尼克酰胺转甲基酶通过介导细胞内活性氧影响肝癌细胞铁死亡的作用研究

目的探究尼克酰胺转甲基酶介导细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)在肝癌细胞铁死亡中的影响及其机制。方法选取2019年3月至2020年2月于笔者医院接受治疗的40例原发性肝细胞癌患者作研究对象,分别取患者的癌旁组织标本及肝癌组织标本。使用串联液相质谱仪检测细胞中甲基尼克酰胺(methyl nicotinamid,MNA)表达,使用流式细胞仪检测ROS及过氧化脂质的平均荧光强度,采用蛋白质印迹法(Western blot)法检测人肝癌细胞(SK-Hep-1、Hep3B)细胞表达的情况变化。采用免疫组化法检测癌旁组织、肝癌组织中尼克酰胺转甲基酶(nicotinamide N-methyltransferase,NNMT)及ROS水平,采用CCK-8法检测不同铁浓度细胞的生存活性。结果肝癌组织组中的MNA水平较癌旁组织组有所提升差异有统计学意义(P<0.05)。与癌旁组织组比较,肝癌组织组的ROS平均荧光强度表达升高,过氧化脂质平均的荧光强度表达降低,SK-Hep-1、Hep3B细胞表达量上升,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,NNMT组2、10、20及25μmol/L的细胞生存活性水平升高(P<0.05)。与NNMT组比较,铁抑制组不同铁浓度(2μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、25μmol/L)的细胞生存活性表达下降差异有统计学意义(P<0.05)。结论经尼克酰胺转甲基酶介导可引导产生ROS及能量紊乱,提高了肿瘤细胞的死亡率。

尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶与动脉粥样硬化

尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶是一种多亚单位酶复合体,是细胞中一种可诱发的电子传递系统。尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶目前被认为是血管内生成活性氧的主要酶体,它的激活受蛋白激酶C等信号途径介导。研究表明NADPH氧化酶和近年来新发现的gp91phox同工酶即NOX蛋白家族可能通过损伤血管内皮、促进低密度脂蛋白氧化等参与动脉粥样硬化的发生和发展。

尼克酰胺与胰腺损伤提取物诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛素产生细胞的比较

目的探讨诱导小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为胰岛素产生细胞较好的方法。方法大鼠胰腺提取物和尼克酰胺分别诱导小鼠的BMSCs分化,经免疫组织化学、双硫腙染色、放射免疫学方法和RT-PCR技术(Ins-1、Ins-2、Glut-2、GK)鉴定两种诱导方法诱导细胞的分化程度。结果两种方法诱导后的细胞均可以表达胰岛素。双硫腙染色和胰岛素免疫组织化学的染色结果发现,两种分化后的细胞无明显差异。放射免疫学检测胰岛素及C肽片段:两种分化后的细胞表达的胰岛素随25mmol/L葡萄糖刺激时间的延长产生的胰岛素分泌曲线有明显差别,尼克酰胺分化的小鼠BMSCs产生的胰岛素产生细胞(IPCs)与正常小鼠胰岛细胞的曲线一致性欠佳,而大鼠胰腺损伤提取物分化的小鼠骨髓间充质干细胞产生的胰岛素产生细胞的分泌曲线一致性很好。尼克酰胺分化后的细胞不能产生C肽片段,而大鼠胰腺损伤提取物能够表达C肽片段。RT-PCR结果显示,尼克酰胺与大鼠胰腺提取物均可以表达胰岛细胞相关的几个mRNA(Ins-1、Ins-2、Glut-2、GK)。结论大鼠胰腺提取物与尼克酰胺相比,可能是一种较好的诱导BMSCs分化成熟产生胰岛素的诱导剂。

尼克酰胺联合Exendin-4促进大鼠骨髓间充质干细胞体外转分化为胰岛素分泌细胞团的研究

尼克酰胺联合Exendin4能明显促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)转分化为胰岛素分泌细胞团,表达胰岛素、C肽和相应基因。

