OmniLog TM微生物鉴定系统在青海高原野生型鼠疫噬菌体宿主谱检测中的应用研究

目的采用两种微量法检测青海高原野生型鼠疫噬菌体的宿主谱,为今后噬菌体生态学研究和基于宿主范围噬菌体分类研究提供科学依据。方法基于OmniLog TM微生物鉴定系统微量法和微量点滴法,检测3株鼠疫噬菌体对2株鼠疫耶尔森菌(鼠疫疫苗株EV 76、614F)和4株非鼠疫耶尔森菌(假结核耶尔森菌PTB3、PTB5、大肠杆菌V517、小肠结肠炎耶尔森菌52302-2)的裂解情况。结果476号、087号和072204号鼠疫噬菌体均能成功感染鼠疫疫苗株EV 76、614F并依赖其生长繁殖,且基于OmniLog TM系统33℃培养48 h也能够观察到试验孔中四唑类染料颜色随着噬菌体数量的增加和宿主菌数量的减少而变淡。利用微量点滴法检测3株鼠疫噬菌体对4株非鼠疫耶尔森菌敏感性结果显示,28℃和37℃时476号鼠疫噬菌体对假结核耶尔森菌PTB5敏感,而087号和072204号对其不敏感;476号、087号和072204号鼠疫噬菌体对假结核耶尔森菌PTB3、大肠杆菌V517、小肠结肠炎耶尔森菌52302-2这3株非鼠疫耶尔森菌均不敏感,且基于OmniLog TM系统观察到试验孔与对照孔中细菌生长曲线和四唑类染料颜色分别呈现相似对应的结果。然而,以鼠疫疫苗株EV 76、614F为宿主菌,37℃时072204号鼠疫噬菌体微量点滴于固体培养基上不显示噬菌斑。结论基于OmniLog TM检测系统的噬菌体宿主范围测定法可以作为一种替代传统检测宿主谱的测定方法,在噬菌体与宿主菌相互作用研究中具有较好的应用价值。

1株宽宿主谱大肠杆菌噬菌体的生物学特性观察

目的 观察 1株自污水中分离的宽宿主谱大肠杆菌噬菌体的生物学特性。方法 采用宿主范围测定、噬菌斑计数、负染色电镜观察、血清中和试验及血清交叉中和试验、一步生长实验等技术观察分离的噬菌体。结果 ①宽宿主谱大肠杆菌噬菌体可裂解五株大肠杆菌 ;②针对不同宿主菌其噬菌斑形态、大小、透明度、边缘界限、中心透明区及晕环均发生相应变化 ;③电镜超微结构显示此噬菌体为直径 2 0～ 40nm的微球形颗粒 ,棱角不明显 ,偶见短尾 ;④噬菌体的抗血清Κ值为 41 5 ,与f2 噬菌体血清学相关度为 0 .3 8;⑤潜伏期为 3 0～ 3 5min ,裂解量为 10 4。结论 分离所得的噬菌体是 1株大肠杆菌宽宿主谱噬菌体 ,为直径 2 0～ 40nm的圆形颗粒 ,其与f2 噬菌体的血清相关度较低 。

大肠埃希菌宽宿主谱噬菌体生物学特性的比较研究

目的比较研究1株宿主谱发生突变的宽宿主范围噬菌体与其原始野生型单一宿主谱噬菌体株的生物学特性改变，探讨噬菌体识别特异性机制和将噬菌体作为生物消毒剂，应用于环境污水净化的可行性。方法利用大肠埃希菌285菌株自环境污水中筛选到1株具有宽宿主范围的噬菌体，与野生型噬菌体f2比较观察，分析宿主谱改变对噬菌体的生物学特性的影响。结果两噬菌体电镜下形态均为微球形且棱角不明显，但（噬菌体XY）颗粒偶见短尾，大小形态不均一；噬菌体f2和噬菌体XY的抗血清K值分别为30．1和41．5；噬菌体XY与噬菌体f2的相关度较低（K值比〈O．45）；结果显示，噬菌体XY较噬菌体f2具有吸附速率高、潜伏期短、裂解量大的特点；两噬菌体均为约6000bp的单链RNA噬菌体，但宿主谱改变前后它们的RAPD-PCR及RT-PCR差异有统计学意义；噬菌体SY对环境水样本中的大肠埃希菌杀灭率可达到36．75％～56．28％，而噬菌体f2则为19．19％～35．06％（P〈0．01）。结论宽宿主谱噬菌体较噬菌体f2在超微形态、一步生长曲线、抗原性等方面差异均有统计学意义；微生物杀灭效果也明显高于噬菌体f2（P〈O．01）；核酸分析证实其宿主特异性裂解效应已从基因水平发生了变化。

