血管内皮生长因子A与小泛素相关修饰物特异性蛋白酶5在前列腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨血管内皮生长因子A(VEGFA)与小泛素相关修饰物特异性蛋白酶5(SENP5)在前列腺癌中的表达情况及临床意义。方法:使用GEPIA数据库,对VEGFA、SENP5基因的相关性及与前列腺癌病人的生存期进行分析;采用qRT-PCR、Western blotting从转录、蛋白质翻译水平检测肿瘤细胞中VEGFA、SENP5的表达情况;收集前列腺癌病人组织标本和临床资料,采用免疫组织化学法检测前列腺癌组织中VEGFA、SENP5的蛋白表达,分析其表达情况与肿瘤病人临床病理参数间的关系;使用STRING网站进行VEGFA、SENP5蛋白质互作网络图构建。结果:VEGFA与前列腺癌病人总生存时间有关(P<0.05),SENP5与病人总生存时间、无病进展生存时间均相关(P<0.05);与正常细胞相比,VEGFA与SENP5在前列腺癌细胞中mRNA、蛋白质均高表达(P<0.05);VEGFA与SENP5蛋白在肿瘤病理组织中可见淡黄色或棕黄色染色,VEGFA主要于细胞质中表达,SENP5主要于细胞核中表达;VEGFA强阳性表达与临床分期、有无远处转移相关(P<0.05),SENP5强阳性表达与Gleason评分、有无远处转移相关(P<0.05);VEGFA与SENP5间显著相关(P<0.01);SENP5可能通过SUMO1-HSP90AA1轴与VEGFA相互作用。结论:VEGFA、SENP5在前列腺癌中高表达,两者显著相关,且与肿瘤临床病理参数有关,可能是前列腺癌病人治疗的潜在靶点。

小泛素相关修饰蛋白特异性蛋白酶1对脐静脉内皮细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的探讨小泛素相关修饰蛋白特异性蛋白酶1(SENP1)对脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移及凋亡的影响。方法用20个感染复数的p LKO.1-SENP1-小发夹RNA(shRNA)-绿色荧光蛋白(GFP)干涉慢病毒(SENP1干涉组)和p PIG-U6-随机序列(scramble)-GFP对照慢病毒(GFP-SC对照组)感染HUVEC。病毒感染HUVEC 48 h后,用流式细胞仪检测慢病毒的感染效率,实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western蛋白质印迹法检测HUVEC内SENP1基因和蛋白表达水平。用CCK8试剂盒检测细胞增殖能力,Transwell小室法检测细胞的迁移能力,流式细胞仪分析细胞凋亡率。结果 GFP-SC对照组和SENP1干涉组感染效率均>97%。与GFP-SC对照组比较,SENP1干涉组HUVEC SENP1基因和蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。CCK8法测定结果表明,SENP1干涉组HUVEC增殖能力较GFP-SC对照组明显降低(P<0.01)。SENP1干涉组细胞迁移过Transwell小室的细胞数量明显低于GFP-SC对照组(P<0.01)。用低浓度血清(含2%胎牛血清)培养基诱导细胞凋亡24 h,SENP1干涉组细胞凋亡率即已升高到GFP-SC对照组的2倍左右(P<0.05);诱导凋亡至48 h,SENP1干涉组细胞凋亡率升高到对照组的3.2倍左右(P<0.05)。结论 HUVEC内SENP1表达水平的降低不仅可以显著抑制细胞增殖和迁移能力,亦可促进细胞凋亡。

