异荭草苷通过MAPK/FoxO信号通路减轻LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症反应

为了研究异荭草苷(Isoorientin,ISO)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症反应的影响及其机制,将对数生长期的RAW264.7细胞随机分为对照组、模型组(LPS 1μg·mL^(-1))和异荭草苷(ISO 2.5~40μg·mL^(-1)+LPS)给药组。各组细胞培养24 h后,MTT法检测ISO对RAW 264.7细胞毒性,Griess法检测细胞培养液中一氧化氮(NO)的含量,ELISA法检测细胞培养液中TNF-α的含量,q RT-PCR方法检测环氧合酶2(COX-2)m RNA的表达水平,蛋白质印迹分析法测定细胞中COX-2、JNK、p-JNK、p38、p-p38、FoxO1和FoxO3蛋白的表达。结果表明,与LPS模型组比较,ISO显著抑制LPS诱导的TNF-α(P<0.001)和NO(P<0.01)的产生,且未见其细胞毒性。此外,ISO以剂量依赖的方式显著抑制RAW 264.7细胞COX-2基因(P<0.001)和蛋白(P<0.05)的表达。蛋白质印迹分析显示,ISO显著抑制MAPK信号通路中p-JNK和p-p38的磷酸化,并减少Fox O1/3的核转位。综上所述,ISO可抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症反应,其作用机制可能与其在MAPK/FoxO信号通路中发挥调节作用有关。

基于Gal-3/NLRP3/IL-1β信号通路探讨异荭草苷治疗溃疡性结肠炎的作用机制

目的探讨异荭草苷对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠的治疗效果及其作用机制。方法将48只C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、美沙拉嗪组(600 mg·kg^(-1))、异荭草苷低剂量组(25 mg·kg^(-1))、异荭草苷高剂量组(50 mg·kg^(-1))及异荭草苷对照组(50 mg·kg^(-1)),每组8只。小鼠自由饮用2%DSS溶液复制UC模型,实验进行3周后,各给药组给予相应药物灌胃治疗4周。给药结束后,称取体质量,摘眼球取血,剖取结肠组织。采用苏木素-伊红(HE)、阿利新蓝-过碘酸-雪夫染色(AB-PAS)法观察小鼠结肠组织病理形态变化;透射电子显微镜观察小鼠结肠组织超微结构;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-10、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、脂多糖(LPS)和髓过氧化物酶(MPO)水平;免疫组化法检测小鼠结肠组织中半乳糖凝集素(Gal-3)蛋白表达;免疫荧光法检测黏蛋白(MUC2)表达及NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)共定位情况;免疫印迹(Western Blot)法检测小鼠结肠组织中Gal-3、NLRP3、ASC、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、IL-1β、IL-18、闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组小鼠体质量明显下降,结肠长度明显缩短,肠质量指数明显增加(P<0.01);小鼠肠黏膜结构紊乱,微绒毛稀疏,隐窝结构见大量炎性细胞浸润,线粒体肿胀明显,杯状细胞明显减少;血清IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、LPS和MPO水平明显升高,IL-10水平明显降低(P<0.01);结肠组织MUC2蛋白阳性表达减少及NLRP3和ASC共定位增强;结肠组织中Gal-3、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达明显增加,Occludin和ZO-1蛋白表达明显降低(P<0.01)。与模型组比较,异荭草苷低、高剂量组小鼠体质量明显上升,结肠长度明显增长,肠质量指数明显降低(P<0.05,P<0.01);肠黏膜、微绒毛及线粒体结构明显恢复,炎性浸润减轻,杯状细胞明显增加;血清IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、LPS和MPO水平明显降低,IL-10水平明显升高(P<0.05,P<0.01);结肠组织MUC2蛋白阳性表达增加,NLRP3和ASC共定位减弱;结肠组织中Gal-3、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达明显降低,Occludin和ZO-1蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01)。结论异荭草苷对DSS诱导的UC小鼠具有良好的治疗效果,其机制可能与抑制Gal-3/NLRP3/IL-1β信号通路,保护肠黏膜屏障有关。

