RP-HPLC法同时测定广金钱草中夏佛塔苷和异夏佛塔苷

目的用RP-HPLC分离广金钱草中的夏佛塔苷和异夏佛塔苷,并对其进行定量测定。方法色谱柱为依利特C18（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相为乙腈-0.025 mol/L磷酸溶液（三乙胺调pH至3.02）（15∶85）;柱温30℃;体积流量0.9 mL/min;检测波长270 nm。结果广金钱草中夏佛塔苷的线性方程为Y=2×106X-153 980,进样量在0.158~0.898μg范围内线性关系良好（r=0.999 7）,回收率为100.0%,RSD为0.7%;异夏佛塔苷的线性方程为Y=3×106X-86 359,进样量在0.076~0.436μg范围内线性关系良好（r=0.999 6）,回收率为99.9%,RSD为0.6%。结论增加异夏佛塔苷的色谱检测有利广金钱草及其制剂的质量控制。

HPLC法测定霍山石斛中夏佛塔苷、异夏佛塔苷的含量

【目的】建立霍山石斛中夏佛塔苷和异夏佛塔苷的含量测定方法。【方法】采用高效液相色谱(HPLC)法,ZorbaxSB-Aq色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈(A)—体积分数为0.4%的甲酸溶液(B)(V∶V=15∶85),检测波长为340nm,流速为1mL·min-1,柱温为30℃。【结果】夏佛塔苷、异夏佛塔苷线性范围分别为5.84~70.08μg/mL、9.64~115.68μg/mL(r=0.9999)。夏佛塔苷的平均加样回收率为98.58%,相对标准偏差(RSD,sR)为1.82%;异夏佛塔苷的平均加样回收率为103.87%,sR为0.90%。平均加样回收率范围在99.76%~102.07%,sR均小于3.0%。11批样品夏佛塔苷和异夏佛塔苷的含量分别为0.0122~0.0866mg/g、0.0297~0.1463mg/g。【结论】该含量测定方法准确可靠,重复性好,可为霍山石斛的质量控制提供参考依据。

基于LC-MS/MS研究异夏佛塔苷在大鼠体内药代动力学及其绝对生物利用度

建立LC-MS/MS法测定大鼠血浆中异夏佛塔苷的浓度,研究异夏佛塔苷在大鼠体内的药代动力学特性及其绝对生物利用度。分别灌胃给药1. 5、3. 0、6. 0 mg/kg和静脉注射异夏佛塔苷0. 5 mg/kg后,建立LC-MS/MS分析方法测定大鼠血浆中异夏佛塔苷的含量,运用DAS 3. 0软件计算药代动力学参数。异夏佛塔苷在1. 0～500. 0 ng/m L内线性良好(r=0. 997 6),专属性、精密度和准确度、基质效应和提取回收率以及稳定性均符合生物样本分析要求。药代动力学参数显示:灌胃给药低、中、高3个剂量组,c_(max)分别为(109. 34±22. 87)、(259. 84±95. 35)、(499. 26±288. 09) ng/m L,AUC0-t分别为(310. 57±46. 18)、(552. 67±207. 14)、(1 075. 03±371. 19) h·ng/m L,t1/2分别为(2. 36±0. 22)、(2. 91±0. 19)、(3. 04±0. 86) h,t_(max)分别为(1. 03±0. 25)、(1. 18±0. 17)、(1. 5±0. 43) h,MRT_(0-t)分别为(11. 33±1. 53)、(11. 27±1. 09)、(8. 29±0. 76) h;静脉注射后,AUC_(0-t)为(1 536±421. 3) h·ng/m L,t1/2为(2. 57±0. 46) h,MRT_(0-t)为(9. 55±2. 37) h,绝对生物利用度分别为6. 73%,5. 99%,5. 80%。结果表明,本研究所建立的LC-MS/MS分析方法可应用于异夏佛塔苷在大鼠体内的药代动力学特性研究。

