钙通道抑制剂对川百合花粉萌发的影响

细胞内钙离子在花粉萌发过程中发挥重要作用,钙离子如何被植物花粉细胞所吸收是植物生殖生理研究的热点问题.对一些常用的钙通道抑制剂对川百合花粉萌发和花粉管伸长生长的影响进行了研究.结果表明,萌发中的花粉需要从外界吸收大量钙离子,电压依赖型钙通道的有机抑制剂(异搏定、尼群地平、地而流卓)和3价无机离子(镧、铝、钆)可以明显抑制花粉萌发,电压依赖型通道很可能是细胞外钙离子进入萌发花粉的重要途径.

云南川百合DALP遗传变异分析

采用DALP分子标记技术,对10个川百合居群进行DNA指纹检测,结果筛选出5个引物组合,扩增后共产生192条DNA基因片段,其中178条谱带具有遗传多态性,占92.71%;10个居群的总等位基因数(Na)为1.9271、平均为1.0823,总有效等位基因数(Ne)为1.4430、平均1.0533,基因多样性指数(H)为0.2673、平均0.0303,总Shannon多样性指数(I)为0.4105、平均为0.0447,基因分化系数(Gst)为0.8874,即遗传变异有88.74%发生在居群间、有11.26%发生在居群内,表明川百合居群间存在较大的遗传分化。此外,昆明市西山的川百合野生居群(DC)的遗传多样性明显高于栽培居群,这与川百合栽培品种长期人工驯化有直接关系。同时野生居群受到人为活动干扰严重。研究结果表明,DALP分析可为川百合遗传育种的可持续利用提供理论依据。

骤然低温下转录组测序揭示川百合抗寒通路与相关基因

在没有参考基因组的情况下,为了揭示川百合(Lilium davidii)在4℃处理下基因表达谱的变化,为百合抗寒育种、引种及栽培提供理论支撑及技术支持。采用高通量Illumina Hiseq测序平台对川百合20℃(对照组)与4℃(处理组)温度条件下进行转录组测序,并对测序数据进行了分析研究,进一步探究川百合寒冷应答的分子机制。结果表明,经富集分析后得,与光合作用、光合作用-天线蛋白、光合生物体中的碳固定、叶绿素代谢等相关的基因可以作为研究川百合寒冷响应机制的主要研究对象。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析结果表明,随机选出的10个差异性表达基因的表达趋势与高通量测序结果一致。这为川百合响应低温相关基因的发掘与利用、川百合耐寒分子机制的揭示及百合种植资源遗传改良奠定了基础。

兰州百合与川百合试管苗结鳞茎研究

以兰州百合与川百合组培苗为材料进行了试管内结鳞茎的诱导研究,结果表明:兰州百合试管内诱导形成鳞茎的最适培养基为1/2MS+0.5mg/LIBA,平均每株结鳞茎数可达3.1个,鳞茎平均直茎为1.0cm,鳞茎形成部位在试管苗的底部。川百合试管内诱导形成鳞茎的最适培养基为1/2MS+1.0mg/LIAA,平均每株结鳞茎数为1个,鳞茎平均直茎为0.7cm,鳞茎形成部位在试管苗的顶端。

川百合精细胞的超微结构

川百合与朱顶红花粉管中的生殖细胞分裂行为非常不同。诸如：染色体行为微管的组织形式和分布包括着丝点微管形成的时间，纺锤体的形状及间期周质微管网络在生殖细胞分裂过程中消失与否等，但这两种细胞具有共性，包括在有丝分裂前期缺乏早前期带微管（PPB），未其形成细胞板等，这两种植物精细胞的结构应有较大差异，我们曾报道了朱顶红精细胞的超微结构，本文详细从超微结构方面描述了川百合精细胞的特征。川百合花粉管的萌发采用半离体－活体培养方式，11－18小时后，DNA荧光染料Hoechst33258和醋酸地衣红染色检查花分管中生殖细胞和精细胞发育时期。切取含有分裂的生细胞和精细细胞的花柱部分，按曾报道的方法固定、包埋、切片、染色及观察。在所有检查的花粉管中，两精子均前后排列（Fig.1-3)，营养核前导并靠近花粉管顶端（Fig.,3)。H33258染色可见两精核间以DNA联系（Fig.3)。两个新形成的精核彼此分离（Fig.1)，后来又相互造近，并维持一定距离（Fig.3)偶尔一对精子与营养核靠近（Fig.2)。两精细胞被一共同的细胞壁连接，他们不仅被自己的质膜也被营养细胞的质膜包围构成周质。周质平坦光滑。共同壁横向、弯曲、网状具胞质通道（Fig.4)，厚度明显大于周质。色质凝集的程度更大些（Fig.5)，可能意味着一个精子发育的早些。精细胞质中具有线粒体、内质网、高尔基体、脂体和大量核糖体。无质体。线粒体具有发育完好的精细胞中，微管呈纵向束排列于随精细胞的继续发育，共同壁消失了。与朱顶红等植物的染色体行为遵循典型有丝分裂方式不同，川百合生殖细胞与紫露草相同，它的染色体在有丝分裂中期沿细胞长轴分布，胞质分裂时没有细胞板出现。可以认为：川百合象烟草一样是介于朱顶红和紫露草之间的中间类型。雄性生殖单位（MGU）在三细胞和二细胞花粉中普遍存在。尽管本工作观察到营养核与精细胞紧密联系，以及两精子与DNA联系的例子，但MGU在超薄切片中并未见到，有可能MGU是一个动态的和时间上的暂时结构。另一方面，MGU的建立是以性细胞（生殖细胞或精细胞）的突起和营养核的裂瓣相互环绕为基础的，而性细胞中的细胞骨架（即：微管）可能对维持其与营养核的附着起重要作用。缺乏微管，可能是川百合精细胞不存在MGU的原因之一。

