彗星电泳法在植物原生质体凋亡检测中的应用

应用中性法彗星电泳检测烟草（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．）原生质体的凋亡。结果表明，彗星发生的百分率（彗星率）和发生核质固缩及“核着边”（凋亡形态学标志）的细胞的百分率之间存在明确的相关性。利用标准的细胞凋亡检测手段，包括ＤＮＡｌａｄｄｅｒｉｎｇ及核糖核酸末端转移酶介导的ｂｉｏｔｉｎｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ），都证明这种彗星电泳法可以用来比较精确地检测植物原生质体的凋亡。

彗星电泳检测细胞DNA损伤应用新进展

彗星电泳是近年发展起来的一种测定单个细胞DNA损伤的方法 ,因其操作简单、快速及灵敏等特点 ,应用范围十分广泛 .着重介绍了这一技术的发展。

彗星电泳法检测H_2O_2对人淋巴细胞DNA损伤及其激光扫描共聚焦显微境下的观察和三维重建

目的 :应用彗星电泳法于荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下观察人淋巴细胞经H2O2 作用后的DNA损伤情况。 方法 :人淋巴细胞经不同浓度H2O2(0、10、20、40、80μmol/L)作用20min,或20μmol/LH2O2 作用不同时间(0、10、20、30min)后 ,采用彗星电泳法 ,荧光显微镜下观察、照相 ,对尾长、总彗星长度、尾距进行测量和分析。同时采用激光共聚焦显微镜(LSCM)进行观察和三维重建 ;比较了不同染料(PI、AO、EB、Hochest33258)的染色效果。 结果 :H2O2 作用浓度为0、10、20、40、80μmol/L时 ,尾距( x- ±s)分别为0.001±0.002、0.31±0.35、1.23±0.96、2.82±1.38、3.52±0.96(P<0.01) ;作用时间为0、10、20、30min时 ,尾距( x- ±s)分别为0.05±0.09、0.22±0.30、1.62±0.93、1.89±1.09(P<0.01)。尾长、总彗星长度也有显著性增加 ,经统计学检验 ,P<0.01。与荧光显微镜相比 ,LSCM下的"彗星"轮廓十分清晰 ;PI和EB染色效果较好。 结论 :H2O2 能剂量依赖性和时间依赖性地导致人外周血淋巴细胞DNA的明显断裂损伤。利用LSCM构建"彗星"的三维图像将更有利于DNA损伤的准确测量。鉴于染色效果的差异 。

毒鼠强诱导细胞DNA损伤的彗星电泳检测

目的 研究毒鼠强对小鼠淋巴细胞和脑细胞DNA的损伤作用。方法 分离健康小鼠的淋巴细胞和脑细胞 ,以彗星电泳的方法测定不同浓度毒鼠强处理后的细胞DNA损伤。结果 1/2 0～ 1/2LD50 剂量组的毒鼠强均可引起淋巴细胞和脑细胞不同程度的DNA损伤 ,与对照组呈极显著性差异 (P <0 0 0 1)。结论 毒鼠强引起细胞DNA断裂损伤 ,并呈现明显的剂量 -效应关系。

大鼠死后骨骼肌细胞核DNA降解的彗星电泳检测

目的探讨彗星电泳检测大鼠死后骨骼肌细胞核DNA降解碎片与死后时间的关系。方法建立SD大鼠死亡模型,18只雌性大鼠断颈处死,在25.1℃分别于死后6、12、24、36、48、60提取大鼠骨骼肌组织进行彗星电泳,荧光显微成像系统采集图像,同时获取多个分析参数(Comet4.0),并进行统计学处理。结果在死后6～48h,彗星尾长(TL)在死后各时间点的均数依次为11.56±0.10、17.76±0.18、18.82±0.21、21.68±0.18和23.33±0.07;Oliver尾矩(TM)在各时间点的均数依次为1.63±0.46;2.12±0.90;2.15±1.03;2.22±0.76;3.35±0.80;尾DNA(TDNA)在各时间点的均数依次为29.57±8.42;32.36±10.92;30.11±12.55;37.81±12.03;54.76±8.60。结论细胞DNA降解随着死后时间的延长而增加;彗星尾长用于推断死后时间优于Oliver尾矩和尾DNA。

彗星电泳判断川陈皮素诱导的A549细胞死亡方式

目的:探讨川陈皮素诱导的A549细胞死亡方式。方法:40、80μg/ml的川陈皮素分别处理A549细胞12、24、46h后,用彗星电泳法来检测DNA的损伤情况,并判断细胞的死亡方式。结果:40μg/ml的川陈皮素能诱导A549细胞凋亡,而80μg/ml的川陈皮素则诱导A549细胞坏死。结论:当川陈皮素作用剂量较小时,以诱导A549细胞凋亡为主;而当作用剂量较大时,则以诱导坏死为主。