异夏佛塔苷对人非小细胞肺癌A549细胞抗肿瘤的活性及其作用机制

目的探讨不同浓度异夏佛塔苷(Isoschaftoside)对人非小细胞肺癌A549细胞抗肿瘤活性及其作用机制的影响。方法采用MTT法检测不同浓度的异夏佛塔苷对A549细胞增殖的作用;采用Annexin V FITC/PI双染法流式细胞术检测异夏佛塔苷对A549细胞凋亡的影响;蛋白印迹法(Western blotting)检测异夏佛塔苷对A549细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2和Caspase-3表达的影响。结果MTT结果显示:与对照组相比,异夏佛塔苷对A549细胞有明显的抑制增殖作用,且呈时间剂量依赖性;流式双染检测显示:异夏佛塔苷作用于A549细胞48h后可增加细胞的凋亡率,且作用具有剂量依赖性;Western blotting显示:异夏佛塔苷可上调Bax、Caspase-3基因的表达,下调Bcl-2基因的表达。结论异夏佛塔苷在体外具有明显的抗肿瘤活性,其机制可能与上调Bax、Caspase-3基因的表达,下调Bcl-2基因的表达有关。

HPLC法测定不同产地天南星中夏佛塔苷及异夏佛塔苷的含量

目的建立测定天南星中夏佛塔苷及异夏佛塔苷含量的HPLC方法。方法采用Syncronis aQ C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇(A)乙腈(B)-0.4%甲酸水溶液(D)为流动相(7:13:80),等度洗脱,检测波长334 nm,流速0.9 ml/min,柱温30℃。结果夏佛塔苷在18.11~108.62μg/ml线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为99.16%,RSD为2.60%;异夏佛塔苷在6.14~36.84μg/ml线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为99.46%,RSD为3.47%。不同产地天南星中夏佛塔苷、异夏佛塔苷的含量差异较大,夏佛塔苷的含量以四川最高、浙江最低,分别为55.346、0.006μg/ml,异夏佛塔苷的含量以四川最高、东北最低,分别为19.068、0.000μg/ml。结论建立的方法准确简便,快速可行,可用于天南星中夏佛塔苷及异夏佛塔苷的含量测定,为天南星的质量控制提供参考。

HPLC法同时测定神农茶颗粒中的夏佛塔苷、异夏佛塔苷、去氧地胆草内酯和4,5-二咖啡酰奎宁酸

目的：建立同时测定神农茶颗粒中夏佛塔苷、异夏佛塔苷、去氧地胆草内酯、4,5-二咖啡酰奎宁酸4个成分的高效液相色谱测定方法。方法：采用Hypersil C18色谱柱（200 mm ×4.6 mm,5μm）；以乙腈-0.025 mol·L-1磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量：1.3 ml·min-1,检测波长：270 nm（夏佛塔苷和异夏佛塔苷）、208 nm（去氧地胆草内酯）、327 nm（4,5-二咖啡酰奎宁酸）,柱温为室温。结果：夏佛塔苷、异夏佛塔苷、去氧地胆草内酯和4,5-二咖啡酰奎宁酸分别在5.850~117.000,4.650~93.000,4.160~83.200,5.470~109.400μg · ml-1范围内线性良好, r 值均大于0.999,平均加样回收率分别为97.70%、96.87%、97.53%、99.29%,RSD分别为1.40%、1.13%、1.69%、1.01%（n=6）。结论：该方法简便,结果准确,可用于神农茶颗粒的含量测定。

RP-HPLC法同时测定消炎利胆片中咖啡酸、异夏佛塔苷、夏佛塔苷的含量

目的：建立同时测定消炎利胆片中咖啡酸、异夏佛塔苷、夏佛塔苷含量的方法。方法：采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Phenomenex C18，流动相为甲醇-0.1％磷酸水溶液（梯度洗脱），流速为0.8 ml/min，检测波长为334 nm，柱温为25℃，进样量为10μl。结果：咖啡酸、异夏佛塔苷、夏佛塔苷的检测进样量线性范围分别为0.10～2.81、0.20～5.63、0.10～2.63μg（r＝0.9999、0.9999、0.9999）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜3％；加样回收率分别为96.3％～100.4％（RSD＝1.59％，n＝9）、97.3％～101.2％（RSD＝1.28％，n＝9）、96.6％～100.6％（RSD＝1.39％，n＝9）。结论：该方法简单灵敏、准确可靠、重复性好，可用于同时测定消炎利胆片中咖啡酸、异夏佛塔苷、夏佛塔苷的含量。

