山茱萸多糖对乳腺癌MCF-7细胞的影响及其通过调控AMPK/SIRT1通路的作用机制研究

目的:探讨山茱萸多糖对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响,并通过观察山茱萸多糖对腺苷酸活化蛋白激酶/沉默信息调节因子1(AMPK/SIRT1)通路的调控作用探索其可能的作用机制。方法:体外培养MCF-7细胞,随机分为对照组(正常培养基培养)和山茱萸多糖低、中、高剂量组(分别予12.5、25.0、50.0 mg/mL山茱萸多糖培养)以及山茱萸多糖高剂量+AMPK激活剂(AICAR)组(予50.0 mg/mL山茱萸多糖+2.0 mmol/L AICAR培养),采用平板克隆形成试验检测MCF-7细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,划痕试验检测细胞迁移情况,Transwell法检测细胞侵袭情况,蛋白免疫印迹法(Western blot法)检测各组细胞AMPK、磷酸化AMPK(p-AMPK)、SIRT1蛋白相对表达量。选择BALB/c裸鼠,建立荷瘤裸鼠模型,随机分为对照组(灌胃生理盐水)与山茱萸多糖组(每日灌胃800 mg/kg山茱萸多糖溶液),每组6只,连续灌胃28 d。每7 d测量2组裸鼠肿瘤体积并做组间比较,灌胃结束后处死各组裸鼠取移植瘤,采用免疫组化法检测各组裸鼠移植瘤组织中AMPK、p-AMPK、SIRT1蛋白表达。结果:体外细胞学实验结果表明,山茱萸多糖低、中、高剂量组MCF-7细胞集落形成数明显低于对照组(P<0.05),细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05),细胞划痕愈合率、细胞侵袭数明显低于对照组(P<0.05),细胞中p-AMPK、SIRT1蛋白表达明显低于对照组(P<0.05);山茱萸多糖高剂量+AICAR组MCF-7细胞集落形成数明显高于山茱萸多糖高剂量组(P<0.05),细胞凋亡率明显低于山茱萸多糖高剂量组(P<0.05),细胞划痕愈合率、细胞侵袭数明显高于山茱萸多糖高剂量组(P<0.05),细胞中p-AMPK、SIRT1蛋白表达明显高于山茱萸多糖高剂量组(P<0.05);山茱萸多糖各剂量对上述指标的影响表现出显著的剂量依赖性(P<0.05)。荷瘤裸鼠实验结果表明,移植第14、21、28、35 d山茱萸多糖组裸鼠移植瘤体积显著小于对照组(P<0.05);干预结束后,山茱萸多糖组裸鼠移植瘤质量与瘤体组织p-AMPK、SIRT1蛋白阳性表达率均明显低于对照组(P<0.05),AMPK蛋白阳性表达率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:山茱萸多糖对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭有一定的抑制作用,并可促进MCF-7细胞凋亡,能抑制裸鼠移植瘤生长,其可能的机制为抑制AMPK/SIRT1通路激活。

山茱萸多糖对肺癌细胞的凋亡作用及Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨山茱萸多糖对人肺癌A549细胞凋亡的作用及凋亡相关基因表达的影响。方法采用MTT法、DNA琼脂糖凝胶电泳法、免疫组化SP法检测山茱萸多糖对A549细胞凋亡作用及Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果山茱萸多糖对A549细胞抑制作用明显,抑制程度与质量浓度呈正相关;DNA琼脂糖凝胶电泳出现相差约200 bp的DNA梯形条带,免疫组化SP法染色显示Bcl-2的表达下降,Bax的表达上升。结论山茱萸多糖对人肺癌A549细胞的增殖有较强抑制作用,能诱导细胞凋亡,其机制与下调Bcl-2的表达,上调Bax的表达有关。

山茱萸多糖提取纯化方法及药理作用研究进展

山茱萸又叫石枣、药枣,为山茱萸科植物山茱萸(Cornus officinalis Sieb.et Zucc)干燥成熟果肉,具有补益肝肾、涩精固脱的功效。本文着重就山茱萸多糖的提取纯化方法及山茱萸多糖的药理作用作一综述。1山茱萸多糖的提取纯化方法及最佳的提取工艺1.1传统提取纯化方法主要采取热水、超声和乙醇沉淀等。李平等〔1〕将热水抽提后的山茱萸残渣用碱提取后,经过中和、

