异虎耳草素通过调控Nrf2-NF-κB通路轴减轻松果体损伤大鼠氧化应激和炎症反应

目的探讨异虎耳草素对PCPA诱导的大鼠松果体损伤的保护作用及其机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,褪黑素10 mg/kg组和异虎耳草素1.5 mg/kg组,每组10只。除正常组外,其余3组均通过腹腔注射PCPA(450 mg/kg)构建松果体损伤大鼠模型,造模成功后灌胃给药,连续7 d。在给药第6天,采用戊巴比妥钠协同睡眠实验评估各组大鼠的入睡潜伏期和睡眠持续时间。给药结束后,检测血清褪黑素、松果体组织超氧化物歧酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT)、一氧化氮(NO)、白介素(IL)-6、IL-2和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量;HE染色观察松果体组织病理学变化;Western blot法检测松果体组织中血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)、核转录因子-κB(NF-κB)p65、IκB激酶β(IKKβ)、磷酸化IκB激酶β(p-IKKβ)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠松果体细胞结构损伤严重、数目减少,大鼠入睡潜伏期延长,睡眠持续时间缩短,褪黑素、SOD、GSH、GPx和CAT含量降低,NO、MDA、IL-2、TNF-α和IL-6含量升高(P<0.05),Nrf2、NQO1、HO-1、NF-κB p65、IKKβ、p-IKKβ和核NF-κB p65蛋白表达上调,Keap1和胞质NF-κB p65表达下调(P<0.05);与模型组比较,异虎耳草素组大鼠松果体组织损伤得到缓解,入睡潜伏期和睡眠持续时间明显改善,褪黑素、SOD、GSH、GPx和CAT含量增加,NO、MDA、IL-2、TNF-α和IL-6含量减少(P<0.05),Nrf2、NQO1、HO-1、NF-κB p65、IKKβ、p-IKKβ和核NF-κB p65蛋白表达下调,Keap1和胞质NF-κB p65表达上调(P<0.05)。结论异虎耳草素能够通过激活Nrf2信号通路和抑制NF-κB信号通路,抑制氧化应激和炎症反应,减轻大鼠松果体组织损伤,促进褪黑素分泌。

异虎耳草素-β-环糊精包合物的制备

以 β 环糊精为包合材料 ,制备异虎耳草素 β 环糊精包合物 ,以提高异虎耳草素的水溶性。结果表明 ,包合是成功的 ;异虎耳草素用 β 环糊精包合后在水中的溶解度比包合前提高 60倍。

异虎耳草素对PCPA致松果体损伤模型大鼠的改善作用及生物钟基因表达的影响

目的:研究异虎耳草素对对氯苯丙氨酸(PCPA)致松果体损伤模型大鼠的改善作用及其对生物钟基因表达的影响。方法:将60只大鼠随机分为空白对照组(2%聚山梨酯80溶液)、模型对照组(2%聚山梨酯80溶液)、阳性对照组(褪黑素,10 mg/kg)和异虎耳草素高、中、低剂量组(3、1.5、0.75 mg/kg),每组10只。除空白对照组外,其余各组大鼠均采用腹腔注射PCPA(450mg/kg)的方法构建松果体损伤模型。造模结束后,各组大鼠灌胃给药,每天1次,连续7 d。在给药第6天,通过戊巴比妥钠协同睡眠实验考察各组大鼠的入睡潜伏期和睡眠持续时间;末次给药后,采用酶联免疫吸附法测定大鼠血清中褪黑素水平,分别在荧光显微镜和电子显微镜下观察大鼠松果体组织的病理变化和细胞超微结构改变,并采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法测定大鼠松果体中生物钟基因Clock、Bmal1、Per1、Per2、Per3、Cry1、Cry2 mRNA表达水平。结果:与空白对照组比较,模型对照组大鼠的入睡潜伏期显著延长(P<0.05);血清中褪黑素水平和松果体中Bmal1、Per1 mRNA表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01),Per3mRNA表达水平显著升高(P<0.05);松果体细胞排列紊乱、核固缩,空泡变性明显增多,数目明显减少,线粒体多见肿胀、嵴断裂、固缩。与模型对照组比较,异虎耳草素高剂量组大鼠的入睡潜伏期显著缩短(P<0.05)、睡眠持续时间显著延长(P<0.05),血清中褪黑素水平和松果体中Clock、Bmal1、Per1、Cry1、Cry2 mRNA表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01);异虎耳草素中剂量组大鼠的入睡潜伏期显著缩短(P<0.05),血清中褪黑素水平和松果体中Clock、Bmal1、Per1、Cry1、Cry2 mRNA表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01),Per3 mRNA表达水平显著降低(P<0.05);异虎耳草素低剂量组大鼠Clock、Bmal1、Per2、Cry2 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),Per3 mRNA表达水平显著降低(P<0.05);异虎耳草素各剂量组大鼠松果体细胞排列紊乱均有一定程度改善、核固缩空泡变性减少,线粒体肿胀、嵴断裂、固缩均有一定程度减少。结论:异虎耳草素对PCPA致大鼠松果体损伤具有一定的改善作用;其可上调松果体正向调节因子Clock、Bmal1和负向调节因子Per1、Per2、Cry1、Cry2的表达,下调负向调节因子Per3的表达。

