基于NOD2介导的AMPK/mTOR信号通路探讨宫颈癌细胞恶性行为的机制

目的 基于核苷酸结合寡聚化结构域受体2(NOD2)介导的AMP活化蛋白激酶(AMPK)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路探讨宫颈癌(CC)细胞恶性行为的机制。方法 生物信息学分析确定NOD2在CC组织中的表达。将靶向NOD2(shNOD2)、shRNAs阴性对照(shNC)以及NOD2过表达(NOD2)质粒和载体(Vec)转染CC细胞。通过CCK-8测定、集落形成和Transwell细胞侵袭测定来确定NOD2对CC细胞生长的影响。通过高通量RNA测序(RNA-Seq)进行转录组分析。Western blot试验检测细胞系中NOD2、AMPK/mTOR信号通路和自噬蛋白的表达。24只雌性BALB/c裸鼠随机分为4组,每组6只:载体组(Vec组)、NOD2过表达组(NOD2组)、shNC组和shNOD2组。构建小鼠远处转移模型,监测肺转移的荧光强度,计数肺转移结节的数量。结果 在线数据库分析显示,NOD2在CC组织中表达明显高于正常组织,并且不同分期的CC中NOD2的mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05)。此外,NOD2的高表达与较差的总生存期和无病生存期相关(P<0.05)。NOD2过表达对CC细胞增殖、集落形成、迁移和侵袭具有促进作用,而NOD2敲低则相反。与体外结果一致,在转移的小鼠尾静脉注射模型中,NOD2组CC细胞的肺定殖、肺转移灶较Vec组增加(P<0.05),而shNOD2组CC细胞的肺定殖、肺转移灶较shNC组减少(P<0.05)。RNA-Seq结果显示NOD2表达与AMPK信号激活、mTOR信号抑制、自噬调节途径激活和自噬体形成显著相关。与shNC组相比,shNOD2组磷酸化AMPK、LC3蛋白表达水平减少(P<0.05),磷酸化mTOR、p62蛋白表达水平增加(P<0.05);与Vec组相比,NOD2组LC3、AMPK蛋白表达水平增加(P<0.05),磷酸化mTOR、p62蛋白表达水平减少(P<0.05)。与shNC组相比,shNOD2组GFP-mRFP-LC3的点积累减少(P<0.05);与Vec组相比,GFP-mRFP-LC3的点积累增加(P<0.05)。结论 NOD2可能通过AMPK/mTOR信号促进CC增殖、迁移和侵袭,其作用机制部分涉及自噬激活。

HSP90α在宫颈癌细胞及组织中的表达及其与肿瘤凋亡的关系

目的探讨分析HSP90α在宫颈癌细胞及组织中的表达及其与肿瘤凋亡的关系。方法选择2019年4月至2021年4月吉林省肿瘤医院收治的103例宫颈癌患者,取其术中切除癌组织及癌旁组织,采用RT-qPCR法检测组织中HSP 90αmRNA相对表达量,并分析HSP 90α基因表达与患者临床病理特征及无进展生存预后的关系。采用RT-qPCR检测宫颈癌HeLa、CaSki、C-33A细胞及正常宫颈上皮细胞End1/E6E7中HSP90αmRNA水平表达。采用HeLa细胞,将其分为空白对照组、shRNA组及sh-NC组,检测各组细胞中HSP90αmRNA表达水平,采用CCK8法检测各组细胞增殖情况,采用流式细胞技术检测各组细胞凋亡情况,采用Western Blot法检测各组细胞凋亡相关基因表达情况。结果宫颈癌患者癌组织HSP 90αmRNA相对表达量显著高于癌旁组织(P<0.05)。癌组织HSP 90αmRNA表达与患者浸润深度、临床分期及淋巴结转移有关(P<0.05)。HSP90α低表达组患者无进展生存预后显著优于高表达组(P<0.05)。宫颈癌HeLa、CaSki、C-33A细胞株HSPαmRNA相对表达量显著高于正常宫颈上皮细胞株End1/E6E7(P<0.05)。shRNA组细胞HSP90αmRNA相对表达量显著低于空白对照组及sh-NC组(P<0.05)。24、48、72、96 h时,shRNA组细胞450 nm处吸光度值显著低于空白对照组及sh-NC组(P<0.05)。shRNA组细胞凋亡率显著高于空白对照组及sh-NC组(P<0.05)。shRNA组细胞Caspase-3、Bax蛋白相对表达量较空白对照组、sh-NC组显著升高(P<0.05),shRNA组细胞Bcl-2、Cyclin D1蛋白相对表达量较空白对照组、sh-NC组显著降低(P<0.05)。结论在宫颈癌组织及细胞中,均存在HSP90α高表达,HSP90α参与宫颈癌的发生发展过程,抑制宫颈癌细胞中HSP90α表达,可有效抑制肿瘤增殖活性,激活细胞凋亡通路而促进细胞凋亡,HSP90α有望成为宫颈癌治疗的潜在生物标志物。

