广东省2019—2023年耐万古霉素屎肠球菌检出率升高的时空变迀研究

目的分析近年广东省耐万古霉素屎肠球菌(VR-Efm)临床分离株的时空分布,探寻VR-Efm检出率上升的原因。方法回顾性分析2019—2023年广东省4个区域(珠三角、粤东、粤西、粤北)的38所医疗机构上报至广东省细菌耐药监测系统中VR-Efm检出情况、患者人口学特征及科室和标本分布等资料,同步分析世界卫生组织重点关注的ESKAPE中其他5种细菌的检出情况。结果广东省VR-Efm检出率从2019年1.4%(63/4543)上升至2023年21.3%(1351/6345),呈明显上升趋势,2023年44.7%(17所)的医疗机构VR-Efm检出率>20%;广东省4个区域VR-Efm检出率普遍上升,以珠三角地区为中心向周围辐射增长。ESKAPE整体由2019年10.1%升至2023年10.8%,其余5种病原体中,耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌检出率从2019年8.0%上升至2023年15.0%,耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌和耐碳青霉烯类肠杆菌属检出率分别从2019年的61.6%、34.4%、21.2%、7.9%下降至2023年的58.2%、31.9%、21.0%、7.6%,皆有不同程度下降。ICU VR-Efm检出率(12.2%)高于门急诊(9.4%)、内科(9.2%)和外科(7.0%)等非ICU科室(均P<0.05)。VR-Efm检出率较高标本分别为尿(9.8%)、血(9.1%),其余标本检出率介于6.9%~9.6%。青少年患者VR-Efm检出率(4.4%)低于中老年患者(>9.4%,P<0.05)。结论近5年广东省VR-Efm检出率明显上升,可能与社区和医院获得的优势克隆传播有关。有条件的医疗机构应对入院患者开展VR-Efm的筛查,并对检出VR-Efm的患者采取有效防控措施,以遏制VR-Efm检出率在该区域的上升。

添加不同形式屎肠球菌对凡纳对虾生长性能、非特异免疫及抗病力影响的比较研究

为了研究饲料中添加不同形式的屎肠球菌(Enterococcus faecium)LYB对凡纳对虾(Penaeus vannamei)生长、免疫及抗病力的影响。本研究设置了5种不同添加形式,分别为屎肠球菌发酵液(FJ)、活菌体(HJ)、发酵上清液(FQ)、超声波破碎菌体(CS)和热灭活菌体(RM),以商品饲料作为对照(Con),实验周期为42 d。研究表明,各处理组对虾成活率在84.0%~96.0%之间,Con组成活率最高且与CS组差异不显著(P>0.05)。从对虾生长情况来看,HJ和CS组对虾末体质量和特定生长率显著高于FQ、RM和Con组(P<0.05),与FJ组差异不显著(P>0.05)。各处理组对虾血清中的超氧化物歧化酶(SOD)、酚氧化酶(PO)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、溶菌酶(LZM)活性以及总抗氧化能力(T-AOC)均显著高于Con组(P<0.05),其中CS组的ACP活性最高,HJ、CS、FJ和RM组的AKP活性显著高于FQ组(P<0.05),CS和FJ组的POD活性显著高于HJ和RM组。HJ、CS、FJ和RM组对虾肝胰腺SOD、LZM、proPO、LGBP和HSP70基因表达水平显著高于FQ和Con组,其中CS组的HSP70、LZM和proPO基因表达水平最高,各处理组对虾肝胰腺中Imd、Toll和Relish基因相对表达量显著高于Con组(P<0.05),HJ和CS组的Imd表达量显著高于FQ和FJ组(P<0.05),CS组的Toll和Relish基因相对表达量最高(P>0.05)。在mTOR信号通路中,FJ、CS和RM组对虾肝胰脏TOR和4E-BP基因表达水平显著高于FQ和Con组(P<0.05),HJ、FJ和RM组对虾肝胰脏elF4E1Α和elF4E2基因表达水平显著高于CS、FQ和Con组(P<0.05)。副溶血弧菌(Vibrio Parahaemolyticus)攻毒结果表明,CS组对虾累计死亡率显著低于对照组(P<0.05)。综合各项指标,在凡纳对虾饲料中添加屎肠球菌LYB活菌菌液和超声波破碎菌体可显著提升其生长性能和免疫能力,其中超声波破碎菌体可作为潜在后生元,用于提高凡纳对虾的生长、免疫和抗病力。

