乳苣不同部位异槲皮苷含量测定及其抗氧化活性研究

采用高效液相色谱(HPLC)法测定了乳苣不同部位的异槲皮苷含量;以抗坏血酸(VC)为阳性对照,采用DPPH法和FRAP法对乳苣不同部位提取物的抗氧化活性进行了初步探索。结果表明,乳苣样品在14 min内分离度良好,异槲皮苷浓度在2.00~10.00μg·mL^(-1)范围内与吸光度线性关系良好(R=0.9996),精密度(RSD=0.63%)、重复性(RSD=1.24%)、平均加标回收率(95.15%,RSD=1.72%,n=6)均符合要求,乳苣全草提取物溶液在室温下放置24 h稳定性良好(RSD=1.75%);采用HPLC法测得乳苣茎、叶、全草提取物中异槲皮苷含量分别为0.67 mg·g^(-1)、1.70 mg·g^(-1)、1.21 mg·g^(-1),根中未检测到异槲皮苷;乳苣不同部位提取物均具有一定的抗氧化活性,其对DPPH自由基的清除率和还原能力均随提取物浓度的增加逐渐升高,特别是乳苣叶提取物,当其浓度为0.4 mg·mL^(-1)时,其还原能力接近VC。

异槲皮苷调控线粒体动力学逆转造影剂所致大鼠急性肾损伤

探究异槲皮苷对造影剂所致大鼠急性肾损伤的治疗作用及机制,通过建立碘普罗胺370注射液诱发的大鼠造影剂所致肾病模型,采用每天25、50 mg/kg异槲皮苷和阳性药N-乙酰半胱氨酸(NAC)进行预处理治疗,检测大鼠肾脏血肌酐水平、组织形态学、丙二醛(MDA)和H_(2)O_(2)水平、还原性谷胱甘肽(GSH)和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)水平;采用原位末端缺刻标记法(TUNEL)、半胱天冬酶3(caspase-3)活性检测肾脏组织的凋亡情况;免疫组织化学检测多腺苷二磷酸多聚酶(Cleaved PARP)、线粒体融合蛋白2(MFN2)和线粒体动力相关蛋白1(DRP1)的表达和免疫印迹法检测肾脏组织MFN2和DRP1的表达。结果表明:异槲皮苷可以有效减轻造影剂碘普罗胺所致的急性肾损伤,缓解肾脏组织的氧化应激状态,改善线粒体动力学失衡。本研究结果将为异槲皮苷进一步被开发成为造影剂所致肾病急性肾损伤的治疗药物提供理论基础。

HPLC法同时测定甘薯叶中5种酚酸和异槲皮苷

咖啡酸、绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸和异槲皮苷是甘薯叶中的主要活性成分,本研究建立高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)同时测定这6种成分的方法。通过对检测波长、色谱柱、洗脱溶剂、洗脱流速等参数优化得到的最佳分析条件为:ZORBAX SB-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)为分析柱,以0.1%甲酸水溶液(A)和乙腈(B)为流动相,采用梯度洗脱:0~12 min,10%~25%B;12~18 min,25%B,流速0.8 mL/min,检测波长326 nm,柱温30℃。咖啡酸、绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸和异槲皮苷的线性范围分别为0.25~25.0、0.5~50.0、5.0~100.0、10.0~200.0、5.0~100.0和0.5~50.0μg/mL。该方法分析时间短(18 min),线性度(R^(2)≥0.998)、稳定性(RSD≤1.97%)、精密度(RSD≤1.56%)和加标回收率(95.14%~103.22%)好。对江西10个不同产地甘薯叶目标成分分析发现,宜春丰城的甘薯叶具有最高的总酚含量。

异槲皮苷对β-淀粉样蛋白诱导毒性的阿尔茨海默病转基因秀丽隐杆线虫模型的神经保护作用

目的:探究探讨异槲皮苷对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导毒性的转基因CL4176秀丽隐杆线虫(以下简称线虫)的神经保护作用及其作用机制。方法:以转基因线虫CL4176为模型,在显微镜下考察异槲皮苷对线虫瘫痪情况、寿命、运动能力、吞咽频率、活性氧(ROS)水平、抗氧化酶活力等指标的影响。采用实时荧光定量技术测定异槲皮苷作用后线虫Aβ沉积及胰岛素信号途径相关基因表达情况。结果:异槲皮苷能够显著降低痴呆模型线虫瘫痪率(P<0.05),可延长模型线虫寿命,提高其运动能力,能够显著提高模型线虫体内超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活力(P<0.05),显著降低其体内ROS和丙二醛水平(P<0.05),同时显著下调Aβ mRNA表达量,上调DAF-16、SKN-1、SOD-3、GST-4、CTL-3、HSF-1 mRNA表达量。结论:异槲皮苷能够显著延缓线虫衰老、降低瘫痪率和抑制Aβ沉积,可能与调控胰岛素/胰岛素样生长因子1信号通路上的基因表达有关。