三倍体川百合的核型与酯酶同功酶鉴定

在云南西北部怒江峡谷,从川百合Lilium davidii Duchartre的一个群体中,首次发现了该种的三倍体个体。本文采用核型及酯酶同功酶分析的方法,以同一群体的二倍体(2n=24)为对照,对此三倍体进行了鉴定。它具有三组形态相同的染色体(2n=3x=36),其核型与二倍体的基本相似;酶谱也显示出三倍体和二倍体具有同源等位基因,三倍体还出现明显的基因剂量效应等变异特征。它应是二倍体川百合的自然同源增倍体。

川百合花粉管的生殖细胞分裂过程中微管骨架的分布变化

应用透射电镜辅以免疫荧光定位技术研究了川百合 (Lilium davidii Duch.)花粉管中生殖细胞分裂过程中染色体动态和微管分布的关系。在生殖细胞分裂前和有丝分裂前期 ,电镜观察一直未见微管结构 ,但免疫荧光图象显示生殖细胞中有微管蛋白存在。直到分裂的前中期—中期 ,染色体出现 ,它们沿花粉管的长轴前后排列 ,横向的着丝点对相应地一对对地纵向排列。这时 ,生殖细胞中才出现大量微管 ,它们分布于细胞周质区和染色体之间 ,并跨越染色体的整个长度。前中期—中期开始时 ,只有 1～ 2对着丝点从横向转为纵向 ,微管垂直插入着丝点形成着丝点微管 ,而非前人用免疫荧光方法观察到的微管与着丝点侧向联接的图象。随着横向的着丝点对逐渐转变成纵向的过程 ,着丝点微管数量逐渐增多 ,但不形成典型的纺锤体。分裂后期 ,染色体交错分离 ,微管的分布与前中期—中期的基本相同。晚后期 ,染色体呈明显的两群 ,除极区和细胞中央区有微管残余外 ,大部分微管消失。通过染色体长度的测量 ,间接证明了分裂后期 B的存在。分裂末期的晚期 ,核膜形成后 ,在两精核之间的区域 ,微管数量开始增多。此区可能代表用免疫荧光所观察到的微管重叠区。细胞板出现后 。

川百合花丝组织培养

川百合花丝在1/2MS大量元素+2,4-D 1㎎/L+KT 1㎎/L培养基上安培养5周后,得到淡黄色愈伤组织。将川百合花丝愈伤组织转到N6+2,4-D 0.5 ㎎/L+、KT 0.5㎎/L培养基上,培养5周。然后转入1/2 MS+BA 2㎎/L+NAA 0.1 ㎎/L 分化培养基上,光照培养4周后,即分化出绿色芽丛。

川百合花粉管类血影蛋白的分离鉴定及功能分析

花粉管伸长是高等植物完成有性生殖的一个重要过程.研究表明,细胞骨架对花粉管的伸长有重要的调控作用,但是目前还不清楚细胞膜骨架是否也参与花粉管伸长的过程.血影蛋白是膜骨架的一个重要组分,通过双向电泳和免疫印迹等方法证明,川百合花粉管总蛋白在硝酸纤维素杂交膜上存在2个血影蛋白印迹点,分子量分别为150和105kD,等电点分别为4.54和4.39.通过提取花粉管质膜总蛋白进行SDS-PAGE和免疫印迹,发现150kD类血影蛋白位于花粉管的质膜上;通过活性电泳发现105kD类血影蛋白以210kD形式存在于花粉管胞质中,且很可能是以二聚体形式存在.通过显微注射的方法将抗人红细胞血影蛋白的抗体注入正在生长的花粉管中,花粉管的伸长明显受到抑制,表明类血影蛋白调控川百合花粉管的伸长过程.