蛇床子中佛手柑内酯和异虎耳草素含量的高效液相色谱-二级管阵列检测法同时测定

目的建立同时测定蛇床子中佛手柑内酯和异虎耳草素含量的方法。方法采用高效液相色谱（HPLC）法对其含量进行测定，色谱柱为SinoChromC18（250ram×4．6ram，5μm，Elite），流动相为甲醇-0．1％醋酸（55：45），流速1.0ml／min，柱温250C；二极管阵列检测器（DAD）检测器，检测波长310nm。结果佛手柑内酯在0．0315～0．945txg范围内呈良好的线性关系A=2385C～6．666（r=0．9999），异虎耳草素在0．0296—0．888μg范围内呈良好的线性关系A=1711C＋1．203（r=0．9999）；平均回收率分别为99．2％和99．1％，相对标准偏差分别为0．91％和0．67％（n=6）；在常温下8h内稳定性较好。结论HPLC—DAD法简便快速，准确，重现性好，结果可靠，可作为蛇床子的质量控制方法。

异虎耳草素对原代海马神经元细胞抑制性神经递质及其受体基因表达的影响

目的:观察异虎耳草素对原代海马神经元细胞γ-氨基丁酸(GABA),5-羟色胺(5-HT)含量及受体基因表达的影响,探讨其催眠作用机制。方法:体外培养SD乳鼠原代海马神经元细胞,在细胞生长状态最佳时,经神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组化鉴定纯度并给药。分为空白组,地西泮组(25 mg·L^-1),异虎耳草素低、中、高剂量组(5,10,20 mg·L^-1),共5组,给药24 h后流式细胞术检测海马神经元细胞早期凋亡率,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清液GABA,5-HT含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞内γ-氨基丁酸A型受体(GABAA)基因GABRA1,GABRA5,GABRB2,γ-氨基丁酸B型受体(GABAB)基因GABBR1,5-羟色胺1A型受体(5-HT1A)基因5-HT1A(A),5-HT1A(B),5-HT1A(C)表达的变化。结果:第7天海马神经元细胞生长状态良好,鉴定纯度> 90%;与空白组比较,海马神经元细胞早期凋亡率异虎耳草素中、高剂量组显著降低(P <0. 01),GABA含量异虎耳草素高剂量组显著升高(P <0. 01),GABRA1,GABRA5,5-HT1A(A),5-HT1A(C)mRNA表达异虎耳草素中、高剂量组显著升高(P <0. 05,P <0. 01),GABBR1,5-HT1A(B)mRNA表达异虎耳草素各组均显著升高(P <0. 05,P <0. 01)。结论:异虎耳草素催眠作用机制可能与抑制海马神经元细胞凋亡,升高抑制性神经递质GABA含量,上调GABA与5-HT相关受体基因表达有关。

虎耳草的化学成分研究(英文)

为研究虎耳草[Saxifraga stolonifera(L.)Meeb.]的化学成分,用柱色谱方法进行分离,根据其理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。分离得到了10个化合物,分别鉴定为5-甲氧基异虎耳草素(1)、3,4-二羟基烯丙基苯-4-O-β-D-葡糖苷(2)、(7R,8S)-4,9,9′-三羟基-3-甲氧基-7,8-二氢苯骈呋喃-1′-丙基新木脂素-3′-O-β-D-葡糖苷(3)、槲皮素-3-O-β-D-木糖-(1→2)-β-D-半乳糖苷(4)、山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(5)、(3S,5R,6R,7E,9R)-3,5,6,9-四羟基-7-megastigmane(6)、苄基-O-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-葡糖苷(7)、对羟基苯乙酮(8)、连苯三酚(9)和对羟基苯酚(10)。其中化合物1为新化合物,化合物2～10为首次从该植物中分离得到。