尼克酰胺对人脐带间充质干细胞的保护效应

目的:探讨尼克酰胺(nicotinic acid amide,NAA)减轻人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)输注损伤的效应。方法:空白对照组为0.3 m L生理盐水、MSC组为0.3 m L 1×106CFSE标记的h UC-MSCs,MSC+NAA组为0.3 m L 10 mmol/L NAA处理24 h的1×106CFSE标记的h UC-MSCs,分别与2.7 m L正常人全血混匀,注入改良Chandler Loop内,在37℃下,20 m L/min循环1 h,检测循环前后血小板、白细胞、h UC-MSCs和C3a的变化。结果:血小板消耗率空白对照组为(29.96±10.88)%、MSC组为(77.76±19.29)%、MSC+NAA组为(50.13±18.10)%;白细胞消耗率空白对照组为(37.82±13.81)%、MSC组为(64.57±17.08)%、MSC+NAA组为(41.52±17.26)%,MSC组和MSC+NAA组与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。MSC+NAA组的h UC-MSCs存活率较MSC组高(P<0.05)。空白对照、MSC和MSC+NAA组的C3a含量分别为(206.27±58.10)μg/L、(230.47±39.61)μg/L和(208.37±40.66)μg/L。结论:h UC-MSCs与正常人全血在改良Chandler Loop内共循环1 h可模拟血液介导即刻炎症反应(instant blood-mediated inflammatory reaction,IBMIR),大量损耗MSCs和血液成分,导致C3a上升。NAA可抑制IBMIR、降低血液成分的损耗、提高h UC-MSCs的存活率,提示NAA能减轻MSCs的输注损伤。

高葡萄糖刺激血管内皮细胞尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4表达上调、活性氧增加及细胞凋亡

目的研究在高葡萄糖刺激的条件下,人脐静脉内皮细胞中尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4的表达、细胞内活性氧以及细胞凋亡的变化。方法倒置显微镜下观察人脐静脉内皮细胞形态;免疫荧光法检测人脐静脉内皮细胞Ⅷ因子相关抗原的表达;高葡萄糖刺激人脐静脉内皮细胞,用逆转录聚合酶链反应检测尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4mRNA水平,Western blotting检测尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4蛋白表达的变化,DCFH-DA检测细胞内活性氧生成量,流式细胞仪和Hoechst染色检测细胞凋亡。结果高葡萄糖刺激人脐静脉内皮细胞时,尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4mRNA及蛋白表达上调,细胞内活性氧生成增加,细胞凋亡增加。结论高葡萄糖处理促进人脐静脉内皮细胞尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4表达上调并引起细胞内活性氧生成和凋亡增加。

尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4过表达对人脐静脉内皮细胞凋亡和活性氧水平的影响

目的研究尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐氧化酶4表达水平的改变对内皮细胞活性氧生成和凋亡的影响。方法转染尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐氧化酶4表达质粒或GFP质粒到人脐静脉内皮细胞和ECV304中,用逆转录聚合酶链反应检测转染后尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐氧化酶4mRNA的水平,用流式细胞仪检测细胞内活性氧水平和细胞凋亡率,用Hoechst染色和TUNEL法观察细胞凋亡。结果转染后的人脐静脉内皮细胞中尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐氧化酶4mRNA水平明显高于GFP质粒组和对照组,不表达尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐氧化酶的ECV304细胞系经转染后亦表达尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐氧化酶4mRNA;流式细胞仪检测发现,与GFP质粒组(ECV304和人脐静脉内皮细胞的凋亡率分别为1.56%±0.33%和4.56%±0.62%)和对照组(ECV304和人脐静脉内皮细胞的凋亡率分别为1.05%±0.25%和2.28±0.37%)相比,转染尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐氧化酶4质粒组内皮细胞的活性氧生成和凋亡率(ECV304和人脐静脉内皮细胞的凋亡率分别为9.60%±0.92%和12.41%±1.12%)明显增加(P<0.05,n=3);Hoechst和TUNEL染色发现,转染尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐氧化酶4质粒后有部分内皮细胞胞核出现凋亡特征性改变。结论尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐氧化酶4表达质粒可有效地转染人脐静脉内皮细胞,引起尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐氧化酶4mRNA水平升高;尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐氧化酶4过表达可诱导人脐静脉内皮细胞凋亡。