屎肠球菌对五指山断奶仔猪肠道健康及微生物群落的影响

本试验旨在研究屎肠球菌对五指山断奶仔猪肠道健康及微生物群落的影响及对断奶应激的缓解作用。试验选取初始体重为(3.79±0.24) kg的33日龄五指山未断奶仔猪18头,随机分为对照组、断奶组和屎肠球菌组,每组6头(公母各占1/2)。对照组仔猪不进行断奶处理,在33日龄时灌喂20 mL磷酸盐缓冲液(PBS),并饲喂母乳至38日龄;断奶组仔猪33日龄时灌喂20 mL PBS,35日龄断奶,并饲喂饲粮至38日龄;屎肠球菌组仔猪33日龄时灌喂20 mL屎肠球菌(灌喂量为1×109CFU/kg BW),35日龄断奶,并饲喂饲粮至38日龄。38日龄时,将所有试验猪进行屠宰,并测定其肠道形态、酶活性及微生物群落。结果表明:1)在各组初始体重一致的情况下,断奶组仔猪终末体重出现下降,而对照组和屎肠球菌组仔猪终末体重均有所提高。2)与对照组相比,断奶组仔猪十二指肠、空肠和回肠绒毛高度、绒毛宽度和绒毛表面积均极显著降低(P<0.01),十二指肠隐窝深度显著提高(P<0.05),十二指肠绒毛高度/隐窝深度(V/C)值极显著降低(P<0.01)。与断奶组相比,屎肠球菌组仔猪十二指肠、空肠和回肠绒毛高度、绒毛宽度和绒毛表面积均极显著提高(P<0.01),十二指肠隐窝深度显著降低(P<0.05),十二指肠V/C值极显著提高(P<0.01)。3)与对照组相比,断奶组仔猪十二指肠和回肠β-半乳糖苷酶活性显著降低(P<0.05),屎肠球菌组空肠和回肠α-淀粉酶活性显著或极显著提高(P<0.05或P<0.01)。与断奶组相比,屎肠球菌组仔猪十二指肠β-半乳糖苷酶活性显著提高(P<0.05)。与对照组和断奶组相比,屎肠球菌组仔猪各肠段脂肪酶活性均极显著提高(P<0.01)。4)与断奶组相比,屎肠球菌组仔猪回肠Chao1指数显著提高(P<0.05)。与对照组相比,断奶组仔猪回肠中变形菌门相对丰度明显提高,回肠中厚壁菌门相对丰度明显降低。与断奶组相比,屎肠球菌组仔猪回肠中厚壁菌门和罗姆布茨菌属相对丰度明显提高,结肠中乳杆菌属相对丰度明显提高,结肠中拟杆菌门相对丰度明显降低。综上所述,断奶前灌喂屎肠球菌菌液可通过改善五指山断奶仔猪肠道形态及菌群结构,并通过提高其肠道相关酶活性,缓解断奶对仔猪的负面影响,进而促进断奶仔猪健康生长。

耐万古霉素屎肠球菌的流行病学及耐药性分析

目的探讨本中心耐万古霉素屎肠球菌的流行病学及耐药性,为临床合理用药及感控防治提供科学依据。方法回顾性分析中山大学附属第一医院2017年1月—2023年6月临床分离的104株非重复的耐万古霉素屎肠球菌(vancomycin-resisitant Enterococcus faecium,VRE-fm),分析患者的基本资料、标本类型分布及对不同抗生素的耐药率、菌株携带的耐药基因及毒力基因。结果共分离104株非重复的VRE-fm菌株,≥60岁患者占63.4%(66/104);VRE-fm菌株主要分离自尿液54.8%、引流液14.4%和血液7.7%;微量肉汤稀释法药敏试验结果显示,104株VRE-fm对利奈唑胺全部敏感,替加环素的敏感率为98.1%,对其他抗菌药物敏感性较差;本中心47株VRE-fm菌株进行全基因组测序结果显示,均携带vanA耐药基因,未检出vanB和vanM耐药基因;47株VRE-fm菌株全部携带acm毒力基因,仅有1株VRE-fm菌携带esp毒力基因,其余毒力基因均为阴性。结论目前VRE-fm菌株的耐药性严峻,VRE-fm菌株通常同时携带耐药基因和毒力基因,临床可用于治疗VRE-fm感染的药物非常有限。因此,应当加强对万古霉素等糖肽类抗菌药物的使用管理,努力开发和实施感染控制方法,以有效地防止VRE-fm的进一步发生和蔓延。

