非洲猪瘟病毒弱毒株感染流行病学调查分析

调查青海省非洲猪瘟病毒弱毒株感染情况并分析疫情风险,可提升青海省对非洲猪瘟的防控预警水平,为有效防控非洲猪瘟提供技术依据。通过现场问卷调查和监测的方式,在生猪养殖量较集中的西宁市、海东市及环湖沿线部分农区县(市、区)开展非洲猪瘟病毒弱病毒感染情况流行病学调查工作。结果显示,2023年生猪非瘟阳性率为0.10%,环境监测阳性率为1.85%。病毒环境污染面较广,生猪及其产品的生产、调运、屠宰及市场交易等环节防控工作仍然存在薄弱之处,亟待改善。

黄芪多糖对鸡免疫禽传染性支气管炎弱毒疫苗免疫效果的影响

试验探究黄芪多糖(APS)对禽传染性支气管炎弱毒疫苗的免疫调节作用,以期发掘黄芪多糖用作疫苗佐剂的应用潜力。将120只14日龄蛋鸡随机分为3组,每组4个重复,每个重复10只蛋鸡,分别设置为APS+H120联合免疫组、H120疫苗组以及PBS阴性对照组。各组蛋鸡共进行3次免疫,每次间隔2周,每次鼻腔接种100μL/只。最后一次免疫14 d后经鼻腔攻毒禽传染性支气管炎病毒M41株,观察鸡的临床症状,检测肺脏和肝脏载毒量。结果显示,与H120疫苗组相比,APS+H120疫苗联合免疫能够诱导14日龄蛋鸡产生传染性支气管炎病毒(IBV)特异性免疫球蛋白G(IgG)和分泌型免疫球蛋白A(sIgA),有效保护蛋鸡抵抗同种异源毒株的攻击,蛋鸡存活率为100%。攻毒后APS+H120组蛋鸡未出现禽传染性支气管炎典型临床症状,蛋鸡生产性能未受到影响。研究表明,APS对禽传染性支气管炎H120弱毒疫苗的免疫效果具有促进作用。

维氏气单胞菌弱毒株FS12001及其疫苗对异育银鲫的免疫效果

为探究由维氏气单胞菌(Av)弱毒株FS12001制备的疫苗免疫效果,将Av弱毒株FS12001制备活疫苗、灭活疫苗、ISA763A-灭活疫苗和蜂胶-灭活疫苗,腹腔注射免疫异育银鲫,同时设ISA763A佐剂、蜂胶佐剂及0.65%NaCl作为对照组。于免疫后1、3、5、7和14 d经实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测脾脏组织中IgM、IL-1β及LZM的基因表达量;于免疫后7、14、21、28、42和48 d尾静脉采血分离血清,检测IgM抗体水平,测定SOD和LZM酶活性;于免疫28 d后用2株Av强毒株分别攻毒各组实验鱼,连续观察记录7 d,计算各免疫组的相对保护率。结果显示,各免疫组脾脏组织中IgM、IL-1β及LZM的基因表达量高于对照组,且ISA763A-灭活疫苗组和蜂胶-灭活疫苗组的表达量显著高于其他各实验组。各疫苗免疫组血清特异性抗体水平均显著高于0.65%NaCl对照组和佐剂对照组。各疫苗免疫组的LZM活性均在28 d最高,灭活疫苗组、ISA763A-灭活疫苗组及蜂胶-灭活疫苗组SOD活性均在7 d最高。菌株AVCA07攻毒后,活疫苗组、灭活疫苗组、ISA763A-灭活疫苗组和蜂胶-灭活疫苗组的RPS分别为63%、56%、100%和56%;菌株YC170511攻毒后,以上4个免疫组RPS分别为59%、55%、93%和72%。研究表明,用弱毒株FS12001制备疫苗,注射免疫异育银鲫后均可增加脾脏中IgM、IL-1β及LZM的基因表达量,提高血清抗体水平,增强SOD和LZM酶活性,增强其抵抗Av感染的能力。

