G-CSF预处理供者的HLA相合同胞异基因骨髓移植治疗慢性粒细胞白血病研究(英文)

为了评价供者应用G-CSF的骨髓移植治疗慢性粒细胞白血病的临床疗效,用HLA相合的、混合淋巴细胞培养阴性的同胞供者骨髓,对单一病种慢性粒细胞白血病行移植治疗.供者应用G-CSF 250微克/天,连用7天后供髓的32例为研究组,对照组18例常规采髓移植,在预处理方案,GVHD预防和支持治疗方法相同的情况下,比较研究组和对照组移植后在加速造血重建,降低GVHD发生和延长无病生存的疗效.移植结果显示,供者应用G-CSF在慢性粒细胞白血病移植中造血重建加速,中性粒细胞＞0.5×109/L和血小板＞20×109/L的中位天数分别是第15(10-22)天和第17.5(13-28)天,对照组是第21和24天(P＜0.01),研究组发生急性Ⅱ-Ⅳ度GVHD2例(6.3%),对照组5例(27.8%),通过比较,两组差异有显著性(P＜0.05),慢性GVHD发生分别是24%和33.3%(P＞0.05).研究组移植相关死亡、复发和无病生存与对照组比较无统计学差异(P＞0.05).结论:使用G-CSF动员供者的HLA相合的异基因骨髓移植,造血重建加快和重度急性Ⅱ-Ⅳ度GVHD减轻,有可能提高CML移植的无病生存率.

高压氧对异基因骨髓移植后aGVHD影响的实验研究(英文)

本研究探讨高压氧(HBO)在抗异基因骨髓移植后aGVHD和提高生存率中的作用及机制。给受致死量照射的C57BL/6受鼠注入供鼠BALB/c骨髓与脾淋巴细胞的混合液,分别给与高压氧、环孢素A、氨甲蝶呤处理。用流式细胞仪检测脾T细胞及其亚群和黏附分子CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD11a+、CD4+CD18+、CD8+CD11a+、CD8+CD18+的表达,用ELISA和RT-PCR法检测细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和TNFα的表达。结果表明:HBO组小鼠11天的活存率明显高于异基因移植组及CsA+MTX组;HBO和CsA+MTX可明显降低脾组织中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD11a+、CD4+CD18+、CD8+CD11a+、CD8+CD18+的表达(p<0.05);HBO组小鼠血清IL-2和TNFα的浓度及脾组织中IL-2和TNFα mRNA的含量都低于异基因骨髓移植组(p<0.05),但高于CsA+MTX组;HBO组小鼠脾组织中IL-4和IL-10 mRNA的含量显著高于异基因骨髓移植组和CsA+MTX组(p<0.05)。结论:高压氧在对抗aGVHD和提高活存率方面优于环孢素A和氨甲蝶呤,其抗aGVHD的作用机制与调节促炎/抑炎细胞因子的分泌和黏附分子的表达及抑制T淋巴细胞作用有关。

少量多次异基因骨髓移植的实验研究

目的：探讨少量多次异基因骨髓移植的ＧＶＨＤ反应。方法：采用不同少量异基因骨髓细胞的多次尾静脉注射。观察大小便，皮毛，体位及死亡率等ＧＶＨＤ反应一般表现。移植后不同天数进行体内混合淋巴细胞反应及嵌合体测定。外周血象及骨髓有核细胞按常规方法计数。半固体琼脂法进行骨髓ＣＦＵ－ＧＭ测定。肝、脾、小肠及皮肤病理学检查判断ＧＶＨＤ反应程度。外周血Ｌ６１５细胞及脾脏Ｌ６１５细胞比例判断ＧＶＬ作用。结果：一次性大剂量组ＧＭＨＤ反应表现明显，单纯多次异基因骨髓细胞移植的ＧＶＨＤ反应不明显，而少量多次骨髓移植组则ＧＶＨＤ反应强度界于两者之间，并且具有较好的造血恢复作用。在ＧＶＬ作用方面，一次性大剂量骨髓移植组产生较强的近期抗白血病作用，但多死于ＧＶＨＤ反应。少量多次骨髓移植１×１０６骨髓细胞及 １×１０６脾单个核细胞组抗白血病作用较强，３０ ｄ生存率达 ６０％，死亡原因主要为白血病。结论：少量多次骨髓移植可以减轻ＧＶＨＤ反应，保留部分ＧＶＬ作用。

