小窝蛋白3在人结直肠癌组织中的表达及斑蝥素对其表达的抑制作用

目的:探讨小窝蛋白3(CAV3)在人结直肠癌(CRC)组织中的表达及斑蝥素对于CAV3表达的影响,阐明斑蝥素防治结直肠癌的分子学机制。方法:取30例手术切除的CRC组织,同时取癌旁正常组织为正常对照组,通过HE染色和免疫组织化学法检测CAV3在人CRC组织中的阳性表达率。将人CRC HCT-116细胞分为对照组、氟尿嘧啶组和斑蝥素组,通过免疫组织化学染色和实时定量PCR法检测CAV3mRNA表达水平。结果:HE染色,与正常对照组比较,CRC组织中癌细胞核染色较深、排列紊乱。30例CRC组织中22例CAV3呈阳性表达,阳性表达率为70.3%;正常对照组呈阴性表达。免疫组织化学染色,与正常对照组比较,CRC组织中CAV3蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与对照组比较,氟尿嘧啶组和斑蝥素组HCT-116细胞中CAV3蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。实时定量PCR法,与对照组比较,氟尿嘧啶组和斑蝥素组HCT-116细胞中CAV3mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论:CAV3蛋白在大多数人CRC组织中呈高表达,斑蝥素可能通过下调CAV3表达抑制CRC细胞生长。

小窝蛋白3在糖尿病心肌缺血再灌注损伤中的研究进展

心肌缺血再灌注损伤(MIRI)是缺血心肌恢复血液灌注后出现的严重并发症。糖尿病患者较非糖尿病患者更易发生MIRI,且损伤程度更为严重,这也是糖尿病患者围手术期死亡的首要原因,但其具体机制目前尚未阐明。小窝蛋白3(Cav-3)是构成心肌细胞小窝结构的核心蛋白,参与调控促细胞生存信号通路转导、糖脂代谢、氧化应激、线粒体稳态、内质网应激及细胞自噬等过程,在MIRI中起关键保护作用。心肌Cav-3表达降低是糖尿病MIRI敏感性和易损性增加的重要原因,深入研究Cav-3在糖尿病MIRI中的具体机制有望为防治糖尿病MIRI提供新靶点、新策略。

小窝蛋白-3/RISK介导HBO-PC对心肌的保护作用研究

目的探究高压氧预处理(HBO-PC)减轻心肌缺血再灌注(I/R)损伤的具体分子机制。方法对心肌细胞予以HBO-PC处理,并复制缺氧复氧(H/R)模型,用试剂盒测定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)及一氧化氮NO的含量,Western blot检测促/抗凋亡蛋白、蛋白激酶Cε(PKCε)、小窝蛋白-3(Cav-3)、再灌注损伤挽救激酶(RISK)通路中蛋白及其磷酸化水平的变化,免疫共沉淀和免疫荧光染色检测PKCε与Cav-3的结合;同时使用PKC抑制剂Chelerythrine(CHE)和RISK通路抑制剂进一步验证HBO-PC对心肌细胞I/R损伤的作用机制。结果 H/R模型模拟I/R损伤过程。HBO-PC降低MDA和LDH含量、Caspase-3活性和Bax的表达,增加SOD和NO含量、Bcl-2表达,抑制心肌细胞凋亡,减轻I/R损伤。同时,HPO-PC促进PKCε活化及其与Cav-3的结合,增加Cav-3蛋白表达,以及RISK通路中胞外信号调节激酶(ERK)1/2、蛋白激酶B(Akt)、磷脂酰肌醇3-羟激酶(PI3K)和下游效应激酶糖原合酶激酶(GSK)3β的磷酸化水平;CHE能够抑制HPOPC的作用。RISK通路抑制剂增加Caspase-3活性和Bax表达,减少Bcl-2表达,阻断HBO-PC对心肌细胞凋亡的拮抗作用。结论 HBO-PC可能通过调控PKCε/Cav-3/RISK通路,抑制心肌细胞凋亡,抵抗心肌I/R损伤,发挥心肌保护作用。

