人胎盘底蜕膜间充质干细胞的分离及其生物学特性研究

胎盘来源间充质干细胞(mesenchymal stem cells,,MSC)与骨髓间充质干细胞相比,具有来源充足、免疫原性低、病毒污染率较低,且无社会伦理争议等方面的优点,使其具有更好的临床应用前景。胎盘组织不但包括来自母体的绒毛膜组织、羊膜组织,还包括来自母体的底蜕膜组织,但底蜕膜来源间充质干细胞生物学特性还需要进一步研究探讨。我们使用酶消化法分离底蜕膜来源间充质干细胞,通过短串联重复序列分析(STR)检测细胞是否均来源于母体组织,用MTT法检测细胞生长方式,流式细胞仪分析细胞周期和细胞表型,使用不同的诱导分化培养基检测其多向分化的能力。然后将底蜕膜间充质干细胞细胞与植物血凝素刺激的外周血单个核细胞共培养,用酶联免疫吸附试验检测上清γ-干扰素的水平。结果表明:短串联重复序列分析证明所得到的细胞均来源于母体组织,底蜕膜细胞生长呈典型的成纤维细胞形态。细胞表达常见的间充质干细胞表面标记CD90、CD73、CD105、CD44,不表达CD45,CD11b和CD34。在不同的条件培养基培养状态下,细胞均可向成骨、成脂和成软骨方向分化。结论:从胎盘底蜕膜获得的细胞,具有间充质干细胞的基本特征,是底蜕膜间充质干细胞。底蜕膜间充质干细胞能抑制植物血凝素刺激的人外周血单个核细胞分泌γ-干扰素,这使得底蜕膜间充质干细胞作为一个母亲自体间充质干细胞的重要来源,能安全的用于治疗母亲的免疫系统疾病。

人胎盘底蜕膜间充质干细胞的分离培养及其多向分化潜能的实验研究

目的探讨人胎盘底蜕膜间充质干细胞(MSCs)体外生物学特性,并验证其多向分化潜能。方法通过酶消化和密度梯度离心法从人足月胎盘底蜕膜中获取MSCs,倒置显微镜下观察其形态变化和生长特点;CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期及表面抗原(CD29、CD44、CD73、CD90、CD34、CD45、CD14)的表达;在特定诱导条件下,使其向成骨、成脂、成软骨方向分化,鉴定其多向分化潜能。结果人足月胎盘底蜕膜中分离的MSCs呈克隆样生长,形态类似于骨髓MSCs,传代后细胞增殖迅速,细胞倍增时间为(2.21±0.21)d;大于70%的细胞处于静止期(G0/G1期),阳性表达CD29、CD44、CD73、CD90,不表达CD34、CD45、CD14;经诱导后茜素红染色、油红O染色和Alcian blue染色均呈阳性表现。结论胎盘底蜕膜中含有丰富的MSCs,易于体外分离培养,且具有多向分化潜能,有希望成为另一新颖的干细胞来源。

经直肠超声对药物流产中底蜕膜部位血流的研究

目的:寻找可判断药物流产后是否需清宫的超声影像学指标。方法:孕囊排出后,即刻应用直肠彩色超声观测底蜕膜部位的血供状态,并分成3型,Ⅰ型:无血流信号;Ⅱ型:星点状或短棒状血流信号,RI>0.6;Ⅲ型:火球状血流信号,RI≤0.6。比较3种血流信号类型流产的转归。用以下4项指标评价流产转归:流产后流血天数、流血量、是否需清宫、病理结果。结果:Ⅰ型10例,其中9例(90%)流血天数≤7d,全部病例流血量均<月经量,超声复查均无残留物,均不需清宫。Ⅱ型32例,其中20例(62.5%)血流时间≤7d,21例(65.6%)流血量<月经量,31例(96.9%)超声复查无残留,1例(3.1%)施行清宫术。Ⅲ型5例,流血天数均>15d,流血量均相当于月经量,超声显示宫内均有组织残留,全部行清宫术。结论:药流后底蜕膜部位血流状态可应用经直肠彩色超声将其分为3种类型:Ⅰ型预示完全流产;Ⅱ型大部分病例流产完全,仅3.1%的病例流产不全需清宫;Ⅲ型预示不全流产,100%需要清宫。

