宣肺败毒方治疗新冠病毒感染的中医学理论探讨及现代药理研究进展

目的探讨宣肺败毒方治疗新型冠状病毒感染的中医学理论,归纳该方的药理实验研究进展,为扩展该方的临床应用和进一步的实验研究提供参考。方法采用理论研究与文献调研相结合的方法,探讨宣肺败毒方的中医学理论和药理学进展,归纳该方的实验研究。结果宣肺败毒方适用于湿毒郁肺的患者,宣肺败毒方可通过PD-1/IL17A、IL-6/STAT3及CXCL2/CXCR2等通路改善肺损伤,以及NF-κB通路减轻肠道疾病。结论宣肺败毒方是中药和科技结合的产物,既有充分的中医药理论支撑,亦有足够的现代药理实验研究证据支持。

宣肺败毒方调控TLR4/NLRP3/Caspase1信号通路抗小鼠急性肺损伤的作用机制研究

[目的]基于Toll样受体4(TLR4)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase1)信号通路研究宣肺败毒方(XFBD)对IgG免疫复合物(IgG-IC)诱导小鼠急性肺损伤(ALI)的药效作用及机制研究。[方法]采用IgG-IC诱导小鼠构建ALI模型,灌胃XFBD 4 g生药/kg和8 g生药/kg,单次给药;苏木素-伊红染色法(HE)观察肺组织病理变化;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定细胞活力;荧光定量PCR法检测小鼠肺组织细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)以及TLR4/NLRP3/Caspase1信号通路相关因子mRNA表达量;免疫组化法检测小鼠肺组织TLR4、NLRP3和消皮素D(GSDMD)蛋白表达;蛋白免疫印迹法检测小鼠肺组织闭合蛋白(Occludin)、闭锁连接蛋白1(ZO-1)以及TLR4/NLRP3/Caspase1信号通路相关因子蛋白表达水平。[结果]与正常组相比,模型组小鼠肺组织炎性细胞浸润,肺泡间隙增厚,肺组织病理损伤评分和肺组织脏器系数显著升高,LDH及细胞因子表达明显升高,Occludin和ZO-1表达下调,TLR4/NLRP3/Caspase1信号通路相关因子mRNA和蛋白水平显著升高;与模型组相比,XFBD显著缓解急性肺损伤小鼠肺组织炎症细胞浸润,降低细胞因子表达,上调Occludin和ZO-1,显著下调TLR4/NLRP3/Caspase1信号通路相关因子mRNA和蛋白水平。[结论]XFBD可通过调控TLR4/NLRP3/Caspase1信号通路发挥抗小鼠ALI的作用。

基于网络药理学和分子对接的宣肺败毒方治疗急性呼吸窘迫综合征的机制及验证研究

[目的]采用网络药理学和分子对接技术探究宣肺败毒方治疗急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的作用机制并进行验证。[方法]通过中药系统药理学数据分析平台,对宣肺败毒方的组成药物麻黄、苍术、藿香、青蒿、虎杖、马鞭草、薏苡仁、芦根、葶苈子、苦杏仁、化橘红、甘草分别进行活性成分筛选,构建活性成分-靶点相互作用网络图,采用Genecards、SwissTargetPrediction和Uniprot数据库获取ARDS疾病靶点,筛选ARDS核心靶点,构建靶点间蛋白相互作用分析图,采用DAVID数据库对核心靶点进行GO和KEGG分析,采用Schr?dinger软件对活性成分-核心靶点分子对接并计算结合能。通过脂多糖构建ARDS小鼠模型,造模1 d后经宣肺败毒方连续灌胃28 d,通过流式细胞及酶联免疫吸附(ELISA)实验分析肺泡灌洗液中白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ、肺组织中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和磷脂过氧化氢GSH过氧化物酶(GPX4)的变化,对网络药理学结果进行验证。[结果]筛选得到宣肺败毒方治疗ARDS的活性成分205个,度值前8位的化合物分别是槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、豆甾醇、木犀草素、异鼠李素、柚皮苷和光甘草定。筛选得到核心靶点107个,度值排名前10位的核心靶点为Jun、IL-6、TP53、AKT1、ALB、VEGFA、STAT3、CASP3、IL-1β和PTGS2。生物信息学分析发现宣肺败毒方治疗ARDS与IL-7、TNF和Toll样受体等炎性反应相关信号通路有关,与PTGS2等铁死亡相关蛋白具有较低结合能。小鼠模型证实,宣肺败毒方可以显著降低脂多糖诱发的肺泡灌洗液中炎症因子异常升高和肺组织氧化还原失衡。[结论]宣肺败毒方治疗ARDS的机制与缓解氧化损伤与细胞凋亡、调控炎症信号通路、减少炎症细胞募集浸润和细胞因子分泌有关,干预铁死亡途径可能是重要机制。