三个卷瓣组百合的根尖染色体C-带比较

利用染色体组型分析进行种和种质资源的识别是一种有效的手段。本文利用Gemisa C-分带方法对三个卷班组百合南川百合(L.rosthornii)、川百合(L.davidii)和金佛山百合(L.jinfushanense)根尖染色体进行了研究。南川百合的带型公式为:2n=24=10C+8CL+2L+2N+2,川百合的带型公式为:2n=24=4C+2CI^++2I+6I_++ 2I^++2I_+T^++2T_++2CNT_++2,金佛山百合的带型公式为:2n=24=4C+4CI+4CI_++4I_++2I^++2I_++2I_+T^++2。通过Gemisa C-分带方法不但可以很好的区分各种的各条染色体,而且可以很好的区分这三个卷瓣组野生百合。

药用百合的多倍体诱导及快速繁殖

为改良现有的药用百合栽培品种,丰富遗传育种资源。在无菌条件下,将丛生芽浸入0.02%,0.05%,0.10%,0.25%,0.50%秋水仙碱水溶液中1～4d,然后转入MS+1mg·L-16-BA+0.5mg·L-1NAA中培养;或将浸透0.02%,0.05%,0.10%,0.25%秋水仙碱溶液的药棉嵌入已转入MS+1mg·L-16-BA+0.5mg·L-1NAA中的丛生芽上培养1～5d。结果是培养30d后,2种方法都诱导出了变异芽。通过根尖细胞染色体检测,变异芽为四倍体或嵌合体。结论为以浓度为0.1%的秋水仙碱溶液浸泡处理丛生芽3d效果最好,得到的变异芽75%为纯合的四倍体,其染色体数量由24(2n=2x=24)变为48(2n=4x=48)。

百合花粉细胞中钙离子的荧光测定法

以川百合花粉为材料 ,利用孵育法在花粉原生质体中 ,特别是利用低温装载法在完整花粉粒中 ,成功地载入酯化形式的钙离子荧光探针fluo 3AM。利用激光共聚焦显微技术对花粉细胞质中游离钙离子的分布特点进行研究的结果表明 ,花粉萌发初期细胞质内游离钙离子呈极性分布 ,萌发沟附近的钙离子浓度明显高于其他部位 ,萌发孔附近最高 ,花粉细胞核中较低。文中对低温装载法的可行性进行了讨论。

细胞外钙调素对百合花粉细胞内钙离子浓度的影响

以川百合 (LiliumdavidiiDuchartre)花粉为材料 ,利用低温装载法在完整花粉粒中成功地装载了酯化形式的钙离子荧光指示剂fluo_3AM ,利用激光共聚焦显微技术研究了细胞外钙调素对细胞内游离钙离子浓度的影响。结果发现外源纯化钙调素可以使细胞内游离钙离子的浓度升高 ,在一定范围内促进效果与钙调素浓度呈正相关。不能透过细胞膜的钙调素拮抗剂W7_agarose和植物钙调素抗血清处理都可以使花粉细胞质中游离钙离子浓度降低 。

食用百合生态适应性及离体繁殖差异

以兰州百合、川百合、卷丹、龙牙百合为材料,研究4种百合土壤栽种时的物候期、鳞茎生长量、株高及鳞茎在培养基上培养的不定芽增殖倍数、分化率差异。结果表明,卷丹发芽相对最早,龙牙百合发芽晚于其他3种百合1~2周;兰州百合苗期短、开花早,枯萎期历时长达8周;4种百合采收时鳞茎鲜质量增加值由高到低依次为卷丹>龙牙百合>川百合>兰州百合,其中,卷丹鳞茎鲜质量增加相对最高,为33.92 g,龙牙百合围径增加相对最大,为4.35 cm;兰州百合在6-BA、NAA浓度分别为1.5、0.5 mg/L的培养基上其不定芽增殖芽增殖倍数相对最高,为5.75倍;兰州百合、川百合鳞茎不定芽分化率分别为96%、94%,卷丹、龙牙百合鳞茎不定芽分化率则低于90%,兰州百合、川百合鳞茎离体繁殖效率高于卷丹、龙牙百合。

兰州百合优质高效栽培技术

兰州百合是川百合的变种，是野生种经长期驯化、选择和培育而成，在兰州已有200多年的栽培历史，其个头大、味香甜、纤维少、营养丰富、洁白如玉，倍受人们的青睐，在国内外享有很高的知名度。以真空包装鲜百合和百合干为主要产品的兰州百合远销上海、北京、广州、南京及港、澳、台等地区，并出口美国、日本、东南亚地区，深受海内外消费者喜爱。目前在兰州市种植面积达5000hm^2，

兰州百合高效配方施肥技术

兰州百合（Lilium davidii var.unicolor salisb）是百合科百合属川百合的变种,是野生种经长期驯化、选择和培育而成,为多年生鳞茎草本植物。种球栽植后经2～3 a才能生长成商品百合。其鳞茎硕大,颜色洁白,鳞片丰满白嫩,质地细腻,营养丰富,口味甜美而幽香,是中国唯一的甜百合,有很高的食用、药用、保健和观赏价值,

浅议食用兰州百合的高效优质发展思路

食用兰州百合是全国四大百合品系之一,产品以鳞瓣大而肉厚,风味甘甜,营养丰富而闻名,名列栽培百合之首,素有＂食用兰州百合甲天下＂之称。食用兰州百合属川百合的变种,地下块茎由数十瓣鳞片相叠抱合而成,