老年急性心肌梗死伴心力衰竭患者血清中Kruppel样因子15、微小核糖核酸128-3p表达与心功能的关系

目的探讨老年急性心肌梗死(AMI)伴心力衰竭患者血清中Kruppel样因子15(KLF15)、微小核糖核酸128-3p(miR-128-3p)表达与心功能的关系。方法纳入2020年8月至2021年8月期间襄阳市襄州区人民医院收治的老年AMI伴心力衰竭患者112例作为AMI伴心力衰竭组,同期选取一般资料相匹配且单纯AMI患者120例作为AMI组,所有患者采用超声心动图进行心功能检测,记录左心室收缩末期内径(LVESd)、左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室射血分数(LVEF);测定患者血清中脑钠肽(BNP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、KLF15、miR-128-3p水平;Pearson法分析老年AMI伴心力衰竭患者血清KLF15、miR-128-3p表达水平与BNP、CK-MB、cTnI、LVESd、LVEDd、LVEF相关性,并分析血清KLF15与miR-128-3p的相关性。结果与AMI组相比,AMI伴心力衰竭组患者miR-128-3p表达水平、BNP、CK-MB、cTnI、LVESd、LVEDd水平升高(t/Z=38.306、5.865、7.997、20.575、16.037、17.368,P<0.05),LVEF、KLF15水平降低(t=24.072、47.301,P<0.05)。AMI伴心力衰竭患者血清miR-128-3p水平随心功能分级升高而升高(F=322.866,P<0.05),KLF15水平随心功能分级升高而降低(F=221.228,P<0.05);老年AMI伴心力衰竭患者血清miR-128-3p表达水平与BNP、CK-MB、cTnI呈正相关(r=0.667、0.525、0.617,P<0.05),与LVEF呈负相关(r=-0.537,P<0.05);血清KLF15表达水平与BNP、CK-MB、cTnI、LVEDd呈负相关(r=-0.531、-0.574、-0.562、-0.416,P<0.05),与LVEF呈正相关(r=0.624,P<0.05)。TargetScan网站预测miR-128-3p与KLF15具有靶向结合位点,Pearson分析显示,老年AMI伴心力衰竭患者血清miR-128-3p与KLF15呈负相关(r=-0.853,P<0.05)。结论老年AMI伴心力衰竭患者血清KLF15降低,miR-128-3p水平升高,均与患者心功能指标具有相关性,可作为判断AMI伴心力衰竭患者心功能的标志物。

LncRNA NEAT1通过miR-195-5p/CEBPA轴促进骨髓瘤细胞增殖和转移机制的实验研究

目的 探究长链非编码RNA(LncRNA)核富集丰富的转录本1(NEAT1)通过miR-195-5p/CCAAT增强子结合蛋白α(CEBPA)轴对骨髓瘤细胞增殖和转移的影响及机制。方法 (1)收集2021年3月~2023年2月在山东省第一医科大学附属聊城市第二人民医院血液内科住院的40例多发性骨髓瘤(MM)患者和10例健康骨髓供者的骨髓单个核细胞(BMNC)及MM细胞系U266,RPMI 8226,NCI-H 929和MM.1S,RT-qPCR和Western blot检测细胞中NEAT1,miR-195-5p,CEBPA mRNA和蛋白水平。(2) U266细胞分为过表达NEAT1组(NEAT1组)及其对照组(NC组)、敲低NEAT1表达组(sh-NEAT1组)及其对照组(sh-NC组)、过表达NEAT1和miR-195-5p组(NEAT1+miR-195-5p组)及其对照组(NEAT1+miR-NC组)、过表达miR-195-5p和CEBPA组(miR-195-5p+CEBPA组)及其对照组(miR-195-5p+NC组)。CCK-8和5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)染色检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;RT-qPCR检测细胞中NEAT1,miR-195-5p,CEBPA mRNA水平;Western blot检测细胞中CEBPA,Ki67,增殖细胞核抗原(PCNA),基质金属蛋白酶(MMP)-2,MMP-9,磷脂酰肌醇3激酶(PI3K),p-PI3K,蛋白激酶B(AKT),p-AKT,雷帕霉素靶蛋白(mTOR),p-mTOR蛋白水平。(3) 20只裸鼠分为敲低NEAT1表达组(sh-NEAT1组)及其对照组(sh-NC组),每组各10只。裸鼠皮下注射相应已转染的U266细胞悬液,四周后测定移植瘤各项指标差异。结果 (1)与正常BMNC相比,MM患者和MM细胞系中NEAT1,CEBPA mRNA和蛋白水平升高,miR-195-5p水平降低,差异具有统计学意义(t=11.697,9.272,4.352,11.639,均P<0.05)。(2)过表达NEAT1后,与NC组比较,NEAT1组细胞NEAT1,CEBPA mRNA和蛋白水平升高,miR-195-5p水平降低(t=12.825,5.874,13.893,4.797);细胞培养72h A值、EdU阳性率升高,细胞迁移、侵袭数增多(t=9.425,5.632,8.841,5.364);Ki67,PCNA,MMP-2,MMP-9,p-PI3K/PI3K,p-AKT/AKT,p-mTOR/mTOR蛋白水平升高(t=14.227,7.743,7.348,7.803,8.714,8.629,7.359),差异具有统计学意义(均P<0.05);敲低NEAT1表达后,与sh-NC组比较,sh-NEAT1组细胞NEAT1,CEBPA mRNA和蛋白水平降低(t=5.776,5.001,4.503),miR-195-5p水平升高(t=4.456),细胞迁移、侵袭能力降低(t=6.204,8.792),差异具有统计学意义(均P<0.05);过表达miR-195-5p能够部分逆转过表达NEAT1对细胞上述指标的影响,差异具有统计学意义(t=4.356~10.809,均P<0.05);过表达CEBPA能够部分逆转过表达miR-195-5p对细胞上述指标的影响,差异具有统计学意义(t=4.329~14.452,均P<0.05)。(3)敲低NEAT1表达能够抑制裸鼠移植瘤生长,差异具有统计学意义(t=5.175~18.190,均P<0.05)。结论 LncRNA NEAT1通过靶向miR-195-5p/CEBPA表达促进MM细胞增殖和转移,其可能通过激活PI3K/AKT/mTOR通路发挥作用。