基于分子对接筛选宣肺败毒方和血必净注射液中抑制新型冠状病毒RNA依赖的RNA聚合酶的活性物质

目的:筛选宣肺败毒方和血必净注射液中抑制新型冠状病毒RNA依赖的RNA聚合酶(RNA Dependent RNA Polymerase,RdRp)的活性物质。方法:以新型冠状病毒RdRp作为分子对接的靶蛋白,使用AutoDockTools软件对其去水加氢。利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)检索出宣肺败毒方和血必净注射液中的有效活性小分子化合物,将其导入Chem 3D中进行能量最小化,用AutoDockTools加氢、调节化学键,然后与处理后的RdRp在AutoDock Vina中进行分子对接。最后通过Pymol、Discovery Studio、Ligplot进行可视化处理。结果:从TCMSP中分别检索出宣肺败毒方活性成分230个、血必净注射液活性成分125个。通过分子对接技术筛选出19个与RdRp结合能低于-8.0 kcal/mol的化合物。经可视化处理发现,宣肺败毒方中的大黄素甲醚二葡萄糖苷和埃沃生物苷、血必净注射液中的丹参酚酸j可很好地作用于RdRp的活性口袋,且与RdRp形成传统氢键、碳氢键及疏水键等相互作用。结论:本研究从宣肺败毒方和血必净注射液中筛选出与核苷酸竞争性结合新型冠状病毒RdRp的小分子,为研发抗新型冠状病毒感染的特效药提供理论依据。

宣肺败毒方治愈新型冠状病毒肺炎重症患者病案报道

中医药在新型冠状病毒肺炎防治的全过程中发挥着重要的作用,目前应对重型患者,中医疗法以中药注射剂为主。宣肺败毒方为“中药+科技”的产物,赋宣肺理气、化湿解毒之理,具有抑制病毒感染、降低炎症因子、促进肺部炎症吸收等作用。在辨证论治前提下,以宣肺败毒方为主,治愈重型新型冠状病毒肺炎1例,将其病案报告总结如下,以期为该病的临床治疗与进一步研究提供参考。

基于网络药理学和分子对接探讨宣肺败毒方治疗新型冠状病毒肺炎的潜在作用机制

目的:探讨宣肺败毒方治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的潜在作用机制。方法:借助中药系统药理学分析平台(TCMSP)检索宣肺败毒方有效活性成分及作用靶标,运用GeneCards等数据库获取COVID-19的相关靶标基因并与宣肺败毒方的作用靶标取交集获取治疗靶标。将治疗靶标上传STRING数据库获取蛋白交互作用(PPI)信息,利用Cytoscape构建药物-靶点-疾病网络、靶点蛋白高置信度PPI网络、活性成分-靶点-通路网络。利用Bioconductor中的R包对潜在作用靶点进行GO功能分析和KEGG通路富集分析。将主要活性成分分别与SARS-CoV-2的3CL水解酶(3CLPro)和血管紧张素转换酶2(ACE2)及关键靶标进行分子对接。结果:筛选出宣肺败毒方有效活性成分共99个,其中作用于COVID-19的22个活性成分可通过52个潜在靶标作用于COVID-19。富集得到GO中1364个生物过程条目和22条KEGG通路,涉及IL-17、JAK-STAT、MAPK、NF-κB、PI3K-Akt、Th1和Th2细胞分化、Th17细胞分化、T细胞受体、血管内皮生长因子(VEGF)和沙门氏菌感染等路径。分子对接结果显示宣肺败毒方中的木犀草素、β-谷甾醇、芒柄花黄素、紫檀素等活性成分与3CLPro和ACE2有较好的结合性,并且与核心靶点也有较好的结合性。结论:宣肺败毒方主要通过黄酮类和植物淄醇类活性成分与SARS-CoV-2的ACE2和3CLPro受体结合,抑制病毒入侵及病毒复制,在病毒感染细胞后可能通过调节IL-6、MAPK3、MAPK1、IL-1β、CCL2、EGFR、NOS2等关键靶点发挥抗炎、抗细胞因子风暴、抗氧化、调节机体免疫的作用来治疗COVID-19。