小泛素样修饰物特异性蛋白酶3通过调节脂滴水平体外促进HepG2细胞丙型肝炎病毒复制

目的探究丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞小泛素样修饰物特异性蛋白酶3(SENP3)对脂滴水平的调节及其对HCV复制的影响。方法以感染性HCV病毒颗粒感染人HepG2细胞,采用Western blot法检测感染前后SENP3蛋白表达水平。采用脂质体法转染SENP3-siRNA至HepG2细胞,在感染HCV后采用Western blot法检测HCV核心蛋白表达量,采用qRT-PCR法检测HCV RNA水平,采用油红O染色观察细胞脂滴水平。以软脂酸处理敲低SENP3后的HepG2细胞,采用qRT-PCR法检测感染HCV后HCV RNA水平。结果在HCV感染HepG2细胞后1 d、3 d和6 d,HCV核心蛋白相对表达量分别为0.01±0.00、0.17±0.02和0.43±0.04,SENP3蛋白相对表达量分别为0.23±0.04、0.42±0.03和0.46±0.04,差异显著(P<0.05);转染SENP3-siRNA可有效降低SENP3表达并降低HCV感染后细胞HCV核心蛋白表达水平;SENP3敲低细胞HCV RNA相对水平为54.2±11.4%,较转染非特异性siRNA细胞显著降低(P<0.01);敲低SENP3蛋白表达后细胞脂滴数量显著减少;敲低SENP3的HepG2细胞感染HCV后HCV RNA相对水平为58.2±5.2%,较转染非特异性siRNA细胞显著降低(P<0.01),而以软脂酸处理敲低SENP3的HepG2细胞,在感染HCV后HCV RNA相对水平为74.6±6.4%,较未经软脂酸处理细胞显著升高(P<0.01)。结论在HCV感染肝细胞时SENP3可通过调节脂滴代谢促进HCV复制。

小泛素样修饰物修饰与肿瘤相关研究进展

小泛素样修饰物(SUMO)能与目标蛋白产生共价连接,调节靶蛋白的活性,从而改变其在细胞内的功能。SUMO与肿瘤的发生、发展和转移密切相关。多种癌蛋白、肿瘤抑制子、DNA修复蛋白和周期蛋白都是SUMO的靶蛋白,SUMO系统中的某些酶在肿瘤中的表达也可能发生相应改变。现就与肿瘤相关的SUMO研究进展作一综述。

SUMO特异性蛋白酶1诱导蛋白质去小泛素相关修饰增加子宫内膜癌侧群细胞化疗敏感性

目的探讨通过诱导蛋白质广泛去类泛素化修饰途径抑制子宫内膜癌的干性维持潜能,达到子宫内膜癌侧群细胞化疗增敏的目的。方法流式细胞术分选培养CD133^(+)CD44^(+)的KLE子宫内膜癌侧群细胞克隆球,Western blot法检测小泛素相关修饰蛋白1(SUMO1)及肿瘤侧群细胞干性维持基因八聚体结合转录因子4(Oct4)和性别决定区Y-box2(Sox2)蛋白的表达情况。慢病毒介导KLE侧群细胞稳定转染SUMO特异性蛋白酶1(SENP1)基因,Western blot法检测SENP1、SUMO1、Oct4和Sox2的蛋白表达;比较过表达与未过表达SENP1基因的KLE侧群细胞克隆形成率,流式细胞术检测细胞周期变化,四甲基偶氮唑蓝实验和流式细胞术检测子宫内膜癌侧群细胞对顺铂的化疗敏感性,子宫内膜癌荷瘤鼠模型检测SENP1过表达对顺铂的化疗敏感性影响。结果CD133^(+)CD44^(+)和CD133-CD44-子宫内膜癌KLE细胞克隆形成率分别为(23.64±5.03)%和(4.64±1.25)%,差异有统计学意义(P=0.003),CD133^(+)CD44^(+)子宫内膜癌KLE细胞中SUMO1、Oct4和Sox2蛋白表达水平高于CD133-CD44-子宫内膜癌KLE细胞(均P<0.05)。与未转染SENP1基因的KLE侧群细胞比较,SENP1过表达的KLE侧群细胞SUMO1、Oct4、Sox2蛋白表达水平降低,细胞克隆形成率由(25.67±5.44)%下降至(7.46±1.42)%,细胞周期发生由G0/G_(1)期向G_(2)期的偏移,顺铂半数抑制浓度由(55.46±6.14)μg/ml下降至(11.55±3.12)μg/ml,细胞凋亡率由(9.76±2.09)%上升至(16.79±3.44)%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。过表达SENP1能够降低KLE侧群细胞增殖能力,增加化疗敏感性。结论通过过表达SENP1能够诱导蛋白质去SUMO化修饰,抑制子宫内膜癌侧群细胞的干性维持潜能,进而增强其化疗敏感性。

