高效液相色谱测定温肾暖脾颗粒中补骨脂素和异补骨脂素含量

目的建立温肾暖脾颗粒补骨脂素、异补骨脂素的含量测定方法,为质量控制提供实验依据。方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:甲醇-水(40:60);检测波长246 nm;结果峰面积和质量浓度之间线性关系良好,补骨脂素R^(2)=0.9992,异补骨脂素R^(2)=0.9993;精密度、稳定性均符合要求;补骨脂素平均回收率为98.25%,RSD为0.89%,异补骨脂素平均回收率为95.90%,RSD为1.18%。结论本试验研究并建立了高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)补骨脂素、异补骨脂素的含量测定方法,可以作为温肾暖脾颗粒质量控制的依据。

异补骨脂素通过促进骨形成加快骨折愈合

目的 研究异补骨脂素(isopsoralen,ISO)对小鼠胫骨骨折愈合的影响及其作用机制。方法 取2月龄体质量为(20±2)g雄性C57BL/6小鼠50只,按随机数字表法分为模型(Model)组和异补骨脂素治疗(ISO)组,每组25只,ISO组灌服40 mg/kg的ISO,Model组灌服等体积生理盐水,每日1次。取服药第7、14、21、28天术侧胫骨,采用Micro-CT扫描骨折区域量化骨体积分数(bone volume/total volume,BV/TV),并通过HE染色观察骨折断端愈合及塑形情况。采用ELISA法检测服药14 d小鼠血清中骨碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase,BALP)和Ⅰ型前胶原氨基端原肽(procollagen Type I N-terminal peptide,PINP)骨形成指标的变化情况。采用Western blot检测服药7、14 d小鼠胫骨骨痂组织中CollagenⅠ、Runx2、BMP2、OSX和VEGF蛋白的表达含量。通过血管灌注观察服药28 d后骨折区域骨痂微血管,量化分析血管体积分数及血管直径。采用免疫组织化学染色观察服药14 d后胫骨中VEGF表达情况。结果 HE染色结果显示,ISO组的愈合进程快于Model组。Micro-CT量化结果显示,服药7 d后ISO组的BV/TV高于Model组,但差异无统计学意义;14 d后ISO组的BV/TV明显高于Model组(P<0.05);21 d后ISO组的BV/TV明显低于Model组(P<0.05);28 d后ISO组的BV/TV明显低于Model组(P<0.05)。血清骨形成生化指标显示ISO组BALP和PINP含量均显著高于Model组(P<0.05)。骨组织蛋白表达检测结果显示,ISO组的CollagenⅠ、Runx2、BMP2、OSX和VEGF表达量均明显高于Model组(P<0.05)。血管造影结果示,ISO组血管体积分数明显高于Model组(P<0.05),ISO组血管直径明显高于Model组(P<0.05)。免疫组织化学染色结果显示ISO组VEGF表达量明显高于Model组(P<0.05)。结论 异补骨脂素可以提高成骨细胞活性,提高相关骨形成蛋白的表达量,加快造血组织进入来促进骨折愈合。