异槲皮苷抗腹泻作用的研究

为了研究异槲皮苷的抗腹泻作用,本试验采用酶水解芦丁法制备异槲皮苷,通过蓖麻油致小鼠腹泻模型、小肠炭墨推进试验和大鼠肠腔积液试验,分析异槲皮苷的抗腹泻作用,并进一步检测其对肠道离子通道蛋白mRNA表达的影响,初步探讨其抗腹泻机制。结果显示,高剂量的异槲皮苷[50 mg/(kg·bw)]可明显延迟蓖麻油诱导的小鼠初次腹泻时间(P<0.01),并减少稀便次数(P<0.05),抑制炭粉在小肠内的推进(P<0.01),并显著减少大鼠的小肠积液(P<0.01);实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结果显示,与腹泻模型组小鼠相比,异槲皮苷高剂量组小鼠钠/氢交换因子1(NHE1)、钠/氢交换因子2(NHE2)、钠/氢交换因子3(NHE3)、水通道蛋白4(AQP4)和钠/葡萄糖协同转运蛋白1(SGLT1)的mRNA表达显著上调(P<0.05),囊性纤维化跨膜传导调节蛋白(CFTR)的mRNA表达显著下调(P<0.05)。结果表明,异槲皮苷具有明显的抗腹泻作用,为其临床应用提供理论依据。

莲须的UPLC指纹图谱及异槲皮苷含量分析

目的建立莲须的超高效液相色谱法(UPLC)指纹图谱,并建立其异槲皮苷的含量测定方法。方法色谱柱为Waters Acquity UPLC HSS T3,1.8μm,2.1×100 mm;以乙腈(A)-0.2%乙酸(B)为流动相进行梯度洗脱;流速0.2 mL·min^(-1);柱温:30℃;进样量3μL;检测波长300 nm。建立莲须药材的指纹图谱和异槲皮苷含量分析方法,并对19批不同产地莲须药材进行测定。结果指纹图谱及含量测定方法的各项方法学验证均良好,19批莲须与对照指纹图谱的相似度在0.883~0.995,标定了7个共有峰。主要成分异槲皮苷线性关系良好(R^(2)>0.999),加样回收率在91.58%~99.70%,RSD为3.54%,19批莲须异槲皮苷含量在0.011%~0.033%。结论所建立的莲须UPLC指纹图谱及异槲皮苷含量分析方法专属性强、分离度好、灵敏度高,可为莲须药材的质量控制与评价提供参考。

异槲皮苷-β-环糊精包合物的制备及溶解度研究

采用共沉淀法制备了异槲皮苷-β-环糊精固体包合物,用紫外、红外光谱进行包合物表征,同时利用紫外分光光度法建立了包合物中异槲皮苷的含量测定方法,并考察了方法的精密度和回收率。结果表明,异槲皮苷的日内和日间精密度均小于2%,平均回收率为96.04%~99.88%。在此基础上,对异槲皮苷在β-环糊精溶液中的相溶解度进行研究,发现异槲皮苷与β-环糊精形成了1∶1型包合物;相溶解度结果显示异槲皮苷被制备成固体包合物后,在本实验浓度范围内溶解度最大可提高为包合前的7.31倍。

阳春砂仁中总黄酮、异槲皮苷和槲皮苷含量测定研究

建立阳春砂仁中异槲皮苷和槲皮苷含量的高效液相(HPLC)测定方法。异槲皮苷进样量在0.0183～0.0915μg范围内有良好的线性关系,平均回收率为102.69%,相对标准偏差为0.70%(n=6);槲皮苷进样量在0.0294～0.1470μg范围内线性关系良好,平均回收率为103.15%,相对标准偏差为0.68%(n=6)。建立了紫外分光光度法测定砂仁中总黄酮含量的方法,采用槲皮苷为对照品,浓度在0～9.8μg/mL范围内线性关系良好,平均回收率为100.89%,相对标准偏差为1.19%(n=6)。本方法简便快捷,可作为砂仁含量测定质量控制方法。