牛病毒性腹泻病毒1型KE-9基因缺失弱毒疫苗和牛病毒性腹泻病毒2型NY-93基因缺失弱毒疫苗对4~6月龄犊牛的安全性研究

本试验旨在评估牛病毒性腹泻病毒1型KE-9基因缺失弱毒疫苗和牛病毒性腹泻病毒2型NY-93基因缺失弱毒疫苗对4~6月龄犊牛的安全性。12头4~6月龄犊牛随机分成3组,每组4头,各组分别肌肉注射牛病毒性腹泻病毒1型KE-9基因缺失弱毒疫苗、牛病毒性腹泻病毒2型NY-93基因缺失弱毒疫苗或疫苗稀释液,2 mL/头。试验结果表明,免疫后所有试验用牛无牛病毒性腹泻病毒引起的发热和临床症状,也不引起白细胞水平的下降;仅1头牛在免疫牛病毒性腹泻病毒2型NY-93基因缺失疫苗后第7 d检测到病毒血症和鼻腔排毒,在其他时间点均为阴性。所有犊牛均无大体病理学和组织病理学变化。综上所述,牛病毒性腹泻病毒1型KE-9基因缺失弱毒疫苗和牛病毒性腹泻病毒2型NY-93基因弱毒疫苗对4~6月龄的犊牛安全性良好。

罗非鱼无乳链球菌弱毒疫苗不同免疫途径最适宜免疫温度的研究

为了获得罗非鱼无乳链球菌弱毒疫苗不同接种途径最适宜的免疫温度,试验将罗非鱼(Oreochromis niloticus)饲养于4个水温(22℃、26℃、30℃、35℃)中,每个饲养水温分为4组,分别为浸泡组、注射组、口服组和空白对照组,每组40尾。浸泡组罗非鱼链球病疫苗浸泡浓度为1×10^(7)cfu/mL,浸泡时间为15 min;注射组腹腔注射疫苗,疫苗菌液浓度为1×10^(8)cfu/mL,0.2 mL/尾;口服组将疫苗均匀喷洒至饲料表面,晾干投喂,分别于试验第1,3,7天口服接种,疫苗菌液浓度为1×10^(8)cfu/mL,0.2 mL/尾。于免疫后第5,10,15天每组随机选取3尾采集血液及脏器组织,检测免疫后疫苗抗原组织分布、血清抗体水平和溶菌酶活性,计算疫苗相对免疫保护率。结果表明:注射组免疫后第5,10,15天罗非鱼脾脏组织均可检测到疫苗抗原;饲养水温为35℃时,注射组免疫后第5,10,15天血清抗体水平极显著高于空白对照组(P<0.01);饲养水温为22℃时,浸泡组、注射组和口服组血清溶菌酶活性显著或极显著高于空白对照组(P<0.05或P<0.01)。随着饲养水温的升高,浸泡组相对免疫保护率逐渐降低,22℃时为52.33%;注射组相对免疫保护率逐渐升高,与饲养水温呈正相关,饲养水温为22℃、26℃、30℃、35℃时相对免疫保护率分别为21.53%、68.25%、85.64%和90.43%;口服组相对免疫保护率先升高后下降,26℃饲养水温罗非鱼免疫效果最好,相对免疫保护率为54.51%。说明罗非鱼链球病疫苗浸泡免疫接种最适饲养水温为22℃,注射免疫接种最适饲养水温为35℃,口服免疫接种最适饲养水温为26℃。

