左旋紫草素基于调节NF-κB途径和NLRP3炎性体轴减轻急性胰腺炎动物模型胰腺组织损伤作用

目的探究左旋紫草素对急性胰腺炎动物模型胰腺组织损伤的作用及其作用机制。方法选取SD大鼠48只,随机分为假手术组、模型组、左旋紫草素低剂量组和左旋紫草素高剂量组4组,每组12只。采用胆胰管逆行注射5%牛磺酸钠溶液构建急性胰腺炎模型,左旋紫草素低剂量组和高剂量组在造模前1 h及造模后分别腹腔注射左旋紫草素(10、20 mg/kg),模型组及假手术组给予等量0.9%氯化钠溶液。采用HE染色观察胰腺及心肌组织病理变化,免疫组织化学染色和蛋白免疫印迹(Western blot)分析NF-κB信号通路和NLRP3炎性体轴相关蛋白的表达情况,酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠的胰腺及心肌组织出现明显的病理损伤,NF-κB、NLRP3蛋白阳性率及相关蛋白NF-κB p65、p-p56、NLRP3、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、ASC蛋白的相对表达水平显著升高(P<0.01),而IκBα的相对表达水平显著降低(P<0.01),且血清IL-1β、TNF-α、CK-MB水平显著升高(P<0.01)。与模型组相比,左旋紫草素低剂量组和高剂量组大鼠的胰腺及心肌组织损伤程度减轻,NF-κB、NLRP3蛋白阳性率及相关蛋白NF-κB p65、p-p56、NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白的相对表达水平显著降低(P<0.01),IκBα的相对表达水平显著升高(P<0.01),血清IL-1β、TNF-α、CK-MB水平显著降低(P<0.01),且左旋紫草素高剂量组的效果优于低剂量组。结论左旋紫草素能够通过调节NF-κB信号通路和NLRP3炎性体轴减轻急性胰腺炎动物模型胰腺组织损伤,为左旋紫草素在急性胰腺炎的治疗提供重要的参考。

左旋紫草素对小鼠变应性鼻炎抑制作用研究

目的探讨左旋紫草素对变应性鼻炎(AR)小鼠治疗效应及其相关抑制机制。方法采用卵清蛋白(OVA)致敏建立小鼠AR模型,按随机数字表法将25只C57BL/6小鼠随机分为正常组、AR模型组、左旋紫草素低剂量和高剂量组,以及标准对照组,每组5只。除正常组外,其他各组完成AR模型构建:在第1、5、9、12日使用OVA+氢氧化铝凝胶混合制剂进行致敏,第13日开始连续7 d,使用OVA每日进行一次激发。在造模第28日起,左旋紫草素组小鼠灌胃2、8 mg/(kg·d)左旋紫草素。标准对照组小鼠灌胃给予地塞米松2.5 mg/(kg·d),正常组和AR模型组动物灌胃等剂量的二甲基亚砜,共灌胃4周,末次灌胃30 min内观察各组小鼠鼻部症状并予以评分。采用流式细胞术检测小鼠外周血辅助性T细胞(Th)1和Th2细胞亚群表达水平;ELISA检测小鼠鼻腔灌洗液白细胞介素4(IL-4)、免疫球蛋白E(IgE)、γ干扰素(IFN-γ)水平;HE染色检测鼻黏膜病理情况。qRT-PCR法检测鼻黏膜组织中T盒子转录因子(T-bet)、GATA结合蛋白3(GATA3)、信号传导子和转录活化子1(STAT1)、STAT6 mRNA表达。结果给药4周后,与正常组相比,AR模型组的行为学评分、Th1细胞比例、IL-4和IgE水平、GATA3和STAT6 mRNA表达显著增加(P<0.05),Th2细胞比例、IFN-γ水平、T-bet和STAT1 mRNA表达显著降低(P<0.05)。与AR模型组相比,左旋紫草素低剂量组动物的行为学评分,Th1和Th2细胞比例,IL-4、IgE和IFN-γ水平,T-bet mRNA表达几乎无改变(P>0.05),STAT1 mRNA表达显著提高(P<0.05),而GATA3和STAT6 mRNA表达显著降低(P<0.05);与AR模型组相比,左旋紫草素高剂量组动物行为学评分、Th1细胞比例、IL-4和IgE水平、GATA3和STAT6 mRNA表达显著下降(P<0.05),Th2细胞比例、IFN-γ水平、T-bet和STAT1 mRNA表达显著增加(P<0.05)。与左旋紫草素低剂量组相比,左旋紫草素高剂量组外周血中Th1细胞比例、IL-4和IgE水平、GATA3和STAT6 mRNA表达显著下降(P<0.05),Th2细胞比例、IFN-γ水平、T-bet和STAT1 mRNA表达显著增加(P<0.05)。结论高剂量左旋紫草素对小鼠AR有一定的改善作用,其减轻炎症的主要潜在机制可能是通过JAK/T-bet/STAT1和JAK/GATA3/STAT6途径调节Th1/Th2失衡。