清肺排毒汤、化湿败毒方和宣肺败毒方体外抗补体活化作用的比较研究

目的:平行比较新冠肺炎“抗疫三方”(清肺排毒汤、化湿败毒方和宣肺败毒方)对抗新冠肺炎(COVID-19)重要病机补体活化的作用。方法:基于酶联免疫吸附测定(ELISA)原理,采用免疫球蛋白M(IgM)、酵母多糖和甘露聚糖作为包被物分别启动经典途径、替代途径和凝集素途径,通过测定补体活化终端产物攻膜复合物(C5b-9)水平以评价补体活化程度。不仅如此,通过包被新冠病毒刺突蛋白(S蛋白)与核衣壳蛋白(N蛋白)还可考察“三方”对抗这两种蛋白引起补体活化的作用。结果:“三方”均能剂量依赖地对抗经典途径、替代途径和凝集素途径引起的C5b-9生成,也均对S蛋白与N蛋白引起的C5b-9生成具有抑制作用,其中宣肺败毒方的作用最强。结论:“三方”均可在体外对抗三条补体途径的激活并抑制新冠S蛋白与N蛋白引起的补体活化,此作用可能是三方发挥治疗COVID-19作用的药效学基础之一。

宣肺败毒方治疗病毒性肺炎的中医理论及药理机制探讨

病毒性肺炎(VP)是由一种或多种病毒经上呼吸道感染并向下蔓延造成不同程度肺实质损伤的炎性疾病,对社会经济和公共卫生构成严重威胁。目前西医多以对症支持治疗为主,缺少特异性治疗手段,临床仍处于药物缺乏的困境。从中医角度VP属“疫病”范畴,其病因责之于“疫毒、六淫”,“湿、热、毒、虚、瘀”是其病理因素,以“阴阳失衡、脏腑失调、正气亏虚”为基本病机,“扶正祛邪”为其治疗原则,以六经证治为基础立法,辅以卫气营血、三焦理论辨证施治。宣肺败毒方是张伯礼院士与刘清泉教授深入发掘经典文献研究和现代组分优化筛选总结的有效方剂,是“科技+中药”之产物,该方由麻杏石甘汤、麻杏薏甘汤、葶苈大枣泻肺汤、千金苇茎汤及不换金正气散化裁而成,具有宣肺化湿、清热透邪、泻肺解毒之效,治疗疫病之湿毒郁肺证,对防治VP具有一定临床价值。该文综述了宣肺败毒方治疗VP的一系列重要研究进展,探讨其组方结构、用药思路、证治范围及临床新用的中医相关理论,总结其抑制病毒作用、减轻炎症反应、调控免疫系统、改善肺纤维化、调节肠道菌群的药理作用机制,并就研究中存在的问题提出思考与建议,以期为防治VP包括新型冠状病毒肺炎(COVID-19)在内的临床用药及基础研究提供参考。

宣肺败毒方加减治疗新型冠状病毒肺炎重症患者2例

宣肺败毒方是在抗击新型冠状病毒肺炎的临床救治过程中总结出的有效方剂,具有宣肺化湿、清热透邪、泻肺解毒功效。针对天津市2例新型冠状病毒肺炎重症患者,张伯礼院士进行会诊,根据患者的具体情况,考虑病情已发展至湿毒郁肺阶段,开具宣肺败毒方加减的中药处方,明显改善了患者临床症状,阻止了病情进一步发展,促进了患者核酸转阴及痊愈出院。