微小RNA-378-5p对胶质瘤血管生成的影响

目的 探讨微小RNA(miR)-378-5p对胶质瘤血管生成的作用及其分子机制。方法 qRTPCR检测胶质瘤细胞miR-378-5p的表达水平。ELISA检测肿瘤细胞上清液中血管内皮生长因子A(VEGFA)的含量。收集胶质瘤细胞上清液并制成条件培养基培养HUVECs,采用CCK-8、Transwell实验和小管形成实验检测HUVECs增殖、迁移、侵袭和血管形成能力的影响,评估miR-378-5p对HUVECs生物学行为的影响。结果 在4个胶质瘤细胞中U251的miR-378-5p表达量最高,而U87 MG的表达量最低。miR-378-5p表达量高的肿瘤细胞,其条件培养基可显著促进HUVECs增殖、迁移、侵袭和血管生成。反之,降低肿瘤细胞miR-378-5p的表达量,其条件培养基促进HUVECs增殖、迁移、侵袭和血管生成的能力显著下降。ELISA结果显示miR-378-5p促进胶质瘤细胞释放VEGF-A。使用VEGF-A中和抗体干预条件培养基后,HUVECs迁移、侵袭和血管生成能力显著下调。反之外源性添加VEGF-A则可以显著提高HUVECs、迁移、侵袭和血管生成能力。结论 miR-378-5p通过增加胶质瘤细胞释放VEGF-A,进而促进HUVECs增殖、迁移、侵袭和血管生成。

外周血单个核细胞中微小RNA200c-3p、核因子κB mRNA和膜联蛋白-5 mRNA对儿童哮喘诊断价值的比较研究

目的比较外周血单个核细胞(PBMCs)中微小RNA200c-3p(miRNA-200c-3p)、核因子κB(NF-κB)mRNA和膜联蛋白-5(ANX-5)mRNA对儿童哮喘的诊断价值。方法纳入2022年12月至2023年12月间在唐山市妇幼保健院儿科就诊的95例哮喘儿童作为哮喘组,并分成轻度组(30例),中度组(36例),重度组(29例),同期来该院体检健康儿童40例为对照组。使用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测单个核细胞中miRNA-200c-3p、NF-κB mRNA和ANX-5 mRNA的表达量。测量肺功能、1s用力呼气量(FEV 1)、用力肺活量(FVC)、最大呼气流量(PEF)及FEV 1/FVC值。采用Spearman分析miRNA-200c-3p、NF-κB mRNA和ANX-5 mRNA与肺功能的相关性。使用受试者工作特征(ROC)曲线比较miRNA-200c-3p、NF-κB mRNA和ANX-5 mRNA对哮喘的诊断价值。结果miRNA-200c-3p和NF-κB mRNA表达水平在重度组、中度组、轻度组及对照组间差异显著(F=12.58和14.81,P<0.01),并依次降低。ANX-5 mRNA表达水平在四组间差异显著(F=16.34,P<0.01),并依次升高。哮喘患儿单个核细胞中miR-200c-3p和NF-κB mRNA,与FEV 1、PEF、FEV 1/FVC均呈负相关(r介于-0.80~-0.48,P<0.05),ANX-5 mRNA与FEV 1、PEF、FEV 1/FVC呈正相关(r介于0.48~0.83,P<0.001)。ROC曲线显示,外周血PBMCs中miR-200c-3p诊断儿童哮喘的AUC为0.858,敏感度为0.760,特异度为0.893,截断值为2.24,高于NF-κB mRNA和ANX-5 mRNA单独诊断儿童哮喘。结论单个核细胞中miRNA-200c-3p对儿童哮喘的诊断效能优于NF-κB mRNA及ANX-5 mRNA单独诊断,是儿童哮喘诊断的敏感分子标志物。