毛鸡骨草中异夏佛塔苷对照品的制备研究

目的建立毛鸡骨草中异夏佛塔苷对照品的制备分离方法。方法取毛鸡骨草药材醇提浸膏的正丁醇萃取部分用硅胶柱色谱分离,氯仿-甲醇（90∶10-70∶30）梯度洗脱,收集异夏佛塔苷富集流份,继续采用低压C18柱色谱及制备HPLC进行分离纯化,通过NMR、MS等波谱方法鉴定化合物结构,经TLC、HPLC-UV及MS联用等技术进行质量分数检测。结果从毛鸡骨草中制备分离的异夏佛塔苷对照品,质量分数〉99%。结论本法得到的异夏佛塔苷对照品符合中药化学对照品的相关技术要求,为药材毛鸡骨草和含毛鸡骨草的成方制剂的质量控制及药效物质基础研究提供化学对照品。

线纹香茶菜中咖啡酸、新西兰牡荆苷2、异夏佛塔苷的含量动态变化研究

目的：建立同时测定线纹香茶菜中咖啡酸、新西兰牡荆苷2、异夏佛塔苷含量的方法,以确定线纹香茶菜的最佳采摘期。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Diamonsil C18,流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（梯度洗脱）,流速为0.8 ml/min,检测波长为334 nm,柱温为25℃,进样量为15μl。结果：咖啡酸、新西兰牡荆苷2、异夏佛塔苷检测的质量浓度线性范围分别为0.23～5.68、0.31～7.76、0.45～11.30μg/ml（r=0.999 9、0.999 8、0.999 9）;精密度、稳定性、重复性试验的RSD〈2.0%;加样回收率分别为95.1%～98.9%、97.4%～101.3%、95.5%～98.8%,RSD分别为1.8%、1.7%、1.4%（n=6）。采收于每年4-5月、7-8月的线纹香茶菜中上述3种成分含量最高。结论：该方法简便、准确、重复性好,可用于同时测定线纹香茶菜中咖啡酸、新西兰牡荆苷2、异夏佛塔苷的含量;线纹香茶菜的最佳采摘期为每年4-5月、7-8月。

不同来源和部位的广金钱草中化学成分研究

目的:研究不同市场、不同产地、不同部位的广金钱草中3种化学成分含量,为广金钱草临床应用提供科学依据。方法:采用HPLC法,对不同药材市场、不同产地广金钱草地上部分、茎及叶中夏佛塔苷、异夏佛塔苷和异牡荆苷的含量进行测定。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%甲酸溶液(32∶68),流速为1.0 mL/min,检测波长为272 nm。结果:叶中夏佛塔苷、异夏佛塔苷和异牡荆苷的含量均高于地上部分和茎;亳州、安国、玉林、樟树、禹州5个市场地上部分及五通、中庸、宛田3个产地样品叶中夏佛塔苷含量多数均≥0.13%;异夏佛塔苷存在于地上部分、茎、叶中,异牡荆苷仅存在于叶中;玉林市场药效成分含量要优于其他市场,五通产地的药材质量要优于中庸、宛田产地。结论:广金钱草药材质量评价时,建议增加异夏佛塔苷这一指标;贮存药材时,建议减少贮存时间、保持药材完整性;叶是广金钱草3种化学成分的主要富集部位。

广金钱草总黄酮胶囊对照品的研究(英文)

