绿茶及红茶中游离氨基酸对映异构体的分布特征及呈味特性

茶叶中大部分游离氨基酸具有滋味特征及阈值迥异的对映异构体,查明绿茶及红茶中各游离氨基酸对映异构体的分布特征及其对茶汤滋味的贡献,有助于丰富茶叶化学知识体系,为茶叶滋味品质的提升与定向调控提供理论依据。采用酯化-五氟丙酰化法结合手性气相色谱-质谱联用技术(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)查明了10种绿茶及8种红茶中的15对重要游离氨基酸对映异构体的分布特征;采用浓度模拟及定量描述分析法,探明了各游离氨基酸对映异构体的呈味特性,并初步揭示了各氨基酸对映异构体对绿茶及红茶茶汤滋味的影响。分析结果表明,L-谷氨酸混合物、L-酪氨酸、L-丝氨酸在绿茶和红茶中存在显著性差异(P<0.05),其中L-酪氨酸与L-丝氨酸在红茶中的含量显著高于绿茶,而L-谷氨酸混合物则呈现相反的分布趋势。定量描述分析结果表明,各对映异构体主要呈现鲜、甜、苦、硫黄等滋味特征,L-谷氨酸(鲜)、L-色氨酸(苦)、L-谷氨酰胺(鲜)、D-色氨酸(甜)等呈味强度最高;同一氨基酸的不同对映异构体可能呈现截然相反的滋味特征,如色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸及亮氨酸的D-异构体呈现愉悦的甜味特征,而L-异构体呈现较为明显的苦味。氨基酸模拟液与绿茶茶汤的滋味审评结果表明,L-谷氨酸、L-谷氨酰胺及L-天冬氨酸可能对绿茶的鲜味特征起到较为重要的作用,L-丙氨酸及D-苯丙氨酸可能对绿茶的甜味特征起到一定促进作用,而L-苯丙氨酸及L-色氨酸可能参与绿茶苦味特征的形成;以上氨基酸对映异构体同样可能对红茶的滋味形成起到重要作用,而L-丝氨酸及L-酪氨酸等对红茶的甜味和苦味有一定贡献。

超临界流体色谱法测定吲达帕胺及其对映异构体含量

目的建立有效分离吲达帕胺对映异构体并测定其含量的超临界流体色谱法。方法色谱柱为Daicel IB N-5柱(250 mm×4.6 mm,5µm),流动相为二氧化碳-0.1%二乙醇胺甲醇溶液(70∶30,V/V),背压为150 bar,流速为3.0 mL/min,检测波长为243 nm,柱温为40℃,进样量为5µL。结果吲达帕胺及其对映异构体分离度良好,5 min内均已出峰完全。两者质量浓度均在2.48~37.10µg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9999,n=6);检测限均为0.012µg/mL,定量限均为0.05µg/mL;精密度、稳定性试验结果的RSD均小于1.0%;耐用性良好;平均回收率分别为100.75%和100.90%,RSD分别为1.00%和0.72%(n=9)。结论建立的超临界流体色谱法结果准确、耐用性较好,能有效测定吲达帕胺片中吲达帕胺及其对映异构体的含量。

高效液相色谱法拆分并测定盐酸索他洛尔对映异构体

目的建立高效液相色谱法拆分并测定盐酸索他洛尔对映异构体的含量。方法采用CHIRALPAK AD-H手性固定相色谱柱(5μm,250 mm×4.6 mm),流动相为正己烷-乙醇(80︰20),等度洗脱,检测波长为225 nm,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为25℃,进样量为10μL。结果盐酸索他洛尔2种对映异构体分离度良好,2个色谱峰之间的分离度大于2.0,2种对映异构体在1.005~100.5μg·mL-1和1.073~107.3μg·mL-1的浓度范围内线性关系良好(r=0.999),平均回收率分别为97.05%[相对标准偏差(RSD)=2.26%]、98.24%(RSD=2.80%)。2种异构体的检测限均为0.1μg·mL-1,定量限均为0.3μg·mL-1,精密度试验、重复性试验与稳定性试验均良好。结论所建立的方法准确可靠,灵敏度高,可用于盐酸索他洛尔对映异构体的拆分与含量测定。