苦荞异槲皮苷对人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响

从苦荞中提取制备异槲皮苷,研究其对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响。将异槲皮苷作用于人胃癌SGC-7901细胞和人肾上皮细胞系293T,通过噻唑蓝法检测异槲皮苷对其增殖的影响;4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamino-2-phenyl indole,DAPI)荧光染色法观察细胞核的形态学变化;划痕擦伤迁移实验检测异槲皮苷对SGC-7901细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测异槲皮苷对SGC-7901细胞凋亡及细胞周期的影响。结果表明:苦荞异槲皮苷可以抑制SGC-7901细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性,当用100μmol/L异槲皮苷作用细胞48 h后,对SGC-7901细胞的增殖抑制率达到35.92%,而对人肾上皮细胞系293T的增殖抑制率仅为3.15%;DAPI荧光染色法观察异槲皮苷处理细胞后,染色体凝聚,有凋亡小体产生;划痕擦伤实验显示,异槲皮苷能抑制SGC-7901细胞的迁移;流式细胞术检测结果表明,异槲皮苷可使G1和S期细胞减少,G2/M期细胞增多,且细胞凋亡率明显增加。综上所述,苦荞麦异槲皮苷能够诱导SGC-7901细胞发生凋亡,阻断细胞周期并抑制细胞增殖和迁移。

UPLC测定桑叶中抗氧化活性成分异槲皮苷、芦丁和紫云英苷的含量

目的：建立UPLC法测定桑叶中抗氧化活性成分异槲皮苷、芦丁和紫云英苷的含量。方法：采用ABTS＋快速法评价异槲皮苷、芦丁和紫云英苷的抗氧化能力;采用UPLC法,选择ACQUITY UPLC BEH C18（50 mm×2.1mm,1.7μm）色谱柱,流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液梯度洗脱,流速为0.6 m L/min,柱温40℃,检测波长358 nm。结果：异槲皮苷、芦丁和紫云英苷均具有ABTS＋自由基清除能力,其中异槲皮苷与芦丁对ABTS＋自由基清除率可达80%;异槲皮苷、芦丁和紫云英苷在相应的浓度范围内与其色谱峰面积呈良好线性关系,平均加样回收率在98.57%~98.84%之间,RSD均小于2.0%。结论：该方法可更好的对桑叶进行质量控制。

HPLC法同时测定桑叶中芦丁、异槲皮苷、紫云英苷的含量

目的建立晾晒、烘干及鲜桑叶中芦丁、异槲皮苷、紫云英苷的含量测定方法。方法采用HPLC法,Shim pack ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温35℃,流动相为0.4%磷酸乙腈溶液(A)和0.4%磷酸水溶液(B),梯度洗脱,检测波长为360 nm,流速设为1.0 ml.min-1。结果三种黄酮类成分在35 min内达到良好分离,芦丁在0.076～1.920 mg.L-1,异槲皮苷在0.086～2.148 mg.L-1,紫云英苷在0.042～2.108 mg.L-1范围内线性关系良好(r>0.999 3,n=6),三种成分平均加样回收率分别为99.7%(RSD=2.5%)9、8.8%(RSD=2.4%)和99.5%(RSD=4.1%)。结论该方法操作简单,结果准确,具有较好的重复性和稳定性,为评价桑叶药材炮制方法提供了一个很好的依据,同时也可用于桑叶药材的质量控制。

RP-HPLC法测定桑叶中的芦丁和异槲皮苷含量

目的:建立HPLC法测定桑叶中芦丁、异槲皮苷含量的定量分析方法。方法:HPLC外标法。采用色谱柱:Agilent TC-C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-甲醇-水-磷酸(100:10:340:0.3,V/V);检测波长365nm;流速1.0ml/min;进样量20μl;柱温:室温。结果:在上述色谱条件下,芦丁、异槲皮苷获良好分离,浓度分别在7.5～150μg/ml(R2=0.9995)、7.1～142μg/ml(R2=0.9998)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为98.79%、99.01%,RSD分别为3.37%、2.43%,重复性实验RSD分别为0.0133%和0.0214%。结论:该方法分离度好,简便快速,为桑叶生药及其制剂的质量控制提供可借鉴的分析方法。