骨髓间充质干细胞对异基因骨髓移植后aGVHD和GVL的影响

为了观察骨髓间充质干细胞(BMMSC)对异基因骨髓移植(alloBMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)和移植物抗白血病(GVL)效应的影响,以急性淋巴细胞白血病(ALL)小鼠为动物模型,对其进行alloBMT的同时,静脉输注体外培养的供鼠BMMSC,同时设立单纯alloBMT对照组。记录受鼠存活时间;观察受鼠发生aGVHD一般反应及病理学变化;用流式细胞术检测受鼠CD4+、CD8+T细胞亚群的差异;采用性染色体检查检测嵌合状况。结果显示:BMMSC推迟aGVHD发生的时间;降低CD4+T细胞的同时增加CD8+T细胞的数量;明显延长受鼠alloBMT后的生存时间。结论:BMMSC与alloBMT联合进行具有一定的GVL效应;BMMSC能抑制alloBMT后aGVHD的发生,但同时具有一定的GVL效应。

供体T_(Reg)细胞对小鼠异基因骨髓移植后GVHD和造血重建的影响

本研究探讨供体CD4+CD25+调控T细胞(regulatoryTcell,TReg)输注对异基因骨髓移植(allo-BMT)后小鼠移植物抗宿主病(GVHD)和造血重建的影响。建立C57BL/6→BALB/c小鼠allo-BMT模型,体外磁珠分离纯化供鼠外周血CD4+CD25+TReg细胞,接受移植的小鼠随机分为3组,在移植骨髓后6-8小时分别予尾静脉输注CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25-T细胞和RPMI1640培养液(空白对照)。以移植后GVHD表现,肝、脾、小肠组织病理形态、生存期及白细胞(WBC)、血小板(Plt)的重建为观察指标并进行组间比较。结果显示:TReg阳性细胞移植组,TReg阴性细胞移植组和空白对照组小鼠WBC>1.0×109/L的时间分别为(8.14±3.26)天、(17.62±5.71)天、(19.81±6.77)天;Plt>20.0×109/L的时间分别为(5.29±1.34)天、(8.97±3.44)天、(9.52±3.92)天,TReg阳性细胞移植组WBC和Plt恢复时间比TReg阴性组与空白对照组快(P<0.05)。3组小鼠在移植后15天GVHD评分为(1.33±0.58)、(1.80±0.27)、(1.93±0.45),TReg阳性细胞移植组小鼠与TReg阴性细胞移植组、空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。移植后(25-30天)的TReg阳性细胞移植组小鼠肝、脾、小肠GVHD病理损害较同期TReg阴性细胞移植组与空白对照组小鼠有一定程度的减轻。3组小鼠移植后平均存活时间分别为(41.45±17.88)天、(18.75±14.39)天和(25.67±16.84)天,TReg阳性细胞移植组小鼠平均存活时间较TReg阴性细胞、空白对照组小鼠延长(P<0.05)。结论:小鼠allo-BMT后输注供体TReg细胞可以减轻移植后GVHD程度,延长小鼠生存期,促进造血重建。