彗星电泳检测^12C^6＋离子束辐照人类肝L02细胞的DNA损伤效应

以传能线密度为30keV/μm的12C6+离子束辐照人类肝L02细胞,利用彗星电泳技术检测了以DNA链断裂为生物终点的DNA辐射损伤效应。CASP软件分析彗星图像,主要检测尾部DNA(TDNA%)、彗星全长(CL)、尾长(TL)、尾矩(TM)和Olive尾矩(OTM)等指标,SPSS11.5软件进行统计学分析,绘制并拟合TM-剂量曲线。结果显示,辐照以剂量依赖的方式引起L02细胞彗星图像各指标的增大,且TM值与剂量线性正相关。说明12C6+离子束对DNA有较强的致损伤效应,且与剂量正相关。研究为正确评价重离子对人体正常组织的辐射风险及危害提供了一定的基础数据和依据。

彗星电泳检测肿瘤细胞对快中子放射治疗敏感性的研究

目的：探讨彗星电泳方法检测肿瘤细胞对p(35)Be快中子的辐射敏感性的可行性。方法：用彗星电泳方法检测人四种肿瘤细胞受p(35)Be中子照射后细胞经30分钟修复时DNA损伤残留率：细胞集落存活法检测1Gy快中子照射后细胞存活率。结果：1Gy快中子照射后四种细胞存活率（SF1）与细胞经30分钟修复后的残留率之间存在明显的负相关（R＝－0．99）。结论：本实验方法很有可能成为一种快速、准确检测肿瘤细胞对p(35)Be快中子治疗的辐射敏感性的方法。

彗星电泳法和K-SDS法检测甲醛和H_2O_2对人脐静脉内皮细胞DNA的损伤

背景与目的:研究甲醛、H2O2以及两者共同作用对人脐静脉内皮细胞DNA的损伤。材料与方法:①应用彗星电泳法于荧光显微镜下观察人脐静脉内皮细胞经甲醛、H2O2、甲醛和H2O2不同浓度(0、5、10、25、50、100 μmol/L)作用20 min或25 μmol/L浓度作用不同时间(0、10、20、30 min)后的DNA损伤情况;②用K-SDS法检测甲醛、甲醛和H2O2不同浓度(0、10、50、100、500、1 000、2 000 μmol／L)或50 μmol／L、100 μmol／L浓度不同时间(0、0.5、1、1.5、2、4 h)引起的DNA-蛋白质的交联效应。结果:①彗星电泳结果:内皮细胞与不同浓度甲醛孵育20 min,5、10、25 μmol／L甲醛所致DNA损伤以断裂为主且与阴性对照有统计学意义(P<0.05);与等摩尔H2O2共同孵育时,5、10、25μmol／L浓度组均可使单独H2O2作用时的彗星尾距增加,50、100 μmol／L使单独H2O2作用时的彗星尾距减小;25μmol／L甲醛作用不同时间,尾距随时间增加而增大(P<0.05)。②交联结果:内皮细胞与不同浓度甲醛孵育1.5 h后,引起DNA-蛋白质交联(DPC)形成明显增高(P<0.05);与等摩尔H2O2共同孵育时除1 h组(P<0.05),其余各组与阴性对照无统计学差异;50 μmol／l的甲醛作用不同时间,2 h组与阴性对照有统计意义(P<0.05);100 μmol／L的甲醛、甲醛与H2O2作用不同时间,各?

彗星电泳检测草胺磷对蚯蚓体腔细胞DNA的损伤

【目的】探讨草胺磷对土壤动物的影响,以蚯蚓为受试动物,在实验室环境下,采用彗星电泳技术检测不同浓度草胺磷胁迫对蚯蚓体腔细胞DNA损伤的程度。【方法】草胺磷质量浓度设定为0、37.5、75、150、300 mg/L,胁迫时间24 h,取头部DNA含量、尾部DNA含量、尾长、尾矩、Olive尾矩5个参数分析DNA损伤程度。【结果】电泳结果显示,与空白对照比较,5个参数在4个草胺磷处理中都有显著差异;随草胺磷浓度升高,尾部DNA含量、尾长、尾矩、Olive尾矩随之升高,头部DNA含量随之降低,草胺磷胁迫引起了蚯蚓体腔细胞DNA的损伤,草胺磷浓度越高,DNA损伤越严重。随后降低草胺磷浓度,延长胁迫时间至96 h,得到相似结果。【结论】草胺磷会引起土壤动物蚯蚓体腔细胞DNA的损伤,草胺磷浓度与蚯蚓体腔细胞DNA损伤程度两者间存在显著的剂量-效应关系。