屎肠球菌FDT2的分离鉴定及抑菌特性研究

【目的】从牦牛粪便中分离和鉴定屎肠球菌并进行体外抑菌特性研究,以期筛选出具有优良抑菌特性的益生菌。【方法】用MRS培养基从青海省健康牦牛粪便中分离肠球菌,结合形态学和分子生物学鉴定后进行抑菌性研究。通过发酵过滤分离菌株上清液,采用打孔法观察其对应的抑菌效果,通过改变pH及加入过氧化氢酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶等方法来分析其抑菌物质,并探究温度和pH对菌株发酵上清液的影响。【结果】结合形态学及系统进化树分析表明,分离的2株菌(FDT2和D2)均为屎肠球菌。抑菌试验结果表明,屎肠球菌FDT2对5株致病菌均有抑制作用,其中对产肠毒素性大肠杆菌K88和大肠杆菌ATCC 43888的抑菌性最强,而屎肠球菌D2对5株致病菌均无明显抑菌作用。通过排酸试验证明,屎肠球菌FDT2发酵上清液中起抑菌作用的不是酸性物质;通过加入过氧化氢酶试验证明了抑菌物质中有过氧化氢存在,且发挥部分的抑菌作用;加入胃蛋白酶和胰蛋白酶后其抑菌圈直径极显著低于对照组(P<0.01),表明抑菌物质中包含细菌素,且在抑菌过程中发挥重要作用。随着温度的逐渐升高,屎肠球菌FDT2的抑菌能力有所降低,在100℃下仍有抑菌性,表明其具有较强的热稳定性。随着pH的升高,屎肠球菌FDT2的抑菌活性逐渐下降,说明细菌素在酸性环境下活性较强。【结论】试验共分离到2株菌,其中屎肠球菌FDT2具有良好的抑菌特性,能分泌细菌素等抑菌物质,有必要对其深入研究。

屎肠球菌F11.1G菌剂对断奶羔羊生长性能、营养物质表观消化率、屠宰性能、瘤胃发酵和瘤胃微生物区系的影响

本试验旨在探究饲粮中添加屎肠球菌(Enterococcus faecium)F11.1G菌剂对卡拉库尔羊断奶羔羊生长性能、营养物质表观消化率、屠宰性能、瘤胃发酵和瘤胃微生物区系的影响。试验选取20只健康、2月龄、体重(21.0±1.0)kg的卡拉库尔羊断奶羔羊,按体重配对原则分为对照组和试验组,每组10只。对照组饲喂基础饲粮,试验组每只羊每天在基础饲粮中添加2.0 g屎肠球菌F11.1G菌剂。试验期75 d,其中预试期15 d,正试期60 d。正试期第1天晨饲前称重记为初始体重,于正试期的第45~52天进行营养物质表观消化率的测定;正试期第60天,每组选取5只试验动物空腹称重后进行屠宰,测定屠宰性能、瘤胃发酵参数和瘤胃微生物区系。结果表明:试验组净增重和平均日增重(ADG)均极显著高于对照组(P<0.01),平均日采食量(ADFI)显著高于对照组(P<0.05),料重比(F/G)极显著低于对照组(P<0.01);试验组酸性洗涤纤维(ADF)表观消化率显著高于对照组(P<0.05);试验组宰前活重和胴体重显著高于对照组(P<0.05),肝脏指数、瘤胃指数、小肠指数和大肠指数显著或极显著高于对照组(P<0.05或P<0.01),皱胃指数显著低于对照组(P<0.05);从瘤胃发酵指标来看,饲粮中添加屎肠球菌F11.1G菌剂后,瘤胃中乙酸、丁酸浓度和乙酸/丙酸显著升高(P<0.05);从瘤胃微生物区系来看,饲粮中添加屎肠球菌F11.1G菌剂后,提高了瘤胃菌群操作分类单元(OTU)数目、拟杆菌门、厚壁菌门和纤维菌门相对丰度,理研菌科_RC9_肠道群相对丰度与ADG和pH、氨态氮(NH3-N)、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸浓度呈正相关。综上所述,饲粮中添加2.0 g屎肠球菌F11.1G菌剂可以提高断奶羔羊生长性能、ADF表观消化率,通过增加瘤胃中乙酸和丁酸浓度改善瘤胃发酵,提高瘤胃细菌OTU数目,增加瘤胃细菌门水平中拟杆菌门、厚壁菌门和纤维菌门相对丰度,并且理研菌科_RC9_肠道群相对丰度与ADG和瘤胃发酵参数呈正相关。