目的:为广金钱草总黄酮胶囊制备含量测定用化学对照品。方法:采用常规柱层析结合制备型HPLC分离目标化合物,通过HPLC法测定其纯度和稳定性及其在胶囊中的含量,根据光谱数据(UV、IR、ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、DEPT、1H-13CCOSY、1H-1HCOSY、1D-HOHAHA、1D-NOE、HMBC)鉴定其结构。结果:分离到的化合物被鉴定为异夏佛塔苷,其纯度在99以上,常温条件下放置3个月内稳定,其溶液在常温条件下8h内稳定。异夏佛塔苷在广金钱草总黄酮胶囊中含量为3.0以上。结论:该化合物可作为广金钱草总黄酮胶囊的含量测定用对照品,并且能从广金钱草中分离得到。

HPLC同时测定广金钱草中3种黄酮类成分含量

目的:建立同时测定广金钱草中夏佛塔苷、异夏佛塔苷和异牡荆素3种黄酮类成分的含量。方法:色谱柱为Eclipse XDB-C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-2.5mmol·L^(-1)醋酸铵溶液,梯度洗脱,检测波长为340 nm;流速为1 mL·mim^(-1)。结果:3种活性成分均在0.010～0.400μg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r≥0.9997);平均加样回收率为101%～102%,RSD<3.0%(n=6)。结论:该方法准确可靠,重复性好,为广金钱草质量控制与鉴定提供了参考。

石淋通片中3个黄酮类成分含量测定

建立了石淋通片的质量控制方法。采用UV法测定石淋通片的总黄酮含量,HPLC法测定石淋通片中夏佛塔苷、异夏佛塔苷和异牡荆素的含量。色谱柱为Eclipse XDB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),用甲醇-2.5 mmol/L醋酸铵溶液作为流动相,梯度洗脱,检测波长为340 nm;流速为1 mL/min。经验证,石淋通片的总黄酮含量在6.989~7.261 mg/g;夏佛塔苷、异夏佛塔苷和异牡荆素的线性关系良好,易于操作,仪器的精密度、样品的稳定性和重现性良好,平均加样回收率均在95%~105%之间。石淋通片中夏佛塔苷的最低含量为1.95 mg/g,异夏佛塔苷最低含量为0.80 mg/g,异牡荆素的最低含量为0.21 mg/g。该方法准确可靠,重复性好,可用于石淋通片的质量标准研究。

纤花线纹香茶菜中3种水溶性黄酮类成分含量动态变化研究

目的：建立同时测定纤花线纹香茶菜中新西兰牡荆苷2、异夏佛塔苷、夏佛塔苷含量的方法,并分析其含量动态变化。方法：采用Phenomenex luna C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,流动相为甲醇-0.5%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速为0.8ml·min^-1,检测波长为330 nm,柱温为室温（25℃）,进样量：10μl。结果：新西兰牡荆苷2、异夏佛塔苷、夏佛塔苷线性范围分别为0.130-3.110μg（r=0.999 8）、0.180-4.540μg（r=0.999 9）、0.08-1.97μg（r=0.999 9）;平均回收率分别为96.8%、99.2%、97.1%,RSD分别为1.9%、1.6%、1.6%（n=6）。上述3种水溶性黄酮成分从幼苗期开始显著累积,异夏佛塔苷和夏佛塔苷在3月和8月达到最高值;新西兰牡荆苷2的含量在1~4月趋于稳定,5月后开始逐渐累积,8月达最高值,之后开始呈逐渐下降的趋势。结论：以水溶性黄酮成分含量为指标,纤花线纹香茶菜的最佳采收期为3月和8月,且以8月份采收的药材质量最佳。