一株宽宿主谱裂解性大肠杆菌噬菌体的进化分析

裂解性噬菌体能够特异性裂解细菌,本研究分析了一株从自然界中分离的宽宿主谱裂解性大肠杆菌噬菌体的种属和进化关系。前期用Adams双层平板琼脂法从猪场污水中分离纯化出一株裂解性噬菌体v B_Eco M_JS09,裂解谱分析能够裂解禽致病性大肠杆菌和产肠毒素大肠杆菌。扩增分析gene18、gene 23序列,并根据gp18和gp23氨基酸序列构建系统进化树,分析JS09的遗传进化关系。结果表明噬菌体v B_Eco M_JS09基因组为ds DNA,属于有尾噬菌体目、肌尾噬菌体科、T4-like噬菌体、T-evens亚群。其gp18氨基酸序列与大肠杆菌噬菌体RB69同源性最高,为100%;gp23氨基酸序列与大肠杆菌T4噬菌体同源性最高为96%。该结果为禽致病性大肠杆菌和产肠毒素大肠杆菌的防控提供了生物学基础。

人兽共患痘病毒病流行现状及其宿主谱研究进展

以天花病毒（Variolavirus，VARV）为代表的痘病毒（Poxvirus）是人类最早认识并深受其害的病毒家族，同时也是严重影响公共卫生安全的重要病原。根据痘病毒的自然宿主、病毒特征以及特异性抗原的差异，可将痘病毒科（Poxviridae）分为两个亚科。

一种简便的拓宽噬菌体宿主谱方法的建立及其结果分析

为拓宽噬菌体宿主谱,本研究通过将产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)特异性噬菌体v B_Eco M_JS09与肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7细菌进行多轮共培养,筛选到了6株能够同时裂解ETEC和EHEC O157∶H7的噬菌体,并多次传代和宿主谱鉴定,选择其中1株噬菌体Bp47-12鉴定其生物学特性。双层琼脂平板试验结果表明,噬菌体Bp47-12在平板上均呈现出了典型的裂解性噬菌体特征,空斑透亮,边缘整齐清晰,无晕环噬菌斑;宿主谱鉴定结果表明,ETEC和EHEC O157∶H7菌株均对噬菌体Bp47-12敏感,实现了噬菌体在ETEC和EHEC O157∶H7菌株之间的交叉裂解反应,拓宽了亲本噬菌体JS09的宿主谱;噬菌体Bp47-12能够耐受60℃左右高温,在p H值3~9时效价稳定;最佳感染复数为1;潜伏期为30 min,爆发期为70 min,平均爆发量分别为15;体外裂解试验结果表明,在5 h之内噬菌体Bp47-12能够有效裂解ETEC和EHEC O157∶H7菌株,OD600值下降约0.66;吸附曲线结果表明,在25 min之内,效价为105 PFU/mL的噬菌体Bp47-12能够完全吸附到宿主菌表面。本研究具有潜在的应用价值,也为拓宽裂解性噬菌体宿主谱和应用噬菌体提供了科学依据。

1株宽宿主谱的阪崎肠杆菌噬菌体生物特性分析及其在乳制品中的应用

以阪崎肠杆菌菌株ATCC25944为宿主菌从河涌水中分离1株噬菌体TBC-1,具有较宽的阪崎肠杆菌宿主范围。电镜形态学及生物特性结果显示:此噬菌体衣壳为二十面体,具有可收缩性尾部;该噬菌体的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.001,一步生长曲线显示其潜伏期20 min,爆发期50 min;爆发量为100 PFU/cell;该噬菌体在温度区间40~50℃及pH 4~10之间可以保持其效价稳定;对阪崎肠杆菌有较好的裂解杀菌效果,并且MOI越高抑制效果越好。全基因组测序分析显示:该噬菌体的基因组为双链DNA,全基因组分子质量85313 bp,平均GC含量40.65%,共有118个蛋白编码区,24个tRNA。应用结果显示,TBC-1对牛乳中2种阪崎肠杆菌的抑制效果:室温(25℃)培育3 h,在MOI为106时,能将102 CFU/mL菌抑制到检出限以下;TBC-1对乳粉中2种阪崎肠杆菌的抑制效果:在25℃与37℃培育3 h,ATCCBAA894菌量均减少到检出限以下,在25℃培育3~12 h,ATCC25944菌量均在检出限以下。本研究表明噬菌体TBC-1具有宽宿主谱系特性、稳定的裂解杀菌以及在牛乳与乳粉中对不同的阪崎肠杆菌均有良好的抑制作用,有潜力成为阪崎肠杆菌生物抑制剂。

