重量法结合氨基酸分析法测定婴幼儿配方乳粉中小分子蛋白肽含量

目的:建立婴幼儿配方乳粉中小分子肽含量的定量分析方法。方法:分别采用凯氏定氮法、重量法、离子交换色谱等方法测定婴幼儿配方乳粉中总蛋白、高分子蛋白和游离氨基酸含量,通过计算求得小分子蛋白肽含量。结果:高分子蛋白检测精密度RSD(n=6)为0.74%;17种氨基酸回收率为91.0%~103.2%,检测结果的相对偏差为0.6%~2.5%;小分子蛋白肽添加回收率为95.2%~98.2%。结论:所建方法精密度和回收率良好,可用于婴幼儿配方乳粉中小分子肽含量的测定。

人乳与牛乳天然小分子蛋白肽的差异对比及功能分析

研究利用超滤技术和Tricine-SDS-PAGE电泳将人乳与牛乳中天然存在的小分子蛋白肽进行分离。蛋白条带经质谱鉴定发现,人乳小分子蛋白肽含有28种,牛乳小分子蛋白肽含有24种,二者存在18种相同蛋白肽。Gene Ontology(GO)功能注释分析发现,在生物过程中,人乳小分子蛋白肽发挥的作用要高于牛乳小分子蛋白肽,尤其体现在免疫过程中的作用;在分子功能上,二者主要分子功能是结合作用,其中人乳小分子蛋白肽的结合作用强,而牛乳小分子蛋白肽参与的转运活性的分子功能大于人乳小分子蛋白肽;在细胞组成上,二者均参与了细胞与细胞膜的组成。通过Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)代谢通路分析可知,人乳小分子蛋白肽参与酪氨酸和抗原的加工和呈递2个代谢通路,而牛乳小分子蛋白肽仅参与系统性红斑狼疮代谢通路。对人乳和牛乳中的小分子蛋白肽组成进行研究,不仅为揭示人乳蛋白和牛乳蛋白的差异及其生理功能提供了理论依据,而且为婴幼儿食品、母乳化制品达到母乳水平提供有益探索。

酶法水解酪朊酸钠工艺的研究

利 用 酪 朊 酸 钠 酶 法 水 解 制 备 营 养 性 酪 蛋 白 小 分 子 肽 ,对 其 酶 制 剂 的 筛 选 、酶 水 解 工 艺 参 数 、小 分 子 肽 得 率 变 化 及 酶 解 液 溶 解 性 进 行 了 系 统 的 研 究 ,得 出 结 论 :碱 性 蛋 白 酶 水 解 酪 朊 酸 钠 的 效 果 较 好 , 并 通 过 正 交 实 验 确 定 了 碱 性 蛋 白 酶 酶 解 酪 朊 酸 钠 的 最 适 宜 条 件 为 温 度 60℃,pH 7.5,酶 解 时 间 24h,底 物 浓 度 10%,碱 性 蛋 白 酶 和 底 物 之 比 4.8× 10AU /g。