尼克酰胺磷酸核糖转移酶功能研究进展

尼克酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt),又称为前B细胞克隆增强因子(PBEF)和内脏脂肪素(Visfatin),近年来由于其多方面的功能在尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)生物学、代谢、炎症等领域成为研究热点。作为NAD生物合成限速酶,Nampt调节NAD依赖蛋白如脱乙酰基酶的活性,并在胰岛β细胞分泌胰岛素中起重要作用。Nampt尚可作为具有免疫调节功能的炎症细胞因子,参与多种急慢性炎症性疾病的发病。本综述总结Nampt上述不同功能,并讨论其与2型糖尿病的关系。

尼克酰胺-N-甲基转移酶在链脲佐菌素致糖尿病猴胰岛中的高表达及意义

目的:本文旨在明确尼克酰胺-N-甲基转移酶(NNMT)在链脲佐菌素(STZ)致糖尿病猴胰腺中的表达及其定位,进而分析NNMT在β细胞损伤中的重要作用。方法:应用基因芯片技术筛选STZ致糖尿病猴胰腺组织差异表达基因,选择NNMT作为研究对象。半定量RT-PCR及Western印迹法分别从mRNA及蛋白水平验证该差异,然后应用免疫组化技术观察该蛋白在胰腺内外分泌细胞中的表达情况。结果:NNMT在正常猴胰腺中仅有微弱表达,但在STZ致糖尿病猴胰腺中其mRNA及蛋白水平均明显上调。免疫组化结果显示该差异表达主要表现在胰岛β细胞分布区。结论:NNMT可以催化对维持细胞功能极为重要的尼克酰胺甲基化,其在糖尿病β细胞内表达上调可能会引起细胞内能量代谢障碍而导致β细胞损伤。

双稳定态化学振荡体系测定尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸

利用酸性介质中Ce 催化溴酸钾 丙二酸BZ化学振荡体系的原理 ,建立了一种新型的测定尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 (NADP)的方法。报道了NADP的浓度在 1.0× 10 -8～ 1.0× 10 -6mol/L范围内的振荡体系中振幅与NADP浓度之间呈良好的线性关系 ,相关系数r为 0 .9999。对NADP参与的反应机理进行了探讨。

双功能螯合剂联肼尼克酰胺衍生物的合成

6 -氯尼克酸与水合肼反应生成 6 -联胺吡啶 - 3-羧酸 ,后者与二叔丁基碳酸酯反应生成6 -BOC -联胺吡啶 - 3-羧酸 ,使联胺基团得到保护。在DCC、DMF催化下 ,6 -BOC -联胺吡啶- 3-羧酸与NHS反应 ,生成物在盐酸二恶烷作用下脱去BOC保护基团 ,最终生成NHS

二甲亚砜、尼克酰胺对肝细胞生长素促肝细胞增殖的影响

为探讨原代肝细胞体外增殖和分化的培养条件和机制 ,观察了肝细胞生长素 (HPN)、二甲亚砜 (DMSO)及尼克酰胺 (NA)对肝细胞增殖、分化的影响。结果显示肝细胞生长素刺激离体肝细胞 3 H TdR掺入和钙动员。DMSO抑制钙动员 ,NA无显著影响。肝细胞原代培养证实 :NA促进DNA合成 ,而DMSO抑制 3 H TdR掺入 ,但DMSO在NA协同下使肝细胞表现为一定的延迟合成活性 ;肝细胞cAMP水平在 96h内与增殖活性呈负相关。 7d条件培养后 ,DMSO +HPN及DMSO +NA +HPN培养组肝细胞对 3 H TdR掺入分别为NA +HPN组的 3 83及 3 5 8倍 ,[Ca2 +]i瞬增分别为 3 0及 3 3倍。表明HPN具有体外刺激原代肝细胞增殖和分化的作用 ,加入NA可以促进肝细胞DNA合成 ;DMSO则抑制 3 H TdR掺入 ,长期表现为稳定肝细胞作用 ,移除DMSO后肝细胞具有较高的增殖活性。