云南不同来源大发表中异荭草苷含量比较研究

目的 考察不同产地、部位、生长年限及采收期大发表药材中异荭草苷的含量变化,为大发表药材后续研究应用提供参考。方法 采用高效液相色谱法,测定云南大理、楚雄、玉溪3个大发表药材主要产地,以及玉溪产大发表药材的不同部位、生长年限及采收期的异荭草苷含量。结果 不同产地的大发表药材中异荭草苷含量存在差异,其中,玉溪产大发表药材的异荭草苷含量为190μg/g,较优于大理和楚雄;大发表药材的不同部位中异荭草苷含量存在显著差异,异荭草苷含量最高的是花,其次是叶、枝、茎、根等;从1年生到3年生,大发表药材中异荭草苷含量变化趋势不明显;从7月初到11月初,大发表药材中异荭草苷含量逐渐升高。结论 初步揭示了不同产地、部位、生长年限及采收期大发表药材中异荭草苷的含量变化情况,为大发表药材质量控制研究和推广应用提供参考。

响应面法优化黔产鸭跖草多糖和异荭草苷提取工艺研究

目的:优化黔产鸭跖草中多糖和异荭草苷提取工艺。方法:采用中心组合设计-响应面法,以鸭跖草多糖和异荭草苷提取率为响应值,提取时间、提取温度、料液比为自变量,结合单因素考察结果,设计3因素3水平试验。结果:得到最佳提取工艺参数为提取时间2.3 h,提取温度95℃,料液比1∶20。结论:综合考虑2种活性成分,响应面优化黔产鸭跖草有效成分工艺切实可行,具有较强的实际意义。

异荭草苷对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的影响及机制

目的:探究异荭草苷对慢性阻塞性肺疾病(COPD)的作用及机制。方法:36只大鼠随机分为对照组、模型组、异荭草苷低、中、高剂量组和地塞米松组,除对照组外,其余组采用香烟烟雾暴露+脂多糖(LPS)法建立COPD大鼠模型,药物干预14 d后,称重计算肺指数,HE染色检测肺组织病理损伤,Smith评分法进行肺损伤评分,肺功能检测仪检测肺活量(FVC)、一秒用力呼气容积(FEV_(1))、一秒率(FEV_(1)/FVC),血气分析仪检测动脉氧分压(PaO_(2))、血氧饱和度(SaO_(2))、动脉二氧化碳分压(PaCO_(2)),ELISA检测肺组织炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-8水平,试剂盒检测肺组织氧化应激指标MDA和SOD含量,Western blot检测Toll-样受体4(TLR4)、髓样分化因子(MyD88)、核因子-κB p65(NF-κB p65)及p-NF-κB p65蛋白水平,并计算p-NF-κB p65/NF-κB p65。结果:与对照组比较,模型组肺组织出现炎症浸润,肺泡严重塌陷,肺泡壁增厚,肺间质水肿;与模型组比较,异荭草苷中、高剂量组和地塞米松组大鼠肺组织病理损伤明显改善,肺指数和肺损伤评分显著降低(P<0.05),肺功能指标FVC、FEV_(1)、FEV_(1)/FVC显著升高(P<0.05),血气分析指标PaO_(2)水平和SaO_(2)百分比显著升高(P<0.05),PaCO_(2)水平显著降低(P<0.05),肺组织IL-6、IL-1β、IL-8、TNF-α、MDA水平降低(P<0.05),SOD水平升高(P<0.05),TLR4、MyD88蛋白表达下调(P<0.05),p-NF-κB p65/NF-κB p65降低(P<0.05)。结论:异荭草苷可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB p65减少炎症因子分泌,降低氧化应激水平,改善COPD大鼠肺功能,缓解肺损伤。