异补骨脂素对模拟微重力引起的骨质流失的防治作用

目的研究异补骨脂素对模拟微重力导致小鼠骨质流失的治疗作用。方法将C57BL/6J小鼠随机分为5组:地面对照组(CON)、尾吊组(HU)、低剂量给药组(ISO-L)、中剂量给药组(ISO-M)、高剂量给药组(ISO-H),每组12只。给药21 d后,处死所有小鼠,取五脏、血清、股骨、胫骨,用于组织病理学检测、Mirco-CT成像分析、血清指标检测、股骨骨组织蛋白分析以及碱性磷酸酶阳性克隆染色。结果与CON组相比,HU组骨密度(bone mineral density,BMD)和骨小梁厚度(Tb.Th)均呈显著降低趋势(P<0.01),骨体积分数(BS/TV)、骨表面积密度(BV/TV%)明显降低(P<0.05),骨小梁数量(Tb.N)下降,骨小梁分离度(Tb.Sp)升高;与HU组相比,尾吊给药后BMD、BV/TV%、Tb.Th、BS/TV均显著升高(P<0.05),Tb.N升高,Tb.Sp下降,均以高剂量组效果最佳。与CON组相比,HU组血清中骨钙素(OCN)下降(P<0.01),抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)浓度上升(P<0.01);尾吊时给予异补骨脂素,使OCN升高(P<0.01),TRACP-5降低(P<0.01)。与CON组相比,HU组的OPG蛋白表达量降低(P<0.05),RANKL蛋白表达量升高(P<0.05),与HU组相比,给予异补骨脂素后OPG、蛋白表达量升高,RANKL的蛋白表达量降低(P<0.05)。HU组所显示的蓝紫色碱性磷酸酶染液颗粒与地面对照组相比密度低,颜色浅,尾吊时加入异补骨脂素后蓝紫色碱性磷酸酶染液颗粒密度升高。结论异补骨脂素能促进模拟微重力状态下骨形成同时抑制骨吸收有效防治骨质的流失。

异补骨脂素介导BMP2/Runx2/Osx信号通路促进成骨细胞增殖和分化的研究

目的本实验旨在探讨异补骨脂素对成骨细胞增殖和分化的影响及其可能的作用机制。方法常规复苏培养前成骨细胞株OCT1细胞,分别给予异补骨脂素低剂量(10μg·mL^(-1))、中剂量(30μg·mL^(-1))和高剂量(60μg·mL^(-1))进行干预48 h,同步采用骨形态发生蛋白2(Bone morphogenetic protein 2,BMP2)纯化蛋白(50 ng·mL^(-1))为阳性对照。MTT法观察细胞增殖情况;实时荧光定量RT-PCR反应检测BMP2、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)和成骨细胞特异性转录因子(Osterix,Osx)mRNA的表达;Western blot检测Runx2和Osx蛋白的表达;从BMP2^(loxp/loxp)小鼠中分离培养原代颅盖骨成骨细胞,利用体外条件性基因敲除技术敲除BMP2基因后,给予最佳浓度的异补骨脂素干预48 h后,采用实时荧光定量RTPCR反应检测Runx2和Osx基因表达的情况,并利用碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)染色观察成骨细胞中ALP活性变化的情况。结果MTT法检测结果显示,异补骨脂素能促进成骨细胞的增殖,但以低剂量(10μg·mL^(-1))组最明显(P<0.05);实时荧光定量RT-PCR反应结果表明,异补骨脂素低剂量(10μg·mL^(-1))和中剂量(30μg·mL^(-1))能促进成骨细胞BMP2 mRNA的表达,以前者作用最佳(P<0.05)。异补骨脂素低剂量(10μg·mL^(-1))可明显促进成骨细胞Runx2 mRNA的表达(P<0.05)。异补骨脂素低剂量(10μg·mL^(-1))和中剂量(30μg·mL^(-1))能促进成骨细胞Osx mRNA的表达。Western blot检测结果显示,异补骨脂素低剂量(10μg·mL^(-1))和中剂量(30μg·mL^(-1))能促进成骨细胞中Runx2蛋白的表达。此外,异补骨脂素低剂量(10μg·mL^(-1))、中剂量(30μg·mL^(-1))和高剂量(60μg·mL^(-1))均可提高Osx蛋白的表达量。体外条件性基因敲除实验结果显示,异补骨脂素诱导的成骨细胞Runx2和Osx基因以及ALP染色高表达呈BMP2的依赖性。结论异补骨脂素可以促进成骨细胞增殖和分化,并可能通过BMP2/Runx2/Osx信号通路而发挥作用。