经直肠超声检测底蜕膜血流及子宫螺旋动脉血流参数预测药物流产结局的价值

目的:探讨经直肠超声检测底蜕膜血流及子宫螺旋动脉血流参数预测药物流产结局的价值。方法:回顾分析流产完全和流产不全者30例,流产前、流产当日、流产后15d经直肠超声检测子宫底蜕膜血流分型、血流阻力指数和子宫螺旋动脉血流参数。结果:流产完全组底蜕膜Ⅰ型血流信号、子宫螺旋动脉及底蜕膜血流阻力指数显著高于流产不全组;Ⅲ型血流信号显著低于流产不全组(P<0.05);Ⅱ型血流信号与流产不全组比较无显著性差异(P>0.05);流产当天与流产后15d所有指标与流产不全组比较均无显著性差异(P>0.05)。结论:药物流产当日经直肠超声检测子宫螺旋动脉及底蜕膜阻力指数和底脱膜血流分型能有效预测药物流产结局。

人胎盘底蜕膜间充质干细胞纹状体移植治疗帕金森病模型大鼠的实验研究

目的研究人胎盘底蜕膜间充质干细胞(hPDB-MSCs)纹状体移植对帕金森病(PD)模型大鼠行为学的影响。方法体外传代培养hPDB-MSCs,使用6-OHDA制备大鼠PD模型并随机分为移植组、假手术组、模型组,对移植组大鼠右侧纹状体进行hPDB-MSCs移植,术后1 W、2 W、4 W进行行为学检测。免疫组化检测移植后1 W、2 W及4W各组大鼠损伤侧黑质酪氨酸羟化酶(TH)的表达。结果 hPDB-MSCs移植后2 W、4 W,移植组大鼠阿朴吗啡诱导的平均旋转圈数明显低于假手术组及模型组(P<0.01);免疫组化显示移植组损伤侧黑质部位移植后4 W TH阳性细胞数较移植前明显增加(P<0.01);与假手术组相比,移植术后1 W、2 W、4 W移植组TH阳性细胞明显增多(P<0.01)。结论 hPDB-MSCs移植能够抑制PD模型大鼠多巴胺能神经元丧失,改善PD模型大鼠的行为学症状,具有一定的治疗作用。

底蜕膜间充质干细胞分化为多巴胺能样神经元

目的探讨人胎盘底蜕膜间充质干细胞体外向多巴胺能样神经元分化的潜能,并优化诱导方案。方法体外分离培养底蜕膜间充质干细胞,用表皮生长因子(EGF)+人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)+B27添加剂和人音猬因子(SHH)+成纤维细胞生长因子8(FGF8)+forskolin+脑源性神经营养因子(BDNF)分两个阶段对其进行诱导;免疫细胞化学先后检测干细胞标记nestin和CD133、成熟神经元标记神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经胶质细胞标记胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、多巴胺能神经元标记酪氨酸羟化酶(TH)的表达;Western blot验证诱导后TH蛋白的表达;高效液相色谱-电化学检测诱导前后多巴胺的分泌。结果经第一阶段诱导后,细胞形成漂浮生长的神经球,nestin和CD133均呈阳性表达;第二阶段诱导后,出现明显的神经元样形态,NSE、GFAP和TH均阳性表达,Western blot也显示TH蛋白的表达,多巴胺分泌量相比诱导前明显增加(P<0.001)。结论底蜕膜间充质干细胞体外可分化为多巴胺能样神经元,可能成为帕金森病干细胞移植治疗新的种子细胞来源。

Glycodelin与IL-17在子痫前期患者底蜕膜中的表达及相关性分析

目的:探讨glycodelin与IL-17在子痫前期患者底蜕膜中的表达,分析glycodelin与IL-17在子痫前期患者发病过程中在免疫抑制方面的相互作用。方法:选取子痫前期患者34例为实验组,正常足月妊娠患者30例为对照组,应用免疫组织化学法检测其底蜕膜中glycodelin及IL-17的表达情况。结果:1Glycodelin在34例子痫前期患者底蜕膜中的阳性表达率是14.17%;在30例对照组阳性表达率为16.67%。两组比较,在底蜕膜中glycodelin表达经统计学分析无差异(P>0.05)。2IL-17在34例子痫前期患者底蜕膜中的阳性表达率是79.41%;在30例对照组阳性表达率为13.33%。两组比较,在底蜕膜中IL-17表达有统计学差异(P<0.05),且随着病情加重IL-17表达逐渐增加。3Glycodelin与IL-17子痫前期患者底蜕膜中表达两者呈现负相关(r=-0.984,P<0.05)。结论:Glycodelin可能在妊娠过程中通过自身在底蜕膜中表达减少并上调IL-17在底蜕膜中的表达进一步过度激活免疫系统,进而导致子痫前期的发生发展。