牛病毒性腹泻病毒1型KE-9基因缺失弱毒疫苗和牛病毒性腹泻病毒2型NY-93基因缺失弱毒疫苗在怀孕母牛中垂直传播能力评价

本研究通过对怀孕母牛免疫牛病毒性腹泻病毒1型KE-9基因缺失弱毒疫苗和牛病毒性腹泻病毒2型NY-93基因缺失弱毒疫苗后检测胎牛组织中是否存在疫苗病毒,以评价该疫苗的垂直传播能力。试验将16头牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗原和抗体阴性,怀孕60~90 d的母牛随机分成2组,第1组6母牛肌肉注射2.0 mL牛病毒性腹泻病毒1型KE-9基因缺失弱毒疫苗;另外2头牛不做任何接种作为哨兵牛同群饲养。第2组6母牛肌肉注射2.0 mL牛病毒性腹泻病毒2型NY-93基因缺失弱毒疫苗;另外2头牛不做任何接种作为哨兵牛同群饲养。母牛免疫后血清抗体转阳,BVDV抗体明显升高。免疫后第56 d剖取免疫牛的胎牛,采集胎牛脑、胸腺、肠系膜淋巴结和脾脏组织用病毒分离方法检测牛病毒性腹泻病毒。结果显示,所有怀孕母牛在整个试验期内无任何临床症状,也无流产现象。试验结束时胎牛发育良好,且未在胎牛的脑、胸腺、肠系膜淋巴结和脾脏组织中分离到牛病毒性腹泻病毒。综上所述,牛病毒性腹泻病毒1型KE-9基因缺失弱毒疫苗和牛病毒性腹泻病毒2型NY-93基因缺失弱毒疫苗对怀孕母牛和胎牛都是安全的,无垂直传播。

探究非洲猪瘟弱毒株防控存在的问题及策略

非洲猪瘟自2018年首次传入我国以来,各生猪养殖场户都在积极寻找合适的方法与防控技术来应对非洲猪瘟,但是目前来看,一旦生猪养殖场发生疫情,都会对养殖户造成严重经济损失。非洲猪瘟的传播速度非常快,发病率、致死率都非常高,无论是野猪,还是家猪,都非常容易被感染。非洲猪瘟与普通猪瘟的症状非常相似,目前还没有有效的药物进行治疗,也没有疫苗可以免疫预防。很多养殖户对非洲猪瘟流行毒株可能还是一知半解,认为弱毒株病毒弱,而忽视它给生猪带来的影响,最后会造成不可挽回的损失。为此本文针对非洲猪瘟弱毒株的特点和防控存在的问题进行深入分析,并提出相关策略,以期能够为生猪养殖提供科学的参考依据。

当前形势下非洲猪瘟病毒弱毒株防控策略

2018年非洲猪瘟病毒(ASFV)基因Ⅱ型强度株首次传入我国境内辽宁省,之后随着病毒的基因变异和毒株重组,病毒出现了多元化、弱毒化的趋势,非洲猪瘟的鉴别诊断以及防控也变得更加困难。本文就当前非洲猪瘟常态化防控形势下,非洲猪瘟弱毒株的流行病特点、临床症状、如何鉴别诊断等方面做了介绍,并提出了具体的防控建议,以期给广大养殖户提供参考。

兼抗黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒弱毒疫苗的创制

黄瓜花叶病毒(CMV)和马铃薯X病毒(PVX)在烟草中普遍存在、危害严重,对烟草产业健康发展有重大影响。为预防田间烟草上黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒,需要构建能够同时预防CMV和PVX的弱毒疫苗。本研究首先构建了CMV RNA2的2b蛋白提前终止突变体pCB301-CMVFny-R2-2bPT,在此突变体中插入200 bp的PVX保守序列(5890-6089)获得突变体质粒pCB301-CMVFny-R2-2bPT-PVX5890-6089。该突变体质粒与含野生型CMVFny RNA1和CMVFny RNA3的质粒等量混合后通过农杆菌浸润方法分别接种中烟100、红花大金元和林烟草,接种后烟草症状与野生型CMVFny-RNA1+RNA2+RNA3混合接种烟草症状相比显示弱侵染性。疫苗遗传稳定性检测证实疫苗载体中插入的PVX 200 bp保守片段稳定存在,CMV和PVX强毒株系攻毒试验表明该弱毒疫苗在中烟100上对CMV和PVX同时具备交叉保护作用。