异基因骨髓移植小鼠联合输注IL-3/IL-6双基因转导的骨髓基质细胞促进造血恢复

探讨用逆转录病毒载体转入IL 3和IL 6双基因的骨髓基质细胞系QXMSC1IL 3/IL 6对异基因骨髓移植小鼠造血功能的促进作用。用逆转录病毒载体 (含小鼠IL 3cDNA ,人IL 6cDNA)分别转导到骨髓基质细胞系QXMSC1(H 2 d) ,构建骨髓基质细胞系QXMSC1IL 3/IL 6。供体小鼠BALB/c(H 2 d)骨髓去除骨髓中T细胞 ,受体小鼠C57BL/6(H 2 b)经γ射线致死量照射后 ,输入去除T细胞的供体骨髓 (1× 1 0 7/鼠 )的同时输入骨髓基质细胞QXMSC1IL 3/IL 6(5× 1 0 5/鼠 )。在骨髓移植后 2 0和 40天 ,分别检测骨髓移植小鼠外周血RBC ,WBC和骨髓有核细胞数及骨髓中CFU S ,CFU GM ,CFU E和CFU GEMM数。结果 :异基因骨髓移植共输入QXMSC1IL 3/IL 6基质细胞系可使异基因骨髓移植小鼠外周血RBC ,WBC数明显恢复 ,骨髓中有核细胞数 ,CFU S ,CFU GM ,CFU E和CFU GEMM明显增加。基质细胞系QXMSC1可作为有效的基因载体促进骨髓移植后造血功能重建。结论 :基质细胞转入细胞因子IL 3或IL 6基因可以进一步促进骨髓移植后造血功能重建 ,联合转导IL 3和IL

异基因骨髓移植后嵌合状态的研究进展

骨髓移植是许多血液系统疾病和免疫缺陷性疾病的有效治疗措施 ,移植成功与否与供者细胞在受者体内的植入状况即嵌合状态的形成有关。由于造血干细胞输入量、供者和受者T细胞量、预处理方案以及移植时患者病情等因素的影响 ,可以形成不同形式的嵌合状态。如果受者的骨髓或外周血中完全是供者的细胞 ,则形成完全的供者嵌合状态 (CC) ;当检测到供者和受者两种细胞成分时 ,则为混合嵌合状态 (MC)。不同形式的嵌合状态 ,以及嵌合状态形式的不同演变趋势 ,其临床意义各不相同。检测嵌合状态的方法有多种 ,包括微卫星检测、染色体核型分析、血型转换、红细胞抗原、限制性片段长度多态性、可变数目串联重复序列以及现在最常用的PCR法。

非亲缘异基因骨髓移植病人肝静脉闭塞病的护理

造血干细胞移植后并发肝静脉闭塞病 (VOD)是造血干细胞移植后与预处理有关的危及生命的严重并发症。根据骨髓移植及VOD的临床特征 ,阐述了异基因骨髓移植预处理护理、VOD预防的护理、VOD发生时的护理及心理护理等。

小鼠同种异基因骨髓移植aGVHD动物模型的建立

目的:建立一个稳定可靠的异基因骨髓移植(allogeneic bone marrow transplantation,Allo-BMT)急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease,aGVHD)动物模型,为Allo-BMT中aGVHD研究提供理想的实验平台。方法:以雄性C57BL/6(H-2b)为供鼠,雌性BALB/C(H-2d)为受鼠,受鼠致死性全身照射(total body irradiation,TBI)(8.0Gy)预处理后,在移植物中混合不同比例的供鼠骨髓细胞和脾细胞以引起不同程度的aGVHD。根据存活期、外周血白细胞计数、临床表现及病理检查等判断aGVHD程度。结果:单纯异基因骨髓组只有部分小鼠出现aGVHD,75%的小鼠长期存活(>30d)。混合不同比例的供鼠骨髓细胞和脾细胞的Allo-BMT小鼠出现aGVHD的时间和程度均有差异,其中骨髓与脾细胞1.5:1或1:1混合组小鼠,均可在相对集中的时间内(8～15d)观察到典型的aGVHD临床和病理改变。结论:建立Allo-BMT aGVHD模型需要加入一定比例的脾细胞,供鼠骨髓与脾细胞1.5:1或1:1混合进行的Allo-BMT,可作为理想的aGVHD动物模型。

小鼠异基因骨髓移植γ线清髓性照射对骨髓内皮龛的损伤研究

本研究探索异基因骨髓移植清髓性γ线照射预处理对受鼠骨髓内皮的损伤程度。体外培养小鼠骨髓单个核细胞,经5-7天检测其表面标记、吞噬Dil-Ac-LDL和结合FITC-UEA-1鉴定,并行CFSE标记。分析正常组、清髓性照射组、内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC)移植组及照射联合EPC移植组小鼠外周血中白细胞变化、骨髓内皮的改变及CFSE标记EPC的骨髓内分布。结果发现,培养细胞鉴定证实为CD31+CD133+CD45low/-,且具有吞噬Dil-Ac-LDL和结合FITC-UEA-1能力。小鼠清髓照射后外周血白细胞迅速减少,与正常组相比,有显著差异(p<0.05)。照射后3天,骨髓中大量出血,内皮细胞和基底膜间连接被损坏。清髓照射后输注CFSE标记EPC,18小时后小鼠骨髓中可见CFSE+细胞,其细胞量是正常小鼠单纯EPC输注组的58倍(p<0.05)。结论:移植清髓照射预处理引起严重骨髓内皮龛损伤,该损伤驱动外源性EPC的归巢。