1株牛源屎肠球菌的分离鉴定及其益生特性

利用形态学观察、生理生化试验与分子生物学方法对分离自牛瘤胃内容物的1株肠球菌GXNN20210320-4进行分类学鉴定,并通过生长性能测定,动物安全性试验、耐受性试验及体外抑菌试验等评价该菌的益生特性,旨在为进一步研究该菌株及开发成益生菌制剂提供一定的前期基础。结果显示,肠球菌GXNN20210320-4为屎肠球菌,该菌从4 h开始进入对数增长期并持续至14 h,生长繁殖速度较快,生长周期短,适合工业化生产。小鼠安全性试验显示,屎肠球菌GXNN20210320-4不是致病性微生物,对于动物可能是安全的。在模拟人工胃液(pH值=3.0)和模拟人工肠液(pH值=6.8)中孵育3 h后屎肠球菌GXNN20210320-4存活率分别为76.85%、80.26%,在0.3%胆盐浓度下孵育1、3 h的存活率分别为83.15%、70.74%,在0.5%胆盐浓度下孵育1、3 h的存活率分别为57.97%、46.78%,说明屎肠球菌GXNN20210320-4具有较好的耐酸耐胆盐能力,该菌株能够经受胃肠道消化液的抑制而发挥作用。屎肠球菌GXNN20210320-4在60℃水浴中孵育15 min后仍有82.35%的菌株存活率,80℃水浴中孵育15 min后活菌数为0,表明屎肠球菌GXNN20210320-4可耐受60℃高温,而不能长时间耐受80℃的高温。体外抑菌试验显示,屎肠球菌GXNN20210320-4对鼠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均具有一定的抑制能力,其中对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最好。综上所述,本研究中的牛源屎肠球菌GXNN20210320-4生长性能良好,对动物无致病性,具有良好的益生特性和抑菌作用,可作为益生菌株进一步开发和应用。

枯草芽孢杆菌与屎肠球菌对蛋鸡生产性能、蛋品质、血清生化、免疫指标和肠道微生物的影响

试验旨在研究枯草芽孢杆菌与屎肠球菌对蛋鸡生产性能、蛋品质、血清生化指标、免疫指标及肠道微生物的影响。选取38周龄400只海兰褐蛋鸡,随机分为4组,每组5个重复,每个重复20只鸡。试验1组(对照组)饲喂基础饲粮;试验2组在基础饲粮中添加200 g/t的枯草芽孢杆菌;试验3组在基础饲粮中添加200 g/t的屎肠球菌;试验4组在基础饲粮中添加由100 g/t枯草芽孢杆菌与100 g/t屎肠球菌组成的复合益生菌。试验期56 d。结果显示,与对照组相比,所有试验组蛋鸡产蛋率均升高(P<0.05),死淘率和料蛋比均降低(P<0.05);蛋壳厚度、蛋黄颜色均升高(P<0.05);蛋鸡血清中的总蛋白及球蛋白含量均增加(P<0.05),血清中免疫球蛋白G、免疫球蛋白M和γ干扰素含量均增加(P<0.05);蛋鸡的盲肠食糜中乳酸菌数量升高(P<0.05),而大肠杆菌和沙门氏菌数量降低(P<0.05)。研究表明,枯草芽孢杆菌与屎肠球菌能够提高蛋鸡的生产性能,维持肠道健康,改善血清生化指标和免疫指标。