噬菌体受体结合蛋白及其宿主谱扩展的相关研究进展

噬菌体是如今地球上种类最多、分布最广的生物之一,在清除细菌尤其是针对目前广泛出现的多重耐药细菌上具有巨大优势。目前多种噬菌体产品已在食品原料、养殖动物、食源性致病菌检测及即食食品杀菌等领域投入使用且效果良好,但天然噬菌体狭窄的宿主范围与复杂的宿主互作机制很大程度上限制了新型噬菌体抑菌剂的开发。噬菌体与宿主细菌的特异性结合依赖于噬菌体表面的受体结合蛋白,对各种不同的噬菌体受体结合蛋白的结构功能与作用机制进行研究有助于进一步了解噬菌体与细菌的互作过程,在此基础上利用诱导培养及基因工程等方法对噬菌体受体结合蛋白进行改造以获得优质的宽谱噬菌体已经成为噬菌体研究的重要内容之一。本文对噬菌体受体结合蛋白的不同结构与各种宿主谱扩展方案的相关研究进行总结,为食品工业中噬菌体的进一步开发与应用提供理论支撑。

大肠杆菌噬菌体分离及宿主谱研究

噬菌体具有特异性强、无残留、对人畜无感染性、容易筛选获得等独特优势,在无抗养殖趋势下潜力巨大。本研究从鸡场采集粪便样本,从中分离出大肠杆菌,再从粪便样本中分离、纯化出噬菌体,测定纯化后噬菌体的效价,并对噬菌体的噬菌谱进行研究。结果表明:噬菌体可以裂解大肠杆菌;分离到的噬菌体为宽宿主谱噬菌体,但有一定的局限性。

大肠杆菌P88噬菌体gp52和gp53基因对其裂解活性和宿主谱形成影响的研究

为探究大肠杆菌溶原性噬菌体P88中非结构与功能基因gp52和gp53对其裂解活性和宿主谱形成的影响,本研究在P88宿主细菌K88基因组中对其进行基因工程操作,然后诱导出相应噬菌体进行功能研究。首先在大肠杆菌Red同源重组质粒p KD46基础上,融合p ST98-AS质粒的四环素抗性基因和I-Sce I核酸内切酶基因,构建缺失质粒p WRG99。利用质粒p WRG99分别构建大肠杆菌K88的gp52和gp53基因缺失突变株(Δgp52和Δgp53)并经PCR和测序鉴定。利用丝裂霉素C诱导Δgp52和Δgp53,采用双层平板法检测噬菌体的裂解活性,结果显示,Δgp52和Δgp53的诱导液可以在大肠杆菌DE048为宿主菌的平皿上形成清晰的噬菌斑,表明Δgp52和Δgp53能诱导出可以感染DE048的噬菌体(将该噬菌体命名为P88-52和P88-53),并且gp52和gp53基因缺失均不影响噬菌体P88的形成和裂解活性。将P88-52和P88-53纯化并经电镜观察,结果显示,P88-52和P88-53与野生株P88形态相似,具有P2-like噬菌体典型的肌尾和短尾丝特征,表明gp52和gp53基因缺失均不影响P88噬菌体颗粒的形态。利用P88的宿主菌对P88-52和P88-53进行宿主谱分析,结果显示,P88-52和P88-53在DE048为宿主菌的平皿上均可以形成清晰的噬菌斑,在MC1061、DH5α和BL21为宿主菌的平皿上均不能形成噬菌斑,与噬菌体P88宿主谱相同,表明gp52和gp53基因缺失均不影响P88噬菌体的宿主谱。综上所述,在宿主菌K88基因组的基础上缺失gp52和gp53基因后,诱导出的P88突变噬菌体的裂解活性和宿主谱均不受影响。本研究通过在宿主菌中对前噬菌体基因编辑来研究溶原性噬菌体的基因功能,为其他溶原性噬菌体基因功能的研究提供了参考依据。