布托啡诺调节缺氧诱导因子-1α/血管内皮生长因子信号通路对宫颈癌细胞增殖、迁移和血管生成的影响

目的探讨布托啡诺(Butorphanol)对宫颈癌细胞增殖、迁移和血管生成的影响及作用机制。方法使用0.5~80.0μg/mL的布托啡诺分别处理HeLa细胞24 h,细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测细胞增殖,计算IC50值。将HeLa细胞分为对照组(Control组)、阴性对照组(NC组)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)过表达组(HIF-1α组)、布托啡诺组(Butorphanol组)、Butorphanol+HIF-1α组,平板克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell小室实验、小管形成实验分别检测HeLa细胞增殖、迁移、侵袭与血管生成,Western blot法检测HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达,裸鼠移植瘤实验检验布托啡诺对宫颈癌移植瘤生长的影响。结果过表达HIF-1α可显著促进HeLa细胞增殖、迁移、侵袭及血管生成拟态形成,并上调HIF-1α、VEGF蛋白表达(P<0.05);布托啡诺可有效抑制HeLa细胞增殖、迁移、侵袭、血管生成拟态形成及宫颈癌移植瘤生长,并下调HIF-1α、VEGF蛋白表达(P<0.05);布托啡诺对宫颈癌细胞的抑制作用可被HIF-1α的过表达减弱。结论布托啡诺通过抑制HIF-1α/VEGF信号通路抑制宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭及血管生成,抑制宫颈癌的生长。

敲低线粒体转录因子A(TFAM)抑制人宫颈癌细胞及骨肉瘤细胞自噬及增殖、侵袭和迁移

目的研究线粒体转录因子A(TFAM)对宫颈癌HeLa细胞及骨肉瘤U2OS细胞的线粒体功能、自噬、增殖、侵袭、迁移的影响。方法HeLa、U2OS细胞转染TFAM小干扰片段(si-TFAM)下调TFAM表达,Mito-Tracker Red CMXRos染色结合激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位(MMP)、MitoSOX^(TM)Red标记法检测线粒体活性氧(mtROS)水平、实时定量PCR检测线粒体DNA(mtDNA)的表达,免疫荧光细胞化学染色检测自噬体数量的变化。Western blot法检测TFAM、微管相关蛋白1轻链3A/B(LC3A/B)、自噬相关基因2A(ATG2A)、ATG2B、ATG9A、锌指转录因子Snail、基质金属蛋白酶2(MMP2)和MMP9的表达。CCK-8法、平板集落形成实验检测细胞增殖,Transwell^(TM)实验、划痕愈合实验检测细胞侵袭、迁移的变化。结果下调TFAM表达导致HeLa及U2OS细胞MMP减少,mtDNA拷贝数减少,mtROS产生量增加。LC3A/B蛋白含量较对照组明显下降,胞质内自噬体数量明显减少,自噬早期阶段蛋白ATG2B、ATG9A表达量明显减少。HeLa及U2OS细胞Snail、MMP2和MMP9蛋白表达均减少。干扰TFAM表达,抑制HeLa及U2OS细胞的增殖、侵袭、迁移能力。结论下调TFAM表达抑制线粒体功能,延缓自噬进程,降低宫颈癌细胞及骨肉瘤细胞的增殖、侵袭、迁移能力。