山茱萸多糖对肺癌A549细胞凋亡的影响及机制

目的探讨山茱萸多糖对人肺癌A549细胞凋亡作用的影响及机制。方法收集对数生长期A549细胞,加入终质量浓度分别为25、50、100 mg/mL的山茱萸多糖20μL,分别培养24、48、72 h,MTT法测定细胞增殖抑制率和山茱萸多糖的半抑制浓度(IC50)。倒置显微镜下观察50 mg/mL山茱萸多糖作用后细胞形态变化。免疫组化SP法检测Survivin蛋白表达,用免疫组化评分(IHS)表示。结果山茱萸多糖作用后A549细胞生长受到明显抑制,细胞增殖抑制率呈明显的量效、时效关系;倒置显微镜下观察到细胞凋亡的典型改变,免疫组化SP法染色显示Survivin表达降低,Survivin蛋白的IHS随浓度增加呈明显下降趋势。结论山茱萸多糖能诱导A549细胞凋亡,其机制可能与下调Survivin表达有关。

山茱萸多糖对自然衰老雌性小鼠卵巢功能的影响

目的观察山茱萸多糖对自然衰老雌性小鼠卵巢功能的改变。方法 3月龄小鼠为青年组对照,取14月龄左右自然衰老的雌性小鼠为老年组,然后灌服山茱萸多糖(青年组灌生理盐水)。24d后处死小鼠,测血清中激素水平,卵巢组织进行HE染色及电镜检测。结果 HE染色结果显示老年组与青年组比较,可见卵泡和黄体数量减少,闭锁卵泡较多,颗粒细胞消失或极薄而少;多糖组可见各级生长卵泡,部分卵泡周边可见较多而厚的颗粒细胞层,但卵泡数量较青年组少,闭锁卵泡减少。电镜结果显示老年组卵巢颗粒细胞数量明显减少,核膜粗糙,细胞器减少,可见染色质浓集于核边缘,多糖组凋亡征象明显改善。激素检测结果显示老年组孕激素(孕酮P)水平与青年组比明显较低,山茱萸多糖组孕激素值较老年组明显升高,差异显著(P<0.05);老年组与青年组比雄激素(睾酮T)值差异不显著,多糖组与老年组也无差异。结论山茱萸多糖可明显改善自然衰老雌性小鼠的卵巢功能。

山茱萸多糖对D-gal致衰小鼠IL-1、IL-2、IL-6以及NO、NOS作用的实验研究

目的研究D-半乳糖(D-gal)衰老小鼠NO自由基及三种细胞因子的活性,以及山茱萸多糖对增龄变化的影响。方法以D-gal致衰小鼠为研究对象,测定NO、NOS及IL-1、IL-2、IL-6等活性。结果D-gal致衰小鼠NO、NOS及IL-6显著高于青年对照组(P<0.01);而IL-1、IL-2却较青年对照组显著下降(P<0.05,P<0.01)。与衰老小鼠比较,给予山茱萸多糖大小剂量组能明显降低NO、NOS及IL-6,并且能显著提高IL-1、IL-2。结论山茱萸多糖可以通过降低NO自由基和IL-6含量,提高IL-1、IL-2含量.改善机体免疫功能,起到延缓衰老的作用。

山茱萸多糖对环磷酰胺致小鼠白细胞减少症的影响

目的:观察山茱萸多糖(cornel polysaccharides,CPS)对环磷酰胺导致的白细胞减少症的影响。方法:利用环磷酰胺腹腔注射造成小鼠白细胞减少症模型,用多糖小大两个剂量灌胃给药,不同时间检测小鼠外周血象、胸腺系数、脾脏系数、骨髓有核细胞数及DNA含量。结果:山茱萸多糖可明显升高模型小鼠的WBC、RBC、Hgb、PLT,骨髓有核细胞数和DNA含量。结论:山茱萸多糖对白细胞减少症模型小鼠有明显作用。其作用与改善骨髓造血功能有关。