编码志贺毒素噬菌体的多样性与宿主谱[英]／Shantini D…／／Infect Imnlun．

在美国，每年由大肠埃希菌O157：H7引起的感染报道为73000多病例，疾病表现为水样腹泻、血性腹泻以致出现血尿综合征，其主要致病因子是志贺毒素(Stx)。大肠埃希菌(STEC)如O157：H7产生的Stx有2种：Stx1及Stx2。Stx1与志贺痢疾杆菌产生的志贺毒素基本相同。Stx2与Stx1在氨基酸水平有55％同源性。STEC可产生Stx1或Stx2，或两者都产生，但重症疾病与Stx2有关。Stx是由溶源性噬菌体编码的。Stx2的编码噬菌体有高度多样性，从同一次暴发流行中分离到的O157：H7菌株，

一株宽宿主谱大肠埃希菌噬菌体的RNA比较分析及其环境微生物杀灭效应观察

目的通过比较研究一株分离自医院污水的宽宿主范围大肠埃希菌(E.coli)噬菌体与野生型单一宿主谱E.coli噬菌体的核酸序列和微生物杀灭效应等生物学特性的改变探讨噬菌体识别特异性机制和将噬菌体作为生物消毒剂应用于环境污水净化的可行性。方法采用抗体沉淀盐酸胍一步法分别提取单一宿主谱E.coli噬菌体f2株及宽宿主谱E.coli噬菌体株的RNA,通过琼脂糖凝胶电泳鉴定其纯度;采用简并引物逆转录聚合酶链反应(RTPCR)及随机引物随机扩增多态性DNA(RAPD)PCR比较分析噬菌体宿主谱改变时核酸序列组成的变化;通过以上两噬菌体对环境样本中活菌和E.coli的杀灭效果的观察,比较分析宿主谱改变对噬菌体的微生物杀灭效应这一生物学特性的影响。结果噬菌体核酸分析试验证实,f2噬菌体及宽噬噬菌体均为6000bp左右的单链RNA噬菌体。RAPDPCR结果显示,两噬菌体基因cDNA扩增出的RAPDDNA片段有明显的差异,其中26条为可区分的DNA带型。利用简并引物进行的RTPCR反应显示,噬菌体f2cDNA在450bp附近出现重复性较好的扩增片段,而宽噬噬菌体cDNA在相同条件下未出现扩增产物。环境水样本微生物杀灭试验结果显示,宽宿主谱株噬菌体对环境水样本中的E.coli杀灭率为36.75%～56.28%,对水样本中活菌杀灭率为30.84%～47.96%;而噬菌体f2对环境水?

噬菌体宿主谱改变核酸分析研究

目的探讨一种高效提取RNA噬菌体核酸的新方法,并通过核酸分析从基因水平了解宿主谱改变对噬菌体核酸的影响。方法采用传统的聚乙二醇(PEG)沉淀蛋白酶消化酸性酚提取法、Tripure提取法以及抗体沉淀盐酸胍一步法3种方法分别提取大肠埃希菌f2噬菌体及其宽宿主谱株的RNA,通过琼脂糖凝胶电泳鉴定其纯度。采用兼并引物逆转录聚合酶链反应(RTPCR)及随机引物随机扩增多态性DNA聚合酶链反应(RAPDPCR)比较分析噬菌体宿主谱改变前后其核酸序列组成的变化。结果抗体沉淀盐酸胍一步法提取的噬菌体核酸具纯度高、条带完整等优点;f2噬菌体及其宽噬株均为6000bp左右的单链RNA噬菌体;两噬菌体基因cDNA扩增出的RAPDDNA片段差异明显,其中26条为可区分的DNA带型;噬菌体f2cDNA在450bp附近出现重复性较好的扩增片段,而其宽噬株cDNA在相同条件下未出现扩增产物。结论抗体沉淀盐酸胍一步法较其他两种RNA病毒核酸提取法具有明显的优势,具有应用价值的新的RNA噬菌体核酸的提取方法;宽宿主谱噬菌体的宿主特异性裂解效应已从基因水平发生了变化。