藁本内酯对宫颈癌细胞化疗耐药性的影响

目的 基于Hippo-Yes相关蛋白(YAP)信号通路探讨藁本内酯对宫颈癌细胞化疗耐药性的影响。方法 将人宫颈癌顺铂耐药细胞HeLa/DDP分为对照组、顺铂组(10μmol/L顺铂)和顺铂+低、中、高浓度藁本内酯组(10μmol/L顺铂+25、50、100μmol/L藁本内酯),检测各组细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭情况,以及YAP、具有PDZ结合基序的转录共激活因子(TAZ)mRNA和YAP、TAZ、基质金属蛋白酶2(MMP2)、Ki67、切割型胱天蛋白酶3(cleaved-caspase-3)、caspase-3蛋白的表达情况。结果 与对照组比较,顺铂组细胞的增殖抑制率、凋亡率和cleaved-caspase-3/caspase-3均显著升高;划痕愈合率、侵袭细胞数,YAP、TAZ mRNA和YAP、TAZ、MMP2、Ki67蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05)。与顺铂组比较,顺铂+低、中、高浓度藁本内酯组细胞的增殖抑制率、凋亡率和cleaved-caspase-3/caspase-3均进一步升高;划痕愈合率、侵袭细胞数,YAP、TAZ mRNA和YAP、TAZ、MMP2、Ki67蛋白的表达水平均进一步降低,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论 藁本内酯可通过抑制Hippo-YAP信号通路提高宫颈癌耐药细胞对顺铂的敏感性。

环状RNA_PLEKHM3通过miR-320/KLF4轴调控宫颈癌细胞上皮间质转化

目的探讨环状RNA含普列克底物蛋白同源域的家族M3成员(PLEKHM3)(circRNA_PLEKHM3)通过调控微小RNA-320(miR-320)/畸变样因子4(KLF4)轴在宫颈癌细胞上皮间质转化(EMT)行为中的作用与机制。方法采用实时定量PCR(qRT-PCR)法检测宫颈癌细胞Hela和CaSki中circRNA_PLEKHM3的表达水平;RNA荧光原位杂交检测circRNA_PLEKHM3在人宫颈癌上皮细胞CaSki中的定位;双荧光素酶报告基因实验检测circRNA_PLEKHM3和miR-320的靶向关系,以及miR-320和KLF4的靶向关系;对CaSki细胞过表达circRNA_PLEKHM3;另外设置三组,分别为在过表达circRNA_PLEKHM3的基础上过表达miR-320、沉默KLF4,以及在过表达miR-320的基础上沉默KLF4。qRT-PCR检测CaSki中miR-320的表达水平;Western blot检测CaSki细胞中KLF4和EMT标志物上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达;Transwell实验检测细胞迁移数和侵袭细胞数。结果circRNA_PLEKHM3在Hela和CaSki中的表达均降低(P<0.05),其主要定位在细胞质中;双荧光素酶报告基因实验显示miR-320和circRNA_PLEKHM3存在靶向关系,KLF4和miR-320存在靶向关系;过表达circRNA_PLEKHM3抑制miR-320和N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9的蛋白表达,上调E-cadherin的蛋白表达,减少细胞迁移和侵袭数(P<0.05);在过表达circRNA_PLEKHM3的基础上过表达miR-320或沉默KLF4均能够促进miR-320和N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白的表达,上调E-cadherin蛋白的表达,减少迁移和侵袭细胞数(P<0.05);然而在过表达miR-320的基础上沉默KLF4,KLF4和N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白的表达受到抑制,E-cadherin蛋白的表达上调,细胞迁移和侵袭数减少(P<0.05)。结论circRNA_PLEKHM3过表达可能通过miR-320/KLF4轴调控宫颈癌细胞的EMT。