屎肠球菌细胞外囊泡对小鼠生长性能、肠道形态和粪便菌群的影响

【目的】探究屎肠球菌细胞外囊泡(Enterococcus faecium extracellular vesicles,Efm-EV)对小鼠生长性能、免疫、肠道形态和粪便菌群的影响,为屎肠球菌作为微生物饲料添加剂在动物生产中的推广应用提供理论依据。【方法】将20只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组和试验组,每组10个重复,每个重复1只小鼠。试验期为5 d,试验组小鼠每隔1 d灌胃含有500 μg的 Efm-EV悬液,每只灌胃150 μL;对照组小鼠灌胃等量PBS溶液。记录小鼠每天的采食量、试验开始和结束时的体重,计算小鼠的平均日增重、平均日采食量、料重比。【结果】与PBS处理相比,Efm-EV处理小鼠的终末体重 、平均日增重、平均日采食量、料重比没有显著变化。Efm-EV处理小鼠的血清IgA和IgG水平与PBS处理小鼠相比显著下降(P<0.05),而小鼠血清IL-10水平显著提升(P<0.05),TNF-α无显著变化。与PBS处理相比,Efm-EV处理小鼠十二指肠绒隐比显著提高(P<0.05),而小鼠十二指肠绒毛高度、隐窝深度,空肠和回肠的绒毛高度、隐窝深度、绒隐比无明显变化。灌胃Efm-EV处理小鼠粪便菌群在门水平上提高了厚壁菌门(Firmicutes)的细菌数量,降低了拟杆菌门(Bacteroidetes)的细菌数量;在科水平上提高了毛螺菌科(Lachnospiraceae)的丰度,降低了Muribaculaceae科的丰度;在属水平上显著提高了小鼠瘤胃球菌科UCG009 (Ruminococcaceae UCG 009)的丰度(P<0.05)。【结论】灌胃Efm-EV能够提高小鼠机体的抗炎水平,改善小鼠十二指肠形态结构,提高瘤胃球菌科UCG009的相对丰度。

一株猪源optrA阳性屎肠球菌的分离鉴定及基因组特征分析

为了调查湖南浏阳地区某生猪养殖场屎肠球菌的耐药情况及耐药基因可能存在的传播机制,从浏阳地区某猪场中采集不同生长阶段猪只肛拭子以及环境样本共345份,从中分离鉴定出76株肠球菌,其中屎肠球菌1株(1.3%),采用琼脂扩散法考察屎肠球菌对10种抗菌药物的耐药情况,并对该菌株进行全基因组测序,检测其耐药基因和毒力基因的分布情况,最后对optrA特定基因组结构进行分析。结果显示,从猪只肛拭子样本分离的编号Ec63菌株,经全基因组测序组装、拼接,得到一条大小为2759403 bp的环状DNA(GC含量为37.9%),携带9大类抗菌药的10种耐药基因,均定位于染色体上,其中氨基糖苷类耐药基因数量最多,且携带有噁唑烷酮类耐药基因optrA;此外,该菌株携带sagA等毒力基因21个,不含有强毒菌株的毒力基因序列。药物敏感性试验结果表明,该菌株对头孢噻呋、四环素呈现高度耐药,对恩诺沙星、万古霉素、红霉素、庆大霉素、头孢西丁、氟苯尼考、利奈唑胺和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑敏感。特定基因组结构分析显示,该菌株存在fexA-optrA核心遗传环境。结果表明,该菌株对机体表现弱毒力的潜力,但存在多耐药性(MDR)基因,是一株多重耐药屎肠球菌。fexA-optrA的基因遗传环境在屎肠球菌耐药传播中起着重要作用,对公共卫生安全具有潜在威胁。本研究结果可为屎肠球菌在养殖业中的应用提供参考依据。