运动通过增强大鼠Caveolin-3/eNOS信号转导缓解胰岛素抵抗形成的机制

目的:探讨Caveolin-3/e NOS信号转导在游泳运动改善高脂饮食大鼠胰岛素抵抗(IR)中的作用,为胰岛素抵抗及其并发症的防治提供理论依据。方法:以SD大鼠为实验对象,随机分为3组:正常对照组(C组)、高脂饮食组(H组)、高脂饮食运动组(HE组)。通过8周高脂饲料喂养建立IR大鼠动物模型,同时对大鼠实施无负重游泳运动干预。用正糖钳技术结合胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素敏感指数(ISI)评价动物模型的建立;通过观察运动对高脂饮食IR大鼠骨骼肌e NOS和GLUT4含量,Caveolin3(Cav-3)m RNA的表达水平,p Akt Ser473和Akt蛋白表达的变化,探讨运动干预IR的机制。结果:(1)8周高脂饮食喂养后,H组大鼠葡萄糖输注速率(GIR)显著下降(P<0.01),ISI水平显著下降(P<0.01),HOMA-IR水平显著增加(P<0.01),提示胰岛素抵抗大鼠建模成功。(2)8周游泳干预后,与H组相比,HE组大鼠GIR显著增加(P<0.01),血清INS含量和HOMA-IR水平均显著降低(P<0.01),ISI水平显著增加(P<0.05或P<0.01);骨骼肌Cav-3 m RNA表达水平,p Akt Ser473和Akt蛋白表达水平均显著增加(P<0.05或P<0.01)。结论:8周游泳运动可通过上调骨骼肌Cav-3的表达水平,激活e NOS/Akt通路,从而增加GLUT4移位,缓解高脂饮食大鼠IR的形成。

妊娠高血压孕妇左室功能改变及其与IL-12、Cav-3表达的相关性

目的探讨妊娠高血压孕妇左室功能改变与白细胞介素(IL)-12、小窝蛋白-3(Cav-3)表达的相关性。方法选取2018年2月—2019年6月在沧州市人民医院诊治的妊娠高血压疾病孕妇156例(病例组),分为妊娠高血压组(50例)、轻度子痫前期组(56例)、重度子痫前期组(50例)。同期选择在沧州市人民医院进行产前检查的正常孕妇88名作为正常组。采用二维超声与三维超声监测孕妇左室功能改变情况,检测IL-12、Cav-3表达情况,并进行相关性分析。结果病例组收缩压、舒张压均明显高于正常组(P<0.05)。妊娠高血压组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期室间隔厚度(IVSD)、心排血量(CO)、心脏指数(CI)、左室舒张早期最大峰速(E)、舒张晚期最大峰速(A)依次升高,且均高于正常组,左室射血分数(LVEF)依次降低,且低于正常组(P<0.05)。妊娠高血压组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组血清IL-12、Cav-3水平依次升高,且高于正常组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,妊娠高血压组血清IL-12、Cav-3水平与LVESD、IVSD、CO、CI、E、A呈正相关(P<0.05),与LVEF呈负相关(P<0.05)。左室肥厚组早产、新生儿窒息、低体质量儿、胎儿宫内窘迫及剖宫产发生率与无左室肥厚组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论妊娠高血压孕妇左室功能异常,伴随IL-12、Cav-3的高表达,IL-12、Cav-3可能是妊娠高血压孕妇左室功能改变的重要因素。