三叶青藤叶中总黄酮、荭草苷和异荭草苷提取分离方法及HPLC检测条件的研究

目的:建立三叶青藤叶中总黄酮、荭草苷及异荭草苷的提取分离和含量测定方法。方法:分别选取不同浓度的乙醇、丙二醇和丁二醇作为溶剂对三叶青藤叶中的有效成分进行提取,分别筛选出对总黄酮、荭草苷及异荭草苷提取率最高的溶剂,并采用高效液相色谱法(HPLC)进行探究。结果:选取荭草苷提取分离溶剂为30%丙二醇,异荭草苷的提取分离溶剂为40%乙醇。荭草苷的线性关系方程为Y=1.0524X-0.5086,在0.4~4μg/mL范围内的峰面积与进样浓度线性关系良好(R2=0.9997)。采用30%丙二醇提取三叶青藤叶中荭草苷的平均含量为3.58μg/g。异荭草苷的线性关系方程为Y=1.6650X-0.8264,在0.4~4μg/mL范围内的峰面积与进样浓度线性关系良好(R2=0.9996)。采用40%乙醇提取三叶青藤叶中异荭草苷的平均含量为1.47μg/g。结论:建立了三叶青藤叶总黄酮、荭草苷及异荭草苷的提取分离和含量测定方法。建立的高效液相色谱法方法简便、准确,重复性好,可应用于三叶青中这几种成分的含量测定。

中药材草龙中荭草苷、异荭草苷含量的测定

建立一种测定中药材草龙[Ludwigia hyssopifolia(G.Don)Exell]中荭草苷、异荭草苷含量的HPLC方法。采用COSMOSIl5 C18-PAQ色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.2%甲酸水(15∶85)为流动相,等度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温40℃,检测波长340 nm。结果表明,荭草苷在0.0016~0.0164μg/μL、异荭草苷在0.0019~0.0189μg/μL水平上呈良好的线性关系(r>0.9990),荭草苷和异荭草苷的平均加样回收率分别为109.37%和96.40%,RSD均小于3.0%;精密度、稳定性和重复性试验的RSD均小于3.0%。该方法准确、稳定、重复性好,可用于中药材草龙的质量控制。

白花败酱草中异牡荆苷和异荭草苷的高速逆流色谱分离和制备

应用高速逆流色谱分离制备白花败酱草中的异荭草苷和异牡荆苷,以乙酸乙酯∶乙醇∶水(4∶1∶5)为两相溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,流速2.0 mL/m in,主机800 r/m in,检测波长254 nm。以此分离条件经一步洗脱,从300 mg白花败酱草粗提物中制备得到异荭草苷24.1 mg和异牡荆苷49.8 mg,产物纯度经HPLC检测高达98.0%,结构经UV、IR、MS1、H NMR和13C NMR鉴定,二者均为首次从败酱属植物中分离得到。

异荭草苷体内外抗呼吸道合胞病毒活性研究

【目的】研究清热消炎中草药淡竹叶中异荭草苷的体内外抗病毒活性,并初步探讨其作用机制。【方法】采用MTT法测定异荭草苷的细胞毒性,并以异荭草苷的最大无毒浓度为起始浓度,采用空斑减数法测定其体外抗RSV活性,计算其抗病毒的选择性指数(SI值);继而采用空斑减数法,研究异荭草苷对RSV复制周期不同阶段的影响,采用实时定量PCR法,检测异荭草苷对病毒蛋白m RNA合成的影响;选取3周龄BALB/c雄性小鼠研究异荭草苷体内抗RSV活性,小鼠灌胃给药4 d,经鼻腔滴入RSV病毒液造模,继续灌胃给药3 d,取小鼠肺组织称重、切片、HE染色,显微镜下观察肺组织病理性改变,并用空斑减数法检测小鼠肺组织内病毒含量。【结果】异荭草苷体外抑制RSV A2株和LONG株的IC50分别为(3.6±0.8)μg/m L和(2.4±0.2)μg/m L,比阳性药利巴韦林的活性略低,因异荭草苷的细胞毒性比利巴韦林小,其抗RSV的选择性指数(SI)为利巴韦林8.3倍;初步的作用机制研究表明,异荭草苷主要抑制RSV在宿主细胞内的复制过程,也可一定程度地抑制病毒进入宿主细胞,实时定量PCR结果显示,异荭草苷可以不同程度地降低RSV的L、F和P蛋白对应的m RNA的表达;异荭草苷可降低小鼠肺组织的病毒滴度,且可缓解病毒引起的炎症。【结论】清热消炎中药淡竹叶中的异荭草苷,具有较好的体内外抗病毒活性,且能一定程度缓解病毒性炎症;该化合物主要在病毒进入宿主细胞后的复制阶段(复制晚期)起作用,能抑制与病毒复制晚期相关的L、F和P蛋白的m RNA表达。