明日叶中5种成分同时测定和挥发性成分分析

目的通过HPLC法测定明日叶Angelica keiskei Koidzumi中异补骨脂二氢黄酮、异补骨脂查尔酮、异虎耳草素、北美芹素和花椒毒素的含有量,固相微萃取（SPME）-GC-MS法分析其中挥发性成分。方法该植物甲醇提取液的HPLC分析采用GL Sciences色谱柱（5μm,4.6 mm×250 mm）;流动相乙腈-水,梯度洗脱;检测波长314 nm;体积流量1.0 m L/min;柱温28℃。GC-MS分析采用Agilent 19091S-433：93.92873 HP-5MS 5%Phenyl Methyl silox-60℃-325℃（325℃）色谱柱（30 m×250μm×0.25μm）;柱温50℃;进样口温度250℃;载气体积流量1.0 m L/min;扫描范围15~500 amu。结果 5种成分在各自线性范围内线性关系良好（r≥0.997 2）,平均加样回收率为97.78%~102.25%（RSD〈2.25%）。明日叶中有11种挥发性成分,9种是萜烯类,总相对含有量达96.45%。结论该方法准确可靠,可为明日叶的质量控制提供参考。

蛇床子中5种成分的HPLC测定法

目的:建立对蛇床子药材中花椒毒素、异虎耳草素、香柑内酯、欧前胡素、蛇床子素进行同时测定的RP-HPLC法。方法:采用Alltech C_(18)色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相乙腈-0.1%醋酸水溶液,梯度洗脱,流速:1mL·min^(-1),检测波长245,325nm;柱温为40℃。结果:花椒毒素、异虎耳草素、香柑内酯、欧前胡素、蛇床子素的线性范围分别为1～20μg·mL^(-1)(r=0.9999),1～20μg·mL^(-1)(r=0.9999),1～20μg·mL^(-1)(r=0.999 8),100～1200μg·mL^(-1)(r=0.9997),100～2000μg·mL^(-1)(r=0.9999),回收率均大于95%。结论:本法简便、准确、重复性好,适用于蛇床子中5种成分的同时测定。

见血飞的化学成分研究

目的研究见血飞的化学成分。方法利用色谱硅胶、Sephadex LH20与RP-18柱分离,NMR法等鉴定结构。结果分离出7个化合物,分别鉴定为:虎耳草素(pimpinellin,Fec-Ⅰ)、飞龙掌血内酯(toddalolactone,Fec-Ⅱ)、异虎耳草素(isopimplnellin,Fec-Ⅲ)、茵芋碱(skimmianine,Fec-Ⅳ)、3-乙酰基-α-香树脂醇(3-acetyl-α-amyranol,Fec-Ⅴ)、β-谷甾醇(β-sitosterol,Fec-Ⅵ)、7-甲氧基-5,4'-二羟基二氢黄酮醇(7-methoxy-5,4'-dihydroxyflavanonol,Fec-Ⅶ)。结论其中化合物Ⅶ为首次从芸香科植物中分离得到。

独活饮片中4种化学成分的含量测定

目的:用HPLC测定独活饮片中的异虎耳草素、二氢欧山芹醇醋酸酯、蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯的含量,为独活的质量控制提供依据。方法:采用资深堂CAPCELL PAK C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1,柱温为25℃,检测波长为330 nm。结果:异虎耳草素、二氢欧山芹醇醋酸酯、蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯对照品回归方程r和线性范围均符合要求,其线性关系良好;重复性试验中上述4种成分的RSD分别为1.87%、1.01%、1.00%、1.06%,表明重复性良好。平均回收率分别为90.94%、99.08%、100.01%、102.44%。结论:该方法敏感度、重复性较好、结果分离度高,可以应用于独活含量测定。

蛇床子及其制剂在临床上的新应用

蛇床子为伞形科植物蛇床Cnidiummonnieri（L．）Cuss．的干燥成熟果实，其性温、味辛苦，有小毒，归肾经。具有燥湿祛风，杀虫止痒，温肾壮阳之功能。用于阴痒带下，湿疹瘙痒，湿脾腰痛，肾虚阳痿，宫冷不孕等症Ⅲ。蛇床子化学成分复杂，主要含有具生物活性的香豆素类化合物，包括蛇床子素、佛手柑内酯、异虎耳草素等。蛇床子及其制剂已广泛应用于临床，现将其近年来在临床上的新应用综述如下。