异丙酚预处理通过上调Caveolin-3增加缺血心肌细胞线粒体膜稳定性的机制研究

目的探讨异丙酚通过上调小窝蛋白-3(Caveolin-3)增加缺血心肌线粒体膜稳定性的机制。方法筛选健康SD大鼠36只,体质量范围为250~300 g,采用随机数字表法分为3组,每组12只。①正常心肌细胞组:仅开胸不结扎;②心肌缺血再灌注组:单纯给予以5%葡萄糖稀释的脂肪乳,持续静脉滴注;③缺血心肌细胞+异丙酚预处理组:缺血前10 min开始持续静脉滴注异丙酚12 mg·kg^-1·h^-1,异丙酚用5%葡萄糖稀释。通过蛋白质免疫印迹检测Caveolin-3和细胞色素C;通过荧光探针DCFH-DA测定ROS产生;通过阳离子染料JC-1评估线粒体膜电位;caspase-3比色测定试剂盒测定心肌细胞caspase-3活性。结果心肌缺血再灌注组Caveolin-3蛋白活性(0.57±0.09)低于正常心肌细胞组(2.24±0.25)和缺血心肌细胞+异丙酚预处理组(2.02±0.14),异丙酚改善心肌缺血诱导的Caveolin-3下调(P<0.05);心肌缺血再灌注组DCF荧光强度(2.79±0.21)高于正常心肌细胞组(1.00±0.12),缺血心肌细胞+异丙酚预处理组心肌细胞DCF荧光强度(1.23±0.14)低于心肌缺血再灌注组(P<0.05);与正常心肌细胞组(1.00±0.06)相比,经受心肌缺血的心肌细胞显示出线粒体去极化降低(0.13±0.02),缺血心肌细胞+异丙酚预处理组(0.83±0.11)稳定了线粒体膜电位(P<0.05)。正常心肌细胞组线粒体细胞色素C为(1.00±0.08),心肌缺血再灌注组为(2.76±0.24),心肌缺血增加线粒体细胞色素C释放到胞质溶胶中,缺血心肌细胞+异丙酚预处理组(1.37±0.18)降低细胞色素C释放(P<0.05);心肌缺血再灌注组显示出caspase-3和caspase-9活性增加。与心肌缺血再灌注组相比,异丙酚降低了caspase-3和caspase-9活性(P<0.05)。结论异丙酚在心肌缺血下的保护作用取决于Caveolin-3的上调,后者降低活性氧产生、增加线粒体膜电位、减少细胞凋亡和细胞色素C释放。

小窝蛋白-3在PKC Eplison亚型介导缺血预适应心脏保护中的作用机制

目的探讨小窝蛋白-3(caveolin-3,Cav-3)在蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)Eplison亚型(PKCε)介导缺血预适应心脏保护中的作用机制。方法将大鼠心肌细胞置于密闭容器中进行诱导缺氧,建立缺血预适应模型,通过Western blot、荧光共振能量转移法(fluorescence resonance energy transfer,FRET)检测PKC 5种亚型在缺血预适应后的变化,判断Cav-3与PKCε表达、转位及活化的相关性。结果缺血预适应后,PKCε、PKCδ、PKCα选择性转位到富含Cav的浆膜上,但不包括PKCβ1和PKCζ。缺血预适应增加了FRET信号,促进PKCε转位到富含Cav浆膜上及增加Cav-3与PKCε蛋白的偶联量。结论缺血预适应可能直接通过Cav-3促进PKCε、PKCδ、PKCα与心肌细胞富含Cav浆膜微小结构域的联系,这种调节机制在心肌保护中起重要作用。

