,评价RT-FQ-PCR法的特异性。采用RT-FQ-PCR和常规培养基培养法对稀释至5个/m L的新生隐球菌菌液进行检测,评价RT-FQ-PCR法的灵敏度。结果采用RT-FQ-PCR法,以新生隐球菌特异性引物为探针对新生隐球菌和其他常见真菌及细菌进行检测,只有新生隐球菌出现荧光信号。RTFQ-PCR在5个/m L浓度的新生隐球菌菌液中检测出新生隐球菌,而常规培养基培养法未检测出。在47例疑似新生隐球菌感染患者中,常规培养基培养方法检测出11例,阳性率为23.40%,而RT-FQPCR法检测出14例,阳性率为29.79%,二者经比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 RT-FQ-PCR法与常规培养基培养法对新生隐球菌的检测具有很好的一致性。且RT-FQ-PCR法能够检测出较低浓度的新生隐球菌,较常规培养基培养法快速、灵敏度高、特异性强,可缩短报告时间,为临床早期诊断及治疗新生隐球菌感染提供可靠依据。

实时荧光定量PCR法与涂片法检测结核分枝杆菌的效果对比

目的:对比实时荧光定量P C R法与涂片法检测结核分枝杆菌(MTB)的效果。方法:选取2021年1月—12月滨州市中心医院结核科三病区住院肺结核患者144例,非结核患者41例。所有患者均接受涂片法和实时荧光定量PCR法进行结核分枝杆菌检测,观察两种检测方式的诊断效果。结果:实时荧光定量PCR法阳性率(60.00%)高于涂片检测法(42.16%),差异有统计学意义(P<0.05);实时荧光定量PCR法诊断灵敏度、特异度、准确度及阴性预测值均高于涂片法,差异有统计学意义(P<0.05);两种检测方法诊断阳性预测值比较,差异无统计学差异(P>0.05)。结论:实时荧光定量PCR法优于涂片法,能够提高MTB检测的阳性率和诊断准确率,为患者后续治疗提供有利的诊断依据,值得临床应用。

实时荧光定量PCR法与杂交捕获法在高危型HPV检测中的比较

大量研究已经证明，人乳头瘤病毒感染（HPV），特别是高危型人乳头瘤病毒感染，在妇女宫颈疾病的发生和发展中起着重要的作用。HPV感染是宫颈癌及宫颈上皮内瘤变（CIN）的主要病因，高危型HPV感染是宫颈癌及其癌前病变的必要条件。据报道…，宫颈癌患者HPV阳性率可达到99．7％，HPV感染使宫颈癌的相对危险陛增加200多倍，是可能罹患宫颈癌的信号，故可利用HPVDNA检测宫颈早期病变，对病变的治疗及预防有具有重要意义。

实时荧光定量PCR法检测环境假单胞菌属细菌丰度

应用实时荧光定量PCR法，建立了总细菌及假单胞菌属的标准曲线，并以环境样本中假单胞菌属与总细菌的比值反映其细菌丰度．应用该方法评价人工除藻反应器中组合填料、无纺布、弹性填料等介质对太湖水中溶藻细菌之一的假单胞菌属的富集情况．结果显示：该方法对总细菌的检测范围为10^3～10^8个基因拷贝/μL（R^2=0．997）；假单胞菌属的检测范围为1～10^5个基因拷贝／μL（R^2=0．994）．对除藻反应器溶藻细菌富集效果的评价显示，所建立的方法能有效检测反应器中填料对该类溶藻细菌的富集程度．初步证明所建立的方法可有效定量假单胞菌属在环境样本中的丰度．

利用实时荧光定量PCR法检测转基因水稻外源基因拷贝数的研究

转基因植物中外源基因拷贝数是影响目的基因表达水平和遗传稳定性的重要因素,因此外源基因拷贝数的检测成为转基因研究的关键.利用高通量、快速、灵敏的SYBR GreenⅠ荧光定量实时PCR法,检测了转大麦烟酰胺合成酶基因(NAS1)水稻中外源基因拷贝数.以蔗糖磷酸合成酶基因(SPS)作为水稻的内源参照基因,通过梯度稀释法,分别获得了NAS1和SPS基因的Ct值与起始模板数的相关性标准曲线,相关系数分别为0.99976和0.99571,相关性高.通过目的基因NAS1和水稻内源参照基因SPS起始模板数的比较,获得了目的基因在转基因水稻中的拷贝数,在8株转基因株系中,1株为假阳性,1株拷贝数为1,3株拷贝数为2,其余3株拷贝数分别为3、4和7,而阴性对照拷贝数为0.这种方法快速、简便、准确,可以满足转基因育种工作中对后代优良株系的选择.