小泛素样修饰物特异性蛋白酶1促进人胆管癌细胞株QBC939的增殖与侵袭

本研究旨在观察小泛素样修饰物特异性蛋白酶1（SENP1）对人胆管癌细胞株QBC939增殖与侵袭能力的影响。

SENP1、SENP5、SENP6蛋白在子宫内膜腺癌组织中的表达及意义

目的探讨小泛素相关修饰物特异性蛋白酶1(SENP1)、小泛素相关修饰物特异性蛋白酶5(SENP5)、小泛素相关修饰物特异性蛋白酶6(SENP6)蛋白在子宫内膜腺癌组织中的表达及其临床意义。方法选择子宫内膜腺癌病例80例、不典型增生62例、增殖期子宫内膜58例。应用免疫组化法检测各组子宫内膜组织中SENP1、SENP5、SENP6表达情况,并分析其与临床病理特征的相关性。结果子宫内膜腺癌组子宫内膜组织中SENP1、SENP5、SENP6阳性率显著高于不典型增生组、增殖期子宫内膜组;不典型增生组子宫内膜组织中SENP1、SENP5、SENP6蛋白阳性率显著高于增殖期子宫内膜组(P<0.05)。SENP1、SENP5、SENP6蛋白的表达均与子宫内膜腺癌的临床分期、组织学分级、浸润及淋巴结转移相关(P<0.05),与患者年龄和病灶大小无关。子宫内膜腺癌组织中SENP1蛋白表达与SENP5、SENP6蛋白表达呈正相关(r=0.708,P=0.000;r=0.773,P=0.000),SENP5蛋白表达与SENP6蛋白表达呈正相关(r=0.632,P=0.000)。结论子宫内膜腺癌组织中存在SENP1、SENP5、SENP6异常高表达,三者表达呈正相关,SENP1、SENP5、SENP6可能在子宫内膜腺癌发生、发展中起到重要的作用。

小泛素样修饰通路在常见恶性肿瘤靶向治疗机制中的研究进展

小泛素样修饰(SUMO)是一种动态可逆的翻译后修饰,在体内多个水平上调节着蛋白质功能。研究结果显示一些关键肿瘤因子和肿瘤抑制因子是SUMO底物。在肿瘤的环境中,SUMO通路成员不仅生物活性由于条件的改变(如缺氧)而发生改变外,而且在不同肿瘤中的表达水平也会出现异常。SUMO通路表达失调必将破坏SUMO化与去SUMO化之间的动态平衡,该平衡一旦被打破,将促进各种肿瘤的发生和耐药。现已研究表明许多与特定肿瘤发病机制相关的分子机制都涉及SUMO化修饰,这也突出了SUMO通路作为恶性肿瘤治疗靶点的潜在可能性。本文总结SUMO化修饰通路在常见恶性肿瘤中的靶向治疗及其作用机制的最新研究进展。

SUMO化修饰与前列腺癌的关系

前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤,发病年龄多在50岁以上,通常与雄激素和/或雄激素受体的过表达密切相关。小泛素样修饰物(small ubiquitin-like modifier,SUMO)是一种蛋白翻译后修饰,有显著的致癌作用。最近研究发现,SUMO化修饰可以通过影响雄激素受体的表达与活性参与前列腺癌的发生发展,并且SUMO特异性蛋白酶-1可作为潜在的治疗靶标。本文介绍SUMO化,以及回顾SUMO化在前列腺癌中的作用。

冠心康冻干粉通过SENP1/STAT3增强小鼠骨髓源巨噬细胞胞葬作用

目的 探索冠心康对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的骨髓源巨噬细胞的小分子类泛素修饰物特异性蛋白酶1(small ubiquitin-related modifiers/sentrispecific proteases 1,SENP1)/信号传导蛋白和转录激活物(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)分子表达及胞葬作用的影响。方法 提取小鼠骨髓来源的单核细胞,加巨噬细胞集落刺激因子,诱导成巨噬细胞,显微镜下观察F4/80荧光标记;加入ox-LDL诱导,不同剂量的冠心康(1.25μg/m L、2.5μg/m L、5μg/m L)作用后,中性红试剂盒检测细胞吞噬率,实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,q RT-PCR)、免疫印迹法(Western blotting)检测胞葬相关分子TAM酪氨酸激酶受体(TYRO3/AXL/MER receptor tyrosine kinase)、血小板反应蛋白-1 (thrombospondin 1,THBS1)、乳脂球表皮生长因子8 (milk fat globule-epidermal growth factor,MFGE8)表达及SENP1/STAT3分子蛋白表达。结果 (1)骨髓源巨噬细胞的纯度约为99%;(2)与对照组比较,ox-LDL诱导的骨髓源巨噬细胞组细胞吞噬率显著降低(P <0.05);与模型组比较,冠心康显著上调细胞吞噬率(P <0.05);(3)与对照组比较,ox-LDL诱导的骨髓源巨噬细胞组胞葬相关分子、SENP1、p-STAT3表达降低(P <0.05);与模型组比较,冠心康显著上调这些分子的表达(P <0.05)。结论 冠心康通过上调SENP1/STAT3分子表达,增强骨髓源巨噬细胞的胞葬作用。