丙泊酚降低高糖环境下H9C2心肌细胞缺氧后的损伤

目的探讨小窝蛋白3(Cav-3)在丙泊酚降低高糖环境下H9C2心肌细胞缺氧后损伤中的作用。方法培养大鼠原代H9C2心肌细胞,构建细胞缺氧-复氧模型。将心肌细胞分为六组:正常培养组(NC组)、高糖培养组(HG组)、高糖缺氧-复氧组(HR组)、丙泊酚处理组(P组)、Cav-3抑制剂组(PI组)和DMSO溶剂组(D组)。比较六组心肌细胞损伤程度、氧化应激反应、线粒体功能、Cav-3蛋白含量、蛋白激酶B(AKT)及信号传导及转录激活因子3(STAT3)活化情况。结果与HR组比较,P组细胞活力、总SOD(T-SOD)活性、线粒体活力、ATP含量、Cav-3蛋白含量、AKT及STAT3活化明显增加,LDH、CK-MB活性、cTnI含量、Bcl-2相关X蛋白(Bax)与B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)比值(Bax/Bcl-2)明显下降,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase 3)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-9(caspase-9)蛋白含量、MDA浓度、JC-1染色的荧光绿红比明显降低,DCF-DA荧光阳性细胞数、MPTP开放明显减少(P<0.05);与P组比较,PI组和D100组细胞活力、T-SOD活性、线粒体活力、ATP含量、Cav-3蛋白含量明显降低,AKT及STAT3活化明显减少(P<0.05),LDH、CK-MB活性、cTnI含量、Bax/Bcl-2值、caspase-3及caspase-9蛋白含量、MDA浓度、JC-1染色的荧光绿红比明显升高,DCF-DA荧光阳性细胞数、MPTP开放明显增加(P<0.05)。结论丙泊酚通过上调Cav-3减少高糖环境下H9C2心肌细胞的缺氧后线粒体的损伤及细胞的死亡。

远端型小窝蛋白病患者的临床、病理及基因研究

目的 报道1例远端型小窝蛋白病患者,并研究其临床、病理及基因特点.方法 患者为27岁女性,以双下肢非对称起病,逐渐累及近端肢带肌.收集并总结该患者临床资料,行双侧下肢MRI检查.对患者左侧胫前肌行活体组织病理检查.同时对患者及其父母行小窝蛋白-3（caveolin-3,CAV3）基因检测.结果 患者双下肢MRI T1WI加权像增强结果提示远端肌群及近端肌群均存在异常信号影.骨骼肌病理检查发现光镜下呈中度肌营养不良样改变,免疫组织化学染色可见CAV3蛋白表达下降.患者存在CAV3基因c.136G＞ A（p.Ala46Thr）杂合突变,而该患者父母基因检测未见该突变.结论 我们报道1例由CAV3基因c.136G＞ A（p.Ala46Thr）杂合突变引起的以下肢非对称起病合并近端肢带肌受累的远端型小窝蛋白病,为临床医生进一步认识该罕见疾病提供依据.

胆汁中胆固醇升高通过影响CCK-1R再分布抑制胆囊收缩

目的分析胆汁总胆固醇含量与胆囊收缩功能的关系,并探讨其可能的机制。方法从2013年3月至2014年1月收集73例在北京协和医院基本外科行胆系手术的胆囊结石患者(结石组)和非胆囊结石患者(非结石组)胆汁,测定胆汁中总胆固醇(TC)和总胆汁酸(TBA)含量。对胆囊结石患者术前行胆囊功能试验。用免疫组化方法测定胆囊黏膜和肌层中I型胆囊收缩素受体(CCK-1R)和细胞膜结构蛋白小窝蛋白-3(Cav-3)的表达。用免疫荧光法定位二者在胆囊黏膜和肌层中的共表达。结果胆囊结石患者胆汁中TC及TBA含量显著高于非结石患者(P<0.05)。胆囊收缩功能较差的患者胆汁中TC含量明显高于收缩功能较好的患者(P<0.05)。结石组胆囊黏膜中Cav-3的表达量明显高于非结石组(P<0.05)。在结石组中CCK-1R和Cav-3在胆囊黏膜和肌层中均有明显共表达,而在非结石组则无明显的共表达现象。结论胆汁中TC含量升高可抑制胆囊收缩功能,其机制与胆囊黏膜和肌层中过多的Cav-3和CCK-1R结合进而影响CCK功能有关。