满天星异荭草苷对CCl_4致肝纤维化大鼠NF-κB信号通路的影响

目的:研究满天星异荭草苷(IOA)对四氯化碳(CCl_4)诱导大鼠肝纤维化的保护作用机制。方法:用CCl_4复制大鼠肝纤维化模型,成模大鼠分为模型组、吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(150 mg/kg)阳性对照组及IOA高(2g/kg)、中(1 g/kg)、低(0.5 g/kg)剂量组,另设正常对照组。给药8 w后,血清生化自动检测仪检测各组大鼠血清ALT、AST、ALB、GLB水平;HE染色观察肝脏组织病理学改变;试剂盒检测各组大鼠肝组织TNF-α、IL-1、IL-10水平;免疫组化染色试剂盒检测大鼠肝组织NF-κBp65、TNF-α表达;PCR检测肝组织Col-ⅠmRNA表达。结果:与模型组比较,IOA能显著降低模型大鼠血清ALT、AST水平,提高ALB/GLB(A/G)比值;明显减轻炎症损伤;显著降低肝组织中TNF-α、IL-1含量,提高IL-10含量。此外,IOA能显著抑制肝组织中NF-κBp65、TNF-α蛋白及Col-I mRNA表达。结论:满天星异荭草苷对肝纤维化有保护作用,其机制可能与抑制NF-κB信号通路继而减轻炎症反应有关。

青海省不同产地秦艽花中獐牙菜苷和异荭草苷含量的HPLC分析

The contents of sweroside and isoorientin in Gentiana straminea Maxim.flower from ten locations of Qinghai Province were determined by HPLC.The results show that the content of isoorientin is higher than that of sweroside in G.straminea flower,and isoorientin and sweroside contents have certain differences among ten samples from ten locations.The content range of isoorientin and sweroside in ten samples is 0.563%-0.937% and 0.346%-0.453%,respectively.And isoorientin content in the sample from Xiangpishan and sweroside content in the sample from Xihaizhen are the highest.It is suggested that sweroside and isoorientin contents in G.straminea flower are affected by ecological environment of locations,and isoorientin content is affected more obviously.

HPLC法测定复方西羚解毒丸中的荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和胡薄荷酮

目的 建立HPLC同时测定复方西羚解毒丸中荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和胡薄荷酮的方法.方法 依利特Hypersil C18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）;以甲醇（A）-o.1％冰醋酸溶液（B）为流动相,梯度洗脱;体积流量1.2 mL/min;检测波长分别为340、340、340、252 nm.结果 复方西羚解毒丸中4种成分荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和胡薄荷酮进样量分别在0.032 8 ～ 0.656 0μg（r=0.999 6）、0.026 2 ～0.524 0μg（r=0.999 7）、0.020 6～0.4120 μg （r=0.999 2）、0.0370～0.7400 μg （r=0.9998）范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.7％、98.0％、96.9％、99.1％,RSD （n=6）分别为1.2％、1.1％、0.8％、0.7％.结论 本方法兼顾复方西羚解毒丸中4种成分在同一色谱图上均有最大吸收,可应用于该制剂的质量控制.