响应面分析法优化黄蜀葵花中金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素提取工艺的研究

采用响应面优化黄蜀葵花中金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素的提取工艺。在超声功率、提取时间、乙醇浓度、提取温度、料液比的单因素实验基础上,固定提取温度50℃、料液比0.1∶15 g/m L,利用响应面分析法优化,建立二次多项式回归方程模型,确定最佳提取工艺为:超声功率340 W、提取时间60 min、乙醇浓度为60%。经工艺验证,金丝桃苷得率为4.97 mg/g,异槲皮苷得率为4.84 mg/g、槲皮素得率为2.02 mg/g,与理论值的相对误差分别为2.5%、4.5%、6.9%。采用响应面设计分析得到最佳提取工艺条件具有较高的实用价值,可为工业化提取提供理论参考。

异槲皮苷对叔丁基过氧化氢诱导的L-02细胞氧化损伤的保护作用

研究异槲皮苷对叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的L-02细胞氧化损伤的保护作用。体外培养L-02细胞,采用t-BHP(100μmol/L)作用24 h,建立L-02细胞氧化损伤模型,分为正常对照组、模型组(100μmol/L tBHP)、阳性对照(10μmol/L维生素E)组和不同浓度异槲皮苷(1、10、100μmol/L)预处理组。采用MTT法检测细胞活力,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测丙二醛(MDA)含量,活性氧(ROS)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物岐化酶(SOD)的活性。与模型组比较,异槲皮苷显著提高细胞存活率(P<0.05),降低ROS和MDA含量及LDH的外漏(P<0.05),明显增加GSH-Px和SOD活性(P<0.05)。异槲皮苷能够上调Sirt6表达,降低NF-κBp65含量。异槲皮苷能够保护t-BHP诱导的L-02细胞氧化损伤,其作用可能与提高清除ROS能力,调控Sirt6和NF-κBp65水平相关。

RP-HPLC同时测定田基黄药材中异槲皮苷、槲皮苷和槲皮素的含量

目的:建立田基黄药材中异槲皮苷、槲皮苷和槲皮素的 RP-HPLC 同时含量测定方法。方法:使用 Hypersil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)柱,以乙腈(A)-0.02 mmol·L^(-1)磷酸二氢钾缓冲液(磷酸调 pH 3.0)(B)为流动相进行梯度洗脱(0～20 min,A 相为14%;20～35 min,A 相从14%变至30%;35～45 min,A 相从30%变至38%),流速:1.0 mL·min^(-1),检测波长:360 nm,柱温:35℃。结果:异槲皮苷、槲皮苷和槲皮素浓度分别在9.90～330μg·mL^(-1)(r=0.9996,n=6)、19.2～640 μg·mL^(-1)(r=0.9998,n=6)和2.16～72.0 μg·mL^(-1)(r=0.9997,n=6)范围内与峰面积积分值线性关系良好;平均加样回收率(n=9)分别为97.2%,99.1%,98.9%。结论:不同购买地田基黄药材中异槲皮苷、槲皮苷和槲皮素含量存在较大差异;该方法简便可靠,重复性好,为田基黄药材质量控制提供了方法。

HPLC法测定不同产地黄蜀葵花中金丝桃苷异槲皮苷及槲皮素-3'-葡萄糖苷含量

目的测定不同产地黄蜀葵花药材中金丝桃苷,异槲皮苷,槲皮素-3'-葡萄糖苷含量。方法高效液相色谱法。色谱柱:Diamonsil C18柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-甲醇(10∶1)-0.4%磷酸,梯度洗脱;检测波长:360nm;柱温:室温;流速:1.0ml/min。结果江苏江堰黄蜀葵花中金丝桃苷含量1.12%,RSD为1.54%;异槲皮苷含量0.68%,RSD为1.58%;槲皮素-3'-葡萄糖苷含量0.59%,RSD为1.47%;江苏兴化黄蜀葵花中金丝桃苷含量0.98%,RSD为1.49%;异槲皮苷含量0.60%,RSD为1.62%;槲皮素-3'-葡萄糖苷含量0.52%,RSD为1.55%;河北邢台黄蜀葵花中金丝桃苷含量1.03%,RSD为1.72%;异槲皮苷含量0.62%,RSD为1.84%;槲皮素-3'-葡萄糖苷含量0.54%,RSD为1.62%。结论江苏江堰黄蜀葵花中金丝桃苷,异槲皮苷,槲皮素-3'-葡萄糖苷含量均最高,江苏兴化黄蜀葵花中金丝桃苷,异槲皮苷,槲皮素-3'-葡萄糖苷含量均最低,该方法简便,准确,重现性好,为各地黄蜀葵花药材的进一步开发利用提供质量控制依据。