LncRNA HAGLR靶向miR-143/Hedgehog信号通路对HPV16/18感染的宫颈癌细胞活性作用机制

目的 研究LncRNA HAGLR靶向miR-143/刺猬因子(Hedgehog)信号通路对人乳头瘤病毒(HPV)16/18感染的宫颈癌细胞活性作用机制。方法 CaSki细胞购自美国标准生物品收藏中心。选取宫颈癌患者的癌组织(符合宫颈癌确诊标准)与癌旁5 cm宫颈组织标本各10例。将LncRNA HAGLR转染到宫颈癌细胞中后分为宫颈癌组、NC组及转染组。实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)检测LncRNA HAGLR、miR-143水平。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖。流式细胞仪检测细胞凋亡。Western印迹检测音猬因子重组蛋白(Shh)、神经胶质瘤相关基因同源蛋白(Gli)1蛋白水平。双荧光素酶报告检测LncRNA HAGLR、miR-143、Shh、Gli1靶向。结果 宫颈癌组织中LncRNA HAGLR表达明显高于在癌旁组织(P<0.05)。宫颈癌组与NC组各指标对比无明显差异(P>0.05)。与NC组相比,转染组LncRNA HAGLR、增殖能力、Shh、Gli1水平明显降低,miR-143、凋亡率明显增加(P<0.05)。结论 LncRNA HAGLR靶向升高miR-143及抑制Hedgehog信号通路可降低HPV16/18感染的宫颈癌细胞的增殖并诱导凋亡。

宫颈癌组织中DACT2启动子甲基化与宫颈癌细胞侵袭和转移的关联

目的:探究宫颈癌组织中β-环连蛋白抑制基因2(DACT2)启动子甲基化与宫颈癌细胞侵袭和转移的相关性。方法:选择2020年1月—2022年3月在南阳市第一人民医院就诊的60例宫颈癌患者作为观察组,再选择同期60例健康体检者作为对照组,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和实时荧光定量RT-PCR检测DACT2 mRNA的表达,并对DACT2进行免疫组化观察;通过甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和亚硫酸氢盐基因组测序(BGS)分析DACT甲基化水平。采用Pearson检验法,分析DACT2启动子甲基化与宫颈癌细胞侵袭和转移的关联性。结果:对比宫颈癌患者的病理特征中分期、有无细胞转移以及宫颈浸润深度患者所占百分比,差异有统计学意义(t=4.747、5.368、0.834,P<0.05),而年龄和肿瘤大小比较,差异无统计学意义(t=1.004、0.895,P>0.05);宫颈癌组织、癌旁组织和正常组织中DACT2去甲基化发生率分别为45.00%、6.67%和5.00%,差异有统计学意义(χ^(2)=26.454,P<0.05);宫颈癌甲基化组DACT2 mRNA和蛋白表达水平显著低于宫颈癌非甲基化组,差异有统计学意义(t=11.332、8.543,P<0.05);相关性分析结果表明,DACT2启动子甲基化是引发宫颈癌细胞侵袭和转移的因素,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:宫颈癌细胞侵袭和转移主要影响因素就是DACT2启动子甲基化,且DACT2启动子甲基化率越高,细胞侵袭和转移程度就越高。因此临床应密切监测患者DACT2启动子甲基化情况,有助于优化宫颈癌患者的治疗方案。

枸杞多糖的硒化及其对人宫颈癌细胞的抑制作用

在硝酸催化作用下,利用亚硒酸钠对枸杞多糖进行分子修饰,合成硒化枸杞多糖,反应条件为硝酸体积分数0.5%,70℃反应10h,透析24h。采用体外抗肿瘤实验测定硒化枸杞多糖对人宫颈癌细胞生长的抑制作用。结果显示硒化枸杞多糖对人宫颈癌细胞具有一定的抑制作用,与未硒化的枸杞多糖相比有显著性差异,且呈一定的剂量依赖性。