激素性股骨头坏死患者微小核糖核酸、骨形态发生蛋白-2、1型纤溶酶原激活物抑制剂表达水平及其临床意义

目的探讨激素性股骨头坏死患者血清微小核糖核酸-672-5p(miR-672-5p)、微小核糖核酸-29b(miR-29b)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、1型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)表达水平及其对激素性股骨头坏死的预测价值。方法选取2020年3月至2023年3月河南科技大学第一附属医院收治的116例激素性股骨头坏死患者作为病例组,根据国际骨循环研究会(ARCO)分期标准将其分为Ⅰ期组(41例)、Ⅱ期组(30例)和Ⅲ期组(45例),另选本院同期125例健康体检者作为对照组。比较病例组和对照组及不同ARCO分期激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、BMP-2、PAI-1水平,利用受试者工作特征(ROC)曲线分析各指标的预测价值。结果病例组患者的血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平高于对照组,血清BMP-2水平低于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅲ期组患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平高于Ⅱ期组和Ⅰ期组,Ⅱ期组高于Ⅰ期组(P<0.05);Ⅲ期组患者血清BMP-2水平低于Ⅱ期组和Ⅰ期组,Ⅱ期组低于Ⅰ期组(P<0.05)。激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平与ARCO分期呈正相关,BMP-2与ARCO分期呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-672-5p、miR-29b、BMP-2、PAI-1预测激素性股骨头坏死的AUC值均大于0.8(P<0.05),表明均具有较高的预测激素性股骨头坏死的效能。结论激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1呈高表达,而血清BMP-2呈低表达,四者均具有较高的预测激素性股骨头坏死的效能。

血清LncRNA HCG11及miR-26b-5p与急性缺血性脑卒中患者脑梗死面积及功能预后的相关性

目的研究急性缺血性脑卒中患者血清长链非编码RNA人类白细胞抗原复合物组11(long non coding RNA human leukocyte antigen complex group 11,LncRNA HCG11)及微小核糖核酸-26b-5p(microRNA-26b-5p,miR-26b-5p)水平与脑梗死面积及功能预后的相关性。方法选取2021年1月至2022年12月本院收治的急性缺血性脑卒中患者106例,根据梗死面积将其分为小面积组、中面积组和大面积组,随访1年后根据改良Rankin量表(modified Rankin Scale,mRS)分为预后良好组和预后不良组。采用qRT-PCR检测LncRNA HCG11,miR-26b-5p相对表达量;采用Logistic回归分析影响患者预后的因素;绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析LncRNA HCG11和miR-26b-5p对患者梗死面积的诊断及对预后的预测价值。采用Spearman相关分析LncRNA HCG11、miR-26b-5p与梗死面积及美国国立卫生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale,NHISS)的相关性。结果急性缺血性脑卒中大面积梗死患者的LncRNA HCG11水平升高,miR-26b-5p水平降低(P<0.05);与预后良好患者相比,预后不良患者的LncRNA HCG11水平升高,miR-26b-5p水平降低(P<0.05);不同梗死面积患者高血压史、高血脂史以及NHISS评分、C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)之间比较,差异具有统计学意义(P<0.05);LncRNA HCG11与梗死面积及NHISS均呈正相关(r_(梗死面积)=0.553,P_(梗死面积)<0.001;r_(NHISS)=0.462,P_(NHISS)<0.001),miR-26b-5p与梗死面积及NHISS均呈负相关(r'_(梗死面积)=-0.534,P'_(梗死面积)<0.001;r'_(NHISS)=-0.447,P'_(NHISS)<0.001);miR-26b-5p为影响患者预后不良的保护因素,高血压史、NHISS评分、CRP和LncRNA HCG11为患者预后不良的影响因素(P<0.05);LncRNA HCG11和miR-26b-5p及联合诊断患者梗死面积优于单独指标诊断(Z_(LncRNA HCG11)=3.049,P_(LncRNA HCG11)=0.002;Z_(miR-26b-5p)=2.657,P_(miR-26b-5p)=0.008,AUC=0.937);且LncRNA HCG11+miR-26b-5p对患者预后的预测能力显著优于LncRNA HCG11、miR-26b-5p、CRP、NHISS单独指标(Z_(LncRNA HCG11)=2.207,P_(LncRNA HCG11)=0.027;Z_(miR-26b-5p)=2.080,P_(miR-26b-5p)=0.038;Z_(CRP)=2.341,P_(CRP)=0.019;Z_(NHISS)=2.093,P_(NHISS)=0.036,AUC=0.892);LncRNA HCG11与miR-26b-5p呈负相关(r=-0.425,P<0.05)。结论急性缺血性脑卒中患者血清LncRNA HCG11水平升高,miR-26b-5p水平降低,均为患者脑梗死面积及功能预后的影响因素,对患者脑梗死面积及功能预后具有一定的诊断及预测价值。