骨髓间充质干细胞对大鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病的影响

目的：探讨大鼠骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）对异基因骨髓移植（allo—BMT）后移植物抗宿主病（GVHD）的影响。方法：从大鼠骨髓中分离培养问充质干细胞，通过形态学观察及流式细胞术检测表面标志以鉴定其纯度。通过混合淋巴细胞培养（MLR）检测MSCs体外对T细胞增殖的影响。建立大鼠GVHD模型（SD—Wistar），对其进行allo—BMT的同时，共移植不同数量供者源性的MSCs，观察受体大鼠的临床表现、绘制Kaplan—Meier生存曲线，并通过病理分析，综合评价MSCs，对allo-BMT后GVHD的影响。结果：在混合淋巴细胞培养体系中加入与反应淋巴细胞同源的MSCs，能够抑制T细胞的增殖，不同MSCs浓度组之问存在显著性差异（P〈0．01）。异基因骨髓移植时，供鼠MSC与T细胞比例为1：5、2：5共输注时，能推迟受鼠GVHD的发生时间，延长生存期，但并未避免GVHD的发生；当比例为1：1时，只有20％的受鼠发生了慢性GVHD反应，1—2周后逐渐缓解，并得到了长期生存，其余80％大鼠均未出现GVHD反应而长期生存。结论：大鼠MSCs不仅在体外能够抑制T细胞的增殖，体内共移植骨髓和高数量的MSCs也可以降低GVHD的发生率和严重程度，并延长受鼠的生存时间。本研究结果为临床GVHD的防治提供了新的思路。

STR基因座在异基因骨髓移植植活诊断中的应用研究

目的 :探讨多个 STR基因座在异基因骨髓移植植活诊断中的应用。方法 :分别复合扩增各病例组常染色体 1 3个STR基因座和 Amelogenin基因座 ,以及Y染色体 6个 STR基因座。扩增产物进行 Gene Scan扫描 ,Genotyper分型。结果 :病例 1、2、3移植后呈完全嵌合状态 ,提示移植成活。病例 4在第一次移植未成活后 ,行二次移植后呈完全嵌合状态。结论 :常染色体 1 3个 STR基因座可以很好地应用于异基因骨髓移植植活诊断的检测。Y- STR基因座做为植活诊断的证据具有一定的局限性。

TGF-β减轻异基因骨髓移植小鼠急性移植物抗宿主病

为了探讨转化生长因子β(TGF-β)对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病发生发展的影响,用C57BL/6小鼠作为供鼠,BABL/c小鼠为受鼠,建立小鼠同种异基因骨髓移植模型。BABL/c受鼠随机分为4组:空白对照组、单纯照射组、移植对照组和TGF-β实验组。TGF-β实验组于移植前2天至移植后7天每日皮下注射TGF-β1(1μg/kg)。结果显示:TGF-β实验组小鼠生存时间明显长于移植对照组(p<0.01),TGF-β实验组小鼠小肠、皮肤及肝脏GVHD病理改变明显轻于移植对照组。移植后7天TGF-β实验组小鼠血清IL-2浓度较空白对照组高,但远低于移植对照组;TGF-β实验组血清IL-10浓度明显高于移植对照组。结论:TGF-β能够减轻或抑制小鼠allo-BMT后致死性的aGVHD发生,提高移植后存活率。TGF-β可能使Th1细胞向Th2细胞偏移,抑制IL-2等Th1类细胞因子的分泌,同时促进了Th2类细胞因子IL-10的表达,降低aGVHD的发生。