山茱萸多糖对HDF细胞β-半乳糖苷酶及p16表达的影响

目的探讨山茱萸多糖对抗HDF细胞衰老的作用及其可能的调控机制。方法体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞(HDF),实验组从40代开始加多糖含药血清,观察细胞形态,MTT法检测细胞活力,分光光度法检测β-半乳糖苷酶活性,免疫组化法检测p16蛋白的表达。结果衰老组细胞活力下降,β-半乳糖苷酶含量升高,p16蛋白表达阳性细胞数升高;山茱萸多糖可提高细胞活力、降低β-半乳糖苷酶含量,p16蛋白表达阳性细胞数下降。结论山茱萸多糖可通过改变p16的表达而发挥其抗HDF细胞衰老作用。

山茱萸多糖PFCCⅠ抗氧化性能研究

研究了山茱萸多糖PFCCⅠ的抗氧化性能。利用烘箱法研究多糖对油脂的抗氧化活性,结果表明,碱提山茱萸多糖PFCCⅠ可有效抑制植物油氧化;利用Fenton反应检测多糖PFCCⅠ对羟基自由基(·OH)的清除作用,当清除率达50%时所需浓度分别为80μg/mL;通过邻苯三酚自氧化反应检测二者对超氧阴离子自由基(O2-·)的清除能力,当清除率达50%时所需PFCCⅠ浓度为34.9μg/mL。

山茱萸多糖对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆及海马糖原合成酶激酶-3β表达的影响

目的研究山茱萸多糖对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆及海马糖原合成酶激酶(GSK)-3β表达的影响。方法将100只Wistar大鼠随机分成4组,青年组、模型组、多奈哌齐组、山茱萸多糖组。采用D-半乳糖联合海马区β淀粉样蛋白(Aβ)_(1～40)注射建立AD模型。水迷宫实验观察大鼠学习记忆能力,HE染色观察病理组织学变化,免疫组化(SABC法)检测海马CA2区GSK-3β蛋白表达量。结果与模型组比较,山茱萸多糖组平均逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),穿越原平台次数明显增加(P<0.05)。山茱萸多糖组GSK-3β蛋白阳性染色较模型组明显减弱(P<0.05)。结论山茱萸多糖对AD模型大鼠学习记忆能力有改善,可能与降低海马区GSK-3β蛋白表达量相关。

山茱萸多糖对阿尔茨海默病模型大鼠tau蛋白的影响

目的研究山茱萸多糖对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化的影响及其机制。方法清洁级Wistar鼠63只,随机分为青年组、假手术组、模型组、多奈哌齐组和山茱萸多糖组。采用D-半乳糖与Aβ联合诱导法制作AD大鼠模型,Morris水迷宫检测学习记忆能力,免疫组化法检测海马神经元p-tau(Ser422)及tau蛋白的表达情况,Western印迹法检测大鼠海马神经元tau蛋白在Ser422位点、Ser396位点的磷酸化水平。结果与青年组、假手术组比较,模型组大鼠海马p-tau(Ser422)、p-tau(Ser396)表达增加(P<0.05),多奈哌齐和山茱萸多糖显著降低p-tau(Ser422)、p-tau(Ser396)表达(P<0.05)、提高tau蛋白表达(P<0.05)。结论山茱萸多糖可通过抑制p-tau(Ser422)、p-tau(Ser396)生成,改善AD大鼠学习记忆能力。