急性呼吸窘迫综合征新生儿血清miR-138-5p和miR-574-5p水平的变化及临床意义

目的 探讨新生儿急性呼吸窘迫综合征(nARDS)患儿血清miR-138-5p和miR-574-5p表达水平的变化及临床意义。方法 收集2018年9月~2023年8月武汉科技大学附属孝感医院新生儿科收治的nARDS患儿112例作为观察组,并根据预后分为预后良好组(n=98)和预后不良组(n=14);选择同期出生的足月健康新生儿104例作为对照组。定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测血清miR-138-5p和miR-574-5p的表达水平;ROC曲线分析血清miR-574-5p,miR-138-5p水平对nARDS患儿预后的诊断价值;多因素Logistic回归分析影响nARDS患儿预后不良的因素。结果与对照组比较,观察组血清miR-574-5p表达水平(1.72±0.23 vs 1.04±0.17)升高,miR-138-5p表达水平(0.55±0.08vs 1.02±0.16)降低,差异具有统计学意义(t=24.557,25.597,均P <0.05);与预后良好组比较,预后不良组血清miR-138-5p表达水平(0.41±0.06 vs 0.57±0.08)降低,miR-574-5p表达水平(2.07±0.25 vs 1.67±0.19)升高,差异具有统计学意义(t=7.188,7.069,均P <0.05);预后不良组产妇年龄、宫内窘迫、羊水异常比例较预后良好组升高,差异具有统计学意义(t=5.359,4.257,6.577,均P <0.05)。miR-574-5p是nARDS患儿预后不良的独立危险因素,miR-138-5p是保护因素(均P <0.05)。血清miR-138-5p,miR-574-5p单独及联合诊断nADRS患儿预后不良的AUC(95%CI)分别为0.793(0.706~0.864),0.898(0.826~0.947)和0.931(0.867~0.970),二者联合预测优于miR-138-5p,miR-574-5p各自单独诊断(Z=2.151,1.982,均P <0.05)。结论 nARDS患儿血清miR-138-5p表达水平降低,miR-574-5p表达水平升高,二者对nARDS患儿预后不良具有一定的诊断价值。

依托咪酯调控miR-204-5p/HOXC8轴对胃癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的探讨依托咪酯(Eto)调节微小RNA(miR)-204-5p/同源盒基因C8(HOXC8)轴对人胃癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法2023年4月—2024年4月于武汉科技大学实验室进行实验,将胃癌细胞MKN45分为对照(Ctrl)组、低剂量Eto组(Eto-L,5μmol/L)、中剂量Eto组(Eto-M,10μmol/L)、高剂量Eto组(Eto-H,20μmol/L)、Eto-H+miR-inhibitor-NC、Eto-H+miR-204-5p inhibitor组。CCK-8法、集落形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测MKN45细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞侵袭能力;qRT-PCR检测细胞中miR-204-5p和HOXC8 mRNA表达水平;双荧光素酶实验检测miR-204-5p和HOXC8之间的靶向关系。结果与Ctrl组比较,Eto-L组、Eto-M组、Eto-H组、Eto-H+miR-inhibitor-NC组、Eto-H+miR-204-5p inhibitor组MKN45细胞存活率、集落形成率、细胞侵入率、HOXC8 mRNA水平均显著降低(F/P=33.391/<0.001、29.646/<0.001、44.814/<0.001、45.485/<0.001),细胞凋亡率和miR-204-5p水平显著升高(F/P=78.091/<0.001、22.665/<0.001);与Eto-H+miR-inhibitor-NC组比较,Eto-H+miR-204-5p inhibitor组MKN45细胞存活率、集落形成率、细胞侵入率、HOXC8 mRNA水平均显著升高(q/P=8.099/<0.001、7.587/<0.001、7.768/<0.001、11.162/<0.001),细胞凋亡率和miR-204-5p水平显著降低(q/P=10.254/<0.001、8.596/<0.001);与HOXC8-WT和miR-NC共转染细胞比较,HOXC8-WT和miR-204-5p mimic共转染的MKN45细胞中相对荧光酶活性显著降低(t/P=5.770/<0.001)。结论Eto可能通过上调miR-204-5p、下调HOXC8,减弱胃癌细胞MKN45增殖和侵袭能力,促进细胞凋亡。

急性缺血性脑卒中患者血清LncRNA RMST,miR-582-5p表达水平与早期神经功能恶化及预后的相关性研究

目的 探讨急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清长链非编码RNA横纹肌肉瘤相关转录物-2(LncRNA RMST)和miR-582-5p的表达水平与早期神经功能恶化(END)及预后的相关性。方法 选取2021年1月~2022年12月期间承德市中心医院收治的129例AIS患者,并根据患者一周内是否出现END将患者分为END组(n=42)和非END组(n=87),另选取同期在该院体检的健康者59例作为健康组。采用qRT-PCR法检测各组血清LncRNA RMST,miR-582-5p水平。Pearson法对END患者血清LncRNA RMST,miR-582-5p水平相关性进行分析;绘制ROC曲线评估血清LncRNA RMST,miR-582-5p水平以及二者联合对AIS患者预后情况的效能分析。结果 健康组、非END组、END组血清LncRNA RMST水平(1.01±0.28,2.10±0.41,3.99±0.52)逐渐升高,miR-582-5p水平(1.02±0.23,0.86±0.16,0.73±0.15)逐渐降低,差异具有统计学意义(F=672.974,31.907,均P <0.05)。END患者血清LncRNA RMST水平与mi R-582-5p水平存在明显的负相关(r=-0.451,P<0.001)。血清LncRNA RMST,miR-582-5p水平联合诊断AIS患者预后的AUC(95%CI)为0.961(0.912~0.987),优于单独预测(Z=2.280,4.515,均P <0.05)。结论 血清LncRNA RMST,miR-582-5p水平与END关系密切,有望成为AIS患者预后的预测因子。

微小核糖核酸-125b-5p抑制Caspase 2蛋白酶活性缓解脂多糖诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的研究

