基于机器视觉的微孔板液位检测研究

在使用人工检测微孔板的多孔液位时耗时费力、准确率低下,针对此问题提出一种基于机器视觉的微孔板液位检测方法。通过设计相机采集角度、打光方式等搭建视觉检测系统并采集到清晰的单排液位图像;基于零均值归一化互相关的匹配原理,设计算法对中值滤波后的图像进行位姿校正,结合液位图像重心定位8个单孔液位位置;设定相似度双阈值实现对液位的检测,并对不规则液位图像加入掩码进行二次匹配检测。通过实验验证,该方法对溶液容积变化范围为-10~10μL及以上的液位检测准确率达100%,满足检测微孔板液位的准确性需求。

微孔板法测定乳粉中叶酸含量的不确定度分析

目的:对微孔板法测定乳粉中叶酸含量的不确定度进行分析评估。方法:按GB 5009.211—2022中微孔板法测定婴儿配方乳粉中叶酸含量,依据JJF 1059.1—2012、CNAS-CL01-G003:2021和CNAS-GL05:2011等不确定度评定方法和指南对影响检测结果的各种试验因素进行分析、计算,得到合成标准不确定度及扩展不确定度。结果:扩展不确定度U 95=22.08μg/100 g(k=2),样品中叶酸含量为(282.33±22.08)μg/100 g。不确定度主要来源于接种微孔板过程、标准曲线拟合和测量重复性。结论:移液器的准确度和微生物因素对试验结果影响较大,需保证仪器质量并严格按照标准化流程操作以降低不确定度。

微孔板式微生物法测定婴幼儿配方乳粉中叶酸、泛酸和生物素含量

目的建立微孔板式微生物法测定婴幼儿配方乳粉中的叶酸、泛酸和生物素含量的方法。方法按照国标方法分别提取婴幼儿配方乳粉中的叶酸、泛酸和生物素,在96孔微孔板中接种含有相应测试菌悬液的培养基,再分别加入标准系列溶液和试样提取液,培养后用酶标仪测定吸光度,根据标准曲线分别计算试样中的叶酸、泛酸和生物素含量,并考察测定方法的检出限、精密度和加标回收率。结果叶酸、泛酸和生物素标准曲线的相关系数均大于0.999,检出限分别为0.10μg/100 g、0.013 mg/100 g、0.57μg/100 g,相对标准偏差(relative standard deviations,RSDs)分别为1.02%、0.94%、1.08%,加标回收率分别为94.6%~100.0%、95.3%~103.3%、94.5%~100.1%。结论该微孔板方法操作简单、成本较低,结果准确性和重现性良好,适用于婴幼儿配方乳粉中叶酸、泛酸和生物素含量的大批量检测。

用紫外-荧光微孔板酶检测技术测定两种土壤的酶活性

【目的】土壤酶活性是土壤质量的重要指示指标,本文对土壤酶的快速检测方法进行了探讨。【方法】采用荧光微孔板酶检测技术,测定土壤硫酸酯酶、磷酸酶、β-葡萄糖苷酶和肽酶活性,采用紫外微孔板酶检测技术测定多酚氧化酶和过氧化物酶活性。【结果】结果表明,采自农田的赤红壤的硫酸酯酶、磷酸酶和肽酶活性高于紫色土和采自矿山的赤红壤的相应的酶活性;矿山赤红壤的多酚氧化酶和过氧化物酶活性在三者中最高;紫色土的β-葡萄糖苷酶活性高于赤红壤的β-葡萄糖苷酶活性。【结论】紫外-荧光微孔板酶检测技术可快速测定土壤中酶的活性。

微孔板荧光法对土壤糖酶活性的测定研究

应用荧光共轭物质作为底物,将96微孔板和荧光检测法结合进行稻-麦轮作系统CO2倍增条件(FACE)下土壤两种糖酶(木聚糖酶和纤维素酶)活性的测定,探讨了微孔板结合荧光法测定糖酶活性的可行性。结果表明,此种方法可以灵敏的检测到土壤稀释液中的糖酶活性,测定结果重现性较好(变异系数最大为4.879%)。与传统的分光光度法相比,是一种准确、快速、简便的土壤糖酶活性测定方法。CO2倍增条件下土壤木聚糖酶活性高于自然条件,且在小麦的拔节期,抽穗期和成熟期及水稻的抽穗期和成熟期显著高于对照(P<0.05),CO2浓度升高提高作物的生长代谢水平,进而影响微生物活性造成土壤木聚糖酶活性提高。纤维素酶活性在CO2倍增条件下未发生显著变化,说明土壤纤维素酶在短时期内对CO2增加的响应不显著。

