左归饮高效液相色谱指纹图谱研究及5种成分含量测定

目的为左归饮的质量控制提供依据。方法采用高效液相色谱(HPLC)法建立15批左归饮样品的指纹图谱,色谱柱为Agilent 5 HC-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.2%甲酸水溶液-乙腈(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为250 nm,柱温为30℃,进样量为20μL。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012.1307023版)进行相似度评价,确定共有峰及指认成分,并测定其含量。结果15批样品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度均在0.975~0.999之间。标定共有峰33个,指认出其中5个,分别为5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷、甘草苷、甘草酸。5种成分质量浓度分别在0.017~0.266 mg/mL、0.049~0.784 mg/mL、0.034~0.539 mg/mL、0.016~0.250 mg/mL、0.009~0.150 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好(R^(2)>0.9990,n=5);精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于3.0%;平均加样回收率分别为101.40%,98.72%,98.00%,101.53%,99.13%,RSD分别为2.06%,2.09%,1.65%,1.56%,0.40%(n=6);样品含量分别为49.838~140.933μg/g、131.060~340.103μg/g、68.081~178.313μg/g、12.108~47.326μg/g、1.190~55.483μg/g。结论所建立的方法可用于左归饮HPLC指纹图谱的建立及其中5个成分的含量测定,可更全面地为左归饮的质量评价提供依据。

左归饮对围绝经期大鼠卵巢Bcl-2及Bax表达的影响

目的观察中药左归饮对围绝经期大鼠卵巢细胞凋亡指数及Bcl-2、Bax表达的影响。方法采用围绝经期大鼠动物模型,分别给予低、中、高剂量左归饮灌胃处理8 w。用TUNEL染色观察卵巢细胞凋亡指数(AI);用RT-PCR和免疫组化法检测卵巢Bcl-2、Bax mRNA及蛋白的表达。结果围绝经期大鼠卵巢细胞AI明显高于青年组(P<0.01),各剂量左归饮可使其显著降低(P<0.01或P<0.05)。与青年组相比,围绝经期大鼠卵巢Bcl-2的表达明显降低,Bax表达显著升高(P<0.01);低、中剂量左归饮可有效改善这种表达异常。结论左归饮可通过抑制围绝经期大鼠卵巢细胞过度凋亡,改善卵巢功能。不同剂量的作用机制不同,低、中剂量左归饮可通过上调Bcl-2、下调Bax的表达起作用。

左归饮对围绝经期大鼠卵巢促卵泡激素受体表达的影响及机制

目的探讨左归饮对围绝经期大鼠卵巢促卵泡激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)表达的影响及机制。方法采用围绝经期大鼠动物模型,分别给予低、中、高剂量左归饮灌胃处理8周,用RT-PCR和免疫组化法检测卵巢FSHR mRNA及蛋白的表达。未成年大鼠注射孕马血清后收集培养卵巢颗粒细胞,用RT-PCR方法检测给予不同处理因素后FSHR mRNA的表达水平。结果(1)围绝经期大鼠卵巢FSHR的表达明显低于青年组(P<0.01),给予不同剂量左归饮处理后,FSHR表达均显著升高(P<0.01)。(2)培养颗粒细胞给予不同处理因素,结果显示,与对照组相比,左归饮提取物可促进FSHR mRNA表达(P<0.01);与单纯加入左归饮提取物相比,同时加入左归饮提取物和福司考林(Forskolin)可进一步促进FSHR mRNA的表达(P<0.01),同时加入左归饮提取物和酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein则能明显削弱左归饮的促进作用。结论左归饮可通过上调围绝经期大鼠卵巢FSHR的表达,提高卵巢对卵泡刺激素的反应性,改善围绝经期卵巢功能。左归饮对FSHR mRNA表达的促进作用可能是通过激活腺苷酸环化酶-蛋白激酶A(cAMP-PKA)及酪氨酸蛋白激酶途径实现的。