山茱萸多糖对阿尔茨海默病模型大鼠GSK-3β和磷酸化GSK-3β的影响

目的研究山茱萸多糖对阿尔茨海默病(AD)大鼠GSK-3β和磷酸化GSK-3β的影响,探讨其对AD大鼠的保护作用机制。方法清洁级Wistar大鼠120只,随机分为青年组、假手术组、模型组、多奈哌嗪对照组、山茱萸多糖水提液组、山茱萸水煎剂组,每组20只。采用海马注射Aβ-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)制作AD大鼠模型,免疫组化(SABC)法和免疫蛋白印迹法检测GSK-3β蛋白和GSK-3β(Ser9)蛋白的表达水平。结果与青年组、假手术组比较,模型组大鼠海马组织GSK-3β蛋白表达增加(P<0.05),GSK-3β(Ser9)蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,多奈哌嗪对照组,山茱萸多糖水提液组,山茱萸水煎剂组大鼠的GSK-3β蛋白表达显著减少(P<0.05),GSK-3β(Ser9)蛋白表达增加(P<0.05)。结论山茱萸多糖通过抑制GSK-3β蛋白过度激活,促进GSK-3β(Ser9)蛋白表达途径防治AD的发生发展。

山茱萸多糖的提取及含量测定

目的从山茱萸中提取多糖,并建立山茱萸多糖含量的测定方法。方法采用均匀设计优化山茱萸多糖的提取条件,用热水浸提、乙醇沉淀、DE-52柱层析的方法提取纯化山茱萸多糖,用苯酚-硫酸比色法测定多糖含量。结果山茱萸中多糖的含量为16.04%,平均回收率为99.01%,RSD=1.13%(n=3)。结论首次运用均匀设计优化山茱萸多糖的提取条件,提取得率高,苯酚-硫酸比色法测定山茱萸多糖含量稳定性、回收率较好。

山茱萸多糖对衰老模型大鼠学习记忆能力影响的研究

目的以山茱萸多糖对D-半乳糖致衰大鼠抗脑老化及学习记忆能力的影响,探讨其在改善脑老化方面的作用及可能机制。方法采用D-半乳糖诱导的衰老模型Wistar大鼠为实验对象,经胃灌服不同剂量山茱萸多糖(0.14、0.28 g/kg),连续灌服30 d。测定各组大鼠学习记忆能力、脑组织丙二醛(MDA)、脂褐素(LF)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和单胺氧化酶B(MAO-B)活性,同时观察不同剂量山茱萸多糖对衰老模型大鼠上述指标的影响。结果衰老模型组MDA、LF含量、MAO-B活性较青年组明显增加(P<0.01),而学习记忆能力、SOD活性明显低于青年组(P<0.01);不同剂量山茱萸多糖组学习记忆能力、SOD活性明显高于衰老模型组(P<0.05,P<0.01),而MDA、LF含量、MAO-B活性显著低于衰老模型组(P<0.05,P<0.01),以山茱萸多糖大剂量组效果更显著,山茱萸多糖大剂量组作用优于小剂量组。结论山茱萸多糖可通过提高机体抗氧化能力、抑制脂质过氧化、提高老化相关酶活性发挥抗脑老化作用,提高大鼠学习记忆能力。

山茱萸多糖对衰老模型小鼠肝组织SIRT1和p53基因表达的影响

目的研究山茱萸多糖对衰老模型小鼠肝细胞SIRT1和p53基因表达的影响。方法采用半定量RT-PCR法测定小鼠肝组织SIRT1 mRNA和p53 mRNA的表达,并观察山茱萸多糖对其影响。结果与青年对照组相比,衰老模型组小鼠p53 mRNA表达增高,SIRT1 mRNA表达降低(P<0.01)。山茱萸多糖可降低p53基因表达(P<0.05),使SIRT1基因表达增强,但与衰老模型组相比差异无统计学意义(P>0.05);山茱萸多糖大小剂量组间无明显差异(P>0.05)。结论山茱萸多糖通过影响SIRT1对p53的作用而延缓衰老。

山茱萸多糖对衰老HDF细胞cyclinD1、CDK4表达的影响

目的探讨山茱萸多糖对抗人胚肺成纤维二倍体(HDF)细胞衰老的作用及其可能的细胞周期调控机制。方法体外培养HDF细胞,实验组从40代开始加山茱萸多糖含药血清。观察细胞形态;MTT法检测细胞活力;RT-PCR法检测细胞周期蛋白(cyclin)D1、细胞周期蛋白依赖激酶(CDK)4的mRNA表达。结果衰老组细胞活力下降,cyclinD1mRNA表达升高,CDK4 mRNA表达下降;山茱萸多糖可提高细胞活力,降低cy-clinD1表达,提高CDK4表达量。结论山茱萸多糖可能通过改变细胞周期调控因子的表达而发挥其抗HDF细胞衰老作用。