HPLC法测定广金钱草茎、叶中4种黄酮类成分的含量

目的:测定9批不同产地广金钱草茎、叶中新西兰牡荆苷2、夏佛塔苷、异夏佛塔苷和异牡荆素的含量。方法:采用高效液相色谱法,采用Agilent Zorbax SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相乙腈-0.2%磷酸水溶液(14∶86),流速0.8ml·min-1,检测波长335 nm,柱温为30℃。结果:新西兰牡荆苷2、夏佛塔苷、异夏佛塔苷和异牡荆素线性范围分别为13.5~540.8 ng、33.0~1321.6 ng、26.0~1040.6 ng、13.6~543.6 ng(r>0.999);精密度、稳定性、重复性试验的RSD小于3.0%;平均回收率分别为98.2%、98.6%、99.9%和98.0%,RSD分别为1.4%、0.9%、1.7%和1.1%(n=9)。广金钱草叶中4种成分的含量远大于茎。结论:建立的方法简单、灵敏、准确、可靠,重复性好,建立的方法可用于广金钱草的质量控制,也为如何保证广金钱草的质量提供了理论依据。

反相高效液相色谱法同时测定净石灵胶囊中5种成分的含量

目的建立同时测定净石灵胶囊中新西兰牡荆苷Ⅱ、异夏佛塔苷、淫羊藿苷、淫羊藿苷次苷Ⅱ和迷迭香酸含量的反相高效液相色谱法。方法采用Agilent C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相系统为甲醇(A)-0.2%甲酸水溶液(B),梯度洗脱;流速为1.0 m L·min^(-1);柱温25℃;检测波长为切变波长(0~40 min,270 nm;40~50 min,329 nm)。结果净石灵胶囊中新西兰牡荆苷Ⅱ、异夏佛塔苷、淫羊藿苷和淫羊藿苷次苷Ⅱ的进样量分别在0.099~1.238、0.132~1.650、0.081~1.012、0.038~0.475、0.062~0.775μg内与色谱峰面积呈良好的线性关系,加样回收率(n=6)分别为98.6%、99.1%、97.1%、101.0%、98.6%,RSD分别为1.2%、0.97%、1.4%、1.6%、1.9%。结论该方法符合方法学验证要求,简便、快捷,可用于净石灵胶囊的质量控制。

广金钱草标准汤剂UPLC特征图谱研究

目的建立广金钱草标准汤剂的超高效液相色谱法(UPLC)特征图谱。方法采用CORTECS T3 UPLC色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.6μm),乙腈-0.1%磷酸溶液进行梯度洗脱,流速为0.2 mL/min,柱温为30℃,检测波长为340 nm,采用中药色谱特征图谱相似度评价系统软件(2012版)进行特征图谱分析。结果建立了广金钱草标准汤剂特征图谱,标定7个共有特征峰,并指认了夏佛塔苷、异荭草苷、异夏佛塔苷和异牡荆苷4个化合物。该特征图谱可用于广金钱草药材与混淆品金钱草和积雪草药材的鉴别。结论该方法专属、稳定,可用于广金钱草易混淆品的鉴别。

HPLC法同时测定不同来源溪黄草药材中8个水溶性成分的含量

目的：建立同时测定不同品种溪黄草中咖啡酸、新西兰牡荆苷2、新西兰牡荆苷3、异夏佛塔苷、夏佛塔苷、牡荆苷、芹菜素-6,8-二-C-α-L-吡喃阿拉伯糖苷和芦丁含量的高效液相色谱法,并比较评价溪黄草各品种药材质量。方法：采用Phenomenex luna C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,流动相为甲醇-0.5%甲酸水溶液梯度洗脱,流速0.8 m L·min^-1,检测波长334 nm;柱温为室温（25℃）。结果：咖啡酸、新西兰牡荆苷2、新西兰牡荆苷3、异夏佛塔苷、夏佛塔苷、牡荆苷、芹菜素-6,8-二-C-α-L-吡喃阿拉伯糖苷和芦丁线性范围分别为0.09～2.28、0.13～3.11、0.06～1.38、0.18～4.54、0.08～1.97、0.07～1.71、0.06～1.49、0.05～1.31μg;平均回收率（n=6）分别为99.7%、99.5%、100.1%、99.0%、98.4%、98.4%、101.8%、99.4%,RSD分别为0.86%、1.8%、1.8%、1.7%、2.0%、1.2%、1.2%、1.4%。狭基线纹香茶菜中咖啡酸、新西兰牡荆苷2、新西兰牡荆苷3、异夏佛塔苷、夏佛塔苷、牡荆苷、芹菜素-6,8-二-C-α-L-吡喃阿拉伯糖苷和芦丁8个水溶性成分含量分别为0.63～0.33、0.88～6.20、0.44～2.41、2.37～11.19、0.75～5.53、0.76～1.83、0.45～1.78、0.00～2.45 mg·g^-1,纤花线纹香茶菜中上述8个水溶性成分含量分别为0.86～3.12、0.76～6.35、0.53～1.47、2.44～11.1、1.96～5.29、0.00～1.82、0.90～5.82、0.00～2.34 mg·g^-1,线纹香茶菜中上述8个水溶性成分含量分别为0.61～2.17、0.77～1.56、0.47～1.82、1.97～6.48、1.69～6.72、0.00～0.56、0.00～3.30、0.00～0.84 mg·g^-1,溪黄草中上述8个水溶性成分含量分别为0.62～1.33、0.00～0.94、0.44～1.33、0.00～2.13、0.18～1.81、0.00～0.50、0.00～1.11、0.00～0.22 mg·g^-1。结论：本研究所建立的方法能鉴别不同来源的溪黄草药材,可用于溪黄草药材的质量控制。