左归饮对D-半乳糖致亚急性衰老模型大鼠肝肾功能及其自由基代谢的影响

目的:研究滋阴补肾方左归饮对D-半乳糖致亚急性衰老模型大鼠肝肾功能及自由基代谢水平的影响,初步探索其抗衰老作用机制。方法:取健康SD大鼠72只,雌雄各半,随机分为六组,即对照组,模型组,维生素E组,左归饮高、低剂量组及六味地黄丸组。除对照组颈背部皮下注射生理盐水外,其余各组颈背部皮下分别连续注射D-半乳糖造成亚急性衰老模型。造模同时,各给药组分别灌胃给予维生素E、高、低剂量左归饮及六味地黄丸药液进行干预,对照组与模型组同时分别给予等体积的蒸馏水。连续给药8周后,腹主动脉采血,取大鼠肝、肾组织,测定血清中肝肾功能主要指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、肌酐(CREA)、尿素氮(BUN),以及肝肾组织中超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)水平。结果:与模型组比较,左归饮给药组能够降低大鼠血清中ALT、AST、ALP、CREA及BUN的含量,提高大鼠肝、肾组织中SOD和T-AOC的活性,降低MDA的含量。结论:左归饮可能通过改善衰老大鼠的肝肾功能,影响肝肾自由基代谢水平而起到延缓衰老的作用。

左归饮与肾阴虚证方证相应机理的蛋白质组学研究

目的:采用蛋白质组学技术在蛋白质表达水平探讨左归饮与肾阴虚证方证相应的机理。方法:将SD大鼠随机分为正常对照组、肾阴虚证模型组与左归饮组3组,对其肝、肾组织蛋白质提取液及血清分别进行蛋白质双向电泳并对电泳图谱进行分析,找出左归饮调节纠正的蛋白质,并进行质谱分析鉴定。结果:找出左归饮调节纠正的蛋白质点21个,质谱鉴定出18种蛋白质。结论:左归饮可以调节纠正肾阴虚证模型动物有关的糖代谢、脂肪代谢、信号传导等酶类非正常表达的蛋白质。

左归饮对围绝经期大鼠卵巢NO生成的影响及机制

目的观察左归饮对围绝经期大鼠卵巢一氧化氮(nitric oxide,NO)生成的影响及机制。方法对围绝经期大鼠动物模型,分别给予低、中、高剂量左归饮及尼尔雌醇灌胃8周,模型组及青年对照组(对照组)予生理盐水灌胃。用硝酸酶还原法、化学比色法分别检测卵巢NO含量、总一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性;用RT-PCR和免疫组化法检测卵巢诱导型NOS(inducible NOS,iNOS)、内皮型NOS(en-dothelial NOS,eNOS)及神经型NOS(neuronal NOS,nNOS)mRNA及蛋白的表达。结果 (1)模型组大鼠卵巢NO含量、总NOS活性显著低于对照组(P<0.01),中、高剂量左归饮可使其明显增高(P<0.01,P<0.05);(2)模型组大鼠卵巢中eNOS、iNOS、nNOS表达均明显低于对照组(P<0.01),中剂量左归饮可显著促进初老大鼠卵巢此3种NOS表达(P<0.01),高剂量可使iNOS、eNOS表达增高(P<0.01),而低剂量仅使iNOS表达增强(P<0.01)。结论卵巢局部eNOS、iNOS、nNOS表达的下调,导致的NOS活性降低、NO生成减少,均与围绝经期大鼠卵巢微循环血管功能受损密切相关;左归饮可通过上调eNOS、iNOS、nNOS表达,增加围绝经期大鼠卵巢NOS活性、NO生成,对衰老卵巢微循环发挥保护作用。

左归饮加减对老年小鼠睾丸的组织学及组织化学影响

用昆明种雄性小鼠18只,其中老年小鼠(18～22个月)12只,随机均分成实验组和老年对照组,共余6只(4～5个月)为青年对照组.以中药方剂左归饮加减的水煎液供实验组小鼠自由饮用.75天后,取睾丸进行组织学和组织化学研究,发现实验组小鼠曲精小管增粗,生精过程活跃,3β-羟基甾体脱氢酶反应增强,增殖型精原细胞增多.结果表明:以左归饮为主的方药有改善睾丸功能活动的作用.