某些二价金属尼克酰胺配合物的红外光谱研究

对Mn(Nica)_2Cl_2、Fe(Nica)_2Cl_2、Co(Nica)_2Cl_2、Ni(Nica)_2Cl_2、Cu(Nica)_2Cl_2、Zn(Nica)_2Cl_2配合物的红外光谱进行了分析,除Zn(Nica)_2Cl_2是简单四面体结构之外。其余皆为多聚八面体结构,其中Cu(Nica)_2Cl_2为多聚变形八面体结构,Nica均以吡啶氮与各金属离子配位。

尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶、氧化应激和心力衰竭

活性氧增加与心力衰竭密切相关,产生活性氧的主要酶体是尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶,它广泛存在于吞噬细胞外的其他组织细胞。尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶过度激活所介导的氧化应激损伤参与心力衰竭的发生发展。

尼克酰胺N-甲基化酶基因多态性对血清同型半胱氨酸的影响

目的探讨尼克酰胺N-甲基化酶(NNMT)A/G基因多态性与血清总同型半胱氨酸(tHcy)水平的关系,及其与叶酸和亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T多态性的相互作用。方法采用横断面研究,选择日本某公司健康男性员工221例(40～64岁)为研究对象,应用LightTyper溶解曲线法和PCR-RLFP的方法分别检测NNMT A/G和MTHFR/C677T基因型。结果NNMT A/G各基因型受检者的血清tHcy水平间差异无统计学意义(P=0.254)。低叶酸水平者中NNMT GG基因型者与A等位基因携带者(GG和AA+AG)的tHcy水平间差异有统计学意义(P=0.029),而这种差异在中、高叶酸水平者间均无统计学意义(P值分别为0.428、0.871);叶酸与NNMT A/G基因多态性存在相互作用(P=0.008)。低叶酸水平者NNMT A/G和MTHFR C677T两种基因型存在相互作用(P=0.034),携带NNMT GG基因的MTHFR TT基因型者其tHcy浓度与其他基因型个体间差异有统计学意义(P<0.001)。结论NNMTA/G多态性不是影响日本健康男性血清tHcy水平的独立危险因素,但其可能与叶酸、MTHFR C677T多态性存在相互作用而影响血清tHcy水平。

尼克酰胺对帕金森病模型小鼠的保护作用

目的:观察尼克酰胺对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱发的小鼠帕金森病(PD)模型中多巴胺能神经元的保护作用,并初步探讨其可能的作用机制。方法:在MPTP(每天30mg/kg×5 d,i.p.)注射前1h腹腔注射尼克酰胺(500 mg/kg),最后1次注射后5天观察小鼠运动能力的改变,检测纹状体多巴胺含量,并分析小鼠全脑及纹状体中乳酸脱氢酶(LDH)及一氧化氮合酶(NOS)的活性变化。结果:1)尼克酰胺能显著改善MPTP小鼠的自主运动能力(P<0.01),但对游泳、爬杆和悬挂等行为没有显著影响;2)尼克酰胺能显著减轻MPTP诱发的纹状体多巴胺含量的降低(P<0.01);3)全脑的LDH和NOS活性在各组之间没有显著差别,但纹状体的LDH和NOS活性在MPTP处理的小鼠中显著升高(P<0.01),尼克酰胺能显著降低MPTP引起的LDH和NOS活性升高(P<0.01),并且与对照组相比没有显著区别(P>0.05)。结论:尼克酰胺可以有效减轻MPTP诱发的帕金森病小鼠模型中多巴胺能神经元的损伤,这种保护作用可能与降低神经元的坏死和抑制NOS活性有关。