目的:MicroRNAs是一种转录后调控靶基因的非编码小RNA,被认为是心脏功能和疾病的重要调节剂,心脏损伤伴随着MicroRNAs表达的动态变化。本研究以脂多糖(LPS)诱导损伤制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,探究miR-125b-5p对Caspase 2蛋白酶活性和LPS诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的影响。方法:采用LPS诱导损伤制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,将miR-125b-5p转染于LPS诱导的H9c2心肌细胞中。RT-PCR检测miR-125b-5p和Caspase 2的表达水平;荧光素酶报告实验确定miR-125b-5p和Caspase 2的靶向关系;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹检测Caspase-2,Caspase-3,Caspase-9,Survivin,Bax/Bcl-2的蛋白表达;试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果:用LPS诱导处理能显著降低miR-125b-5p的表达水平(P<0.05),促进Caspase 2表达(P<0.05)。荧光素酶报告实验表明Caspase 2上存在miR-125b-5p的结合位点,miR-125b-5p能靶向抑制Caspase 2活性(P<0.05)。miR-125b-5p可显著抑制Caspase 2蛋白表达水平(P<0.05)。miR-125b-5p能明显促进H9c2心肌细胞增殖(P<0.05)。miR-125b-5p能显著抑制H9c2心肌细胞凋亡(P<0.05)。同时,miR-125b-5p还能显著抑制裂解的caspase-3、caspase-9和Bax/Bcl-2蛋白水平(P<0.05),促进Survivin的蛋白表达(P<0.05)。miR-125b-5p可明显降低培养液中LDH活性和细胞内MDA、GSH含量、增加胞内SOD活性(P<0.05)。结论:miR-125b-5p通过抑制Caspase 2蛋白酶活性,促进心肌细胞增殖,降低心肌细胞凋亡率,缓解了LPS诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激,表明miR-125b-5p对LPS造成的心肌细胞损伤具有保护作用。

青年缺血性脑卒中病人血清miR-218-5p、LASP1水平及其应用价值

目的探究青年缺血性脑卒中(IS)病人血清微RNA-218-5p(miR-218-5p)、LIM和SH3蛋白1(LASP1)水平及其应用价值。方法选取2020年6月至2022年6月山东中医药大学附属医院收治的青年IS病人96例为IS组,对所有IS病人进行为期3个月的随访,按照改良Rankin量表(mRS)评分进行分组,预后良好组68例(mRS评分≤2分)和预后不良组28例(mRS评分>2分)。选择同期在该院进行体检的健康志愿者96例为对照组。血清miR-218-5p、LASP1 mRNA水平检测采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR);Pearson相关性分析血清miR-218-5p与LASP1 mRNA表达水平的关系。采用受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清中miR-218-5p、LASP1 mRNA表达水平对IS预后评估的价值。结果与对照组相比,IS组白细胞计数、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇水平显著升高,高密度脂蛋白胆固醇水平显著降低(P<0.05);与对照组(1.03±0.11、1.01±0.11)相比,IS组血清中miR-218-5p水平0.88±0.09显著降低,LASP1 mRNA(1.12±0.12)水平显著升高(P<0.05)。IS病人血清miR-218-5p与LASP1 mRNA呈负相关(r=−0.73,P<0.001)。与预后良好组(0.94±0.10、1.05±0.11)相比,预后不良组血清中miR-218-5p(0.74±0.08)水平显著降低,LASP1 mRNA(1.28±0.13)水平显著升高(P<0.05)。ROC曲线显示,二者联合评估IS预后不良的AUC高于miR-218-5p、LASP1 mRNA单独预测的AUC值(Z=12.35,P<0.001;Z=6.60,P=0.010)。结论青年IS病人血清miR-218-5p较低,LASP1 mRNA较高,可用于评估青年IS病人的预后。

冠心病患者血清外泌体微小核糖核酸-141-3p对内皮细胞损伤的影响研究

目的:检测冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血清外泌体中微小核糖核酸-141-3p (miR-141-3p)的表达变化,并分析miR-141-3p对人血管内皮细胞损伤的影响。方法:收集冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血清(n=8)和健康人对照(n=8),用外泌体提取试剂盒提取血清外泌体RNA,使用qRT-PCR的方法检测血清外泌体中miR-141-3p的表达变化;将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)转染NC mimic或miR-141-3p mimic后使用ox-LDL诱导损伤,MTT法检测细胞活性,检测Annexin-V/PI染色结果评价细胞凋亡情况;生物信息学分析预测并验证miR-141-3p作用的靶基因。结果:与健康人的对照血清外泌体相比,冠状动脉粥样硬化患者的血清外泌体中miR-141-3p的表达显著增加(P<0.01)。在HUVECs中过表达miR-141-3p可抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡,维持细胞活性(P<0.05);靶基因预测结果显示与细胞凋亡和增殖相关的基因PTEN可能是miR-141-3p的靶基因,进一步验证结果显示miR-141-3p过表达导致PTEN表达的下调(P<0.05)。结论:冠心病患者血清外泌体中miR-141-3p的表达上调,miR-141-3p可通过下调靶基因PTEN发挥抑制血管内皮细胞凋亡的保护性作用。miR-141-3p可能成为抗动脉粥样硬化治疗的新靶点。