一种用微孔板筛选alpha-葡萄糖苷酶抑制剂的方法(英文)

目的：建立敏感的微孔板方法检测alpha-葡萄糖苷酶抑制活性，以进行抑制剂体外高通量筛选。方法：调整酶和底物适当配比，通过标准曲线、波长扫描、动力学分析以及最佳反应条件的研究，用阿卡波糖验证所建方法。结果：确定反应步骤，96孔板，160μl体系含2．5mmol·L^(-1)PNPG和0．2U·ml^(-1)alpha-葡萄糖苷酶，37℃，pH7．0反应15min，400 nm检测，此法正确、可靠。结论：本文所述用小体积样品筛选得到大量抑制剂的方法，利于从天然产物中开发改善餐后血糖的糖尿病及其并发症治疗药物。

植物总抗氧化能力的微孔板定量测定及评价

目的结合动力学曲线分析评价植物中常见的天然抗氧化物对2,2-二苯基苦基苯肼自由基(DPPH·)的清除能力和反应动力学特点。方法光谱扫描分析DPPH·的吸收特性;采用96微孔板结合酶标仪的微孔板定量法(micro-plate quantification,MQ)分析测定维生素C、绿原酸、药食两用木瓜、橙子、芒果和樱桃对DPPH·的清除能力和动力学曲线,以单位质量(g)或体积(ml)的样品清除DPPH·的量(μg)为总抗氧化能力值(total antioxidative capability,TAC)表示。结果DPPH·在酶标仪的490nm检定波长上有显著吸收峰;维生素C和绿原酸纯品验证了MQ对复合抗氧化物清除DPPH·效能的加合性;根据各动力学曲线特征确定了不同果汁在清除DPPH·反应达到稳定态时的最大TAC(μgDPPH·/ml):木瓜汁87.23(P<0·05),芒果汁62.556(P<0·05),甜橙汁58.778(P<0·05),樱桃汁49.072(P<0·05)。结论采用MQ测定方法,比传统经典方法试剂耗量小、批次处理量大,以及能同时分析评价多样品之间清除DPPH·的差异特性,为评价比较不同植物的总抗氧化能力提供了更快捷的方法。

食源致病菌96微孔板DNA诊断芯片的研制及在一起食物中毒突发事件中的应用

目的研制能同时检测9种常见食源致病菌的96微孔板DNA诊断芯片。方法针对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157:H7(Stx1和Stx2)、志贺氏菌、产单核细胞李斯特菌、蜡样芽胞杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌、副溶血弧菌、霍乱弧菌等9种最常见的食源性致病菌,首先选择合适的保守基因,设计种特异性的PCR引物(5'端标记生物素)和检测探针,通过参数优化建立一管多重PCR扩增体系;然后按5×5的阵列格式将探针点制到96微孔板的微孔内,通过条件优化建立稳定的PCR产物与固化探针的微孔杂交体系;采用链霉抗生物素蛋白碱性磷酸酶和化学显色底物NBT/BCIP来检测特异性的PCR杂交产物。结果20株标准菌株验证已建立的食源致病菌微孔板DNA诊断芯片,获得比较特异和稳定的实验结果。在一起食物中毒事件中,该芯片在采样后12h内检出金黄色葡萄球菌,与传统的细菌分离培养和生化鉴定的结果相符。结论本研究建立的新型食源致病菌96微孔板DNA诊断芯片具有快速、准确、自动化和高通量等特点,为快速应对食物中毒等突发公共卫生事件提供了非常有价值的检测技术。