应用荧光定量PCR方法检测伪狂犬病病毒弱毒株在猪体组织中的分布

为了解伪狂犬病病毒(PRV)TK/PK/gE三基因缺失弱毒株在猪体组织中的分布情况,针对PRV gB基因保守区设计并合成1对特异性引物,建立并优化了一种可快速、定量检测PRV的SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR方法。该检测方法特异性强且敏感度高,最低检测浓度为10^(1)拷贝/μL。PRV TK/PK/gE三基因缺失弱毒株免疫仔猪后可少量存在于大脑、小脑、肝脏、脾脏、肺脏、扁桃体和颌下淋巴结中,部分仔猪鼻甲骨病毒含量较高。应用本研究建立的荧光定量PCR方法阳性检出率为79.2%,而常规PCR方法阳性检出率仅为45.8%。结果表明,本研究建立的荧光定量PCR方法为了解弱毒株在猪体的分布提供了快速、敏感的检测手段。PRV TK/PK/gE三基因缺失弱毒株在猪组织中的分布情况为进一步揭示其组织嗜性、安全性和免疫机制提供了数据。

猪伪狂犬病灭活苗和弱毒苗联合免疫小鼠的免疫效果研究

为了优化猪伪狂犬病(PR)免疫程序,本研究将SPF级昆明雌鼠分为JZ-45组(单免灭活苗)、HB-98组(单免弱毒苗)、JZ-45/JZ-45组(两次均免灭活苗)、JZ-45/HB-98组(首免灭活苗,二免弱毒苗)、HB-98/JZ-45组(首免弱毒苗,二免灭活苗)、HB-98/HB-98组(两次均免弱毒苗)和对照组,共7组,采用猪伪狂犬病病毒(PRV)JZ-45分离株灭活苗和商品化HB-98弱毒苗,以上述相应组免疫物对小鼠免疫,在免疫后0、7 d、14 d、21 d、28 d、35 d和42 d分别采血,分离血清利用间接ELISA和中和试验对小鼠血清PRV特异性和中和抗体水平进行检测;并在免疫后42 d利用PRV JZ-45株对小鼠攻毒(攻毒剂量:100 LD_(50),LD_(50)=10^(2.681)/0.1 mL,100μL/只),观察其临床症状,计算小鼠存活率,并对各组小鼠剖检观察各脏器剖检病变。取小鼠脑、脾脏制备病理切片,观察各组小鼠各组织的病变。结果显示:免疫组小鼠血清PRV抗体及中和抗体水平在0~42 d均呈持续上升趋势,且HB-98/JZ-45组小鼠血清PRV抗体水平在各时间点均高于其它组。攻毒结果显示:单免组小鼠存活率均为80%,其余免疫组小鼠均无明显临床症状,对照组小鼠全部死亡。组织病理切片结果显示:除HB-98/JZ-45免疫组小鼠脾脏、脑部无明显异常外,其他免疫组小鼠脾脏组织均有少量中性粒细胞浸润,对照组小鼠脾脏白髓灶性坏死,有大量中性粒细胞浸润,脑部组织出现炎性细胞浸润,胞质空泡化等。结果表明,在首次免疫HB-98弱毒苗的基础上加强免疫1次JZ-45灭活苗,可对小鼠获得更好的免疫保护效果。本实验比较了不同的免疫程序对小鼠免疫保护效果的差异,为后续PRV免疫程序的改进提供指导,也为更好地控制PR提供参考。

山羊痘弱毒疫苗(AV41株)接种途径和剂量对牛抗体反应的影响

为评估山羊痘弱毒疫苗(AV41株)经皮下和皮内接种牛体后的抗体产生规律,优化牛体免疫程序,选取25头健康成年肉牛分为5组,每组5头,标准单头份剂量为含量1.0×10^(3.5)TCID_(50) AV41株,分别以5倍和10倍羊用剂量进行皮下和皮内免疫,于接种后0、15、30、45和60 d,利用病毒中和试验(VNT)和ELISA试剂盒检测血清抗体水平。结果显示:鼻咽拭子和血液PCR结果均为阴性,未出现排毒;VNT与ELISA抗体检测结果相似,免疫后第30天,皮下接种5倍剂量组中有60%牛抗体转阳,中和抗体滴度最高达1∶640。同时,皮内和皮下10倍剂量组各有40%牛抗体转阳,皮内5倍剂量组有20%牛抗体转阳。VNT中和指数与ELISA的S/P值呈现显著正相关。上述结果表明,类似于国际上相关疫苗的接种途径和剂量,皮下注射5倍羊头份剂量山羊痘弱毒疫苗是安全和有效的,可作为临床预防牛结节皮肤病的免疫接种方案。