MMP-9与COX-2蛋白在妊娠期高血压疾病患者母胎界面:底蜕膜中的表达及意义

目的探讨MMP-9与COX-2蛋白在妊娠期高血压疾病患者母胎界面:底蜕膜中的表达、相互关系及其意义。方法应用免疫组织化学法,选择妊娠期高血压疾病患者42例作为研究组,正常同期妊娠产妇40例作为对照组,分别检测底蜕膜中MMP-9、COX-2蛋白的表达情况。结果1.42例妊娠期高血压疾病患者底蜕膜中MMP-9蛋白的阳性表达率为23.81%(10/42),40例正常同期妊娠产妇的阳性表达率为72.5%(29/40)。两组比较,妊娠期高血压疾病患者底蜕膜中MMP-9蛋白的阳性表达率显著低于正常同期妊娠产妇(P<0.01);2.42例妊娠期高血压疾病患者底蜕膜中COX-2蛋白的阳性表达率为64.29%(27/42),40例正常同期妊娠产妇COX-2蛋白的阳性表达率为15%(6/40)。两组比较,妊娠期高血压疾病患者底蜕膜中COX-2蛋白的表达阳性率显著高于正常同期妊娠产妇(P<001);3.两者在妊娠期高血压疾病患者底蜕膜中的表达存在显著负相关(r=-0.59,P<0.01)。结论妊娠期高血压疾病患者底蜕膜中MMP-9蛋白呈低表达、COX-2蛋白呈高表达,两者之间的表达呈负相关关系。MMP-2蛋白可能通过影响COX-2蛋白的表达导致妊娠期高血压疾病的发生发展。

早期流产患者子宫底蜕膜的超声表现

目的：探讨早孕期胚胎停止发育及流产患者底蜕膜层的超声表现。方法：回顾152例妊娠4。12周患者的超声声像图，其中旱孕期流产117例，妊娠足月者35例。对比妊娠足月及早孕期流产患者底蜕膜层的厚度及回声强度。结果：（1）与正常孕妇相比，在第5-6周流产患者，底蜕膜相对变薄。但随着时间的推移，仍然可以保持其完整性，并且回声均匀；（2）在早孕晚期流产的患者，底蜕膜层的厚度没有表现出增长的趋势；（3）在胚胎死亡之前及之后不久，蜕膜层较正常妊娠回声增强。之后胚胎解体，底蜕膜层变得难以辨认。结论：在早孕期流产患者底蜕膜层超声表现与正常妊娠患者存在差异。

子痫前期患者胎盘及底蜕膜中Fas/FasL表达及意义

目的检测子痫前期患者胎盘滋养细胞及底蜕膜细胞的Fas/FasL表达水平,探讨妊娠期高血压疾病—子痫前期的发病机制。方法采用免疫组织化学方法,半定量分析34例子痫前期组与16例正常妊娠组胎盘及底蜕膜的Fas/FasL表达。结果 Fas蛋白主要表达部位为细胞膜及细胞浆。与正常妊娠组比较,子痫前期组胎盘滋养细胞Fas着色较正常孕足月组增强并随病情加重更为明显;在底蜕膜细胞中,重度子痫前期组Fas着色较正常妊娠足月增强。FasL主要表达部位是细胞浆及细胞膜。与正常妊娠组比较,子痫前期组胎盘滋养细胞上FasL着色较正常妊娠组减弱,随病情加重更为明显;在底蜕膜细胞中,随子痫前期病情的加重FasL着色与正常孕足月相比减弱,并随病情加重逐渐减弱。结论 子痫前期患者胎盘滋养细胞及重度子痫前期底蜕膜细胞中Fas的升高、FasL下降及Fas/FasL的比例失调与子痫前期的发病具有相关性。胎盘滋养层细胞及底蜕膜上Fas/FasL系统的异常表达可能在子痫前期的发病中起着重要的作用,从而为临床治疗妊娠期高血压疾病提供新的方向。

底蜕膜缺失性早期妊娠1例报道并文献复习

底蜕膜缺失性早期妊娠临床并不少见,但不易诊断,常易与滋养细胞疾病混淆,也有学者诊断其为子宫肌层异位妊娠[1],或胎盘植入性早期妊娠[2],或不全流产[3].