脂肪酶催化竹叶抗氧化物中异荭草苷和异牡荆苷酰化

研究南极假丝酵母脂肪酶在叔戊醇中催化竹叶抗氧化物中异荭草苷和异牡荆苷的酰化。反应条件为脂肪酶用量50g/L、分子筛4用量100g/L、竹叶抗氧化物中黄酮苷与月桂酸的物质的量比1:4、反应温度60℃、搅拌转速150r/min、反应时间48h。经过高效液相色谱分析,制备液相分离,得到2种被酰化的黄酮苷。对产物的结构采用电喷雾电离质谱分析,1H-NMR及13C-NMR表征,确定产物分别为异荭草苷-6″-月桂酸酯和异牡荆苷-6″-月桂酸酯。

淡竹叶颗粒中荭草苷和异荭草苷的含量测定

目的：建立淡竹叶颗粒中荭草苷和异荭草苷的含量测定方法。方法：采用FORTIS-C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,以乙腈-0.2%磷酸溶液为流动相,采用梯度洗脱,流速1.0 m L/min,柱温30℃,检测波长330 nm。结果：荭草苷和异荭草苷分别在3.08~61.50μg/m L和2.18~43.60μg/m L浓度范围内与峰面积有良好线性关系（r=0.999 9）,平均加样回收率分别为99.1%、98.6%,RSD分别为0.94%、0.90%。结论：本方法专属性强,灵敏度高,重复性好,可作为控制淡竹叶颗粒质量的方法。

HPLC法测定导赤冲剂中异牡荆苷和异荭草苷的含量

目的建立导赤冲剂中异牡荆苷和异荭草苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为迪马C18柱,流动相为四氢呋喃-乙腈-0.2%磷酸水溶液(66∶22∶12),流速为1.0mL.min-1,柱温为35℃,检测波长为330nm。结果异荭草苷在0.82～4.08μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.9990),平均加样回收率为98.4%,RSD为2.7%;异牡荆苷在0.79～3.96μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.9999),平均加样回收率为98.8%,RSD为2.6%。结论建立的含量测定方法简便、准确、灵敏,可用于导赤冲剂中异牡荆苷和异荭草苷的含量测定。

HPLC法同时测定三角草中黄酮类成分异荭草苷和异牡荆素的含量

目的建立同时测定三角草中异荭草苷和异牡荆素成分的高效液相色谱方法,为三角草质量评价提供参考。方法采用岛津高效液相色谱仪Shimadzu SPD-20AT,色谱柱:Agilent Ecilipse XDB-C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5.0μm);柱温为35℃,检测波长:339 nm,流动相为0.1%甲酸(A)-乙腈(B),梯度洗脱:7%~15%B(0~8 min),15%~20%B(8~12 min),20%~26%B(12~20 min),26%~35%(20~28 min),35%~50%B(28-35 min),50%~7%B(35~50 min),流速:1.0 mL·min^(-1)。结果异荭草苷和异牡荆素分别在0.049~0.738μg和0.044~0.660μg线性关系良好,加样回收了分别为100.70%和100.38%,两者的RSD分别为1.74%和1.83%。结论本研究建立的HPLC同时测定三角草中异荭草苷和异牡荆素成分含量方法,操作简单、结果准确、重复性好,可用于三角草的质量控制。

HPLC法测定小秦艽花中异荭草苷的含量

1仪器与试药岛津LC-20Atvp高效液相色谱仪;SPD-20Avp紫外检测器;Sartorius CP225D万分之一电子天平;KQ-200KDE型高功率数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;SZ-93自动双重纯水蒸馏器（上海亚荣生化仪器厂）。异荭草苷由实验室分离并鉴定,其MP,1HNMR,13CNMR与文献对照一致,另外化合物纯度用HPLC测定,用面积归一化法计算,含量大于96%;甲醇色谱纯（天津光复精细化工研究所）;双重水（实验室自制）。