左归饮及其部分组方对老年小鼠细胞免疫功能的影响

目的:探讨左归饮及其部分组方对老年小鼠细胞免疫功能的作用。方法:将ICR健康雄性老年小鼠随机分为老年对照组(Old contrast group,OC)、左归饮组(Zuoguiyin group,ZGY)、单味熟地组(Prepared rhizome of rehmannia group,PROR)、去熟地组(None prepared rhizome of rehmannia group,NPROR)等4组。常规水煎左归饮及其部分组方,配成100g/L浓度的药水混合液,供中药各组小鼠自由饮用75天,老年对照组小鼠饮用自来水。(1)测胸腺指数,脾指数;(2)用MTT法测定脾脏T淋巴细胞增殖活性;(3)用酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清中IL-2水平。结果:ZGY可增强老年小鼠特异性细胞免疫功能,显著提高老年小鼠的胸腺指数和脾指数,增强T淋巴细胞活性,同时增加体内IL-2表达水平,而单味熟地仅能显著增强老年小鼠T淋巴细胞活性,对其它免疫衰老指标影响不大,去熟地组对老年小鼠的细胞免疫功能影响不显著,显示出整方抗衰老的优势。结论:左归饮可能是通过提高细胞免疫功能来发挥其抗衰老作用。

左归饮对老年小鼠抗氧化作用及胸腺脾脏指数的影响

目的:从抗氧化作用及免疫器官指数角度探讨左归饮延缓衰老的作用机理。方法:以5.5 g/(kg.d)浓缩左归饮煎液自由饮75 d,并以老年小鼠作对照,观察左归饮对老年小鼠血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)及胸腺指数、脾指数的影响。结果:老年小鼠与青年小鼠比较MDA含量明显升高,SOD活性、T-AOC、胸腺指数和脾指数显著降低。应用左归饮则使老年小鼠上述指标明显恢复,且差异显著。结论:左归饮能增强老年小鼠的抗氧化能力,减少自由基对细胞膜的损伤,抑制免疫器官的退化和萎缩,起到延缓衰老的作用。

左归饮延缓衰老作用研究

目的:探讨左归饮延缓衰老的部分作用机制。方法:以雄性老年小鼠为研究对象,自由饮用常规水煎左归饮及其部分组方混合液75天,测定血清中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;测定胸腺指数、脾指数,MTT法测定脾脏T淋巴细胞增殖活性,酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清中IL-2水平。结果:左归饮能明显降低老年小鼠血清中MDA含量,同时能明显升高SOD活性;单味熟地组能明显降低老年小鼠血清中MDA含量;去熟地组能明显升高老年小鼠血清中SOD活性。左归饮能显著提高老年小鼠的胸腺指数和脾指数,T淋巴细胞增殖活性,血清中IL-2含量;单味熟地组仅能显著增强老年小鼠T淋巴细胞增殖活性。结论:左归饮明显增强老年小鼠的抗氧化能力和细胞免疫功能。

左归饮及其部分组方对老年小鼠自由基代谢的影响(英文)