左旋紫草素与溶菌酶相互作用的研究

利用荧光猝灭方法结合紫外光谱(UV)、傅立叶红外光谱(FT-IR)和圆二色性光谱(CD),在模拟生理条件下研究了左旋紫草素和溶菌酶的结合常数、主要作用力以及左旋紫草素对溶菌酶二级结构的影响。在温度为296、303和310K时,根据Scatchard方程测得左旋紫草素和溶菌酶的结合常数分别为3.022×104、1.894×104、0.9581×104L.mol-1,结合位点数分别为0.98、0.76、0.68;焓变(ΔH)和熵变(ΔS)分别为-14.78kJ/mol、24.26J/(mol.K),结果表明其主要作用力为疏水性和静电作用力。同步荧光和紫外光谱研究进一步证明左旋紫草素与溶菌酶有着较强的结合,左旋紫草素对溶菌酶的荧光猝灭为多种机理同时存在,并根据Frster能量非辐射转移理论测得结合位置与色氨酸残基间的距离r为4.62nm。CD和FT-IR研究显示,左旋紫草素使溶菌酶的二级结构发生了变化。该文为左旋紫草素在人体内的储存、运输、作用机理及临床试验提供了具有指导作用的信息。

光谱法与分子模拟对左旋紫草素和人血白蛋白键合作用的研究

采用荧光光谱法、紫外吸收光谱法和圆二色性光谱(CD)研究了模拟生理条件下左旋紫草素和人血清白蛋白(HSA)的相互作用,计算了反应的结合常数、结合位点数和热力学参数,并探讨了左旋紫草素对人血清白蛋白二级结构的影响。在温度为292、303、310和318 K时,根据Scatchard方程测得左旋紫草素和HSA的结合常数分别为3.118×106、0.249×106、0.112×106和0.102×106L.mol-1,结合位点数分别为1.308、1.094、1.026和1.018;焓变(ΔH)和熵变(ΔS)分别为-104.82 kJ.mol-1、-238.18 J.mol-1.K-1,左旋紫草素在人血清白蛋白上的结合位置与色氨酸残基间的距离为2.66 nm。分子模型研究表明,左旋紫草素与HSA在亚结构域ⅡA结合,二者间的作用力主要为疏水和氢键作用力。CD结果表明,左旋紫草素与HSA的键合使HSA中α-螺旋结构含量从55.80%降到52.31%。

紫草油膏中左旋紫草素的含量测定

目的：建立紫草油膏中左旋紫草素的含量测定方法。方法：采用HPLC法，色谱柱为Shimpack C18（6mm×150mm，5μm），流动相为甲醇-水-磷酸（85：15：0．3，v／v），检测波长为516nm。结果：在0．16～0．8μg间，左旋紫草素进样量与峰面积呈良好的线性，线性方程为Y=24623．04X＋4636．63，r=0．9994；测得紫草油膏中左旋紫草素的平均含量为5．33mg·（100mL）^-1。结论：结果准确，重复性好。

微乳对左旋紫草素增溶作用的实验研究

目的:研究o/w型微乳对左旋紫草素的增溶作用。方法:以伪三角相图法制备了聚氧乙烯蓖麻油甘油醚(EL)-乙醇-肉豆蔻酸异丙酯(IPM)-水的微乳体系,用比色法测定了在微乳和水中左旋紫草素的溶解度。结果:左旋紫草素在微乳中的溶解度为水中的955倍。结论:微乳对左旋紫草素有明显的增溶作用,为紫草素相关制剂的研究提供了依据。

左旋紫草素肠道转运及Caco-2细胞转运特性

目的研究左旋紫草素肠道及Caco-2细胞转运特征及其机制。方法应用翻转肠囊法和Caco-2细胞模型考察时间、浓度对左旋紫草素转运吸收特性的影响,应用P-糖蛋白抑制剂维拉帕米对左旋紫草素转运吸收机制进行研究,采用HPLC法测定左旋紫草素的浓度,计算其表观渗透系数(Papp)。结果在Caco-2细胞模型,随浓度增加和时间延长,左旋紫草素的累积转运量逐渐增加;加用维拉帕米后,使AP侧到BL侧的表观渗透系数Papp(AP→BL)显著增加,而从BL侧到AP侧的表观渗透系数Papp(BL→AP)显著降低。在翻转肠囊模型,100μmol·L-1左旋紫草素中加入维拉帕米后Papp显著增加。结论左旋紫草素的转运存在被动转运和主动转运2种形式,P糖蛋白参与主动转运过程;该药经肠道吸收中等,加入维拉帕米可能促进吸收。