HPLC-CAD法测定普瑞巴林口服溶液中的对映异构体

目的:建立一个可检测普瑞巴林口服溶液中的普瑞巴林对映异构体含量的方法。方法:选择CHIRALPAK ZWIX(+),4.0 mm×150 mm,3μm色谱柱;以0.01 mol/L醋酸铵缓冲液(pH值5.5)-乙醇(20∶80,体积比)为流动相,流速为0.5 mL·min^(-1),等度洗脱;柱温为20℃;采用CAD检测器,蒸发管温度为35℃。结果:R-普瑞巴林峰与普瑞巴林峰和各辅料峰分离度良好;最低检测量为60 ng;12份供试品加标溶液的重复性结果RSD为3.3%;R-普瑞巴林的质量浓度在2.99~22.39μg·mL^(-1)范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9991);平均回收率(n=9)为99.8%;微小改变流速、柱温、醋酸盐缓冲液pH值与蒸发管温度等色谱条件,对检测结果均无影响。结论:该方法专属性强、灵敏度与精密度高、耐用性良好,可用于测定普瑞巴林口服溶液中的普瑞巴林对映异构体含量。

气相色谱法测定(R)-(-)-缩水甘油丁酯对映异构体的方法学研究

建立气相色谱法用于测定(R)-(-)-缩水甘油丁酯中的对映异构体((S)-(+)-缩水甘油丁酯),该方法用氢火焰离子化检测器,检测器的温度设置为300℃;进样口的温度设置为220℃;使用SPB-20(体积分数20%苯基-80%二甲基聚硅氧烷)中含25%2,3-二-O-乙酰基-6-O-TBDMS-β-环糊精为固定液的毛细管柱(Supelco Beta DEX 225,30 m×0.25 mm,0.25μm),起始柱温60℃,维持时间为3 min,升温速率为每分钟5℃,升温至200℃,维持时间为5 min;分流比设置为50∶1;以氮气作为载气,以每分钟2.5 mL作为流速,进样体积1μL。(S)-(+)-缩水甘油丁酯定量限为7.5μg/mL,在质量浓度7.5~100μg/mL范围内线性关系良好,10~100μg/mL范围内三个质量浓度水平回收率在96.2%~103.1%范围内。本方法专属性强,灵敏度、准确度高,精密度、耐用性等良好,可用于(R)-(-)-缩水甘油丁酯的质量控制。

HPLC法测定乙酰半胱氨酸泡腾片的对映异构体含量

建立一个可检测乙酰半胱氨酸泡腾片中对映异构体含量的方法。采用CHIRALPAK AY-H手性色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm);以正己烷-无水乙醇-三氟乙酸(90∶10∶0.1)为流动相,等度洗脱;柱温为20℃;流速为1.0 m L·min^(-1);检测波长为216 nm。在所选定的液相色谱条件下,乙酰半胱氨酸峰与其对映异构体峰分离良好,辅料峰均不干扰对映异构体的检测;最低检测限为12.7 ng;12份加标供试品溶液的重复性结果RSD为1.9%;对映异构体的浓度在1.4879~8.9272μg·m L^(-1)范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999);微小改变流速、柱温与流动相比例等色谱条件,对检测结果均无影响。该方法专属性强、灵敏度与精密度高,耐用性良好,可用于测定乙酰半胱氨酸泡腾片中的对映异构体含量。

反相液相色谱法测定索磷布韦起始物料中的对映异构体

目的:建立索磷布韦起始物料[(2R)-2-脱氧-2-氟-2-甲基-D-赤式戊糖酸γ-内酯3,5-二苯甲酸酯]对映异构体检测方法。方法:采用CHIRALCEL OJ-RH (4.6 mm×150 mm,5μm)为色谱柱;流动相为三氟乙酸-乙腈-水(0.25∶680∶320),等度洗脱;检测波长为230 nm,流速为1.0mL/min。结果:专属性良好,对映异构体在限度浓度的20%~200%范围内线性关系良好,r=0.9999;回收率在97.7%~104.0%范围内,RSD小于10.0%(n=9);进样精密度RSD小于2.0%,中间精密度和重复性RSD值均小于10.0%;耐用性良好。结论:方法精密度好且准确度高,可用于索磷布韦的对映异构体检测。