背景:补肾法正逐步成为中医老年病学中抗衰老的治疗方法之一。目的:探讨滋补肾阴方左归饮对老年小鼠自由基代谢血清丙二醛含量,超氧化物歧化酶活性的影响。设计:完全随机对照实验。单位:广东医学院微生物与免疫学教研室。对象:实验于2002-09/2004-07在皖南医学院免疫学研究室完成,选择四川省医学科学院实验动物研究所提供的40只雄性老年封闭群小鼠。随机分为老年对照组、左归饮组、单味熟地组及去熟地组,每组10只。左归饮由熟地、山药、枸杞、炙甘草、茯苓、山茱萸,按9:6:6:3:4:5比例组成。常规水煎,左归饮组浓缩至含生药0.5775g/mL,单味熟地组浓缩至含生药0.1575g/mL,去熟地组浓缩至含生药0.42g/mL,配成100g/L浓度的药水混合液。干预:左归饮组、单味熟地组、去熟地组饮用左归饮、熟地、去熟地,4次/d,1.5mL/次,共75d,给药期间不提供其他饮用水。老年对照组小鼠饮用自来水。饮用75d后,摘眼球取血2mL,留存血清,用硫代巴比妥酸法测定血清中丙二醛含量,黄嘌呤氧化酶法测定血清中超氧化物歧化酶活性,比色法测定血清总抗氧化能力。主要观察指标:①血清中丙二醛含量。②血清中超氧化物歧化酶活性。③血清总抗氧化能力检测。结果:老年对照组死亡1只,单味熟地组死亡3只,最终36只小鼠进入结果分析。①血清中丙二醛含量:左归饮组和单味熟地组低于老年对照组[(5.280±1.204)μmol/L和(5.886±2.717)μmol/L,(9.533±3.494)μmol/L,(q=3.641～4.657,P<0.05)]。左归饮组和单味熟地组老年小鼠血清中丙二醛含量基本一致。②超氧化物歧化酶活性:左归饮组和去熟地组高于老年对照组[(7.008±0.782)mkat/L和(6.989±0.809)mkat/L,(5.908±0.392)mkat/L,(q=3.641～4.657,P<0.05)],左归饮组和去熟地组超氧化物歧化酶活性基本一致。单味熟地组与老年对照组超氧化物歧化酶活性基本一致。③总抗氧化能力:左归饮组和单味熟地组虽然高于老年对照组,去熟地组低于老年对照组,但差异均无显著性意义(P>0.05)。结论:左归饮能明显降低老年小鼠血清中丙二醛含量,并能提高血清中超氧化物歧化酶活性,表明左归饮在改善老年机体自由基代谢、增强超氧化物歧化酶活性和减少丙二醛积蓄对机体损伤方面具有明显作用。

微量元素与左归饮组方的研究

目的:对微量元素与左归饮组方关系进行研究。方法:以中医药基本理论为指导,应用因子分析方法,研究微量元素与左归饮组方原则及药物功效间的关系。结果:因子分析所得方中药物的组合及作用大小排序与中医方解基本一致。结论:中医组方原则及药物功效与微量元素密切相关。

HPLC法同时测定左归饮提取物中马钱苷和5-羟甲基糠醛的含量

目的:测定左归饮中马钱苷和5-羟甲基糠醛2种化学成分的含量。方法:采用高相液相色谱法,以C_(18)柱为色谱柱,流动相为乙腈-水,梯度洗脱;流速为1.0 mL·min^(-1);柱温为30℃;检测波长为250 nm。结果:左归饮中的马钱苷和5-羟甲基糠醛分别在0.51~4.08μg(r=0.999 8)、0.26~2.04μg(r=0.999 8)与峰面积呈良好线性关系,平均加样回收率分别为101.24%(RSD=1.40%)和99.72%(RSD=1.10%)。结论:该法准确可靠、重复性好,可作为同时测定左归饮中马钱苷和5-羟甲基糠醛含量的测定方法。