山茱萸多糖对胃癌细胞增殖和凋亡的机制

目的探讨山茱萸多糖对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法用不同剂量山茱萸多糖灌胃接种AGS细胞的裸鼠,检测裸鼠体内肿瘤体积;TUNEL法检测细胞凋亡指数;胃癌细胞AGS分为对照组、山茱萸多糖低、中、高剂量组、si-NC组、si-ELF3-AS1组、山茱萸多糖+pcDNA组、山茱萸多糖+pcDNA-ELF3-AS1组。MTT检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测lncRNA ELF3-AS1表达水平。结果山茱萸多糖处理的裸鼠体内移植瘤体积减少,细胞凋亡指数升高(P<0.05)。山茱萸多糖处理胃癌细胞AGS后,细胞增殖抑制率升高,凋亡率升高,ELF3-AS1表达水平降低,且呈剂量依赖性(P<0.05)。胃癌细胞AGS中ELF3-AS1表达水平升高(P<0.05)。抑制ELF3-AS1表达后,细胞增殖抑制率升高,凋亡率升高(P<0.05)。ELF3-AS1过表达逆转了山茱萸多糖对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的作用。结论山茱萸多糖可能通过下调ELF3-AS1抑制胃癌AGS细胞增殖,促进AGS细胞凋亡。

山茱萸多糖对阿尔茨海默病模型大鼠认知能力和海马磷酸化-tau蛋白表达的影响

目的观察山茱萸多糖对阿尔茨海默病(AD)大鼠认知能力的影响及作用机制。方法 100只Wistar大鼠随机分为青年组、假手术组、模型组、多奈哌齐组、山茱萸多糖组各20只。采用D-半乳糖联合β-淀粉样蛋白(Aβ)1~40注射建立AD模型。水迷宫实验观察大鼠认知能力,免疫组化(SABC)法检测大鼠海马CA4区磷酸化tau(p-tau)蛋白表达量。结果药物干预后,山茱萸多糖组平均逃避潜伏期较模型组明显缩短(P<0.05);120 s穿越原平台次数较模型组明显增加(P<0.05)。山茱萸多糖组海马区p-tau蛋白阳性染色较模型组明显减弱(P<0.05)。结论山茱萸多糖对AD大鼠认知能力有改善,可能与降低海马区p-tau蛋白表达量相关。

山茱萸多糖的生理活性研究

以肾阴虚小鼠模型、CCl4急性肝损伤小鼠模型及小鼠免疫低下模型探讨山茱萸多糖补益肝肾的作用。以负重游泳时间、耐缺氧时间、血清超氧化岐化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量为指标,考察山茱萸多糖对肾阴虚小鼠模型的作用;以丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、SOD和MDA含量为指标,考察山茱萸多糖对CCl4急性肝损伤小鼠模型的作用;以小鼠血清溶血素水平,考察山茱萸多糖对机体特异性免疫功能的影响。研究结果表明:山茱萸多糖能显著增强肾阴虚小鼠的负重游泳时间、耐缺氧时间,提高血清中SOD活性,降低血清中MDA含量;降低肝损伤小鼠血清ALT、AST水平和肝脏组织中MDA含量,提高肝脏组织中SOD活性;提高免疫低下小鼠血清溶血素水平。山茱萸多糖能增强小鼠免疫功能、保护肝脏组织和改善肾阴虚症状,并以此实现补益肝肾的作用。

山茱萸多糖提取条件的优化

通过单因素试验和均匀设计试验,研究了温度、时间、料液比对山茱萸多糖提取得率的影响。结果表明:提取温度是影响多糖提取得率的主要因素;最佳提取工艺为料液比1∶36,温度100℃,时间180 min,在该条件下山茱萸多糖提取得率为199.36 mg/g。