一种阿维巴坦钠起始物料中对映异构体的测定方法

建立高效液相色谱法测定阿维巴坦钠起始物料中对映异构体的含量。方法:采用高效液相色谱法,CHIRALPAK ^(?) AY-H多糖涂敷型正相手性柱,以乙醇:甲醇:二乙胺(75:25:0.1)为流动相,流速为0.6ml/min,紫外检测器,波长210nm,柱温35℃。结果显示阿维巴坦钠起始物料中对映异构体能得到良好的分离;在0.0008mg/ml-0.0495mg/ml(相当于样品含量0.16%-9.90%)范围内浓度与峰面积线性关系良好;检测限浓度为0.0004mg/ml(0.08%),定量限浓度为0.0008mg/ml(0.16%);精密度试验中重复性与中间精密度良好,重复测定结果RSD 0.48%(n=6),0.40%(n=12);准确度试验平均回收率98.1%,回收率RSD 3.6%;流速、柱温、添加剂比例的微小变化不影响样品检测。该方法作为阿维巴坦钠起始物料中对映异构体的检测方法准确、可靠。

高效液相色谱法检测阿伐那非的对映异构体

建立正相HPLC法检测阿伐那非原料药中的对映异构体。方法 采用CHIRALCELAD-H色谱柱,以正己烷-乙醇-二乙胺(体积比40∶60∶0.1)为流动相,柱温为35℃,流速为0.7mL/min,检测波长为267nm,柱温为35℃,进样量为20μL。结果 阿伐那非对映异构体与阿伐那非等其他成分达到较好分离,质量浓度在0.09736~2.9208μg/mL范围内与峰面积成线性相关,回收率在0.08%~0.12%含量范围内良好;定量限为0.04868μg/mL(相当于样品浓度的0.01%),检测限为0.019472μg/mL(相当于样品浓度的0.004%);影响因素结果表明,阿伐那非性质稳定,不会发生非对映异构体转化。结论 本研究开发的液相色谱方法简便高效、专属性强、结果稳定准确、重复性好,可适用于阿伐那非原料药中对映异构体含量的检测和限度控制。

手性HPLC法分析双乙酰科立内酯对映异构体

建立了前列腺素中间体双乙酰科立内酯对映异构体的手性高效液相色谱测定方法。采用硅胶表面涂覆有纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的手性色谱柱(OD-H,4.6 mm×250 mm,5μm),以正己烷-异丙醇(V∶V=80∶20)为流动相,流速1.0 mL/min,柱温40℃,检测波长205 nm,外标法测定对映异构体超量值。结果双乙酰科立内酯对映异构体分离度为3.5,(+)-双乙酰科立内酯在0.199~3.980 mg/mL(R^(2)=0.9994)、(-)-双乙酰科立内酯在0.198~3.960 mg/mL(R^(2)=0.9994)浓度范围线性关系良好。(+)-双乙酰科立内酯低、中、高浓度平均加样回收率(RSD)分别为99.38%(0.43%)、99.30%(0.88%)、100.10%(0.51%),(-)-双乙酰科立内酯低、中、高浓度平均加样回收率(RSD)为99.76%(0.86%)、100.07%(0.26%)、99.27%(0.20%)。3批样品平均对映异构体超量值为4.75%、70.10%、-75.33%。方法简便、快速,能准确测定双乙酰科立内酯对映异构体超量值,为前列腺素药物手性中间体提供新的分离和检测方法。