姜黄素对宫颈癌细胞系中c-Jun及JAK-STAT信号传导通路的影响机制研究

目的:探讨姜黄素对宫颈癌细胞系中c-Jun及JAK-STAT信号传导通路的影响机制。方法:将宫颈癌Hela细胞分为不同浓度(5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L)实验组和对照组,实验组用不同浓度的姜黄素进行处理,对照组不予处理。采用MTT法检测各组Hela细胞增殖抑制率,Western blot法检测细胞JAK1、JAK2、STAT3、c-Fos及c-Jun蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)法检测细胞JAK1、JAK2、STAT3 mRNA相对表达量。结果:与对照组比较,姜黄素作用24 h、48 h、72 h后,10μmol/L组、25μmol/L组、50μmol/L组细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05)。与对照组比较,10μmol/L组、25μmol/L组、50μmol/L组细胞c-Fos、c-Jun蛋白表达水平及JAK1、JAK2、STAT3 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(均P<0.05),且药物浓度越高,对相关基因和蛋白表达的抑制作用越明显。结论:姜黄素能够地抑制宫颈癌Hela细胞增殖,且存在剂量和时间依赖性,其作用机制可能与下调c-Fos及c-Jun蛋白表达,降低细胞内JAK-STAT信号传导通路活性有关。

肉桂抑制人宫颈癌细胞生长增殖的体外研究

目的:研究肉桂对人宫颈癌细胞生长的影响。方法:肉桂水煎液作用于宫颈癌细胞后,CCK-8法检测细胞增殖和贴壁情况,划痕实验分析细胞的迁移能力,流式细胞术分析细胞周期。结果:作用48h后,高、中、低浓度肉桂组宫颈癌细胞生长抑制率分别为97.12%、24.58%、15.40%;贴壁率为48.3%,与对照组相比明显减少(P<0.05),且明显降低细胞的迁移(P<0.05);FCM显示细胞周期移行被阻滞于G2期。结论:肉桂对体外人宫颈癌细胞增殖有明显抑制作用,并可降低肿瘤细胞贴壁率和迁移能力,阻滞细胞周期于G2期。

5-氮胞苷对宫颈癌细胞系DAPK1异常甲基化的影响

目的 观察宫颈癌细胞系SiHa及HeLa中凋亡相关蛋白激酶 1(DAPK1)的表达与甲基化修饰之间的相关性,以及5 氮胞苷对细胞DAPK1表达和生长的影响。方法 应用甲基化特异性PCR法分析细胞中DAPK1的甲基化状态;采用RT- PCR及免疫组化SABC法检测不同浓度 5- 氮胞苷干预对宫颈癌细胞 DAPK1 mRNA及蛋白表达的影响;MTT法观察5 -氮胞苷对细胞增殖的影响。结果 DAPK1基因在宫颈癌细胞 SiHa中有甲基化修饰,5- 氮胞苷干预能使其甲基化的DAPK1基因重新表达并抑制细胞生长。结论 DAPK1 的甲基化修饰是宫颈癌发生重要机制之一,5 -氮胞苷能使甲基化的DAPK1去除甲基化修饰,重新表达并恢复抑癌作用。

利用斑马鱼模型研究芦荟大黄素对宫颈癌细胞SiHa的抑制作用

通过细胞增殖实验(MTT)研究不同浓度芦荟大黄素(Aloe emodin,AE)对人宫颈癌细胞Si Ha生长的抑制作用,并将Si Ha细胞注入48 hpf的斑马鱼胚胎卵黄囊,建立斑马鱼移植瘤模型,然后用不同浓度AE进行处理,考察肿瘤细胞在斑马鱼体内的增殖和迁移情况。结果显示,AE对Si Ha细胞的生长抑制率随浓度和作用时间的增加而呈明显上升趋势,表现出一定的浓度-时间-效应依赖关系;体内实验表明AE对斑马鱼移植瘤的增殖和转移具有抑制作用。本研究表明,AE具有开发成抗宫颈癌药物的潜能,同时斑马鱼移植瘤模型也可以成为宫颈癌研究和药物评价的重要模型。