有机玻璃刻痕增强彗星电泳的凝胶粘附能力

目的:增强凝胶在支持物上的粘附能力,防止彗星电泳时脱胶。方法:Jurkat细胞株与凝胶液混和,涂抹专用检测载玻片和刻痕有机玻璃片,然后进行常规彗星凝胶电泳,荧光显微镜下分析DNA损伤。结果:刻痕有机玻璃片防脱胶率96.8%,与专用试剂盒载玻片没有统计学差异(P>0.05),刻痕有机玻璃片不影响电泳效果。结论:刻痕有机玻璃可用来进行彗星电泳,检测细胞DNA损伤。

应用DNA彗星电泳法检测辐照食品

[目的]通过彗星电泳法检测样品单细胞DNA损伤从而鉴别辐照食品。[方法]选取12种食品基质,经1KGy、3KGy、5KGy、7KGy、10KGy剂量辐照后,进行彗星电泳检测,并对检测时效性进行研究。[结果]除熟制鸡肉外,其他样品均可通过彗星电泳法检测到辐照状况,检测灵敏度达1KGy辐照剂量;辐照产生的DNA损伤具有明显的剂量-效应关系,以TL、TDNA%指标分析存在平台期,以TM、OTM指标分析则不存在平台期;辐照后6h-5d均可检测到明显的彗星图像。[结论]彗星电泳法适用于除熟制食品外的含DNA食品的辐照检测,方法稳定性好,检测灵敏度高。

山东济宁辐射事故受照人员生物剂量估算及彗星电泳检测分析

目的探索特大剂量照射后外周血和骨髓染色体培养方法，拟合6Gy以上大剂量照射染色体双着丝点＋环剂量-效应曲线，对山东济宁“10．21”事故受照者进行准确生物剂量估算和DNA损伤检测。方法采集2例受照者外周血和骨髓细胞，制备染色体标本，计数双（多）着丝点＋环数目；用正常离体人血拟合6～22Gy双＋环剂量效应曲线及数学方程；对2例事故受照者进行生物剂量估算。用碱性单细胞凝胶电泳方法检测受照者外周血DNA损伤。结果B的外周血染色体双＋环平均数为4．47个／细胞；A的外周血培养无分裂细胞，骨髓染色体双＋环平均数为9．15个／细胞。用6—22Gy剂量效应方程估算全身平均受照剂量，B为9．4Gy，A为19．5Gy。单细胞凝胶电泳可见2例受照者的多数彗星细胞呈小头大尾形状。结论用新建立的6～22Gy染色体畸变剂量效应曲线估算2例受照者的生物剂量，已分别达到极重度骨髓型放射病和肠型放射病水平。

紫外辐射诱导烟草原生质体中DNA损伤的彗星电泳检测

以烟草原生质体为材料,采用彗星电泳检测用0.5W·m-2紫外线以不同时间(0、5、10、30、60和120s)诱导的烟草原生质体中DNA的损伤。结果表明,在0～10s的时间内代表DNA损伤程度的尾矩、Olive尾矩等参数与紫外线照射时间具有良好的时间依赖关系。本文建立的烟草原生质体体系采用彗星电泳技术,可以快速而灵敏地检测紫外线对植物细胞的损伤程度。

“彗星”电泳法在DNA损伤与修复检测中的应用

单细胞琼脂电泳(SCGE,Single Cell Gel Electrophoresis)又称彗星电泳法(COMET ASSAY)是一种操作简便、快速、敏感性高的DNA损伤与修复的检测技术。该方法在检测放射和化学性致癌、致突变物质所引起的DNA损伤方面有其独特的优点:1)此法无需复杂的实验条件,;2)样品分析只需4～6小时,为现场调查和大生物样本的研究提供了可能性;3)此法检测的是单细胞的DNA损伤,比以前已知的各种细胞水平的致突变检测方法更为敏感;4)所需样品量小,外周血只需30μl左右;5)无需放射性示踪剂,因此突破了传统的局限。