人胎盘底蜕膜间充质干细胞抗炎特性对帕金森病模型大鼠的神经保护作用

目的研究人胎盘底蜕膜间充质干细胞（hPDB-MSCs）抗炎特性对帕金森病（PD）模型大鼠多巴胺能神经元的影响。方法体外培养hPDB-MSCs，6．羟基多巴（6-OHDA）制备大鼠PD模型并按照随机数字表法分为模型组与移植组，每组32只。hPDB-MSCs尾静脉移植观察各组大鼠行为学改变。免疫组化检测移植后3d、1周、2周及4周各组大鼠损伤侧黑质酪氨酸羟化酶（TH）、离子钙接头蛋白（Ibal）表达。实时荧光定量PCR检测各时间点各组大鼠损伤侧黑质抗炎因子人白细胞介素-10（hIL-10）、人转化生长因子-β（hTGF-β）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达。结果hPDB-MSCs移植后1周、2周、4周，移植组大鼠阿朴吗啡诱导的平均旋转圈数明显低于模型组，差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫组化结果显示移植组大鼠损伤侧黑质部位TH阳性细胞数较模型组明显增加，1周、2周、4周时差异有统计学意3Z（P〈0．05）。移植组大鼠损伤侧黑质部位Ibal阳性细胞则明显减少，4周时最为显著。mRNA水平，移植组大鼠hIL-10及hTGF-β表达均较模型组增加，而TNF-α表达量则逐渐降低。结论hPDB-MSCs尾静脉移植后能够通过抗炎机制抑制PD模型大鼠多巴胺能神绎元丧失，改善PD模型大鼠症状。

经直肠超声观察底蜕膜部位血流情况预测药物流产结局的研究

目的:探讨预测药物流产后是否需清宫的超声诊断血流指标。方法:因非意愿妊娠自愿要求药物流产的早孕妇女孕囊排出后,行直肠超声检查,根据底蜕膜部位血流分成3种类型,Ⅰ型:无血流信号;Ⅱ型:星点状或短棒状血流信号,阻力指数(resistance index,RI)>0.6;Ⅲ型,火球状血流信号,RI≤0.6。比较3种类型患者药物流产后的转归情况,主要评价指标有流产后出血天数、出血量、是否施行清宫手术和清宫组织病理结果。结果:Ⅰ型20例,其中18例(90.0%)出血天数≤7 d,20例流产后出血量均<月经量,均未行清宫术;Ⅱ型64例,其中40例(62.5%)流血天数≤7 d,22例(34.4%)经宫缩剂及止血剂治疗后出血逐渐停止,仅2例(3.1%)出血时间>15 d,施行清宫术;Ⅲ型10例,流血天数均>15 d,流产后出血量均>月经量,全部予以清宫(100.0%)。结论:药物流产后底蜕膜部位血流状态可应用经直肠彩色超声将其分为3种类型,Ⅰ型预示流产完全;Ⅱ型预示大多数能流产完全(96.9%),仅少数病例需要清宫处理;Ⅲ型预示不全流产。

人胎盘底蜕膜间充质干细胞库的初步构建

该文探讨了建立生物学特性稳定的人胎盘底蜕膜间充质干细胞(DB-MSCs)库的可行性,旨在为组织工程种子细胞提供更多来源。该研究采用组织块贴壁法从10例足月人胎盘底蜕膜组织中获取间充质干细胞,并采用STR检测细胞是否均来源于母体组织。对分离得到的DB-MSCs采用–196 ℃低温冻存,并在一定时间复苏培养,用倒置显微镜观察细胞形态,CCK8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期和细胞表面标志物,特定培养基诱导其成脂、成骨、成软骨分化。结果显示,从底蜕膜组织中分离培养扩增获得数目稳定的DB-MSCs。STR分析证明,所得细胞均来源于母体组织,经冻存并复苏后的DB-MSCs形态和表面标志物保持不变,并可稳定扩增8代以上,倍增时间为(2.04±0.25)天,大多数的细胞处于静止期(G_(0)/G_(1)),复苏后的细胞保持了较强的成脂、成骨和成软骨分化能力,在细胞中未发现细菌、真菌、支原体和内毒素等的污染。该研究初步建立了DB-MSCs库,进一步明确了库存细胞的制备流程及其质量评价体系,可为再生医学修复重建组织工程提供较好的种子细胞。