狭基线纹香茶菜水溶性成分及其抗肿瘤活性研究

目的 研究狭基线纹香茶菜Isodon lophanthoides var.gerardianus的水溶性成分及其抗肿瘤活性.方法 采用大孔吸附树脂D-101、ODS、Sephdex LH-20等色谱技术和重结晶进行分离纯化,通过ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR等现代波谱技术进行结构鉴定；以HepG2为供试细胞株,采用MTT法对化合物进行体外抗肿瘤活性研究.结果 从狭基线纹香茶菜水提液中分离得到12个水溶性化合物,分别鉴定为新西兰牡荆苷Ⅱ （1）、新西兰牡荆苷Ⅲ （2）、异夏佛塔苷（3）、夏佛塔苷（4）、牡荆苷（5）、芹菜素-6,8-二-Gα-L-吡喃阿拉伯糖苷（6）、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷（7）、芹菜素-6-C-β-L-吡喃阿拉伯糖-8-C-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（8）、芹菜素-6-C-β-D-木糖-8-C-α-L-阿拉伯糖苷（9）、咖啡酸（10）、迷迭香酸（11）、芦丁（12）.结论 化合物1～9为首次从香茶菜属植物中分离得到；其中化合物1、6、11对HepG2细胞有较好的抑制作用.

UPLC-MS/MS同时测定金牡感冒片中15个成分

目的:建立超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS法)同时测定金牡感冒片中15个化学成分(新绿原酸、原儿茶酸、对羟基苯甲酸、绿原酸、隐绿原酸、獐牙菜苷、夏佛塔苷、穗花牡荆苷、异夏佛塔苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆苷、木犀草苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C)的含量。方法:采用UPLC-MS/MS法,正负离子切换的多反应监测(MRM)模式进行含量测定。色谱条件:使用CORTECS UPLC C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.6μm),流动相为0.1%甲酸水-乙腈,梯度洗脱,流速为0.25 m L·min^(-1)。结果:15个成分在各自考察的浓度范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.994 0;加样回收率在96.8%~104.5%,RSD为3.8%~4.6%;12批样品中新绿原酸、原儿茶酸、对羟基苯甲酸、绿原酸、隐绿原酸、獐牙菜苷、夏佛塔苷、穗花牡荆苷、异夏佛塔苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆苷、木犀草苷、异绿原酸A、B、C的含量分别为0.300~0.630、0.013~0.031、0.053~0.133、2.319~4.290、0.442~0.792、0.345~0.715、0.476~0.945、0.164~0.283、0.068~0.162、0.004~0.006、0.006~0.013、0.064~0.100、0.974~1.682、0.423~0.690、0.799~1.636 mg·g^(-1)。结论:本研究所建立的UPLC-MS/MS定量分析方法可作为金牡感冒片中15个成分同时测定的方法。