饲料中添加包衣屎肠球菌对异育银鲫生长性能和肌肉品质的影响

本试验旨在研究饲料中添加包衣屎肠球菌对异育银鲫生长性能和肌肉品质的影响。选取240尾初重[(10.99±0.01) g]相近的异育银鲫,随机分成3组,每组设4个重复,每个重复20尾。3组试验鱼分别投喂添加0(对照组)、1.0×10^(7)(LF组)和1.0×10^(8)CFU/g(HF组)包衣屎肠球菌的饲料,实测饲料中乳酸菌活菌数分别为<10^(4)、5.4×10^(6)和6.2×10^(7)CFU/g,试验期12周。结果显示:与对照组相比,HF组的终末体重、增重率、特定生长率、蛋白质效率显著提高(P <0.05),饲料系数显著降低(P <0.05)。LF组的肌肉pH、解冻损失率均显著低于对照组(P <0.05),LF组、HF组肌肉的羟脯氨酸、胶原蛋白含量均较对照组显著提高(P<0.05)。与对照组相比,LF组肌肉的韧性显著提高(P<0.05),HF组肌肉的硬度、韧性、咀嚼性均显著提高(P<0.05)。LF组、HF组的肌纤维直径显著低于对照组(P<0.05),而肌纤维密度则显著高于对照组(P<0.05)。由此可见,饲料中添加包衣屎肠球菌可以促进异育银鲫生长,提高其肌肉品质,且以添加量为1.0×10^(8)CFU/g时效果较好。

屎肠球菌Ef026的体外益生特性研究

本试验旨在探究屎肠球菌Ef026的体外益生特性,挖掘其开发成饲用微生物制剂的潜力。通过对菌株的耐受性、细胞表面特性、抑菌作用、抗氧化作用及药敏试验,全面评价了其体外益生特性。结果显示:屎肠球菌Ef026在pH 3.0及0.3%的胆盐浓度下具有良好的耐受性;能够耐受70℃高温;具有极高的黏附性,其黏附指数为(38.00±1.67)%;对多种畜禽和水产养殖中常见病原菌具有一定的抑制作用;菌株完整细胞能够耐受2.0 mM H_(2)O_(2),同时还具有还原能力、DPPH·清除力、·O_(2)^(-)清除力和抗脂质过氧化能力;对常用抗生素具有不同程度的敏感性。屎肠球菌Ef026具有优良的体外益生特性,具有开发成饲用微生物制剂的价值。

响应面法优化屎肠球菌T2-2产γ-氨基丁酸的发酵条件

从传统腌制芥菜中筛选获得高产γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的屎肠球菌T2-2为研究对象,通过单因素实验和响应面法优化菌株发酵条件,提高GABA产量。结果表明:屎肠球菌T2-2产GABA最佳发酵条件为:温度30℃,屎肠球菌T2-2添加量7.50%,L-谷氨酸钠添加量18.93 g/L,pH 6.0,时间1 d,此时菌体生长量为0.338,酶活为3.177μg/mL,GABA产量为1.190 mg/mL,较优化前提高63.01%。本研究为提高乳酸菌产GABA含量提供一定的理论依据。

万古霉素依赖性屎肠球菌的生物学特性观察

目的观察万古霉素依赖性屎肠球菌(VDEfm-1501)的生物学特性。方法 1株从1例血液病患者尿液中分离到的依赖万古霉素生长的VDEfm-1501,先用VITEK 2细菌鉴定仪对其进行菌种鉴定,之后用PCR法和VITEK MS质谱鉴定法对其进一步验证。E-test法检测VDEfm-1501万古霉素依赖生长特性及生长所需的最低万古霉素浓度;K-B法检测VDEfm-1501耐药性;PCR法检测VDEfm-1501耐药基因;多位点序列分型法对VDEfm-1501进行序列型(ST)分型;PCR法对VDEfm-1501的D-丙氨酸连接酶基因(ddl基因)进行测序。结果随着VDEfm-1501传代次数增多其万古依赖性逐渐减弱,传至第5代时这种依赖性不再明显,第6代时几乎完全消失;VDEfm-1501正常生长至少需要1.0μg/m L的万古霉素。VDEfm-1501对氨苄青霉素、庆大霉素及环丙沙星耐药,仅对利奈唑胺和四环素敏感;VDEfm-1501携带庆大霉素耐药基因[ace(6')-Ie-aph(2″)-la基因]。VDEfm-1501为耐万古霉素的肠球菌(VRE)ST型,属于CC17克隆复合体。VDEfm-1501的ddl基因942 bps位置上插入了"GG"。结论 VDEfm-1501依赖万古霉素生长的特性容易丢失,其生长所需的最低万古霉素浓度为1.0μg/m L。VDEfm-1501多重耐药,携带耐药基因ace(6')-Ie-aph(2")-la基因。VDEfm-1501属于VRE的ST型。ddl基因942 bps位置上"GG"的插入导致了VDEfm-1501的出现。