基于网络药理学分析宣肺败毒方治疗SARS、MERS和COVID-19的作用机制

目的探讨宣肺败毒方对冠状病毒感染治疗作用的有效成分、作用靶点、信号通路等,从而阐释其作用机制。方法利用Cytoscape构建了宣肺败毒方的药物–性–味–归经网络。采用TCMSP数据库、SwissADME数据库和Swiss Target Prediction数据库筛选宣肺败毒方的有效成分和相关靶点,通过GeneCards数据库和CTD数据库收集严重急性呼吸道疾病(SARS)、2012年的中东呼吸综合征(MERS)和新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的疾病靶点,将药物靶点和疾病靶点取交集,利用Cytoscape软件构建网络;运用String数据库,对潜在靶点进行蛋白相互作用(PPI)网络模型构建;通过Metascape数据库对潜在靶点进行GO和KEGG富集分析,并且用Cytoscape构建网络。结果宣肺败毒方中有10种药材与肺经有关。从中筛选出167个活性成分和242个潜在作用靶点,核心药物为甘草、麻黄、青蒿、马鞭草、虎杖,核心成分为槲皮素、豆甾醇、山柰酚、木犀草素、异鼠李素等,核心靶点为AKT1、IL-6、TP53、VEGFA、TNF等,可能的作用机制与PI3K-Akt signaling pathway、HIF-1 signaling pathway和TNF signaling pathway等多个信号通路有关。结论通过网络药理学探讨了宣肺败毒方对SARS、MERS和COVID-19的潜在共同作用机制,体现了中药多成分、多靶点、多途径的作用特点。

基于疾病传变谈新型冠状病毒肺炎与抗疫三方

基于疾病传变理论,对新型冠状病毒肺炎的病因、病机、传变规律与抗疫三方的临床应用规律进行总结。归纳得出新型冠状病毒肺炎病因以寒湿疫毒为主,兼有伏燥、火热等,疾病初起病机为虚在太阴,太阳气化失司,少阳枢机不利,以致气不摄津,水湿内生,入里化热伤阴。抗疫三方可分经、分脏腑、分三焦施治,使上中下三焦气机正常运转,以达利水祛湿、行水布津、润燥除热之功。清肺排毒汤主寒湿之象显著,以射干麻黄汤温化水饮;宣肺败毒方主稍有化热之象,以葶苈子泻肺逐水;化湿败毒方主热象显现,以葶苈子泻肺逐水、生大黄清热解毒。三方药物及药性各有侧重,然均立足于分治三焦气机以祛湿,需辨证论治。

浅析《伤寒论》“存津液”思想在“三方”治疗新型冠状病毒肺炎中的体现

中医将新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19)(以下简称“新冠肺炎”)列入“疫病”范畴,而作为有着疫病成书背景的中医经典著作《伤寒论》,在新冠肺炎的治疗中作出了重要贡献。“存津液”思想贯穿全书,津液病变分为“津亏、津停、痰湿、水饮。”“阴阳和”为其治疗大法,从八法的角度论述“存津液”思想在《伤寒论》理法方药中的体现,并结合其简析新冠肺炎治疗的“三方”——清肺排毒汤、化湿败毒方、宣肺败毒方的组方规律,为中医药预防方在抗击疫情中的应用提供新的思路。

“肺主通调水道”对治疗新型冠状病毒感染“三方”的理论指导

“肺主通调水道”是肺的主要生理功能之一,也是中医学辨证论治的重要理论基础,对临床处方也有很大的指导意义。文章通过归纳中医专家对新型冠状病毒感染的病机认识,对“肺主通调水道”的条文认识,分析治疗新型冠状病毒感染有效的清肺排毒汤、宣肺败毒方和化湿败毒方三方的药物组成和方解,进而为理解“肺主通调水道”提供新的思考视角,以加深中医理论内涵研究并能对临床进行理论指导。