CO_2对人宫颈癌细胞株CASKI的增殖及CDK4和Cyclin D1表达的研究

目的:探讨腹腔镜二氧化碳(CO2)气腹对宫颈癌细胞体外生长的影响。方法:体外培养人宫颈癌细胞株Caski,以14mmHg气压的CO2处理2h,用四唑盐比色试验(MTT)、流式细胞术(FCM)和免疫细胞化学法检测Caski细胞外生长情况、细胞周期变化及周期相关蛋白CDK4和Cyclin D1的表达水平。结果:CO2处理后Caski细胞增殖加快,细胞周期中处于增殖期的细胞比例增高,周期相关蛋白CDK4和Cyclin D1的表达显著增加。结论:CO2可以促进Caski细胞的增殖。

shRNA干扰HIF-1α对人宫颈癌细胞黏附分子表达的影响

目的:在细胞和移植瘤水平研究shRNA干扰低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)对宫颈腺癌HeLa细胞中黏附分子CD44v6及上皮型钙黏素(E-cadherin)表达的影响。方法:将人宫颈癌Hela细胞株(记为H0细胞)、转染pGenesil-1空白质粒的HeLa细胞株(记为H1细胞)及转染HIF-1α-shRNA质粒的HeLa细胞株(记为H2细胞)分别行常氧培养及低氧(1%O2)培养,应用Western blotting检测每组HeLa细胞中HIF-1α、CD44v6、E-cadherin及β连接素(β-catenin)在细胞水平的表达情况,应用免疫组织化学法检测HIF-1α、CD44v6、E-cadherin及β-catenin在上述3种HeLa细胞裸鼠移植瘤模型瘤组织水平的表达情况。结果:Western blotting分析显示,H0和H1细胞低氧组检测到HIF-1α、β-catenin、CD44v6蛋白呈强阳性,而E-cadherin表达减弱;常氧状态下H0、H1和H2组及低氧下H2组HIF-1α无表达、E-cadherin表达呈阳性。免疫组化分析发现H0及H1组移植瘤组织中HIF-1α、E-cadherin、β-catenin及CD44v6的表达分别为0.651±0.057、0.198±0.015、0.465±0.061及0.687±0.102,0.671±0.069、0.201±0.020、0.452±0.038及0.701±0.071,H2组分别为0.194±0.023、0.548±0.045、0.421±0.052及0.187±0.057,H2组与H0和H1组间HIF-1α、E-cadherin、及CD44v6表达的差异有统计学意义(P<0.05);相关性分析提示HIF-1α与E-cadherin、CD44v6的表达有一定相关性。结论:通过shRNA干扰抑制人宫颈癌HeLa细胞HIF-1α,可一定程度上下调低氧环境中宫颈癌HeLa细胞黏附分子CD44v6及上调E-cadherin的表达。

嗜酸乳杆菌作用人巨噬细胞后对其抗宫颈癌细胞作用影响的研究

目的诱导获得人外周血巨噬细胞(MΦ),研究嗜酸乳杆菌作用MΦ后对其抗肿瘤效应的影响及机制。方法自正常人外周血分离获得单核细胞,体外rhGM-CSF诱导培养,观察细胞形态并检测其相关表型;利用MTT法检测所诱导MΦ对宫颈癌细胞HeLa的直接抑瘤效应;ELISA法检测其培养上清中TNF-α及IL-12的含量。结果诱导7d的贴壁细胞具有典型的MΦ形态,流式分析显示为分化成熟的MΦ;体外细胞毒实验显示:嗜酸乳杆菌活菌状态和热灭活状态以10∶1、1∶1与MΦ相互作用后能够显著增强MΦ对HeLa细胞的杀伤作用(P<0.05),激活后的MΦ在一定效靶比为10∶1时其肿瘤抑制率最大,与LPS阳性对照相比,其抗瘤活性差异不存在显著性(P>0.05);经嗜酸乳杆菌活菌和热灭活菌作用的MΦ能显著提高IL-12和TNF-α两种细胞因子的分泌量,而且存在剂量依赖性,与空白对照组比较差异存在显著性(P<0.05)。结论两种生物状态的嗜酸乳杆菌均能够增强人MΦ抗宫颈癌细胞作用。