MALDI-TOF MS快速鉴定耐万古霉素屎肠球菌及其流行病学分型性能分析

目的利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)快速鉴别van A型万古霉素耐药屎肠球菌(VREfm)和万古霉素敏感屎肠球菌(VSEfm),并对VREfm进行流行病学相关性分析。方法收集139株屎肠球菌临床分离株,其中VREfm66株、VSEfm73株。采用聚合酶链反应(PCR)确定66株VREfm的万古霉素耐药基因。采用MALDI-TOFMS鉴定屎肠球菌。随机选取45株VREfm和50株VSEfm,采用ClinProTools 3.0软件对质谱峰进行分析并建立模型,用最佳模型验证另外的21株VREfm和23株VSEfm。随机选取21株VREfm进行多位点序列分型(MLST)分析,并采用MALDI-TOF MS对其进行层次聚类分析。结果MALDI-TOF MS鉴定出所有菌株均为屎肠球菌,鉴定分值为2.321~2.602。66株VREfm均为vanA基因型。采用ClinProTools 3.0软件建立的最佳模型进行外部验证时,敏感性和特异性分别为95.2%和95.7%。21株VREfm共有7种序列分型(ST)型别,以ST78最常见。MALDI-TOF MS将21株VREfm分为4个集群,绝大多数ST78菌株被归于同一集群,与ST78高度相关的其他ST型别也被归于此集群。结论在严格控制实验条件的前提下,MALDI-TOF MS可快速区分vanA型VREfm和VSEfm,但无法区分与VREfm高度相关的ST型别。

屎肠球菌的检测技术

屎肠球菌是条件致病菌,通常情况下可在动物肠道内正常存在,并不会导致宿主动物发生疾病,但在宿主的免疫力或者营养状况下降的情况下,就会引发一系列疾病,如引起鸡的急性败血症、慢性关节炎等。王亚宾等(2010)和刘昆等(2015)分别建立猪源和羊源屎肠球菌PCR和多重PCR的检测方法。PCR的方法虽然敏感、特异,但仍需扩增后处理,耗时长、容易造成污染,且不能定量。近年来,定量PCR已经被普遍用于病原菌的检测,该方法除了具有PCR方法的优点外,更快速,且能定量。在国内有关屎肠球菌定量PCR鲜有报道,因此,本研究拟建立屎肠球菌定量PCR,从而对屎肠球菌做出快速检测。

枯草杆菌屎肠球菌二联活菌胶囊治疗急慢性腹泻的疗效及安全性

目的:临床验证枯草杆菌、屎肠球菌(美常安)治疗急慢性腹泻的疗效及安全性。方法:多中心、随机、盲法、平行对照研究。其中急性腹泻95例,慢性腹泻48例;急性腹泻疗程5d,慢性腹泻疗程14d,观察腹泻缓解时间及腹泻伴随症状(腹疼痛、腹胀、里急后重等)变化。结果:急性腹泻于疗程结束时,试验组腹泻缓解率为91.67%(44/48);大便成形率为78.05%(32/41);腹泻伴随症状积分明显下降,腹泻综合疗效评估显效78.72%(37/47),有效率为10.64%(5/47),与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。慢性腹泻组3d时腹泻缓解率为37.50%(9/24),起效比对照组迅速,2组比较P=0.039 5;疗程结束时腹泻缓解率为91.67%(22/24),大便成形率为62.50%(15/24),腹泻伴随症状明显下降;综合疗效评估显效66.67%(16/24),有效25.005(6/24)。安全性研究未发现不良反应。结论:枯草杆菌屎肠球菌二联活菌胶囊治疗成人急慢性腹泻安全有效。