顺式双环[3.2.0]庚-2-烯-6-酮对映异构体手性拆分及含量测定

目的高效液相色谱法拆分顺式双环[3.2.0]庚-2-烯-6-酮对映异构体并进行含量测定,同时进行含量测定的方法学研究。方法采用硅胶表面涂覆有直链淀粉-三(S)-α-甲基苯基氨基甲酸酯手性固定相,以正己烷-异丙醇(体积比95∶5)为流动相,流速0.8 mL·min^(-1),柱温25℃,检测波长210 nm,采用外标法测定顺式双环[3.2.0]庚-2-烯-6-酮对映异构体的含量,采用面积归一化法计算对映异构体超量值。结果顺式双环[3.2.0]庚-2-烯-6-酮对映异构体分离度为11.4,两个对映异构体在质量浓度2~40 mg·L^(-1)内有良好线性关系(R^(2)≥0.999),(+)-顺式双环[3.2.0]庚-2-烯-6-酮低、中、高质量浓度平均加样回收率(RSD)分别为99.16%(0.8%)、99.34%(0.8%)、100.2%(0.7%);(-)-顺式双环[3.2.0]庚-2-烯-6-酮低、中、高质量浓度平均加样回收率RSD分别为99.72%(0.9%)、100.0%(0.3%)和98.81%(0.6%)。结论该方法能够用面积归一化法准确测定顺式双环[3.2.0]庚-2-烯-6-酮对映异构体超量值,为前列腺素类药物手性中间体提供新的分离方法。

柱前手性衍生化-HPLC法测定科立内酯二醇对映异构体含量

基于柱前手性衍生化-HPLC法,以联苯-4-甲酰氯为衍生化试剂,采用硅胶表面涂覆有直链淀粉-三(s)-α-甲基苯基氨基甲酸酯手性色谱柱(AS-H,4.6 mm×250 mm,5μm),以正己烷-无水乙醇(V∶V=80∶20)为流动相,流速1 mL/min,柱温30℃,检测波长275 nm,外标法计算科立内酯二醇对映异构体超量值。结果显示,科立内酯二醇对映异构体衍生物分离度为2.8,(+)-科立内酯二醇衍生物在2.07~41.40μg/mL、(-)-科立内酯二醇衍生物在1.95~39.06μg/mL范围有良好线性关系(R2=0.9991、R2=0.9991)。(+)-科立内酯二醇衍生物低、中、高浓度平均加样回收率(RSD)分别为99.36%(0.51%)、99.24%(0.89%)、100.24%(0.65%);(-)-科立内酯二醇衍生物低、中、高浓度平均加样回收率(RSD)为99.74%(0.89%)、100.02%(0.31%)、98.81%(0.63%)。方法简便、快速,能准确测定科立内酯二醇对映异构体超量值,为前列腺素药物手性中间体提供新的分离和检测方法。

手性毛细管气相色谱法拆分4-氯甲基-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环对映异构体

手性化合物具有独特的生物活性,其在药物治疗中发挥着关键作用。为准确测定对映异构体中不同构型的纯度,建立手性化合物对映体分离方法十分关键。4-氯甲基-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环是一种重要的手性医药中间体,本文建立了一种手性毛细管气相色谱拆分测定4-氯甲基-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环对映异构体的方法。采用固定相为环糊精衍生物的色谱柱Rt-bDEXse进行分离,并以氢火焰离子化检测器进行检测。经过优化,得到最优色谱条件:线速度为70 cm/s;升温程序为初始柱温70℃保持1 min,以2.0℃/min的速率升温到150℃;溶样溶剂为甲醇。实验结果表明,在该条件下,(R)-4-氯甲基-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环和(S)-4-氯甲基-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环可在10 min内快速分离,两者的分离度远大于1.5,在0.5~50.0 mg/L的范围内线性关系良好,线性相关系数均大于0.998,(R)-和(S)-4-氯甲基-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环的检出限分别为0.07和0.08 mg/L,定量限分别为0.22 mg/L和0.25 mg/L。以甲醇作为空白样品,进行0.5、2.0、10.0 mg/L 3个不同水平的加标回收试验,(R)-和(S)-4-氯甲基-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环的回收率分别为94.0%~99.1%和96.0%~98.8%,相对标准偏差(RSD)分别为1.26%~4.87%和1.51%~4.46%。该方法可为手性医药中间体4-氯甲基-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环对映异构体的拆分提供参考。