小檗碱对人宫颈癌细胞生物学行为及裸鼠成瘤的影响

目的:研究小檗碱对人宫颈癌细胞生物学行为及裸鼠成瘤的影响.方法:将不同浓度小檗碱(5、20、40mg/L)作用于HeLa及CaSki细胞,MTT法检测HeLa及CaSki细胞的增殖能力;光学显微镜观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;侵袭及迁移实验研究细胞侵袭和迁移能力;Western blot法检测细胞中Bcl-2、Bax及MMP-9表达.显微镜下观察HeLa及CaSki细胞中NF-κB p65蛋白阳性表达情况并计算阳性表达率.建立宫颈癌裸鼠模型,腹腔给予不同浓度小檗碱(10、30、50mg/L),观察裸鼠肿瘤体积变化及肿瘤组织中Bcl-2、Bax、MMP-9、NF-κB p65阳性表达情况.结果:小檗碱对HeLa及CaSki细胞增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性,细胞抑制率随着作用时间及作用剂量的增加而升高.小檗碱促进HeLa及CaSki细胞凋亡、降低细胞侵袭迁移能力.随着小檗碱浓度增加,HeLa及CaSki细胞内Bax蛋白表达量增加,而Bcl-2、MMP-9、NF-κB p65蛋白表达量显著降低.小檗碱能明显降低肿瘤体积,且呈剂量依赖性降低Bcl-2、MMP-9、NF-κB p65蛋白表达,提高Bax蛋白表达.结论:小檗碱能有效抑制宫颈癌增殖及侵袭转移并诱导其发生凋亡,其作用机制可能与降低Bcl-2、MMP-9、NF-κB p65表达及提高Bax表达有关.

大豆异黄酮及其衍生物对宫颈癌细胞增殖的影响

近年来的研究发现大豆异黄酮及其衍生物具有抗癌、抗氧化、抗突变等多种药理学作用。目前宫颈癌仍是严重威胁广大女性生命的恶性肿瘤之一,因此开发新的药物非常重要。本文对大豆异黄酮及其衍生物对宫颈癌细胞(Hela、CaSki、Me180、Siha)增殖方面的影响进行了综述,并对其作用途径进行了归纳总结,为研究开发宫颈癌药物提供了新思路。

雷氏大疣蛛毒素组分13对人宫颈癌细胞增殖的抑制作用

目的探讨雷氏大疣蛛毒素的分离及其分离组分对人宫颈癌Hela细胞体外增殖的抑制作用。方法采用反相层析(RPC)法分离纯化雷氏大疣蛛毒素各组分,MTT法测定各分离组分对Hela细胞增殖的影响,对其有效组分13进行量效、时效关系测定;SDS-PAGE测定该有效组分的分子量范围。结果雷氏大疣蛛毒素经反相层析分离得到的组分13对Hela细胞增殖有较强的抑制作用,而且抑制作用呈现良好的量效、时效关系;IC50为24μg/mL。形态学观察到细胞凋亡。分子量约为80KDa。结论雷氏大疣蛛毒素组分13可以有效抑制人宫颈癌Hela细胞株的增殖。

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对宫颈癌细胞的基因表达调控

目的:探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-d C)对宫颈癌细胞p16和MGMT基因表达的调控作用。方法:用5-Aza-d C处理4种宫颈癌细胞(He La、Si Ha、C33A和Ca Ski)后,MSP检测抑癌基因P16和MGMT的甲基化变化,并用荧光定量PCR和Western blot检测P16和MGMT的表达情况,同时用MTT和Annexin V-FITC/PI双染检测细胞增殖和凋亡。结果 :P16和MGMT在4种宫颈癌细胞中均存在甲基化。用5-Azad C处理细胞后,甲基化程度均被逆转。5-Aza-d C抑制P16和MGMT在宫颈癌细胞中的表达。5-Aza-d C抑制宫颈癌细胞的增殖并促进其凋亡。结论:P16和MGMT虽在宫颈癌细胞中存在甲基化,但其表达程度仍然较高,推测P16和MGMT的表达调控可能还受其他因素的影响。5-Aza-d C能抑制宫颈癌细胞的生长。5-Aza-d C虽然可以使宫颈癌细胞中P16和MGMT的甲基化程度得到逆转,但对P16和MGMT的表达却是抑制的,尚需更多实验验证并发掘其原因及机制。