新型鸭呼肠孤病毒弱毒S株在雏番鸭体内的增殖规律

【目的】研究新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)弱毒S株C30在雏番鸭血液中的病毒血症,口咽、泄殖腔的排毒规律及靶器官的带毒时间,了解弱毒S株在雏番鸭体内的增殖规律和致弱机理。【方法】设计特异性引物,建立检测NDRV核酸的RT-qPCR方法;新型鸭呼肠孤病毒弱毒S株第30代(NDRV-S-C30)腿部肌肉注射2日龄雏番鸭,在免疫后1、2、3、4、6、8、10、12、14 d(Days post vaccination,dpv)采集其血液、肝脏、脾脏、泄殖腔分泌液和口咽液,用RT-qPCR方法检测NDRV在血液、口咽、泄殖腔及靶器官的增殖能力及带毒时间。【结果】建立了检测NDRV核酸的特异性RT-qPCR方法,使用该方法检测NDRV弱毒攻毒雏鸭的口咽和泄殖腔排毒时间分别为2~8 d和2~10 d,排毒高峰期为4~6 d;病毒血症时间为1~4 d,其中1~2 d为病毒血症高峰期;弱毒在肝脏的带毒时间为3~6 d,在脾脏的带毒时间为1~8 d。【结论】NDRV-S-C30弱毒株免疫雏番鸭后可通过口腔和泄殖腔向外界排毒,仅能引起较弱的病毒血症反应,且在肝脏中的增殖能力弱,丧失了对易感靶器官造成病理损伤的能力。明确了NDRV弱毒S株的排毒规律及病毒血症时间,为建立弱毒免疫效力评价方法奠定了基础。

不同品系小鼠对炭疽芽胞杆菌弱毒株芽胞的敏感性研究

通过比较四种品系小鼠对炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)(简称炭疽杆菌)弱毒株芽胞的敏感性,确定炭疽杆菌弱毒株芽胞攻毒合适的动物模型。采用炭疽杆菌弱毒株A16Q1(pXO1-、pXO2+)和A16PI2(pXO1+、pXO2-)的芽胞对四种品系小鼠(DBA/2、KM、ICR和BALB/c)进行腹腔攻毒,记录小鼠死亡时间,计算LD50、绘制存活曲线并统计分析。运用较敏感的KM小鼠研究不同canSNP基因型毒素缺陷株(含pXO2拷贝数不同)芽胞的毒力差异。利用更为敏感的DBA/2小鼠评价S-层蛋白BA3338对荚膜缺陷株芽胞毒力的影响。结果表明,在四种品系小鼠中,毒素缺陷株芽胞的毒力均高于荚膜缺陷株芽胞的毒力。DBA/2小鼠对炭疽杆菌弱毒株芽胞的剂量依赖关系最好,最为敏感,其次是KM小鼠,而ICR小鼠和BALB/c小鼠对炭疽杆菌弱毒株芽胞不敏感。确定了DBA/2小鼠和KM小鼠在炭疽杆菌弱毒株芽胞研究中的适用性。使用KM小鼠评价了不同canSNP基因型炭疽杆菌芽胞的毒力差异,结果表明,不同canSNP基因型炭疽杆菌由于所含pXO2质粒拷贝数的差异导致芽胞的毒力不同。使用DBA/2小鼠评价了S-层蛋白BA3338缺失对炭疽杆菌芽胞毒力的影响,表明BA3338基因的缺失导致炭疽杆菌芽胞毒力降低。

弱毒冻干疫苗与灭活疫苗的效力分析

畜禽疫病是畜牧业发展过程中不可避免的问题,严重危害着养殖业的健康发展。为了控制和预防畜禽疾病的流行,疫苗接种已经成为一种常见的措施。畜禽疫苗的种类繁多,其中弱毒冻干疫苗和灭活疫苗是两种主要类型的疫苗。在选择适当的疫苗时,需要考虑不同类型疫苗的优缺点以及环境条件等多种因素。本文将重点分析畜禽弱毒冻干疫苗和灭活疫苗的效力及其基本原理,旨在为畜禽疫苗的选择和使用提供参考。

PRRS弱毒活疫苗保护效果对同源性要求有多高?