早期自然流产绒毛外滋养细胞VEGF的表达及意义

在妊娠早期,滋养细胞发育和分化为构成绒毛的滋养细胞（合体滋养细胞和细胞滋养细胞）及绒毛外滋养细胞（extravillous trophoblast,EVT）。EVT增殖侵入蜕膜组织,具有类似肿瘤的增殖浸润能力[1]。其中,浸入子宫蜕膜间质甚至浅肌层的称绒毛外中间滋养细胞（interstitial extravillous trophoblast,IET）,侵入母体血管的绒毛外滋养细胞称为血管滋养细胞（endovascular extravillous trophoblast, ET） 。

子宫动脉栓塞术联合米非司酮治疗产后胎盘植入的临床分析

胎盘植入是指胎盘绒毛穿透底蜕膜侵入子宫肌层,可导致胎盘滞留,影响子宫收缩,若处理不当,造成产后难以控制的大出血,还可引起继发感染、子宫损伤等不良后果。以往治疗需要切除子宫,使患者失去生育能力。目前介入技术的临床应用为胎盘植入的治疗提供了新手段,避免切除子宫,提高了患者的生活质量。

胎盘植入的产前诊断及保守治疗现状

胎盘植入是产科少见但很严重的并发症,是可能由于原发性子宫底蜕膜发育不良、创伤性内膜缺陷导致继发性蜕膜发育不良等,胎盘绒毛侵入或穿透子宫肌层所致的一种异常胎盘种植。近年来,由于剖宫产率、人工流产率、药物流产率的增加,胎盘植入的发生率也呈明显上升趋势。其中剖宫产史为重要高危因素,有学者报道,剖宫产术后再次妊娠发生胎盘植入的风险是无剖宫产史的35倍。

胎盘早期剥离150例临床分析

我院1954至1981年共收治150例胎盘早期剥离患者,本文就其病因、对孕产妇和围产儿的影响、处理及预防等方面进行讨论;同时随机抽样150例正常产妇作对照。一、临床资料 (一)发病年龄、产次、孕周本组发病年龄19～42岁,150例中,30岁以下108例,占72％,孕周27^+～43周,其中31～41周有98例,占65.53％;初产妇62例,占41.33％,经产妇88例,占58.67％。 (二)发病诱因本组有因可查者91例(66.67％),其中以妊娠中毒症及高血压为多见,共69例(46.0％)。其它诱因见表1。另59例未发现有任何诱因,多为轻型患者。

基于细胞生物学方法比较5种不同组织来源间充质干细胞的特征

背景:间充质干细胞的来源以及分离方法越来越多样,充分认识到这些间充质干细胞的异同,将有助于间充质干细胞在临床中更加合理规范的应用。目的:比较不同组织来源间充质干细胞的生物学特征。方法:采集剖宫产产妇在生育后脱落的脐带、胎盘以及部分脂肪组织,采用胰酶消化法或组织块贴壁法培养出底蜕膜间充质干细胞、绒毛膜间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、脐带胎盘连接处间充质干细胞、脐带间充质干细胞,所用的干细胞培养基有3 种:含胎牛血清的干细胞培养基、含脐血裂解物的干细胞培养基、含无血清添加物的干细胞培养基。检测不同培养条件下的细胞直径、表面标志物以及多向分化能力,检索GEO数据库分析不同间充质干细胞的基因表达情况。结果与结论:①不同培养条件影响细胞大小和细胞周期,其中无血清培养体系培养的间充质干细胞直径偏小,而脐血裂解物干细胞培养基能够增加胎盘源间充质干细胞的直径;②5 种间充质干细胞有类似的表面标志物,都具有成骨、成软骨和成脂肪分化能力,其中脂肪间充质干细胞成脂肪分化能力更强;③脂肪间充质干细胞相比于与其他4 种干细胞在基因表达上存在较大差异,具有更复杂细胞基质成分。

妊娠中毒症

0041313 预痫的设备中听觉性和骨传导性自动血压监测的比较/Natarajan P∥Am JObstet Gynaecol.-1999,181(5 Part 1).-1203～1211 津医情0041314 预痫妇女底蜕膜中8游离一层-前列腺素 F2a 水平升高/Cathrine Staff A∥Am J Obstet Gynaecol.-1999,181(5 Part1).-1211～1215 津医情0041315