基于分子印迹技术分离淡竹叶中异荭草苷的研究

目的利用分子印迹技术,建立一种制备异荭草苷分子印迹聚合物的方法,并将其用于中药淡竹叶中异荭草苷的分离研究。方法本研究以异荭草苷为模板分子,2-乙烯基吡啶为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,通过沉淀聚合法制备印迹聚合物,对聚合物表面形态进行表征,研究聚合物的吸附与分离性能。结果制备所得印迹聚合物对异荭草苷具有吸附能力和一定的分离能力,最大吸附量可达2.5μmol·g-1。结论分子印迹聚合物可用于淡竹叶中异荭草苷的分离。

满天星异荭草苷对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的调控作用机制

目的研究满天星异荭草苷对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法满天星异荭草苷5,10,20,40,80和160μmol·L^(-1)作用于HepG2细胞24,48和72h后,用MTT法检测细胞存活率。满天星异荭草苷5,10和20μmol·L^(-1)作用细胞48 h,检测细胞内乳酸脱氢酶(LDH)的释放量;作用24 h,荧光探针H2DCF-DA测定细胞内活性氧(ROS)含量,流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡和线粒体膜电位,比色法检测胱天蛋白酶3,8和9的活性,RT-PCR检测Bcl-2和Bax m RNA的表达;Western蛋白印迹法检测Bcl-2,Bax和细胞色素c蛋白的表达。结果满天星异荭草苷浓度依赖性地(5~160μmol?L^(-1))抑制HepG2细胞存活,作用24,48和72 h时IC50分别为62.7±9.1,47.2±11.4和(18.2±7.5)μmol?L^(-1)。与细胞对照组相比,满天星异荭草苷5,10和20μmol?L^(-1)能明显提高LDH水平和细胞凋亡率(P<0.05),10和20μmol?L^(-1)可显著促进ROS的产生,降低线粒体膜电位,并增强胱天蛋白酶3和9的活性;RT-PCR和Western蛋白印迹结果表明,满天星异荭草苷能明显降低Bcl-2 m RNA和蛋白的表达,但升高Bax m RNA和蛋白表达(P<0.05),降低细胞色素c蛋白表达(P<0.05)。结论满天星异荭草苷抑制HepG2细胞增殖,促进其凋亡,该作用与线粒体凋亡途径密切相关。

异荭草苷调节小胶质细胞活化抑制内毒素血症小鼠神经炎症的研究

目的研究异荭草苷(isoorientin,ISO)对内毒素血症小鼠神经炎症和小胶质细胞活化的干预作用及其对脑源性神经营养因子(BDNF)的影响。方法将BALB/c小鼠随机分为5组:空白对照组、脂多糖模型组(5 mg·kg^(-1),腹腔注射)、异荭草苷低剂量组(25 mg·kg^(-1),灌胃)、异荭草苷高剂量组(50 mg·kg^(-1),灌胃)、氯化锂组(100 mg·kg^(-1),灌胃)。定量RT-PCR或RT-PCR法检测小鼠肝脏和脾脏中白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平以及脑皮质中诱导性一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg^(-1))、细胞因子TNF-α和IL-1β的表达水平。免疫荧光和蛋白印迹法检测皮质中离子钙结合衔接分子1(Iba1)以及BDNF的表达水平。结果异荭草苷可降低内毒素血症小鼠脾脏和肝脏中IL-1β和TNF-α的表达水平(P<0.05),同时异荭草苷还可减少脑组织中IL-1β、TNF-α、Iba1、iNOS和Arg^(-1)的表达水平(P<0.05),并且升高BDNF的表达(P<0.05)。结论异荭草苷能抑制内毒素血症小鼠外周及脑内炎症,通过抑制小胶质细胞活化、促进BDNF表达发挥神经保护作用。