黄芪、赤芍配伍补骨脂对大鼠体内补骨脂素和异补骨脂素药代动力学的影响

目的 研究黄芪、赤芍与补骨脂配伍后,补骨脂中主要毒性成分补骨脂素和异补骨脂素的血浆药代动力学参数变化。方法 32只雄性SD大鼠随机分为4组,补骨脂组、补骨脂-黄芪组、补骨脂-赤芍组、补骨脂-黄芪-赤芍组。单次灌胃给药,分别于给药后0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8、10、12、24 h目内眦取血,超高效液相色谱-串联四级杆质谱(UPLC-MS/MS)法检测血浆中补骨脂素和异补骨脂素的血药浓度,采用DAS3.0软件非房室模型计算药动学参数。结果 补骨脂与赤芍配伍后,大鼠血浆中补骨脂素、异补骨脂素最高血药浓度(c_(max))、药时曲线下面积(AUC_(0-t))显著降低,补骨脂与黄芪配伍后,大鼠血浆中异补骨脂素的c_(max)显著降低,补骨脂与黄芪赤芍三药合用后大鼠血浆中补骨脂素和异补骨脂素的AUC_(0-t)显著降低;异补骨脂素的AUC_(0-∞)和c_(max)显著降低。结论 黄芪、赤芍与补骨脂配伍使用,可以降低补骨脂中主要毒性成分补骨脂素和异补骨脂素的体内暴露量,补骨脂-黄芪-赤芍组大鼠血浆中异补骨脂素平均驻留时间(MRT)延长,其具体作用机制有待深入研究。

异补骨脂素酰胺类化合物的合成及其AKR1C3抑制活性

以7-羟基香豆素为初始原料,经Duff甲酰化反应、Rap-Stoermer反应、水解反应和缩合反应得具有酰胺侧链的角型呋喃香豆素(异补骨脂素)类化合物;利用HR-MS、1HNMR及13 CNMR确证化合物的结构;通过中通量抑酶活性测试方法评价化合物对AKR1C3及AKR1C1的抑制作用。合成了7个新的异补骨脂素酰胺类化合物;初步酶活性测试结果显示,N,N-二正丙基-4-甲基-2-氧-2 H-呋喃并[2,3-h]色烯-8-甲酰胺对AKR1C3具有一定的选择性抑制作用。采用上述方法可成功合成异补骨脂素酰胺类化合物,化合物5e具有一定的选择性AKR1C3抑制作用,可为后续研究提供一定的依据。

异补骨脂素促进小鼠胫骨骨折愈合的研究

目的:探讨灌服不同剂量异补骨脂素(isopsoralen,ISO)对小鼠骨折及血管愈合的影响。方法:选取2月龄体质量为(20±2)g的雄性C57BL/6小鼠60只,采用随机数字表法分为4组:模型组(Model)、低剂量组(isopsoralenlow dose,ISO-L)、中剂量组(isopsoralen-medium dose,ISO-M)和高剂量组(isopsoralen-high dose,ISO-H),每组15只。建立右侧胫骨骨折模型。术后采用灌胃给药,ISO-L组、ISO-M组和ISO-H组分别灌服ISO的浓度为10、20和40 mg·kg^(-1),Model组灌服等体积生理盐水,每日1次,连续给药28d。每周称量体重1次。分别于第7、14、21、28天行X线检查,并采用改良后I.R.Garrett评分对骨痂生长情况进行评价。至28 d后取材,剥离主要脏器称重并计算脏器系数,进行脏器苏木素伊红染色(hematoxylin-eosin,HE)观察病理结构变化。采用微计算机断层扫描技术(Micro-CT)扫描骨折区域并进行三维重建得出效果图,量化骨体积分数(bone volume/total volume,BV/TV)。将脱钙后的胫骨进行石蜡包埋并切片,通过HE染色和番红固绿染色观察骨折断端愈合及塑形情况。通过血管灌注Microfil造影剂后取出右侧胫骨并脱钙,使用Micro-CT扫描骨折区域骨痂微血管,比较血管体积分数及血管直径。结果:给药28 d后,各组小鼠体质量及器官系数比较,差异无统计学意义(P>0.05),脏器HE染色未发现明显病理学改变。X线片和改良后I.R.Garrett评分结果显示,ISO-M组28 d评分高于Model组(P<0.05);ISO-H组第14、21、28天评分均高于其他3组(R0.05)。Micro-CT结果显示,ISO-M组腔内骨痂明显减少,低于Model组(P<0.05);ISO-H组骨痂大部分消退,BV/TV均低于其他3组(P<0.05)。HE染色及番红固绿染色结果显示ISO-H组骨折区域断端闭合,已出现连续板层骨,骨折愈合进程超过其他组。血管造影结果显示,ISO-H组和ISO-M组血管体积分数高于Model组和ISO-L组(P<0.05),ISOH组和ISO-M组血管直径高于Model组和ISO-L组(P<0.05)。结论:ISO在10~40 mg·kg^(-1)浓度范围内无明显毒副作用,可以改善骨微结构,促进骨痂微血管的生成,呈浓度依赖性加速小鼠骨折断端的愈合。