左归饮及其部分组方对老年小鼠细胞免疫功能的影响

目的探讨左归饮及其部分组方对老年小鼠细胞免疫功能的作用。方法将ICR健康雄性清洁老年小鼠随机分为老年对照组(OC)、左归饮组(ZGY)、单味熟地组(PROR)、去熟地组(NPROR)等四组。常规水煎左归饮及其部分组方,配成100 g/L浓度的药水混合液,供中药各组小鼠自由饮用75 d,老年对照组小鼠饮用自来水。测定胸腺指数,脾指数;用MTT法测定脾脏T淋巴细胞增殖活性;用酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清中IL-2水平。结果ZGY可增强老年小鼠特异性细胞免疫功能,显著提高老年小鼠的胸腺指数和脾指数〔(1.679±0.483),(2.876±0.801),(1.181±0.280),(1.859±0.579),P<0.05,P<0.01〕,增强T淋巴细胞活性〔(0.043±0.009),(0.019±0.010),P<0.01〕,同时增加体内IL-2表达水平〔(0.031±0.005),(0.024±0.005),P<0.05〕,而单味熟地仅能显著增强老年小鼠T淋巴细胞活性〔(0.041±0.008),(0.019±0.010),P<0.01〕,对其他免疫衰老指标影响不大,显示出整方抗衰老的优势,去熟地组对老年小鼠的细胞免疫功能影响不显著(P>0.05)。结论左归饮可能是通过提高细胞免疫功能来发挥其抗衰老作用。

左归饮方中微量元素的含量测定

目的 :探讨微量元素与左归饮方功能主治的关系。方法 :采用AA - 6 70型原子吸收分光光度计测定左归饮中Fe、Mn、Zn等微量元素的含量。结果 :Fe含量最高 ,Mn、Zn含量次之。结论

左归饮对衰老模型小鼠血清SOD GSH-Px MDA及IL-2的影响

目的:探讨左归饮延缓衰老的作用机制。方法:将50只小鼠随机分为5组,除正常对照组外均每日注射D-半乳糖造成衰老模型,同时给予不同剂量的左归饮。6周后检测小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,丙二醛(MDA)含量和白细胞介素-2(IL-2)水平。结果:模型对照组与正常对照组比较,小鼠血清中SOD、GSH-Px活性显著降低,MDA含量显著升高,IL-2水平显著下降(P<0.01)。与模型对照组比较,左归饮高、中、低剂量组小鼠血清中SOD活性显著升高(P<0.01,P<0.01,P<0.05),GSH-Px活性显著升高(P<0.01),MDA含量显著降低(P<0.01,P<0.01,P<0.05);左归饮高、中剂量组IL-2水平显著升高(P<0.05)。结论:左归饮可通过抗氧化作用及对IL-2影响延缓衰老。

左归饮合半夏白术天麻汤加减治疗椎基动脉供血不足性眩晕45例

目的 :观察左归饮合半夏白术天麻汤加减治疗椎基动脉供血不足性眩晕的临床疗效。结果 :治疗组总有效率 93 33% ,对照组总有效率 82 2 2 % ,疗效比较 ,差异有非常显著性意义(P <0 0 1)。观察组能显著改善经颅多普勒的各项指标 (VA、BA、PCA)及血液流变学的各项指标 (血红细胞压积、全血粘度、血浆粘度及全血还原粘度 ) ,与对照组比较 ,差异有显著性意义(P <0 0 1或 0 0 5 )。结论

左归饮加减对雄性老年小鼠性腺影响的研究

目的 通过研究左归饮加减对雄性老年小鼠性腺的影响 ,探讨其作用机制。方法 取昆明种 4～ 5个月雄性小鼠 12只 ,为青年对照组 ;18～ 2 2个月雄性老年小鼠 2 4只 ,随机均分成实验组和老年对照组。以中药方剂左归饮加减的水煎液供实验组小鼠自由饮用。 75天后 ,取性腺进行细胞学研究。结果 与老年对照组比较 ,老年实验组小鼠曲精小管增粗 (P <0 0 1) ;支持细胞增多 (P <0 0 5 ) ,核仁增大 ;3β 羟基甾脱氧酶反应增强 ;增殖型精原细胞增多 (P <0 0 5 )。结论 以左归饮为主的补肾活血方药通过调整下丘脑—垂体—性腺轴的分泌机能 ,促进性腺的生精活动 ,有明显的抗衰老作用。

左归饮合二至丸加减配合针刺治疗卵巢储备功能下降60例

卵巢储备功能下降（DOR）即卵巢产生卵子能力减弱,卵母细胞质量下降,导致女性生育能力减弱及性激素缺乏。笔者采用左归饮合二至丸加减配合针刺治疗本病,疗效满意,报道如下。