异鼠李素-3-β-D-葡萄糖苷、异槲皮苷与牛血清白蛋白相互作用的研究

目的研究异鼠李素-3-β-D-葡萄糖苷(Ⅰ)、异槲皮苷(Ⅱ)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用机制。方法主要应用荧光猝灭法和紫外吸收光谱法。结果确定两化合物与牛血清白蛋白的猝灭机制主要为静态猝灭和非辐射能量转移。结论异鼠李素-3-β-D-葡萄糖苷、异槲皮苷与牛血清白蛋白有较强的相互作用,作用力主要为静电引力与疏水作用力;3′-OH比3′-OCH3更能增进黄酮与牛血清白蛋白的作用。

异槲皮苷对脂多糖诱导RAW264.7细胞产生炎症因子的调控

目的探讨异槲皮苷对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞产生的炎症因子的调控作用。方法噻唑蓝(MTT)法检测异槲皮苷对细胞生长的抑制率;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测培养基中肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,一氧化氮(NO)试剂盒检测NO含量;Western blotting检测i NOS和环氧化酶-2(COX-2)蛋白的表达。结果异槲皮苷对细胞的半数抑制浓度为65.73μmol·L^(-1);LPS对细胞无抑制作用;与LPS组比较,异槲皮苷(20,10μmol·L^(-1))可使TNF-α分泌降低至74.80%,60.57%,且对TNF-α分泌的抑制作用,与剂量减少呈正相关;一氧化氮试剂盒检测结果显示异槲皮苷(20,10μmol·L^(-1))可以抑制NO的分泌,NO的分泌量降低至79.34%,68.81%(P<0.05);Western blotting实验结果表明:异槲皮苷(20,15,10μmol·L^(-1))可降低i NOS和COX-2蛋白的表达(P<0.05)。结论异槲皮苷具有抗炎作用,其抗炎分子机制可能与抑制TNF-α、NO、iNOS和COX-2的产生有关,当异槲皮苷浓度为10μmol·L^(-1)时抗炎作用最强。

基于近红外光谱法建立的模型快速预测苗药水冬瓜叶中金丝桃苷和异槲皮苷

基于近红外光谱法建立的定量分析模型快速预测苗药水冬瓜叶中金丝桃苷和异槲皮苷。样品经甲醇水浴回流提取后,采用近红外光谱仪以透射法采集其1100~2300 nm波长范围内的光谱信息,同时用高效液相色谱法测定金丝桃苷和异槲皮苷的含量,结果作为参考值。分别以标准正态变量交换法-平滑法(SNV-Smoothing)和一阶微分法(S-G first derivative)预处理金丝桃苷和异槲皮苷的原始光谱,以偏最小二乘法(PLS)分别在1100~2300 nm和1100~1400 nm波段内构建金丝桃苷和异槲皮苷的定量分析模型,并以相关系数、校正均方根误差(RMSEC)、预测均方根误差(RMSEP)、预测相对偏差(RSEP)来考察模型性能。结果显示:金丝桃苷定量分析模型的RMSEC、RMSEP与RSEP值分别为0.2414,0.2705,0.1775,相关系数为0.9136;异槲皮苷定量分析模型的RMSEC、RMSEP与RSEP值分别为0.0791,0.0208,0.0339,相关系数为0.9077;用所建金丝桃苷和异槲皮苷的定量分析模型预测验证集样品中的金丝桃苷和异槲皮苷含量,预测值与参考值的相对误差分别为-2.8%~2.9%、-5.1%~5.9%;对实际样品重复分析6次,金丝桃苷和异槲皮苷的预测值的相对标准偏差分别为2.7%,3.3%;将样品溶液放置0,1,2,3,6,12 h后进样,预测值的RSD分别为2.9%,3.4%.

异槲皮苷抗抑郁作用实验研究

目的研究异槲皮苷对抑郁症模型小鼠的的抗抑郁活性。方法 ICR小鼠,随机分为空白模型组、阳性对照(盐酸氟西汀)组、异槲皮苷不同剂量组和10%异槲皮苷混合物不同剂量组,观察异槲皮苷对小鼠强迫游泳实验和小鼠悬尾实验的影响。结果与模型组相比,0.3 mg/kg槲皮苷和3 mg/kg10%异槲皮苷混合物能显著缩短小鼠在绝望模型中的不动时间(P<0.01)。结论低剂量的异槲皮苷具有一定的抗抑郁活性,其机制可能与异槲皮苷的抗氧化作用及抑制皮质激素分泌有关。