正交设计优化温通凝胶贴膏基质组方及补骨脂素和异补骨脂素含量测定

目的:优选温通凝胶贴膏的基质配方,并对成型贴膏进行补骨脂素和异补骨脂素的含量测定。方法:采用L9(34)正交设计,以聚丙烯酸钠(NP-700)、高岭土、甘羟铝、中药量为考察因素,以试验综合评分如黏性与剥离强度等作为评价指标,优选制剂最佳基质配方;采用高效液相色谱仪进行含量测定。结果:温通凝胶贴膏的最佳处方配比为:NP-700∶高岭土∶甘羟铝∶中药量=300∶300∶10∶1 000。建立的含量测定方法稳定性好,重现性佳。结论:优选得到的温通凝胶贴膏易于涂布,成型好,可用于批量生产。采用的含量测定方法专属性强,可用于补骨脂素和异补骨脂素的含量测定。

HPLC法测丹知青娥片中补骨脂素、异补骨脂素、芒果苷和丹酚酸B含量

建立HPLC法同时测丹知青娥片中补骨脂素、异补骨脂素、芒果苷和丹酚酸B的含量。方法 采用 Agilent EclipseXDB-C18 (4.6毫米×250毫米,5微米)作为色谱柱,以1%甲酸作为流动相 A,甲醇作为流动相 B;梯度洗脱程序:0~12min, B 29%~48%;12~24min,B 48%~80%;24~25min, B 80%~100%;25~33 min,B 100 %;33~34min,B 100%~29%;34~40 min,B含量29%,柱温度35℃,流量1 mL·min-1;探测波长:二百五十四纳米。进样量:10μL;结果 补骨脂素、异补骨脂素、芒果苷和丹酚酸B的峰面积与浓度之间有良好的线性关系。结论 该方法操作重现性好,在一个色谱条件下能测定三味药材中的四个成分,提高了生产效率,节约了生产成本,并能有效监控丹知青娥片的质量。

补骨脂酊中活性成分补骨脂素、异补骨脂素薄层色谱鉴别

目的:建立补骨脂酊中补骨脂素、异骨脂素鉴别方法。方法:采用薄层色谱法鉴别补骨脂酊中活性成分补骨脂素和异补骨脂素。结果:采用正乙烷:乙酸乙酯(3:1)、上行展开方式、点样量为1~2 μl,分离效果好,斑点清晰,操作简单快捷,重现性好。结论:通过分析影响薄层色谱鉴别因素,优化补骨脂素、异补骨脂素薄层色谱鉴别方法,为完善医疗机构制剂质量标准提供依据。