气相色谱-质谱法测定植物性乳制品中植醇对映异构体含量

运用气相色谱-质谱法,建立植物性乳制品中植醇对映异构体含量的测定方法。通过优化前处理,同时考察方法的线性关系、精密度、加标回收率、检出限及定量限等指标,外标法定量。结果表明:该方法在0.0~1.0μg/mL范围内线性良好(r>0.999),E构型植醇与Z构型植醇检出限分别为0.03、0.04 mg/kg,定量限分别为0.09、0.10mg/kg,加标回收率分别为78.6%~93.5%、79.5%~94.7%,相对标准偏差均小于10%。该方法灵敏、准确、重复性好,能满足植物性乳制品中植醇对映异构体含量的测定。

不同茶类中挥发性萜类化合物的对映异构体

【目的】挥发性萜类化合物是茶叶香气的重要成分,大多数具有手性结构,存在香气特性完全不同的对映异构体。查明不同茶类中挥发性萜类化合物的立体构型分布特征,为深入研究茶叶香气的形成机理及提高茶叶的香气品质提供科学的理论依据。【方法】采用顶空固相微萃取法结合手性气相色谱-质谱联用技术,以Supelcoβ-DEX110为手性气相色谱柱,以萜类化合物的不同手性异构体标准品为定性和定量分析的依据,建立茶叶中挥发性萜类化合物的对映异构体分析方法,并对代表性绿茶、红茶、乌龙茶、白茶及黑茶样品中萜类化合物的对映异构体组成及含量进行分析。【结果】建立了9种萜类化合物的对映异构体的检测方法,发现所有茶样中均能检测到芳樟醇、芳樟醇氧化物B的对映异构体:大部分茶样中芳樟醇的主导构型为S型,但英德红茶、云南滇红和印尼白茶中以罕见的R-(-)-芳樟醇为主;芳樟醇氧化物B在绿茶、红茶、白茶及黑茶中的构型完全一致,而部分乌龙茶(岭头单枞、文山包种)中该物质的主导构型与之相反。芳樟醇氧化物A在绿茶及黑茶中主导构型一致,而在祁门红茶、印度大吉岭红茶、水仙乌岽单枞及铁观音中构型相反;芳樟醇氧化物C和D在所有茶样中的构型均保持一致,且大部分仅检测到单一构型。其他重要萜类化合物在茶样中分布情况各异:α-蒎烯仅在正山小种红茶中以高比例的S-(-)-α-蒎烯被检测出;α-松油醇的主导构型及对映异构体过量值在不同种类的茶叶中各不相同;4-萜品醇在所有可测得的茶样中均以R构型为主导,且除六堡茶(黑茶)外,其他茶样中均未检测到S-(+)-4-萜品醇;α-紫罗兰酮在除了绿茶以外的茶样中均能被检测到,且均以单一的R构型存在。定量分析结果表明,芳樟醇在大部分茶样中都具有最高的含量,平均含量白茶>红茶>乌龙茶>绿茶>黑茶;芳樟醇氧化物B的含量在茶叶中往往仅次于芳樟醇,呈现红茶>白茶>乌龙茶>黑茶>绿茶的规律性;而其他萜类化合物在茶样中的含量普遍低于100ng·g^(-1),且在不同茶类中含量分布迥异。【结论】明确了不同种类茶叶中9种重要挥发性萜类化合物对映异构体的变化情况,有助于从更深层次上了解茶叶香气品质的化学实质,为今后茶叶香气品质调控、茶叶品种、产地判别以及质量认证等提供了新思路。

盐酸替罗非班注射液中对映异构体分析方法的建立

目的建立HPLC法分析盐酸替罗非班注射液中的对映异构体。方法采用Ultron ESOVM(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.1%甲酸铵溶液(用甲酸调节溶液的pH值为4.0)-甲醇(85∶15),等度洗脱30 min,流速0.5 mL·min^(-1),柱温25℃,检测波长227nm,进样量100μL。结果盐酸替罗非班与其对映异构体能有效分离,分离度大于2.0,溶液在室温条件下12 h内稳定。对映异构体浓度在0.025~0.375μg·mL^(-1)与峰面积线性关系良好(r=0.9999);低、中、高质量浓度的平均加样回收率分别为100.86%、96.86%、98.04%,RSD分别为2.7%、1.4%、2.1%(n=3)。以自身对照法计算对异构体含量不大于0.5%。结论本法可用于盐酸替罗非班注射液中对映异构体的检测。