非血缘供者异基因骨髓移植治疗慢性粒细胞白血病

探讨非血缘供者异基因骨髓移植对慢性粒细胞白血病的治疗 ,并对移植相关并发症作了详细观察和处理。预处理方案为标准 Bu Cy,马利兰 (Bu) 4 mg/(kg· d)× 4;环磷酰胺 (Cy) 6 0 mg/(kg· d)× 2。2例供者均来自台湾慈济骨髓捐赠中心 ,HL A基因配型 (SSOP法 )与患者完全配合。采髓量分别为 12 30 m l和 10 10 ml,其中植入的单个核细胞为 2 .13× 10 8/kg和 2 .38× 10 8/kg;CD34+细胞为 2 .3× 10 6 /kg和 2 .8× 10 6 /kg;CFU- GM4.6× 10 5个 /kg和 5 .3× 10 5个 /kg,BFU- E1.2× 10 5个 /kg和 1.7× 10 5个 /kg,CFU- GEMM3.6× 10 5个 /kg和 4.5× 10 5个 /kg。移植物抗宿主病的预防采用环胞素 A+氨甲蝶呤 +人体丙种球蛋白。结果 :在移植后 + 2 4和 + 16天患者中性粒细胞恢复达≥ 0 .5× 10 9/L,在 + 6 4和 + 45天血小板≥ 2 .0× 10 9/L,+ 30天骨髓染色体核型分析 ,2例均达 90 %以上供者嵌合 ,+ 10 0天达完全嵌合 ,Ph1染色体 (- ) ,血型转变为供者血型 ,DNA可变数目重复序列检测 (VNTR)证实供者源造血重建。结论 :HL A相合非血缘异基因骨髓移植治疗慢性粒细胞白血病获得成功 ,重建了患者造血功能 ;移植相关并发症的及时发现和正确处理是保证移植成功的重要因素。

非亲缘异基因骨髓移植后并发严重肝静脉闭塞病和Ⅲ度房室传导阻滞的诊治

目的 探讨非亲缘异基因骨髓移植后严重肝静脉闭塞病 (VOD)和Ⅲ度房室传导阻滞 (AVB)并发症的临床表现和治疗措施。方法 1例非亲缘异基因骨髓移植患者 +36天发生严重VOD ,+129天发生Ⅲ度AVB。予肝素钠、前列腺素E1 脂质微球治疗 ,以及安置人工心脏起搏器。结果 患者抢救成功 ,已存活17个月 ,恢复情况良好。结论 VOD可在骨髓移植 +20天以后出现 ;低剂量肝素和前列腺素E1 防治严重VOD有效 。

同种异基因骨髓移植GVHD动物模型的建立及其病理生理学机制初探

目的:建立稳定的异基因骨髓移植GVHD(移植物抗宿主病)动物模型,并初步了解其病理生理学机制。方法:以BALB/c(H-2d)雌性小鼠为受者,接受8Gy致死剂量的60Co全身照射后,输注雄性C57BL/6(H-2b)供鼠的脾细胞和骨髓细胞,观察受鼠的体征、造血功能恢复及生存时间的变化,并进行病理学、嵌合体和T细胞亚群及相关细胞因子的检查。结果:模型组小鼠在移植后出现了典型的GVHD症状;肠、肝、脾、皮肤的病理学分析均属于Ⅳ度GVHD;嵌合体植入成功;以7、14和21d为检测时间点,发现模型组鼠体内T细胞亚群移植后较移植前CD3+CD4+T细胞数量减少,CD3+CD8+T细胞显著升高,CD4+和CD8+T细胞比例严重倒置,随着时间变化比值会逐渐升高,但仍然处于较显著的倒置水平;血清中IFN-γ、TNF-α在移植后+7d表达显著增高,尤其是IFN-γ的表达在+7d达峰值;IL-4和IL-10的水平在移植前后几乎没有变化。结论:建立了稳定的GVHD动物模型;此模型发病过程中,CD8+T细胞介导的CTL细胞毒性作用可能要大于CD4+Th介导的细胞因子效应;IFN-γ、TNF-α炎症因子在GVHD的早期发挥重要作用;IL-4、IL-10的低水平分泌与急性GVHD的高发病率有关。