补骨脂素与异补骨脂素对乳鼠颅骨成骨细胞分化成熟影响的比较研究

目的比较研究中药补骨脂中两种重要组分——补骨脂素与异补骨脂素对体外培养乳鼠颅骨成骨细胞(rat cal-varial osteoblasts,ROB)分化成熟的影响。方法取新生SD大鼠颅骨,多次酶消化法培养ROB,每3天换液1次,铺满80%皿底后传代培养。以1×10-5mol.L-1的补骨脂素和异补骨脂素对ROB的分化成熟进行药物干预,比较补骨脂素组、异补骨脂素组和不加药的对照组之间碱性磷酸酶(ALP)活性、碱性磷酸酶阳性克隆数(CFU-FALP)、骨钙素分泌量、钙盐沉积量以及钙化结节数量的差异,Real Time RT-PCR检测IGF-1、Osterix、Runx-2和collagen I的基因表达情况。West-ern blot法检测Ⅰ型胶原蛋白的分泌量。结果补骨脂素和异补骨脂素均可促进ROB的分化成熟,具体表现在明显提高ROB的ALP活性,促进钙盐的沉积以及骨钙素的分泌,增加CFU-FALP和钙化结节数量,提高IGF-1、Osterix、Runx-2和collagen I的mRNA水平,增强Ⅰ型胶原的蛋白表达,但异补骨脂素的活性明显高于补骨脂素。结论异补骨脂素促进ROB分化成熟的活性明显高于补骨脂素,提示异补骨脂素是中药补骨脂发挥抗骨质疏松活性的主要有效成分,具有开发为抗骨质疏松新药的潜力。

异补骨脂素的植物雌激素作用及其机制的探讨

目的利用雌激素受体(estrogenic receptor,ER)阳性乳腺癌T47D细胞和ER阴性乳腺癌MDA-MB231细胞观察异补骨脂素(isopsoralen)的雌激素样作用,并探讨其可能的作用靶点和机制。方法以ER拮抗剂ICI182,780为工具药,采用MTT细胞增殖实验观察异补骨脂素对T47D和MDA-MB231细胞增殖的影响;通过流式细胞术检测细胞周期分布的变化。同时,利用实时荧光定量PCR法及流式细胞术检测异补骨脂素对T47D细胞pS2 mRNA及蛋白表达情况的影响。结果1×10-6mol·L-1和1×10-7mol·L-1异补骨脂素能够促进T47D细胞增殖,提高细胞分裂增殖指数,且该作用可被ICI182,780所拮抗;1×10-6mol·L-1和1×10-7mol·L-1异补骨脂素对MDA-MB231细胞增殖无影响。PCR及流式蛋白检测结果显示:1×10-6mol·L-1和1×10-7mol·L-1异补骨脂素可使pS2 mRNA和蛋白表达增加,同时加入ICI182,780可部分拮抗异补骨脂素对pS2表达的诱导和促进作用。结论异补骨脂素具有植物雌激素作用,该效应可通过作用于靶细胞雌激素受体途径实现。

异补骨脂素对体外培养大鼠成骨细胞增殖分化成熟的影响

目的:研究异补骨脂素(Isopsoralen,IP)对体外培养大鼠颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROB)增殖与分化成熟的影响。方法:取新生SD大鼠颅骨,多次酶消化法获得成骨细胞,培养于含10%FBS的MEM培养液中,3 d后首次换液,铺满90%皿底后传代培养;增殖分析采用96孔板,加入在培养液中终浓度分别为1×10-4、1×10-5、1×10-6、1×10-7mol/L的异补骨脂素,MTT法分析;分化分析采用24孔板,于成骨性诱导培养第3、6、9、12、15天分别测碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)活性、钙含量、骨钙素,第12天进行ALP组织化学染色,第14天进行茜素红染色和钙化结节计数。结果:终浓度为1×10-4mol/L的异补骨脂素对细胞增殖有抑制作用,而1×10-5mol/L浓度虽对ROB增殖无明显影响,但能显著提高细胞ALP活性、增加钙含量、促进骨钙素分泌,并增加钙化结节数量。结论1×10-5mol/L异补骨脂素能促进ROB分化成熟,应为中药补骨脂抗骨质疏松的有效成分。