粪肠球菌和屎肠球菌的耐药特征

目的了解粪肠球菌和屎肠球菌在临床标本中的分布及对常用抗菌药物的耐药性,比较不同标本中两种肠球菌的耐药性,为临床治疗提供参考。方法常规法进行菌种鉴定,纸片扩散法进行药物敏感试验。结果420株肠球菌属,来源于尿液、脓液分泌物、痰液,分别占43%、20%、14%位居各类标本中的前3位,粪肠球菌对青霉素、氨苄西林和哌拉西林/他唑巴坦的耐药率分别为23.0%、17.6%和21.2%,明显低于屎肠球菌对这3种抗菌药物的耐药率(90.0%、87.0%和87.7%),而屎肠球菌对氯霉素和四环素的耐药率分别为7.9%和24.6%,明显低于粪肠球菌对这两种抗菌药物的耐药率(43.8%和74.4%),两种肠球菌中,未发现万古霉素耐药株;尿液标本中粪肠球菌对呋喃妥因的耐药率明显低于屎肠球菌。结论临床标本中,肠球菌属在尿液中的分布最高;粪肠球菌和屎肠球菌的耐药谱明显不同,在治疗时,应根据不同的菌种选择用药,由于肠球菌属对万古霉素的耐药率极低,在重症感染时,可选用万古霉素进行治疗。

产乳酸菌素屎肠球菌B_(13)对断奶仔猪生长性能、养分消化率、血清免疫指标及粪便微生物菌群的影响

旨在探讨高产乳酸菌素屎肠球菌B_(13)在饲料中添加对断奶仔猪生产性能、养分消化率、血清免疫指标、粪便微生物菌群的影响。本试验选用28日龄生长状况良好的"杜×长×大"三元杂交仔猪(初重(7.89±1.37)kg)56头,以体重为区组,分配到4个处理组中:A组(抗生素组)、B组(无抗组)、C组(复合菌组)和D组(试验菌组:屎肠球菌B_(13)),试验周期42d。结果表明:1)C、D两组仔猪的全期平均日增重较B组均明显提高(P<0.05),钙的表观消化率较B组显著提高(P<0.05);D组血清中IgG抗体水平较B组提高19.72%(P<0.05)。2)DGGE结果显示,添加屎肠球菌(D组)对粪便中细菌多样性有影响。3)RT-PCR结果显示,添加益生菌(C、D组)后仔猪粪便中乳酸菌及屎肠球菌数量较B组显著增加(P<0.05),并且大肠杆菌数量具有下降趋势(P=0.07)。综上表明,在本试验条件下,饲粮中添加屎肠球菌B_(13)能提高仔猪生产性能、粗蛋白及钙的消化率,增强仔猪免疫力;同时它还能够维持仔猪消化道菌群稳态,遏制致病微生物的生长。

屎肠球菌对仔猪生长性能、免疫和抗氧化功能的影响

试验旨在研究屎肠球菌(Enterococcus faecium,E.faecium)对仔猪生长性能、免疫和抗氧化功能的影响。选用平均体重19.7 kg左右的杜长金仔猪120头,随机分为对照组和试验组,每组设3个重复,每个重复20头仔猪(公母各半)。对照组仅饲喂基础日粮,试验组饲喂添加屎肠球菌(菌含量为1×106 CFU·g-1饲料)的基础日粮。结果表明:日粮中添加屎肠球菌能改善动物的生产性能,其中日增重提高了11.46%(P<0.05),料肉比降低了6.20%(P<0.05);屎肠球菌能提高仔猪免疫和抗氧化功能,其中仔猪血清中白蛋白,IgA,IgG,C3,C4水平和溶菌酶活性分别提高了28.06%(P<0.05),16.48%(P<0.05),25.43%(P<0.05),37.84%(P<0.05),25.00%(P<0.05)和76.08%(P<0.05);血清中谷胱甘肽含量提高了46.80%(P<0.01),但总超氧化物歧化酶活力降低了10.38%(P<0.05)。另外,日粮中添加屎肠球菌使仔猪粪中沙门氏菌和大肠杆菌数量分别降低了15.37%(P<0.01)和11.79%(P<0.05),乳酸菌数量增加了18.78%(P<0.05),细菌总数无明显变化。结果还表明,在断奶仔猪日粮中添加屎肠球菌能够显著促进断奶仔猪的生长,其机理可能在于屎肠球菌作为益生菌,其添加能够显著提高仔猪的特异性免疫和非特异免疫功能,并改善断奶仔猪肠道菌群结构。