左旋紫草素对ConA诱导小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的研究左旋紫草素对ConA诱导小鼠免疫性肝损伤保护作用。方法采用LPS刺激RAW264.7细胞,建立体外炎症模型,检测细胞培养液上清中NO水平。采用ConA尾静脉注射法建立小鼠免疫性肝损伤模型,将小鼠随机分为正常组,模型组,阳性药组(甘草酸二铵),左旋紫草素低、中、高剂量组,每组10只,检测脾脏指数,血清AST、ALT、AKP、GST水平,肝脏组织匀浆T-SOD活性及MDA、白蛋白水平,ELISA法检测小鼠血清IFN-γ、TNF-α、IL-1β水平,观察小鼠肝脏组织病理切片。结果左旋紫草素可改善小鼠肝脏、脾脏指数,降低小鼠血清AST、ALT、AKP、GST水平(P<0.05),降低肝脏组织匀浆MDA水平,增加T-SOD活性,升高白蛋白水平,减少炎症因子IFN-γ、TNF-α释放,改善小鼠肝脏组织病理性损伤。结论左旋紫草素体外具有抗炎活性,同时对小鼠肝损伤有一定保护作用,其机制可能与减少TNF-α释放有关。

左旋紫草素体内代谢研究

本文对紫草素在大鼠体内的生物转化进行了研究，对经苯巴比妥预处理（i.p.60mg.kg^-1.day,3天）的Wistar种健康雄性大鼠腹腔注射紫草素（20mg.kg^-1)，收集到的胆汁和血样分别经β－葡萄糖醛酸酶水解后，用乙酸乙酯提取，建立PP－HPLC／DAD方法对紫草素及其代谢物大大鼠胆汁和尿样中的分布进行了初步考察，根据色谱峰的保留时间和紫外光谱分析，大鼠的胆汁和尿样中分别有10个代谢物。

紫草配方颗粒中左旋紫草素的定性定量研究

目的：定性定量检测不同企业生产的紫草配方颗粒中的左旋紫草素，探讨配方颗粒的质量标准及与传统饮片的差异。方法采用薄层色谱法（TLC）定性鉴别紫草配方颗粒；用高效液相色谱（HPLC）测定紫草配方颗粒中左旋紫草素含量。结果 TLC鉴别中，紫外灯（365 nm）下检视，在与左旋紫草素对照品相应位置上，部分紫草配方颗粒显现相同的斑点；HPLC测定中，在0.106~1.272μg/mL范围内，左旋紫草素浓度与峰面积呈良好的线性关系，回归方程为y=13208x＋65.067，r=0.9990；平均加样回收率为97.29%，RSD=3.20%（n=6）。不同厂家不同批次样品的左旋紫草素含量为0.09~0.23 g/g不等。结论紫草中药配方颗粒中左旋紫草素含量较低，不同厂家不同批次间的差异较大，需进一步研究以确定左旋紫草素含量与配方颗粒质量之间的关系。

左旋紫草素体外稳定性研究

目的研究左旋紫草素在不同条件下的稳定性。方法以左旋紫草素含量变化为指标,采用经典恒温法考察左旋紫草素在不同p H值磷酸缓冲溶液中的稳定性,并在此基础上考察光照、有机溶剂对其稳定性的影响。结果左旋紫草素在不同p H值稳定性不同,以p H为偏酸性较为稳定,且最适p H为3.0。结论左旋紫草素在不同条件下稳定性不同,在实际应用中应加以考虑。

紫黄膏中左旋紫草素的含量测定

目的：建立以高效液相色谱法测定紫黄膏中左旋紫草素含量的方法。方法：色谱柱为Kromasil C18，流动相为甲醇-0．025mol·L^-1磷酸（85：15），检测波长为516nm，柱温为室温，流速为1．0mL·min^-1。结果：左旋紫草素在4．66～37．28mg·L^-1（r=0．9998）范围内线性关系良好，平均回收率为101．8％。结论：本法简便、快速、准确、回收率好，可用于控制该制剂的含量。

HPLC测定紫草油中左旋紫草素的含量

目的建立紫草油中左旋紫草素的含量测定方法。方法采用HPLC法，色谱柱为Acclaim 120 C18（4．6×250mm,5μm）．流动相为甲醇．水．磷酸（78：22：0．3，v／v），检测波长为516nm，柱温为35℃。结果在8．56-42．80ug·mL^-1之间，左旋紫草素进样量和峰面积具有良好的线性关系．线性方程为y=o．4088x＋0．033。r=0．9999；测得紫草油中左旋紫草素平均含量为15．67pg·mL^-1。结论该方法简便可行，重现性好。可作为紫草油的质量控制方法。