不同炮制方法对补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素含量的影响

目的:用不同炮制方法炮制补骨脂,比较不同炮制品中补骨脂素和异补骨脂素的含量,并考查最佳炮制方法的炮制工艺条件。方法:用甲醇超声提取补骨脂中的补骨脂素和异补骨脂素。HPLC法采用Agilent C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,甲醇和水为流动相,流速为1.0mL/min,柱温为40℃,检测波长为245nm。正交试验用于炮制方法的工艺筛选。结果:雷公法炮制的补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的含量均高于其他炮制品中的含量,其最佳炮制条件为:1倍量黄酒浸泡0.5d,水浸泡2d,蒸6h。结论:不同炮制方法对补骨脂中的补骨脂素和异补骨脂素含量有影响。

高效液相色谱法测定中药材补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的含量

建立了测定中药材补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素含量的高效液相色谱法。采用的色谱条件为:HypersilODS色谱柱(150mm×4 6mmi d ,5μm),以乙腈 水(体积比为30∶70)为流动相,检测波长为245nm。在此条件下,补骨脂素、异补骨脂素和内标物联苯苄唑获得了较好的分离。补骨脂素和异补骨脂素质量浓度分别为0 50～10 0mg/L时,组分与内标的峰面积比值与质量浓度之间的线性关系良好(r=1 000),最低检测限为10μg/L(S/N=3)。所建立的方法用于不同产地的补骨脂素药材分析,结果令人满意。

补骨脂素和异补骨脂素对体外细胞色素P450酶活性的抑制和诱导作用

目的探讨补骨脂素(PSO)和异补骨脂素(IPSO)对细胞色素P450(CYP)活性的抑制和诱导作用。方法将人肝微粒体或鼠肝微粒体与PSO或IPSO以及CYP特异性探针底物共孵育30 min,分别以非那西丁O-脱乙基、甲苯磺丁脲4-羟基化、美芬妥因-4-羟基化、右美沙芬O-脱甲基化和咪达唑仑1'-羟基化为同工酶CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6(大鼠2D2)和CYP3A4(大鼠3A1/2)代谢活性的标志,用HPLC-MS/MS法检测相应代谢产物的生成量并计算相应的IC50值,评价PSO和IPSO对5种CYP同工酶的潜在抑制作用。将PSO和IPSO或阳性诱导剂与"三明治"培养大鼠肝原代细胞共孵育72 h后,再加入CYP探针底物孵育1 h,检测相应代谢产物的生成量,与阳性诱导剂组比较,评价二者对CYP1A和CYP3A的诱导作用。结果 PSO和IPSO对人肝微粒体和鼠肝微粒体的CYP1A2均有较强的抑制作用,在人肝微粒体中的IC50值分别为0.17和0.13μmol·L-1;在鼠肝微粒体中的IC50值分别为0.47和0.36μmol·L-1。二者对人肝微粒体的CYP2D6也有中等强度的抑制作用,IC50值分别为3.59和9.51μmol·L-1。PSO和IPSO 100μmol·L-1可分别将大鼠肝细胞的CYP3A活性提高1.18和0.96倍,有一定的诱导作用。结论 PSO和IPSO能显著抑制CYP1A2酶活性,对CYP3A有一定的诱导作用。

异补骨脂素抑制MRP2、MRP3所致的HepG2细胞内胆汁酸蓄积和毒性

目的观察异补骨脂素体外对Hep G2细胞毒性和细胞内胆汁酸浓度的影响,并考察其对胆汁酸合成转运的影响。方法不同浓度异补骨脂素在Hep G2细胞作用24 h,MTT法检测细胞存活,并检查细胞内胆汁酸浓度。常规TRIzol法提取RNA,real time PCR检测细胞中转运体BSEP、MRP2、MRP3、OATP2、NTCP、OSTα,合成酶CYP7A1、CYP27A1和受体FXR、PXR的m RNA转录水平。结果Hep G2细胞存活率随着异补骨脂素浓度升高而剂量依赖性的降低,异补骨脂素作用24 h的IC50为118.1μmol·L-1。100、400μmol·L-1异补骨脂素可使细胞内胆汁酸浓度明显升高。异补骨脂素在25μmol·L-1时就可使MRP2、MRP3、CYP7A1明显降低,当浓度增大到100μmol·L-1时,OATP2、OSTα、CYP27A1、FXR、PXR也明显升高,但BSEP、NTCP差异无显著性。结论异补骨脂素可引起Hep G2细胞内胆汁酸升高和细胞毒性,其机制可能与抑制MRP2、MRP3有关。