^(99m)Tc-YIGSR与^(99m)Tc-MIBI肿瘤细胞摄取比较研究

目的 :利用肿瘤细胞表面含有大量层粘素受体 ,而且能与层粘素特异性结合机制 ,研究99mTc YIGSR (层粘蛋白 小分子肽 )作为一种新型的肿瘤显像剂 ,在埃氏腹水瘤细胞 (EAC)中的摄取并与MIBI进行比较。方法 :① 99mTc MAG3 YIGSR探针的制备 :利用S 已基 琥铂酰亚胺 巯已甘肽 (S Acetly NH 3 MAG3 )作为螯合剂 ,在适当还原剂作用下 ,将99mTc标记到层粘素 YIGSR上 ,用SphadexG10凝胶柱纯化 ,根据放射性计数及 2 80nm紫外吸光值合并各峰管 ,利用纸层析进行放射性化学纯度分析。②细胞培养及细胞存活率测定 :EAC在含小牛血清的 164 0细胞培养液中悬浮培养 ,用台盼兰排除法计数活细胞。③细胞动力学研究 :用放射性核素示踪法研究EAC在 3 7℃和 2 2℃时对99mTc YIGSR及99mTc MIBI的摄取。结果 :①99mTc YIGSR标记率为 ( 62± 3 ) % ,放化纯为 95 % ,99mTc MIBI标记率为 ( 96± 2 ) % ,放化纯为 98%。②细胞存活率随孵育时间延长而下降 ,实验前细胞存活率为 96%± 1% ,孵育 2h细胞及 3h存活率分别为( 96± 1) %及 ( 90± 2 ) % ,均在 85 %以上符合实验要求。③ 3 7℃ 60min时 ,EAC对99mTc YIGSR及99mTc MIBI的摄取峰值分别为 ( 4 3 .16± 2 .4) %和 ( 2 4.4± 1.8) % ;在 2 2℃时EAC摄取峰值分别为 ( 2 6.5?

酪朊酸钠的酶解及分离分析

利用复合蛋白酶水解酪朊酸钠制备营养性酪蛋白小分子肽 ,对水解的工艺参数 ,小分子肽的得率变化及酶解液溶解性进行了系统的研究 ,并对酶解产物进行了SDS -PAGE电泳实验和氨基酸组成分析。

蚂蟥Guamerin基因的克隆及吸食后时空表达分析

该研究对非吸血蛭蚂蟥体中弹性蛋白酶抑制剂基因(wp Guamerin)进行了克隆和生物信息学分析,同时对该基因在蚂蟥不同组织、不同吸食阶段的时空表达特点进行研究。结果表明,蚂蟥wp Guamerin基因全长295 bp,相对分子质量为9 145.95 Da,包含1个编码83个氨基酸的开放阅读框,与吸血蛭Guamerin氨基酸序列相似性均在29%~65%;wp Guamerin编码的蛋白无信号肽,属于亲水性蛋白,二级结构主要由α-螺旋、延伸链、折叠和无规则卷曲组成。wp Guamerin在肌肉中表达量显著高于唾液腺,在嗉囊和肠中无表达;吸食后wp Guamerin在肌肉和唾液腺的表达量分别在第1,3天达到最高。因此,wp Guamerin是有别于吸血蛭Guamerin的小分子多肽蛋白,在蚂蟥消化道中不表达,主要在肌肉中表达,吸食行为可刺激蚂蟥肌肉和唾液腺wp Guamerin基因的表达而不能诱导蚂蟥消化道wp Guamerin的表达。

冷冻复苏过程对人精子印记基因SNRPN和GRB10DNA甲基化及表达的影响

目的探讨精液冷冻复苏过程对人精子印记基因SNRPN、GRB10甲基化状态和mRNA表达的影响。方法将20份人精液标本平行分为2组:新鲜组(n=20)和冷冻组(n=20)。采用计算机辅助精子分析(CASA)进行两组精液的常规参数检测;Percoll密度梯度离心法纯化精子,SNRPN、GRB10基因的甲基化率采用Sequenom DNA测序分析;SNRPN、GRB10基因的mRNA表达采用qRT-PCR定量分析。结果冷冻组精子浓度、精子活力、前向运动精子百分比均低于新鲜组(P<0.05),冷冻组不活动精子百分比显著高于新鲜组(P<0.05);冷冻组精子SNRPN mRNA表达显著低于新鲜组(P<0.05);冷冻组精子GRB10启动子区亚片段检测的-902Cp G位点(即转录起始点上游989 bp处)的甲基化率显著下降(P<0.05);GRB10 mRNA表达较新鲜组显著升高(P<0.05)。结论冷冻复苏过程影响人精子GRB10、SNRPN基因的DNA甲基化和mRNA表达,提示精子库常规使用的精液冻储技术可能改变配子的表观遗传信息,进而调控基因的表达。