不同紫草中左旋紫草素含量比较及提取条件优化

用乙醇提取法比较3种不同紫草中左旋紫草素的含量。结果表明,左旋紫草素含量由高到低为新疆软紫草、滇紫草、硬紫草。对乙醇提取法进行了单因素试验,应用L9(34)正交试验筛选最佳工艺条件:提取温度65℃;提取时间40 min;料液比1∶8。此工艺生产成本较低,操作简单安全,适用于工业化生产。

左旋紫草素转化工艺

目的研究紫草总色素转化为左旋紫草素的最佳工艺条件。方法采用L9(34)正交实验法,以左旋紫草素转化率为指标,优选转化温度、转化时间、2%氢氧化钠的体积与紫草总色素的质量比。结果温度35℃,转化时间4 h,2%氢氧化钠的体积与紫草总色素的质量比例为4.5 m L·mg-1时,紫草素转化率最高,平均转化率为64.86%。结论该优选工艺方便简便,经济环保,适合工业化生产。

紫草总色素β-环糊精包合物的定性鉴别及左旋紫草素含量测定

目的建立定性鉴别紫草总色素β-环糊精包合物有效成分的薄层色谱(TLC)法和测定左旋紫草素含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法采用TLC法进行定性鉴别,展开系统为环己烷-甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶5∶0. 5∶0. 1,V/V/V/V);采用HPLC法测定包合物中有效成分左旋紫草素的含量,流动相为甲醇-0. 025 mol/L磷酸(82∶18,V/V)。结果 TLC鉴别中,供试品溶液与对照品溶液在相应位置上显相同颜色斑点,且斑点清晰,阴性对照无干扰;HPLC图中,供试品溶液与对照品溶液色谱出峰时间一致,分离度好,阴性对照无干扰,含量测定中有效成分的线性关系良好,平均加样回收率为102. 09%,RSD为1. 87%(n=6)。结论该方法操作简便、结果准确、专属性强、重复性好,可用于该产品的质量控制。

紫草工业生产中左旋紫草素的损失与检测合理性研究

目的:研究紫草渗漉液浓缩过程中左旋紫草素的损失原因并建立合理检测方法。方法:以左旋紫草素为指标,采用优化的色谱条件进行测定,分析检测环节中供试液含醇量、供试液生药浓度等对左旋紫草素含量测定的影响,在此基础上考察供试液合理制备方法及含量测定方法学,以建立合理的检测方法。结果:优化的色谱条件为:甲醇∶水(82∶18)为流动相,流速:1.0 mL/min,柱温为35℃,检测波长为516 nm,将分析时间由40 min缩短为24 min;供试液的含醇量显著影响左旋紫草素的含量测定结果,同等浓度的左旋紫草素,在低含醇量(<40%)供试液中的峰面积仅约为高含醇量(>70%)的20%～30%;供试液最好用40%以上乙醇配制,合理浓度范围为0.0167～0.083 g生药/mL;改进的检测方法具有良好的精密度、重现性和准确性。结论:研究首次发现供试液含醇量与左旋紫草素的色谱峰面积密切相关,并由此揭示紫草渗漉液回收乙醇过程中"巨大损失"的另一重要原因是:在检测环节中,供试液含醇量过低导致左旋紫草素的测定结果显著偏低,未能客观反映实际含量。新方法较现有方法能更有效、合理、客观的检测左旋紫草素,监测工艺过程,同时具有高效率、低成本的优势。

HPLC法测定复方紫草油中左旋紫草素的含量

目的:建立复方紫草油中左旋紫草素的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法测定,色谱柱VP-ODS柱(150L×4.6mm,5μm);紫外检测波长516 nm;流动相为甲醇—水(75:25),流速1.0 ml.min-1,柱温为26℃。结果:左旋紫草素在0.4～1.2μg具有良好的线性关系,r=0.999 4,平均回收率为100.34%,RSD=0.92%(n=5)。结论:该方法简便快捷、精密度高、重现性好、结果准确。

HPLC测定紫黄凝胶剂中左旋紫草素的含量

目的建立紫黄凝胶剂中左旋紫草素的含量测定方法。方法采用HPLC法,色谱柱为Acclaim 120 C18（4.6×250mm,5μm）,流动相为甲醇-水-磷酸（78∶22∶0.3,v/v）,检测波长为516nm,柱温为35℃。结果在8.56-42.80μg·mL-1之间,左旋紫草素进样量和峰面积具有良好的线性关系,线性方程为y=0.4088x＋0.033,r=0.9999;测得紫黄凝胶剂中左旋紫草素最低平均含量为0.0615mg·g-1。结论该方法简便可行,重现性好,可作为紫黄凝胶剂的质量控制方法。