异补骨脂素对去卵巢大鼠骨代谢的影响研究

目的研究异补骨脂素对去卵巢大鼠骨代谢的影响。方法取3月龄雌性SD大鼠40只,随机分为4组,假手术对照组,模型组,雌二醇组(苯甲酸雌二醇0.2 mg/kg,皮下注射,每周1次),异补骨脂素组。手术6 w后,异补骨脂素组用25 mg/kg(此浓度经过前期浓度筛选得到)异补骨脂素灌胃,每天1次,1周停止1次,模型组灌胃与用药组等体积生理盐水,假手术组正常饲养。12 w后双能X骨密度仪检测全身骨密度后处死,分离骨组织,于AG-X系列台式电子万能试验机检测左侧股骨和椎骨生物力学指标,血清中骨钙素(osteocalcin,OC)和抗酒石酸性磷酸酶5b(tartrate resistant acid phosphatase 5b,TRACP5b)检测,右侧股骨护骨素(osteoprotegerin,OPG),RANKL免疫组织化学染色,剥离心、肝、脾、肺、肾、肾上腺和子宫称重,计算器官指数,并做常规病理学检测。结果与假手术组比较,模型组大鼠体质量、全身骨密度、股骨骨密度、腰椎骨密度及血清OC、TRACP 5b,胫骨微组织结构和股骨生物力学性能差异极显著,有统计学意义(P<0.01),说明骨质疏松造模良好;与模型组比较,异补骨脂素组大鼠体质量、全身骨密度、股骨骨密度、腰椎骨密度及血清OC、TRACP 5b,胫骨微组织结构和股骨生物力学性能显著差异有统计学意义(0.01<P<0.05)。与模型组比较,阳性对照组大鼠全身与股骨骨密度、血清OC、TRACP 5b和股骨生物力学性能极显著差异有统计学意义(P<0.01)。药物处理组与阳性对照相比无统计差异。结论 25 mg/kg的异补骨脂素能增加SD大鼠骨密度,改善骨组织微结构,有效提升骨生物力学性能,促进骨形成,降低骨质疏松骨折发生的风险。

不同产地补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定

应用高效液相色谱法 ,测定了不同产地补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的含量。色谱柱为Kromasil C18( 4 6mm× 2 5 0mm ,5 μm) ,流动相 :甲醇 水 ( 4 5∶5 5 ) ,检测波长 :2 4 5nm ,流速 :1 0ml/min ,柱温 :35℃。结果 :补骨脂素在 0 0 4 4 8～ 0 4 4 8μg(r =0 9999)范围内、异补骨脂素在 0 0 35 6～ 0 35 6 μg(r =0 9997)范围内线性关系良好 ,补骨脂素和异补骨脂素平均回收率分别为 98 6 9% (RSD =1 97% )和 10 1 0 9% (RSD =3 0 6 % )。

异补骨脂素对小鼠胚胎前成骨细胞胶原的影响

目的探讨不同浓度异补骨脂素干预对小鼠胚胎前成骨细胞(MC3T3-E1)增殖、Ⅰ型骨胶原及AP-1亚基c-Jun表达水平的影响及其与原发性骨质疏松症的关系。方法细胞分为正常对照组与不同浓度异补骨脂素组。分别采用MTT法检测成骨细胞(MC3T3-E1)增殖、天狼星红染色法测定细胞层的胶原含量、Western-Blot检测c-Jun及RT-PCR检测Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果不同浓度异补骨脂素刺激,可明显促进MC3T3-E1增殖,细胞层胶原含量增加,c-Jun蛋白表达逐渐增强及Ⅰ型胶原mRNA的表达增高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论异补骨脂素可能通过促进核转录因子c-Jun表达,进而促进骨胶原合成,从而发挥其预防与治疗骨质疏松症的作用。