1株可裂解肠道内和肠道外大肠杆菌的宽宿主谱噬菌体的分离与特性分析

本试验从猪粪中分离得1株大肠杆菌的烈性噬菌体ΦNJ14.用实验室保存的大肠杆菌对其裂解谱进行检测,发现ΦNJ14能裂解27株大肠杆菌,是一株对肠道内和肠道外大肠杆菌均有效的宽宿主谱的噬菌体.电镜观察结果表明,ΦNJ14头部呈狭长的六面体,有一个可伸缩的尾部,属于肌尾噬菌体科成员.ΦNJ14的生物学特性鉴定结果显示,其效价为1.28×10^10PFU/mL,最佳感染复数（MOI）为100;对60℃以下的温度具有较好的耐受力,在70℃培养20min后活力显著下降;ΦNJ14对碱的耐受力较强,在pH4-11之间都能保持较高的活力;一步生长曲线检测结果显示,ΦNJ14潜伏期为20 min,复制周期为140 min.提示噬菌体ΦNJ14对致病性大肠杆菌具有一定的防控潜力.

山东地区1例肉鸡养殖场大肠杆菌噬菌体的分离和解谱鉴定

噬菌体是天然的抗菌剂,可用于抵制细菌感染,在裂解人类、动物体中的细菌以及消除食品、公共环境等领域中的细菌污染方面均具有重要作用。以从山东地区肉鸡养殖场采集的24株鸡源大肠杆菌为宿主菌,采用双层平板法从肉鸡垫料样本中进行噬菌体的分离,并进行宿主谱测定。结果分离到2株噬菌体,BP14对大肠杆菌的裂解率为8.3%,BP13对大肠杆菌的的裂解率为50%。宽宿主谱噬菌体的分离将为肉鸡大肠杆菌病的防治奠定基础。

医院内污水中噬菌体的分离及其生物学特性观察

目的 :通过噬菌体特性观察 ,为了解噬菌体吸附特异性及溶菌机理的分子生物学机制奠定物质基础 .方法 :利用标准菌株从污水中分离特异性噬菌斑 ,纯化增殖后得到其相应噬菌体 .经过高滴度噬菌体与其非特异性宿主菌的混合培养 ,筛选出宿主谱特异性发生突变的具有宽噬性的噬菌体 .结果 :从污水中分离出 12种特异性噬菌体 ,发现了可裂解同一菌属的不同菌种的宽噬噬菌体 ,改变了噬菌体专一宿主谱这一特性 .结论 :针对同一菌属中不同菌种的宽噬噬菌体具有较高的稳定性及裂菌滴度 ,为探索噬菌体寄生的基因控制及特异吸附的分子生物学机制奠定了基础 ,将人工改造噬菌体 。

瘟热病毒的研究现状

瘟热病毒是副粘病毒科（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）麻疹病毒属（Ｍｏｒｂｉｌｉｖｉｒｕｓ）内对食肉目、鳍足目等动物致病的一类相关病原，包括犬瘟热病毒（Ｃａｎｉｎｅｄｉｓ－ｔｅｍｐｅｒｖｉｒｕｓ，ＣＤＶ）、海豹瘟热病毒（Ｐｈｏｃｉｎｅｄｉｓｔｅｍ－ｐ...

噬菌体治疗细菌感染的研究

噬菌体用于抗菌治疗和预防细菌感染已有很长的历史。但是许多因素阻碍噬菌体治疗的研究和发展 ,尤其是抗生素的出现之后 ,人们忽略了对噬菌体治疗的正确认识。近来 ,对噬菌体的动物实验研究以及对噬菌体生物特性的了解表明噬菌体在一定条件下可用作抗菌药。随着分子生物学的不断发展 ,人们对噬菌体的宿主谱和裂解方式等方面进行了改造 ,并获得了许多令人振奋的结果 。

H_9亚型禽流感病毒分型单克隆抗体的研制及初步应用

禽流感分型单克隆抗体在禽流感的检疫、监测、预警预报工作中发挥重要作用。作者以 Ｈ_9 Ｎ_2 亚型禽流感病毒 Ｆ株为免疫原获得了特异性优、 血凝抑制效价高的单克隆抗体，为 Ｈ_9 亚型禽流感病毒的分型提供了良好的诊断试剂。