基于P38 MAPK/JNK信号通路研究二甲双胍对脓毒性心肌病的保护作用机制

基于丝裂原活化蛋白激酶P38(P38 MAPK)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路探讨二甲双胍对脓毒性心肌病的保护机制。本文为动物实验研究设计,于2023年1—12月在中南大学湘雅医院完成。采用随机数字表法将48只8周龄雌性C57BL/6小鼠分为4组:A组(对照组)、B组(模型组)、C组(模型+盐酸曲美他嗪)、D组(模型+二甲双胍组),每组12只。B、C、D组均以LPS(15 mg/kg)腹腔注射构建脓毒性心肌病小鼠模型,建模24 h后,A组、B组予以腹腔注射等量生理盐水,C组予以20 mg/kg盐酸曲美他嗪灌胃,D组予以腹腔注射二甲双胍200 mg/kg,均连续干预14 d。采用超声成像系统检测心功能,采用TUNEL法检测心肌组织细胞凋亡率;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测小鼠心肌组织中P38 MAPK/JNK信号通路JNK、P38 MAPK mRNA水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定各组小鼠血浆肌酸激酶同工酶(CK-MB)、脑利钠肽(BNP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)含量;采用蛋白质印迹(Western blot)检测心肌组织中蛋白激酶C Eplison亚型(PKCε)、小窝蛋白-3(Cav-3)的蛋白表达。结果显示,与A组左心室射血分数(LVEF)(79.51±6.62)%、左室短轴缩短率(FS)(45.66±4.13)、细胞凋亡率(4.34±0.36)%、JNK(0.96±0.06)、P38 MAPK(1.01±0.03)、CK-MB(2.37±0.13)μg/L、BNP(21.36±3.47)ng/L、TNF-α(176.22±19.24)ng/L、IL-6(35.43±3.84)ng/L、PKCε表达(1.98±0.26)、Cav-3表达(1.04±0.03)相比,B、C、D组细胞凋亡率(28.22±4.49、22.45±3.69、15.88±3.27)%、JNK(1.68±0.11、1.32±0.18、1.13±0.14)、P38 MAPK(2.47±0.71、1.77±0.35、1.49±0.05)、CK-MB(16.55±2.16、12.63±1.98、5.27±0.61)μg/L、BNP(48.92±5.67、33.78±4.11、27.55±3.84)ng/L、TNF-α(463.71±24.81、335.71±36.71、214.78±22.53)ng/L、IL-6(78.57±6.36、63.71±5.66、52.47±5.47)ng/L表达均升高,而LVEF(49.38±5.27、55.47±5.03、62.26±5.14)%、FS(24.36±2.17、30.43±3.29、33.57±2.72)%、PKCε表达(1.33±0.21、1.54±0.23、1.75±0.22)、Cav-3表达(0.47±0.06、0.76±0.05、0.85±0.04)均下调(F=113.020、67.657、219.539、206.222、227.977、88.455、6285.186、135.877、65.924、96.362、17.532、314.419,P<0.05);与B组相比,C、D组细胞凋亡率、JNK、P38 MAPK、CK-MB、BNP、TNF-α、IL-6表达均降低,LVEF、FS、PKCε、Cav-3表达均上调,且D组优于C组(P<0.05)。综上,二甲双胍对脓毒性心肌病具有一定的保护作用,其机制可能与抑制P38 MAPK/JNK信号通路的活化及上调PKCε、Cav-3表达有关。

caveolin-3在心肌缺血／再灌注损伤中的保护作用

背景心肌缺血／再灌注损伤（ischemia／reperfusion injury，I／RI）是全球心脏发病和致死的主要原因，威胁人类的健康安全。小窝蛋白（caveolins，Cav）是细胞质膜微囊（caveolae）中分隔和调节信号转导的蛋白质。小窝蛋白-3（caveolin-3，Cav-3）对心肌I／RI有着重要的保护作用。目的通过总结近几年Cav-3在I／RI中保护作用的研究，为今后进一步研究提供可参考的方向。内容简要介绍caveolae和Cav，并描述Cav在心血管疾病中的作用。总结Cav-3在保护机体免受心肌缺血、I／RI以及预处理中的作用，主要包括其在缺血预处理（ischemic preconditioning，IPC）和缺血后处理（ischemic postconditioning，IPTC）、麻醉药预处理、阿片类药物预处理、脂联素预处理以及其他物理治疗对I／RI的保护作用。趋向提出了临床医师和基础科学家可能会感兴趣的潜在研究方向。