孕早期孕妇促甲状腺激素、甲状腺过氧化物酶抗体及微小RNA-873-5p水平与妊娠期糖尿病相关性研究

目的:分析研究孕早期促甲状腺激素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)及微小RNA-873-5p(miR-873-5p)水平与妊娠期糖尿病(GDM)的相关性。方法:选取定期产检的GDM孕妇命名为GDM组(n=109),另选同期在本院产检的糖耐量正常孕妇为对照组(n=60)。收集两组孕妇的一般资料及孕早期实验室检测指标(TSH、TPOAb、miR-873-5p),采用单因素、多因素分析TSH、TPOAb、miR-873-5p水平与GDM的关系;并绘制ROC曲线分析血清TSH、TPOAb、miR-873-5p水平对GDM的预测价值。结果:GDM组的血清TSH、TPOAb、miR-873-5p水平均高于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,年龄>30岁(OR=1.982)、孕前BMI≥24 kg/m^(2)(OR=2.020)、TSH升高(OR=2.113)、TPOAb升高(OR=2.307)及miR-873-5p水平升高(OR=2.059)是发生GDM的独立危险因素(均P<0.05);ROC曲线分析显示,血清TSH、TPOAb、miR-873-5p及联合检测的曲线下面积(AUC)分别为0.830、0.829、0.762、0.936,联合检测优于单一检测(P<0.05)。结论:TSH、TPOAb及miR-873-5p在GDM孕妇体内呈高表达,可能成为GDM发生的辅助预测指标。

长链非编码RNA AFAP1-AS1靶向miR-195-5p对肝癌细胞生物学行为的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸(lncRNA)AFAP1-AS1及微小核糖核酸-195-5p(miR-195-5p)对肝细胞癌(HCC)细胞生物学行为的影响。方法常规培养人HCC细胞系(HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Bel7402、SK-hep1细胞)和正常人肝细胞(HL-7702细胞),用实时荧光定量PCR法检测AFAP1-AS1、miR-195-5p并筛选实验细胞。将对数生长期实验细胞随机分为si-AFAP1-AS1组、si-NC组,miR-195-5pmimics组、mimics-NC组,miR-195-5pinhibitor+si-NC组、miR-195-5p inhibitor+si-AFAP1-AS1组、inhibitor-NC+si-AFAP1-AS1组、inhibitor-NC+si-NC组,用Lipofectamine 2000试剂将相应质粒按照分组转染入细胞。用CCK-8实验、菌落形成实验检测细胞增殖能力,用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,用Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力,用双荧光素酶报告基因实验验证AFAP1-AS1与miR-195-5p的靶向关系。结果HCC细胞中AFAP1-AS1表达高于正常人肝细胞(P均<0.05),HCC细胞中miR-195-5p表达低于正常人肝细胞(P均<0.05)。由于SK-hep1细胞中AFAP1-AS1表达最高、miR-195-5p表达最低,因此,后续研究均采用SK-hep1细胞进行实验。与si-NC组比较,si-AFAP1-AS1组中AFAP1-AS1表达低、细胞增殖能力低、迁移和侵袭细胞少、G0/G1期细胞比例高、细胞凋亡率高(P均<0.05)。通过Starbase v3.0在线数据库预测发现,AFAP1-AS1与miR-195-5p有互补的结合位点。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-NC组、miR-195-5p组共转染WT-AFAP1-AS1后相对荧光素酶活性比较差异有统计学意义(P<0.05),共转染MUT-AFAP1-AS1后相对荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。与inhibitor-NC+si-NC组比较,si-NC+miR-195-5p inhibitor组细胞增殖能力高、迁移和侵袭细胞多、G_(0)/G_(1)期细胞比例低、细胞凋亡率低(P均<0.05),而si-AFAP1-AS1+miR-195-5p inhibitor组上述细胞生物学行为则相反。结论lncRNA AFAP1-AS1可能通过竞争性结合miR-195-5p参与调控HCC细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡等生物学行为。

妊娠期糖尿病患者血清miR-195-5p、VEGF-A水平与胎儿生长发育与妊娠结局的关系

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者血清微小核糖核酸-195-5p(miR-195-5p)、血管内皮生长因子A(VEGF-A)水平与妊娠不良事件和胎儿生长发育的关系。方法选择203例GDM患者,根据胎儿生长发育将GDM患者分为发育正常组(157例)、发育异常组(46例),根据不良妊娠事件将其分为结局不良组(77例)和结局良好组(126例)。收集妊娠结局相关资料;于GDM患者入组后次日晨采集其静脉血,用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-195-5p,用酶联免疫吸附试验测定血清VEGF-A。Pearson相关法分析miR-195-5p与VEGF-A的相关性,多因素Logistic回归分析血清miR-195-5p、VEGF-A对GDM患者妊娠结局的影响,绘制受试者工作特征曲线分析血清miR-195-5p、VEGF-A对GDM患者妊娠结局的预测价值。结果发育异常组血清miR-195-5p表达高于发育正常组(P<0.05),血清VEGF-A水平低于发育正常组(P<0.05)。GDM患者血清miR-195-5p表达与VEGF-A水平呈负相关(r=-0.472,P<0.05)。结局不良组年龄大于结局良好组,空腹血糖、稳态模型胰岛素抵抗指数、糖化血红蛋白(HbA1c)水平高于结局良好组,分娩孕周早于结局良好组,血清miR-195-5p表达高于结局良好组,血清VEGF-A水平低于结局良好组,比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。年龄大、高水平HbA1c、高表达miR-195-5p是GDM患者妊娠结局的危险因素(P均<0.05),高水平VEGF-A是保护因素(P<0.05)。血清miR-195-5p、VEGF-A联合预测GDM妊娠结局的曲线下面积为0.910,高于二者单独预测(P均<0.05)。结论GDM患者血清miR-195-5p、VEGF-A水平变化与胎儿发育不良、不良妊娠结局有关,二者联合检测可预测GDM妊娠结局。