紫外线辐照聚苯乙烯微孔板用于酶免疫测定的研究与表征

以重组人钙调素 (rhCaM )、亲环素 (rhCyP)、心磷脂和双链DNA (dsDNA)为包被抗原 ,建立了检测针对上述 4种抗原自身抗体的间接ELISA方法 ,并对聚苯乙烯微孔板 (PS)紫外线 (UV)辐照前后进行了对比研究 .结果发现 :PS板经UV 辐照后 ,可显著改善酶免疫分析的测定效果 ,自身抗体的测定敏感度和重复性均有显著提高 .原子力学显微镜 (AFM)表征结果则提供了改善酶免疫分析的直接证据 ,抗原分子均匀平铺于UV 辐照的PS基底表面 ,而未经辐照的PS板则抗原分子的吸附率低 ,且分布不均并有成团聚集现象 .X射线光电子能谱 (XPS)分析表明 ,PS板经UV 辐照后 ,基底表面发生了氧化并引入了含氧的活性基团 ,O/C元素比较辐照前提高了 6 9倍 ,改善了对抗原生物分子的亲水和化学反应性能 ,此亦即UV

微孔板法检测番茄灰霉病菌对杀菌剂的敏感性

【目的】利用酶标仪建立番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)对杀菌剂敏感性的快速、高效测定方法。【方法】以OD增加值作为评价指标,确立微孔板法检测灰霉病菌敏感性的测试条件,并对啶酰菌胺、嘧菌酯、乙霉威、甲基硫菌灵、异菌脲、苯醚甲环唑6种常用杀菌剂对灰霉病菌孢子萌发和菌丝生长的抑制效果进行评价,将结果与孢子萌发法和菌丝生长速率法所得结论进行比对。【结果】微孔板法测定条件为:酶标仪测定波长为630nm,测试培养基为灰霉分生孢子萌发刺激液(PDE),孢子悬浮液浓度为8×105—1.6×106个/mL,培养条件为21℃黑暗条件下振荡(150 r/min),孔中加入孢子悬浮液与药剂培养24 h作为药剂对孢子萌发抑制作用的测试时间,孔中孢子悬浮液培养12 h后再加入药剂培养12—24 h为药剂对菌丝生长抑制作用的测试时间。测试结果与孢子萌发法和菌丝生长速率法所得结论基本一致。用该方法测得啶酰菌胺对山东省3个地区57株灰霉病菌分生孢子萌发及菌丝生长的EC50均值分别为1.9311和5.6488μg.mL-1。【结论】微孔板法综合了孢子萌发法和菌丝生长速率法的优势,测试速度快、结果准确、重现性好,具有良好的实用性。

微孔板杂交法测定椰毒假单胞酵米面亚种的DNA-DNA同源性

采用一种新的DNA DNA杂交方法—微孔板法对椰毒假单胞菌酵米面亚种及伯克霍尔德氏菌属中 1 1个种的DNA DNA同源性进行测定。结果发现椰毒假单胞菌酵米面亚种与唐菖蒲伯克霍尔德氏菌及椰毒伯克霍尔德氏菌的DNA DNA同源性均大于 75% ,建议这 3个种应合并为同一个种 ,命名为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌 (Burkholderiagladioli)。

微孔板试剂盒法检测婴幼儿配方奶粉中叶酸质量分数

研究如何提高微生物法测定叶酸的准确性和稳定性。对微生物法测定叶酸的关键控制点、主要影响因素进行探讨分析。采用IFP微孔板试剂盒检测婴幼儿配方奶粉中叶酸质量分数,相对传统微生物方法具有操作方法简便、结果准确、重复性好的特点。

激光共聚焦显微镜和改良微孔板法观察细菌生物膜形成

目的利用激光共聚焦显微镜(CLSM)和改良微孔板法观察细菌生物膜形成,探索细菌生物膜检测的有效手段。方法烧伤患者植入性导管分离的金葡菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌,经体外分别培育24、48、72h和5d后,先后用CLSM和改良微孔板法,观察细菌生物膜形成和黏附的过程与特点。结果鲍曼不动杆菌、金葡菌、铜绿假单胞菌形成生物膜的时间、生物膜的形态与特点都有显著的差异。结论 CLSM和改良微孔板法是观察和检测细菌生物膜形成过程的有效手段。