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive Syndrome,PRRS)也称猪蓝耳病,是世界上对猪场影响最严重的猪病;猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive Syndrome Virus,PRRSV)几乎在所有区域猪场都有流行,也是目前我国猪场最顽固、带来危害和经济损失最大的病原之一。

新城疫病毒弱毒株分子生物学特性的研究

于 1 996年从长春地区一养鸡场分离到一株新城疫病毒 (NDV长春株 ) ,经过病毒生物学特性的研究表明该NDV毒株为弱毒株。将NDV长春株纯化培养后 ,提取病毒RNA ,经RT_PCR扩增F基因 ,并测定出F基因的全部核苷酸序列为1 75 8bp ,编码有 5 5 3个氨基酸残基。与国内外发表的部分NDV病毒的强毒株和弱毒株的相同序列进行比较 ,其核苷酸同源性在 88.2 %～ 96 .7%之间 ,氨基酸同源性在 90 .1 %～ 98.1 %之间 ,并与所有弱毒株F蛋白裂解位点区 (1 1 2～ 1 1 7)氨基酸序列Gly_Arg/Lys_Gln_Gly/Ser_Arg_Leu相同 。

鸭肝炎弱毒疫苗的研究

鉴于我国目前尚无适用小鸭免疫的鸭肝炎弱毒疫苗,我们以琛圳引进的E52为始发毒株培育了E—85鸡胚化弱毒株,对1日龄小鸭进行的试验表明,具有良好的免疫原性和安全性,现报告如下。

猪肺炎霉形体168弱毒株的回归试验

将猪肺炎霉形体 16 8无细胞培养弱毒株F34 0 经健康小梅山猪连续传 5代 ,每代观察 11— 16d ,临床无气喘和咳嗽症状 ,剖检无胰样小叶性肺炎病变 ,表明该菌株的稳定性和安全性良好 ;同时采集各传代猪的肺组织 ,用病肺块组织接种法分离培养猪肺炎霉形体 ,经 72h培养 ,其培养液呈微混浊 ,无沉淀 ,pH降至 6 .6 ,镜检见类圆球形菌体。

猪瘟兔化弱毒免疫猪淋巴细胞亚类及转化水平、IFN-γ的变化与分析

为研究免疫猪瘟兔化弱毒(HCLV)对猪细胞免疫应答的影响,本研究分别采用HCLV脾淋毒单独(A组)、HCLV细胞毒与兔脾淋组织液联合(B组)、HCLV细胞毒单独(C组)及生理盐水(对照组)免疫仔猪,应用流式细胞术、淋巴细胞增殖试验及ELISA方法测定免疫前后外周血淋巴细胞(PBL)亚类比值、PBL非特异性(NSI)及特异性(SSI)刺激指数、IFN-γ浓度。结果显示免疫后各组CD3+/PBL与CD3+CD8+/PBL差异不显著;CD3+CD4+/PBL于第7 d时A、B和对照组显著高于C组(p<0.05);CD3+CD4+/CD3+CD8+于第7 d、14 d时A、B和对照组显著高于C组(p<0.05),并且C组CD3+CD4+/CD3+CD8+显著降低(p<0.05);NSI于第3 d、7 d时A与B组显著高于C组(p<0.05),而C组显著高于对照组(p<0.05);SSI于第3 d、7 d时A组显著高于B与C组(p<0.05),而B与C组显著高于对照组(p<0.05);IFN-γ含量由高至低依次为:A、B、C和对照组,并且于第3 d、7 d时差异显著(p<0.05)。研究结果表明,HCLV细胞毒引起机体CD3+CD8+相对更快速增殖,而HCLV脾淋毒引起机体CD3+CD4+相对更快速增殖及NSI、SSI、IFN-γ浓度更高,脾淋毒与细胞毒可能侧重不同的免疫分子途径发挥免疫保护效力;兔脾淋组织液对NSI和IFN-γ浓度具有增强作用。