原发性喉癌患者癌组织中miR-425-5p/PTCH1轴分子与临床病理参数及预后的关系

目的探讨原发性喉癌患者癌组织中微小核糖核酸-425-5p(miR-425-5p)/跨膜蛋白受体Patched1(PTCH1)轴分子与临床病理参数及预后的关系。方法前瞻性选取2018年7月至2021年6月新乡医学院第一附属医院收治的108例原发性喉癌患者作为研究对象。比较癌组织、癌旁组织及不同病理特征癌组织miR-425-5p、PTCH1 m RNA相对表达量,采用Spearman法分析miR-425-5p、PTCH1与临床病理特征的相关性,随访3年,统计所有患者的3年生存率,比较生存与死亡患者癌组织中的miR-425-5p、而PTCH1 m RNA相对表达量,并利用受试者工作特征(ROC)曲线获取miR-425-5p、PTCH1最佳截断值,采用KM曲线分析miR-425-5p、PTCH1与预后的关系。结果原发性喉癌患者癌组织中的miR-425-5p相对表达量为1.81±0.48,明显高于癌旁组织的1.08±0.23,PTCH1 m RNA相对表达量为1.21±0.36,明显低于癌旁组织的1.63±0.41,差异均有统计学意义(P<0.05);Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移、低分化癌组织中的miR-425-5p相对表达量分别为1.97±0.46、2.09±0.42、2.14±0.46,明显高于Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、中高分化癌组织的1.54±0.41、1.66±0.39、1.60±0.40,PTCH1 m RNA相对表达量分别为1.09±0.21、1.04±0.24、1.01±0.20,明显低于Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、中高分化癌组织的1.42±0.25、1.30±0.27、1.34±0.23,差异均有统计学意义(P<0.05);Spearman法分析结果显示,miR-425-5p与临床分期、淋巴结转移呈正相关(r=0.663、0.702,P<0.05),与分化程度呈负相关(r=-0.681,P<0.05),PTCH1与临床分期、淋巴结转移呈负相关(r=-0.652、-0.711,P<0.05),与分化程度呈正相关(r=0.694,P<0.05);死亡患者癌组织中的miR-425-5p相对表达量为2.23±0.46,明显高于生存患者癌组织的1.67±0.38,而PTCH1 m RNA相对表达量为0.96±0.21,明显低于生存患者癌组织的1.30±0.34,差异均有统计学意义(P<0.05);ROC分析结果显示,miR-425-5p、PTCH1预测死亡的曲线下面积(AUC)分别为0.815(95%CI:0.727~0.884)、0.792(95%CI:0.702~0.865),最佳截断值分别为2.01、1.09;KM分析结果显示,miR-425-5p高表达、PTCH1低表达患者3年生存率均低于miR-425-5p低表达、PTCH1高表达患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-425-5p在原发性喉癌癌组织中表达上调,PTCH1表达下调,联合检测对预后具有一定预测价值,可作为临床评估病情、预测预后的辅助指标,以指导临床工作。

异氟烷调控微小核糖核酸-150-5p减轻缺氧/复氧引起的心肌细胞损伤的研究

目的:通过体外构建缺氧/复氧模型(HR),探讨microRNA-150-5p在异氟烷(ISO)介导的心肌损伤中的保护作用。方法:选取人心肌细胞H9c2体外培养,培养好的心肌细胞分为对照组、HR组以及不同浓度ISO处理组。HR组心肌细胞在不同浓度的ISO中预处理。通过实时荧光定量PCR检测miR-150-5p含量。CCK-8实验和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡水平的变化,酶联免疫吸附实验检测心肌损伤标志物CK-MB,cTnI和LDH的变化。最后,双酶素荧光素酶报告基因对miR-150-5p靶基因进行验证。结果:与对照组相比,miR-150-5p在缺氧心肌细胞中显著降低(P<0.05)。同时,HR组心肌细胞增殖能力显著降低,凋亡细胞数目增加,心肌损伤指标CK-MB,cTnI和LDH升高(P<0.05)。但当用1%ISO处理后缓解了HR引起的心肌细胞损伤,细胞的增殖能力显著升高,凋亡细胞数目降低,心肌损伤指标CK-MB,cTnI和LDH降低(P<0.05)。ISO处理时转染miR-150-5p抑制剂则降低了ISO对心肌细胞损伤的缓解作用,细胞增值能力下降,凋亡细胞数目增加,心肌损伤指标浓度增加(P<0.05)。最后荧光素酶报告实验证实了PDCD4可能是miR-150-5p的靶基因。结论:miR-150-5p参与ISO缓解HR引起的心肌细胞损伤。