心肺转流期间尼克酰胺磷酸核糖转移酶的变化及其与糖代谢的相关性分析

目的探讨心肺转流（CPB）期间尼克酰胺磷酸核糖转移酶（NAMPT）水平的变化及其与糖代谢的关系。方法择期心瓣膜置换术患者36例，于麻醉后5min（T1）、阻断主动脉后5min（T2）、复温后5min（T3）、开放主动脉后5min（T4）、术毕后5min（T5）从中心静脉抽取血标本，检测血清NAMPT、胰岛素水平和全血血糖水平并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR），分析NAMPT水平的变化及其与糖代谢的关系。结果与T1时比较，T2～T5时患者血清NAMPT、血清胰岛素、血糖和HOMA-IR均明显升高（P〈0．05），且均在L时达到峰值。血清胰岛素水平与NAMPT具有显著正相关（r=0．873，P〈0．01）。结论心瓣膜置换术CPB期间NAMPT和胰岛素的变化具有正相关性，NAMPT可能参与了糖代谢。

尼克酰胺对白介素-1β损伤的离体大鼠胰岛细胞的保护作用

目的 观察尼克酰胺（ＮＡ）对白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）诱导的胰岛细胞损害的保护作用。方法应用体外单层培养的大鼠胰岛细胞，分别检测ＩＬ－１β，ＮＡ（１０，２０ｍｍｏｌ／Ｌ）及其联合对胰岛细胞亚硝酸盐生成，胰岛素分泌以及胞内ＤＮＡ，胰岛素含量和细胞活性的影响。结果 由ＩＬ－１β诱导的胰岛细胞亚硝酸盐生成量显著增加，同时胰岛素基础分泌以及葡萄糖刺激的胰岛素释放均明显减少；胰岛细胞内 ＤＮＡ，胰岛素含量及细胞活性（ＭＴＴ值）均显著下降（Ｐ均＜０．００１）；较高浓度及其的 ＮＡ（２０ ｍｍｏｌ／Ｌ）能阻断这些抑制作用（Ｐ均＜ ０．００１）；而较低浓度的 ＮＡ（１０ ｍｍｏｌ／Ｌ）虽不能阻断 ＩＬ－１β诱导的 ＮＯ生成对葡萄糖刺激的胰岛素释放的抑制作用，但对 ＩＬ－１β介导的其它抑制作用仍呈现保护性效应（Ｐ均＜ ０．００１）。结论 一氧化氮（ＮＯ）虽然参与ＩＬ－１β诱导的胰岛细胞的损害过程，但可能不是唯一的效应分子。ＮＡ可能通过包括抑制ＮＯ生成等多方面机制，实现对ＩＬ－１β诱导的胰岛细胞损害的保护作用。

尼克酰胺镍(Ⅱ)配合物的热分解非等温动力学的研究

本文合成了Ｎｉ（Ⅱ）的一个配合物Ｎｉ（Ｎｉｃａ）２Ｃｌ２（Ｎｉｃａ表示尼克酰胺）。用元素分析、红外光谱、热重及量热分解对该配合物进行了表征，并对其热分解过程进行了研究，运用Ａｃｈａｒ法和ＣｏａｔｓＲｅｄｆｅｒｎ法，推断出该配合物第一步热分解的非等温动力学方程为：ｄα／ｄｔ＝Ａｅ－Ｅ／ＲＴ３／２（１＋α）２／３［（１＋α）１／３－１］－１。

尼克酰胺腺嘌呤氧化酶4在神经胶质瘤的表达

目的探讨尼克酰胺腺嘌呤氧化酶4(NOX4)在胶质瘤的可能作用。方法分析85例行手术切除并经病理证实的胶质瘤标本,WHOⅠ级、Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级分别12例、29例、10例和34例。应用免疫组化方法评估NOX4在各级别神经胶质瘤的表达,分析NOX4在胶质瘤组织的表达部位及表达量变化。结果 NOX4在胶质瘤的表达量较瘤旁组织明显增高。NOX4在低级别胶质瘤中主要表达于细胞质,在高级别胶质瘤的细胞质及细胞核均有表达。NOX4在肿瘤新生血管呈强阳性表达;NOX4在胶质瘤的表达量与胶质瘤恶性程度有关,恶性程度越高,NOX4表达量越高。结论 NOX4在胶质瘤过表达可能在胶质瘤发生和发展过程中起到重要作用。