“新冠三方”的体外抗氧化作用比较

目的 平行比较“新冠三方”(清肺排毒汤、化湿败毒方和宣肺败毒方,以下简称“三方”)的体外抗氧化作用。方法在非细胞体系中,采用FRAP法考察三方的总抗氧化能力;通过DPPH法考察三方对DPPH自由基的清除作用;采用NBT还原法考察三方对超氧阴离子的清除作用;通过基于终产物丙二醛的荧光测定法考察三方对羟自由基的清除作用;用FeSO4体外诱导大鼠肝匀浆MDA法考察三方对抗脂质过氧化的作用。依据以上5个抗氧化指标,平行比较三方提取物在非细胞体系的抗氧化能力。进一步地,在脂多糖活化的RAW264.7细胞模型上,分别使用L-012探针和MitoSOX线粒体超氧化物红色荧光探针检测胞质与线粒体活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成情况;通过光泽精探针检测胞质NADPH氧化酶活性,以平行比较三方提取物在细胞体系的抗氧化能力。结果 在非细胞体系中,三方均能剂量依赖地清除DPPH自由基、超氧阴离子和羟自由基,并且能有效对抗脂质过氧化的发生。在等提取物浓度下,三方对DPPH自由基与超氧阴离子的清除作用相当,总抗氧化能力相当,而化湿败毒方在清除羟自由基和对抗脂质过氧化方面表现更优。在细胞体系中,三方均能通过抑制NADPH氧化酶的活性来减少脂多糖刺激RAW264.7细胞质ROS的生成;不仅如此,三方对线粒体ROS的生成也有抑制作用,其中清肺排毒汤的作用最佳。结论 三方在非细胞体系和细胞体系均展现了多重体外抗氧化作用,且在不同指标上的作用强度各有优劣。考虑到抗氧化应激对COVID-19治疗的重要意义,上述结果提示三方的抗氧化能力是它们发挥治疗COVID-19作用的药效学基础之一。

中药早期干预对新型冠状病毒肺炎重症患者疾病转归影响的回顾性临床研究

目的回顾性分析新型冠状病毒肺炎(简称新冠肺炎)重症患者的临床资料,探讨中药早期干预对新冠肺炎重症患者疾病转归的影响。方法纳入武汉市中医医院2020年1月25日—3月10日收治的重症(重型、危重型)新冠肺炎患者72例,根据最早应用中药干预时间分为早期干预组(发病3天内服药)55例,非早期干预组(发病4天及以上服药)17例。两组患者均辨证给予宣清和化方、感冒退热方、新冠2号方(宣肺败毒方)汤剂及连花清瘟胶囊、喜炎平注射剂、血必净注射剂。分别统计两组患者入院时及入院7天后的实验室指标、急性生理学及慢性健康状况评分系统Ⅱ(ApacheⅡ)评分、序贯性脏器功能衰竭评分(SOFA评分)、肺部CT情况,统计两组患者住院时间并比较临床结局的差异。结果两组入院时一般情况及实验室检测指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。入院7天后两组患者外周血白细胞(WBC)、中性粒细胞(N)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙氨酸氨基转移酶(AST)、门冬氨酸氨基转移酶(ALT)、D-二聚体(D-dimer)等实验室指标差异无统计学意义(P>0.05);早期干预组患者尿素氮(BUN)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、ApacheⅡ评分、SOFA评分较非早期干预组降低(P<0.05),淋巴细胞计数(L)较非早期干预组升高(P<0.05)。早期干预组住院时间中位数为20天,非早期干预组为22天,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。早期干预组患者的死亡率(18.2%,10/55)低于非早期干预组(52.9%,9/17,P<0.05),治愈出院率(78.2%,43/55)高于非早期干预组(47.1%,8/17,P<0.05)。结论中药早期干预能够减轻新冠肺炎重症患者的炎症反应,调节患者免疫功能,促进肺部炎症的吸收,降低死亡率。

公共卫生事件下中医药应急科研体系的构建——基于中医药应对新冠疫情的案例分析

我国在中医药方面筛选并研发出"三药三方",在抗击新冠疫情中发挥了重要作用。化湿败毒方和宣肺败毒方是"三药三方"中的新药。"肺炎1号"在湖北省得到了广泛应用。这三种药物是中医药研发领域很典型的案例。总结这三种药物的研发过程具有重要意义。不仅有利于增强民族自信和文化自信,而且可以为完善公共卫生科研攻关体系以及提升中医药研发水平提供参考。在对这三种药物的研发过程进行案例分析的基础上,总结出中医药应急科研体系。中医药的应急科研体系包括科研管理、科研攻关和成果的应用与转化三部分。中医药深厚的医学积累为应急科技攻关提供了支撑,传统中医药与现代科技紧密结合是加快研发速度的关键,中医药企业较强的生产能力是科研成果迅速得到广泛应用的保障。对应急状态下开展中医药科研提出了几点对策建议。第一、要促进科研管理、科研攻关以及成果应用之间的衔接;第二、要注重前方救治一线和后方科研团队之间的配合;第三、要加强研究基地建设;第四、要注重与中医药企业开展产学研合作。