SUMO在恶性肿瘤中的表达及其分子机制

小泛素样修饰物(SUMO)是新近发现的与泛素相似的一种修饰蛋白,其参与的SUMO化修饰是一种动态可逆的蛋白质翻译后修饰,SUMO可通过共价结合不同的底物蛋白,参与调节蛋白质稳定、亚细胞定位、基因转录调控、信号转导及促进蛋白酶体降解等。SUMO化修饰在结肠癌、乳腺癌、前列腺癌等恶性肿瘤的发生、发展以及转移中扮演重要角色,但SUMO在恶性肿瘤发生发展过程中的分子机制及作用尚未完全明确。因此,深入探究SUMO化在各类癌症进程中发挥的作用,将为恶性肿瘤的诊治及预防提供新方法。

SENP1参与慢性间歇低氧小胶质细胞极化及神经元损伤机制的研究进展

慢性间歇低氧(CIH)诱导的中枢神经系统(CNS)炎症反应是阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)神经认知功能障碍最重要的病理机制之一。小胶质细胞是维持CNS内环境稳定最重要的免疫反应细胞,不同的极化状态对神经元细胞产生损害或保护作用,准确调控小胶质细胞极化状态是控制炎症反应的关键,有助于维持神经认知功能正常。小类泛素相关修饰物(SUMO)修饰广泛参与机体蛋白翻译后修饰,SUMO特异性蛋白酶1是一种关键的去SUMO化蛋白酶,两者可能参与小胶质细胞极化状态、CNS炎症反应及神经元损伤或凋亡的调控。因此,深入了解CIH小胶质细胞极化及炎症反应机制,能为防治OSAHS神经认知功能障碍提供新思路。

Senp2调控c-Myc对胶质瘤侵袭性影响的机制

目的探讨Senp2基因与c-Myc基因在不同等级胶质瘤中的表达情况,并进一步探讨Senp2基因对于胶质瘤侵袭性的影响。方法运用real-time PCR、蛋白质免疫印迹法(Western Blotting)等检测不同等级胶质瘤患者病理组织及正常脑组织中Senp2、c-Myc的表达;运用细胞培养和转染技术沉默U87恶性胶质瘤细胞系中Senp2基因的表达,观察细胞中c-Myc的表达情况。通过Transwell侵袭实验、流式细胞术、CCK8法等观察Senp2基因沉默后胶质瘤细胞侵袭性变化情况。结果胶质瘤级别越高的患者c-Myc基因表达水平越高,Senp2基因表达水平越低(P<0.05)。沉默Senp2基因后可见c-Myc基因表达水平明显升高(P<0.05)。通过Transwell侵袭实验,发现沉默Senp2基因的胶质瘤细胞侵袭性强于对照组。同时当沉默Senp2基因后,细胞处于S期的比例明显增加,CCK8法检测发现沉默Senp2基因后胶质瘤细胞的增殖能力明显增强(P<0.05)。结论 Senp2基因与c-Myc基因在不同等级胶质瘤中表达存在差异,胶质瘤等级越高的患者Senp2基因表达水平越低,而c-Myc基因表达水平越高。Senp2基因可影响胶质瘤细胞中c-Myc基因的表达,从而影响胶质瘤细胞的侵袭性。

新型重组Ulp1的制备工艺研究

类泛素特异性蛋白酶1(Ulp1)是从融合蛋白中移除小分子泛素相关修饰物蛋白(SUMO)标签工艺中的重要工具蛋白酶,在重组多肽和蛋白生产制备中具有广泛应用。Ulp1蛋白易聚集的特性给下游分离纯化工艺带来了诸多挑战。为克服这些问题,本研究设计并重组表达制备了一种S13-Ulp1融合蛋白,以提高Ulp1酶的溶解度,减少聚集,同时降低蛋白等电点,便于采用阴离子交换色谱纯化。通过对发酵、澄清等步骤的工艺参数进行优化,建立了一条发酵表达产量高、纯化工艺简便的S13-Ulp1融合蛋白制备工艺。优化后发酵产量达到了2.34g/L,下游分离纯化总收率为64%,制得的S13-Ulp1蛋白的SDS-PAGE纯度为95%。经酶切试验验证,S13-Ulp1融合蛋白具有与Ulp1相同的特异性,可高效地移除SUMO标签,获得目的多肽。