HPLC法测定Boc-L-苯丙氨酸中的对映异构体杂质

目的:建立Boc-L-苯丙氨酸中对映异构体杂质的方法。方法:采用HPLC法,DAICEL CHIRALPAK AD-H手性色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以V(正己烷)∶V(异丙醇)∶V(乙醇)∶V(三氟乙酸)=80∶5∶15∶0.1为流动相,流速为0.8m L/min,柱温30℃,进样体积为20μL,检测波长210nm。结果:Boc-L-苯丙氨酸与其对映异构体之间的分离度大于1.5;Boc-L-苯丙氨酸与其对映异构体的线性范围均为2.0~10.0μg/mL, r均为0.999;对映异构体的平均回收率为95.9%, RSD为2.4%(n=9)。结论:该方法专属性强,准确度高,可以作为Boc-L-苯丙氨酸中对映异构体杂质的测定方法。

LC-MS法测定(1R,2R)-1,2-双(甲磺酰基氧基甲基)环己烷的对映异构体杂质

目的:建立了一种LC-MS法测定(1R,2R)-1,2-双(甲磺酰基氧基甲基)环己烷的对映异构体杂质的方法。方法:采用表面键合直链淀粉-三(3-氯-5-甲基氨基甲酸酯)的硅胶为填充剂(大赛璐IG-U 100×3.0 mm,1.6μm);以0.1%甲酸水溶液-甲醇(30︰70,体积比)为流动相;流速为0.3 mL/min;柱温为35℃;进样体积为2μL;采用岛津LCMS检测,前体离子为323.0274。结果:(1R,2R)-1,2-双(甲磺酰基氧基甲基)环己烷的对映异构体的线性范围为0.05%~0.6%水平的杂质,相关系数为0.999;检测限为0.01%水平的杂质,定量限为0.03%水平的杂质,具有较高的检测灵敏度;平均回收率为95.3%,RSD为4.1%,准确度高,精密度高;微小改变色谱条件(柱温、流动相比例和流速)的检测结果好,耐用性好。结论:建立的检测方法准确、灵敏,适合于(1R,2R)-1,2-双(甲磺酰基氧基甲基)环己烷的异构体的测定。

高效液相色谱法测定替诺福韦艾拉酚胺中的对映异构体

目的建立高效液相色谱法测定替诺福韦艾拉酚胺中的对映异构体。方法用直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)键合硅胶为填充剂(CHIRAL PAK AD-H,4.6 mm×250 mm,5μm或效能相当的色谱柱);以无水乙醇-甲醇-正庚烷-三乙胺(350∶50∶600∶1)为流动相等度洗脱;检测波长为260 nm;流速为0.4 mL·min^(-1);柱温:30℃。结果主成分峰与对映异构体峰的分离度均不小于1.5,对映异构体平均回收率为98.6%。结论该方法专属性强、灵敏度高、准确度和重复性好,方法简单、经济,可用于替诺福韦艾拉酚胺对映异构体的检查。

HPLC法测定硫酸氢氯吡格雷对映异构体

目的:建立了硫酸氢氯吡格雷对映异构体的HPLC测定方法。方法:采用CHIRALCEL OJ-H(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱;以V(无水乙醇)∶V(正庚烷)∶V(二乙胺)=15∶85∶0.01为流动相,流速为每分钟0.8 mL,检测波长为220 nm。结果:专属性良好,对映异构体浓度在0.20~1.4μg/mL范围内线性关系良好(r=1.000 0,n=7);平均回收率为101.9%,RSD为3.7%。结论:方法精密度好、准确度高,可用于本品的对映异构体检测。