用微孔板改良凝聚胺法交叉配血试验的效果评价

目的建立一种简便、快速的无须离心的微孔板凝聚胺法(以下简称微孔板法)进行交叉配血。方法将传统的凝聚胺法改进,采用自制的微孔板替代传统的试管,省去离心进行输血前交叉配血。结果将微孔板法同手工凝聚胺法灵敏度进行比较,两者检测抗-D、抗-E结果无差异,抗-C手工凝聚胺法稍高于微孔板法(1∶512对1∶256),交叉配血结果两者没有差异。结论微孔板法是一种可行的交叉配血方法。该方法无须试管及离心设备,具有简便快速、经济有效的特点。

聚合酶链反应-微孔板杂交技术检测临床标本中结核分枝杆菌

目的评价聚合酶链反应 (PCR) -微孔板杂交技术检测临床标本中结核分枝杆菌的价值。方法 :应用结核病细菌学涂片、培养常规检测方法及PCR -微孔板杂交技术检测 138例结核病患者痰标本 ,4 2例非结核呼吸系统疾病患者痰标本。结果 :用常规细菌学方法检测临床标本中结核杆菌敏感度为 37% (5 1/ 138) ,用PCR-微孔板杂交技术检测敏感度为 5 6 % (77/ 138) ,高于常规检测法 19%。用PCR -微孔板杂交技术检测临床标本特异性为 10 0 %。结论 :PCR -微孔板杂交技术将PCR扩增、核酸杂交的技术及酶免技术相结合 ,简便、快速、敏感度高、特异性强 ,是结核病辅助诊断的有效方法之一。

微孔板式微生物法测定婴幼儿配方乳粉中泛酸含量

目的采用微孔板式微生物法对婴幼儿配方乳粉中泛酸含量进行测定。方法采用微孔板法将合适浓度的植物乳杆菌液接种至含有试样液与培养液的无菌微孔板中,培养一定时间后测定吸光度值,根据泛酸含量与吸光度值的标准曲线计算出试样中泛酸的含量。通过精密度实验、准确度实验、加标回收实验对此方法进行评价。结果微孔板式微生物法的标准曲线线性良好,相关系数r=0.9965,精密度实验的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为1.90%~5.32%。实验结果表明质控样品的泛酸含量各平行检测值均在定量值范围内,且平均值为6.91 mg/100 g,测定值结果间RSD为1.08%,回收率为89.7%~108.2%。结论该方法操作简便、结果准确,能够降低工作量,提高工作效率,且方法精密度较高,对样品检测结果准确性较高,方法系统误差小,能够应用于实验室对婴幼儿配方乳粉中泛酸含量的测定。

微孔板和分光光度计法检测7种食用菌的抗氧化活性

目的建立微量检测食用菌体外清除二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)活性的方法,并比较常见食用菌的抗氧化活性,为寻找天然抗氧化剂提供初步的筛选方法和技术资料。方法超声提取得到香菇等7种食用菌和火麻仁的提取物后,采用微孔板与分光光度计法测定其DPPH·清除率,然后对这两种方法的测定结果进行曲线拟合,并对实验耗时、试剂用量和方法重复性方面进行对比,进而比较其DPPH·清除活性。结果两种方法所得的DPPH·清除率无统计学差异,但在实验耗时、试剂用量等方面,微孔板法有明显优势。另外,食用菌水提物的抗氧化活性均明显高于醇提物,其中香菇水提物的活性最高。结论微孔板法测定食用菌DPPH·的清除活性时具有准确、快捷、重复性好等特点,而且食用菇水溶性成分的抗氧化活性大于醇溶性成分,可为后续产品的开发提供技术资料。

聚合酶链反应-微孔板杂交作人乳头瘤病毒新亚型分子流行病学研究

目的 了解人乳头瘤病毒 (HPV)新亚型 (注册号 :AF2 76 910 )的分子流行病学特点。方法 PCR 微孔板杂交检测泌尿生殖道标本、宫颈癌石蜡包埋组织、胃癌组织中HPV新亚型 ,结合临床特征了解其致病特点。结果 2 0 2例经HPV通用引物筛查阳性的泌尿生殖道标本中 ,2例HPV新亚型阳性 ,占 0 .1% ;5 1例宫颈癌石蜡包埋组织中 ,3例HPV新亚型阳性 ,占 5 .9% ;15例胃癌组织 ,未测到HPV新亚型。结论 早在 5年前本地区HPV新亚型就已存在 ;HPV新亚型在宫颈癌组织中被测到 ,可能提示其有致癌作用 ,值得进一步研究。