miR-192-5p靶向CKIP-1促进骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化

背景:酪蛋白激酶2结合蛋白1(casein kinase 2-interaction protein-1,CKIP-1)是一种重要的骨形成负调控基因,其敲除鼠骨质显著增强、骨形成和骨密度也显著提高。而miRNA作为较早发现的小分子调控物,对大多数编码基因具有调控作用,在成骨分化中发挥重要作用。目的:探讨miRNA/CKIP-1对骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其分子机制。方法:采用miRNA-Seq技术检测2022年3-6月在开封市中心医院骨外科就诊32例骨质疏松患者及同期体检中心健康人群骨髓间充质干细胞中miRNA的变化情况;利用Targetscan网站预测靶向调控CKIP-1的miRNA,利用荧光素酶报告基因实验检测miRNA与CKIP-1启动子区DNA的结合;在骨髓间充质干细胞中转染miR-192-5p类似物(miR-192-5p mimics)/阴性对照(NC mimics)或miR-192-5p抑制剂(miR-192-5p inhibitor)/阴性对照(NC inhibitor),成骨诱导后第7,14天,通过实时荧光定量PCR技术及茜素红染色检测成骨标志基因Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素、抗骨桥蛋白、骨唾液蛋白及CKIP-1的表达水平和骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的情况;采用蛋白质免疫印迹实验及茜素红染色检测miR-192-5p/CKIP-1/轴对细胞成骨分化的的调控作用。结果与结论:与健康组相比,骨质疏松组有16个miRNA表达明显升高,53个miRNA表达明显降低(P<0.05);利用Targetscan网站预测,并通过荧光素酶报告基因实验验证,发现miR-192-5p与CKIP-1有互补的核苷酸序列(P<0.05);过表达miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),抑制miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),而沉默CKIP-1的表达后,Runx2、骨钙素及骨桥素的蛋白水平增加(P<0.05),逆转了敲低miR-192-5p对细胞成骨分化的抑制作用。上述结果证实,miR-192-5p在骨质疏松症中表达降低;miR-192-5p通过靶向抑制CKIP-1的表达,促进骨髓间充质干细胞成骨分化。

乳腺癌组织微小核糖核酸-485-3p、Xklp2靶蛋白表达水平及临床意义

目的探讨乳腺癌组织微小核糖核酸-485-3p(miR-485-3p)、Xklp2靶蛋白(TPX2)表达水平与患者预后的关系。方法采用免疫组织化学法检测TPX2蛋白表达,采用实时荧光定聚合酶链反应检测miR-485-3p、TPX2 mRNA表达。采用Pearson检验分析乳腺癌组织中miR-485-3p表达与TPX2 mRNA表达的关系;随访5年,采用Kaplan-Meier法分析乳腺癌组织中miR-485-3p、TPX2蛋白表达与患者总生存率的关系,并用COX回归分析影响乳腺癌患者总生存的危险因素。结果乳腺癌组织中TPX2蛋白阳性率、TPX2 mRNA表达水平均高于癌旁正常组织,miR-485-3p表达水平低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌组织中miR-485-3p、TPX2蛋白表达与患者TNM分期、淋巴结转移、Ki-67表达有关(P<0.05)。乳腺癌组织中miR-485-3p表达与TPX2 mRNA表达呈负相关(P<0.05)。miR-485-3p高表达者5年总生存率为77.78%,高于低表达者的52.94%,差异有统计学意义(P<0.05);TPX2蛋白阴性者5年总生存率为84.00%,高于阳性者的60.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。有淋巴结转移、miR-485-3p低表达、TPX2蛋白阳性是影响乳腺癌患者总生存的独立危险因素(P<0.05)。结论在乳腺癌组织中,miR-485-3p低表达、TPX2高表达及二者呈负相关,均可作为判断乳腺癌患者的预后指标。

血清miR770-5-p和miR32-5-p表达与糖尿病肾病患者病情严重程度及肾功能的关系

目的 探讨血清微小核糖核酸(miR)-770-5p和miR-32-5p表达与糖尿病肾病患者病情严重程度及肾功能的关系。方法 选取2022年10月至2023年12月该院收治的糖尿病肾病患者120例为患病组,根据Mogenson分期标准分为轻度组(Ⅰ~Ⅱ期)78例与中重度组(Ⅲ~Ⅴ期)42例。另选取同期该院收治的96例单纯糖尿病患者为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应仪检测血清miR-770-5p和miR-32-5p相对表达水平,并收集分析两组患者临床资料,采用多因素Logistic回归分析患者病情严重程度的影响因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-770-5p和miR-32-5p对患者病情严重程度的诊断价值,采用Pearson相关性分析血清miR-770-5p和miR-32-5p与肾功能指标的相关性。结果 与对照组比较,患病组血清miR-770-5p和miR-32-5p表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。轻度组比较,中重度组血清miR-770-5p和miR-32-5p表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。轻度组与中重度组糖化血红蛋白、空腹血糖、肌酐、尿素氮(BUN)、肾小球滤过率(eGFR)及24 h尿蛋白定量水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,BUN、24 h尿蛋白定量及血清miR-770-5p、miR-32-5p均为影响患者病情严重程度的危险因素,eGFR为影响患者病情严重程度的保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-770-5p、miR-32-5p及联合诊断患者病情严重程度的曲线下面积(AUC)分别为0.821、0.837、0.913,两者联合诊断AUC显著优于miR-770-5p(Z=3.010,P=0.003)、miR-32-5p(Z=2.709,P=0.008)单独诊断AUC。结论 血清miR-770-5p和miR-32-5p对糖尿病肾病具有辅助诊断价值,二者与肾功能指标水平有关,其有望成为糖尿病肾病病情严重程度的生化参考指标。