电镜观察从非典型肺炎患者尸检标本中发现衣原体样和冠状病毒样颗粒

目的 探索 2 0 0 2年末暴发于广东等地的非典型肺炎的病原。方法 对来自广东、山西、四川省和北京市的 7例非典型肺炎死亡病人的尸体解剖标本进行超薄切片电镜观察 ,将病人肺组织提取物接种于 2 93细胞 (人胚肾转化细胞系 ) ,分离病原 ,对病人组织中和分离的病原进行免疫学鉴定。结果 超薄切片电镜观察 ,在死亡患者的肺 ( 7例 )、脾 ( 2例 )、肝 ( 2例 )、肾 ( 3例 )和淋巴结 ( 1例 )中均观察到衣原体样包涵体和网质小体、中间体、原生小体颗粒的存在 ,并在 3例病人肺组织中同时见到了冠状病毒样颗粒和未知的基质样结构。用RT PCR方法从 2例病人肺组织中扩增出冠状病毒RNA聚合酶基因片段。将病人肺组织提取物接种于 2 93细胞进行培养 ,取第 2代细胞作电镜观察 ,也发现衣原体样颗粒和包涵体的存在。在病人组织和培养细胞中见到的衣原体样颗粒均不能与衣原体属特异性抗体和抗肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体抗体反应 ,提示可能为新的衣原体样因子。结论在死亡病人组织和培养细胞中发现的衣原体样和冠状病毒样颗粒 ,可能是广东等地暴发的非典型肺炎的主要病原。

电镜观察从非典型肺炎患者尸检标本中发现衣原体样和冠状病毒样颗粒(摘要)

目的 探索 2 0 0 2年末暴发于广东等地的非典型肺炎的病原。方法 对来自广东、山西、四川省和北京市的 7例非典型肺炎死亡病人的尸体解剖标本进行超薄切片电镜观察 ,将病人肺组织提取物接种于 2 93细胞 (人胚肾转化细胞系 ) ,分离病原 ,对病人组织中和分离的病原进行免疫学鉴定。结果 超薄切片电镜观察 ,在死亡患者的肺 (7例 )、脾 (2例 )、肝 (2例 )、肾 (3例 )和淋巴结 (1例 )中均观察到衣原体样包涵体和网质小体、中间体、原生小体颗粒的存在 ,并在 3例病人肺组织中同时见到了冠状病毒样颗粒和未知的基质样结构。用RT PCR方法从 2例病人肺组织中扩增出冠状病毒RNA聚合酶基因片段。将病人肺组织提取物接种于 2 93细胞进行培养 ,取第 2代细胞作电镜观察 ,也发现衣原体样颗粒和包涵体的存在。在病人组织和培养细胞中见到的衣原体样颗粒均不能与衣原体属特异性抗体和抗肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体抗体反应 ,提示可能为新的衣原体样因子。结论 在死亡病人组织和培养细胞中发现的衣原体样和冠状病毒样颗粒 ,可能是广东等地暴发的非典型肺炎的主要病原。

SARS冠状病毒单克隆抗体制备及在肺尸检标本染色中的应用

目的 制备抗SARS冠状病毒的单克隆抗体 ,用于SARS的实验室诊断。方法 灭活SARS冠状病毒 (PUMC0 1)全病毒免疫BALB/C小鼠 ,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞 (NS 1)融合 ,用酶联免疫吸附试验 (ELISA)、间接免疫荧光法 (IFA)及免疫印迹法对所获得的细胞克隆进行筛选和鉴定 ,并用其中一株 (M2 )杂交瘤诱生的腹水单克隆抗体对SARS患者尸检肺组织切片进行免疫组织化学染色。结果 共筛选出 6株杂交瘤细胞 ,ELISA及IFA法证实其分泌的单克隆抗体与SARS冠状病毒有特异性反应 ,与其他常见呼吸道病原体均无交叉反应。免疫双扩散方法鉴定 1株杂交瘤细胞(M2 )为免疫球蛋白IgG3型 ,其余 5株均为IgG1型。免疫印迹试验显示 1株杂交瘤细胞 (M 2 )分泌的抗体与相对分子质量 6 80 0 0的蛋白有特异性反应 ;4株杂交瘤细胞分泌的抗体与相对分子质量 2 70 0 0的蛋白有特异性反应 ,1株在免疫印迹上未见到结果。SARS患者尸检肺组织病理切片免疫组织化学染色阳性 ,在肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞及巨噬细胞的胞浆均可见阳性颗粒。结论 我们制备的 6株单克隆抗体是抗SARS冠状病毒的特异性单克隆抗体 ,用于SARS尸检肺组织免疫组化染色 ,结果阳性。

直接免疫荧光对冠状动脉粥样硬化病变的形态观察

为了探讨冠状动脉粥样硬化病变的特异性变化,采用直接免疫荧光技术对35例因冠心病猝死的尸检标本进行了系统的染色观察,并以5例外伤致死者作为对照。结果显示,病变组冠状动脉内膜内皮细胞及外膜有免疫球蛋白沉积.粥样斑块内膜增厚处可见连续性黄绿色荧光光环.硬化的血管内膜增厚处可见斑点状和长条状明亮的荧光物质。上述改变在早、晚期病变中均有不同程度阳性反应.从而证实直接免疫荧光技术具有高度的特异性,尤其显示冠状动脉粥样硬化狭窄病变较为敏感。对观察动脉粥样硬化形成过程中的发生与发展变化有重要价值。

局灶性脑缺血海马神经元淀粉样β蛋白及其蛋白前体的表达

目的观察人脑缺血后淀粉样β蛋白140(Aβ140)与其淀粉样β蛋白前体(βAPP)在海马CA1区神经元的表达。方法收集43例因脑缺血而梗死的尸检标本,按缺血时间(发病至死亡时间)分为缺血2～6h、7～24h、25～48h、49～72h、73～96h、97～144h组和145～168h组。选取因其他疾病死亡(非脑缺血)尸检标本2例为对照组。采用HE染色方法观察神经细胞损伤情况;免疫组织化学染色检测Aβ140与βAPP在海马CA1区神经元的表达,在镜下对免疫组织化学染色阳性细胞计数,实验结果应用SPSS11.5统计软件进行分析。结果与对照组(2.88个±0.18个/高倍视野)相比,缺血2～6h组Aβ140表达增加(22.44个±2.79个/高倍视野),在73～96h达高峰(36.30个±2.67个/高倍视野),以后有所回落,但仍高于对照组。缺血7～24h组βAPP阳性细胞数量(28.11个±2.03个/高倍视野)显著低于2～6h组(33.30个±0.42个/高倍视野),缺血24h后阳性细胞数量增多,73～96h组达高峰(32.32个±1.36个/高倍视野),96h以后下降,但仍高于对照组(25.90个±1.55个/高倍视野)。24h后βAPP的增加与Aβ140的增加呈显著正相关。结论人脑缺血后Aβ表达增加,并与βAPP协同加重脑缺血性损伤。