SD大鼠连续灌胃给药对碱性彗星电泳和骨髓微核的影响

目的:开展SD大鼠3天重复经口灌胃给药毒性实验,联合肝、肾和外周血碱性彗星电泳试验和骨髓微核试验,并对遗传毒性试验常用的溶媒及阳性化合物进行检测和比较。通过对比相同实验条件下开展的以染色体损伤和DNA断裂为检测终点的组合遗传毒性试验结果,为给药和取材时间点以及阳性剂的选择提供参考依据。方法:雄性SD大鼠随机分为去离子水组、0.9%氯化钠注射液组、玉米油组、环磷酰胺(CPA)10 mg·kg^(-1)组、环磷酰胺(CPA)40 mg·kg^(-1)组、N-乙基-N-亚硝基脲(ENU)40 mg·kg^(-1)组和甲磺酸乙酯(EMS)200 mg·kg^(-1)组,每组5只。连续3 d灌胃给药,实验期间记录动物临床症状和体重变化。末次给药后3 h处死大鼠。称量肝、肾脏器重量,并收集肝、肾及外周血制备单细胞悬液开展多脏器碱性彗星试验。样本制片后分别经裂解、解旋、电泳、染色等步骤,使用Komet 6.0软件进行图像分析;取材同时收集骨髓细胞制作涂片,计数2 000个嗜多染红细胞(PCE)的含微核细胞发生率。结果:1)CPA、ENU和EMS均未对动物整体产生严重的毒性作用。2)只有EMS组的肝细胞、肾细胞和淋巴细胞的刺猬细胞百分率明显升高,CPA及ENU对刺猬细胞百分率无明显影响。ENU组在3种组织的彗尾DNA含量百分率及Olive尾矩与溶媒对照组比较为弱致DNA断裂作用;而EMS则在3种组织中均显示了强致DNA断裂作用。3)CPA作为经典的骨髓微核试验阳性剂,其微核结果显示了一定的剂量相关性;ENU的致微核作用相对较弱。结论:将多脏器彗星试验与微核试验与3天重复给药毒性实验整合是可行的;实验流程的标准化、阳性剂的选择及实验设计等需根据具体情况来设计。

血细胞彗星电泳在遗传毒性评价中的应用(英文)

目的:用彗星实验检测不同种类化学物在单细胞水平上DNA的损伤情况。方法:体外彗星实验。结果:L-4氧代赖氨酸及10-羟基喜树碱不能直接引起DNA的损伤。ST1435剂量高达4mmol·L^(-1)时才能对DNA产生损伤。二甲基亚砜,作为一种常用溶剂,当其浓度小于2％时,不增加对DNA的损伤,但当浓度≥4％时,可产生具有剂量-效应关系的DNA损伤。博莱霉素和丝裂霉素对DNA有强的剂量-效应关系。结论:慧星实验作为检测可疑化合物遗传毒性的工具,具有快速,灵敏,简单,重复性好及价廉的优点。

单细胞凝胶电泳技术检测DNA损伤的方法及进展

单细胞凝胶电泳技术是一种常见的检测DNA损伤的技术,它具有灵敏度高、经济、简便、快速等优点。近30年来,这种技术被广泛地应用于遗传毒理、环境监测、医学诊断、营养研究上。单细胞凝胶电泳技术不单单能检测DNA断裂损伤,在加入断裂剂或者特异性内切酶后,可以检测到DNA交联和紫外线诱导的嘧啶二聚体,氧化碱基和烷基化损伤。近些年单细胞凝胶电泳与荧光原位杂交技术相结合后更是拓宽了它的应用范围,对常规和非常规的单细胞凝胶电泳技术及其操作方法进行了归纳总结,并讨论了它的发展前景。

用彗星实验和微核实验检测地面水污染的遗传毒性效应

目的探索应用彗星实验(单细胞凝胶电泳技术,SCGE)测定鲤鱼红细胞DNA损伤以评价地面水污染遗传毒性效应的可行性。方法应用单细胞凝胶电泳和微核实验对污染指数(PI)不同的5种河流中采集的鲤鱼的红细胞DNA损伤和微核率进行测定。结果5种地面水水源中的鲤鱼红细胞DNA损伤情况不全相同,与阴性对照组比较差异有显著性(P<0.05),与污染严重程度呈正相关,趋势与微核实验一致。结论SCGE测定鲤鱼红细胞DNA损伤,可以检测地面水的污染状况。

应用微核试验和单细胞凝胶电泳技术检测农药对蜘蛛的遗传毒性

应用蜘蛛血细胞微核试验和单细胞凝胶电泳试验研究了两种杀虫剂——吡虫啉和阿维菌素对蜘蛛头胸部和腹部的遗传毒性。结果表明:各供试浓度吡虫啉和阿维菌素对蜘蛛血细胞微核率均有明显影响,与对照组相比有显著性差异(P<0.05,P<0.01);且随着两种农药浓度升高,血细胞微核率显著增加,存在明显的剂量效应关系(吡虫啉浓度与星豹蛛头胸部血细胞微核率相关系数r=0.672 8,腹部为r=0.800 6;阿维菌素与星豹蛛头胸部血细胞微核率相关系数r=0.989 9,腹部为r=0.985 8)。吡虫啉和阿维菌素对星豹蛛血细胞DNA损伤有明显的剂量效应关系(吡虫啉浓度与星豹蛛头胸部血细胞DNA损伤相关系数r=0.948 2,腹部为r=0.970 4;阿维菌素与星豹蛛头胸部血细胞DNA损伤相关系数r=0.978 1,腹部为r=0.975 6)。两种农药在同一浓度下,对星豹蛛腹部血细胞微核率和DNA损伤程度明显大于头胸部。