微小核糖核酸-136-5p靶向Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1调控胃癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的机制

目的:探讨微小核糖核酸(miR-136-5p)靶向Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(ROCK1)对胃癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。方法:胃癌MKN-45细胞购自美国细胞培养物收藏中心,分为胃癌MKN-45细胞组、miR-NC组、miR-136-5p-mimics组(过表达组)、miR-136-5p-inhibitor组(低表达组),测定各组细胞增殖水平、单克隆形成数目、凋亡率、侵袭水平以及miR-136-5p、ROCK1 mRNA和蛋白水平,细胞增殖水平、凋亡率等计量资料用单因素方差分析及LSD-t检验。结果:miR-136-5p-mimics组吸光度(A)值、存活率、单克隆形成数目、穿膜数、ROCK1 mRNA和蛋白表达水平低于胃癌MKN-45细胞组[0.42±0.02比0.75±0.03、(42.25±7.20)%比(78.19±6.08)%、239.89±35.27比619.33±89.20、(293.85±95.28)个比(693.85±184.74)个、2.04±0.24比3.85±0.25、0.38±0.07比0.97±0.13]和miR-NC组[0.42±0.02比0.73±0.03)、(42.25±7.20)%比(76.59±7.30)%、239.89±35.27比614.89±75.33、(293.85±95.28)个比(702.28±111.52)个、2.04±0.24比3.90±0.23、0.38±0.07比0.85±0.16],而细胞凋亡率、miR-136-5p表达水平高于胃癌MKN-45细胞组[(7.14±1.11)%比(3.68±1.02)%、5.68±0.37比3.17±0.33]和miR-NC组[(7.14±1.11)%比(3.46±1.04)%、5.68±0.37比3.15±0.36,t=10.258、15.941、28.614、30.051、17.685、22.973、10.107、15.425、26.237、28.336、16.811、21.392、15.945、14.528、17.846、14.403,P<0.05]。miR-136-5p-inhibitor组A值、存活率、单克隆形成数目、穿膜数、ROCK1 mRNA和蛋白表达水平高于胃癌MKN-45细胞组[0.93±0.03比0.75±0.03、(86.58±6.36)%比(78.19±6.08)%,1062.29±102.78比619.33±89.20、(1917.34±425.35)个比(693.85±184.74)个、4.63±0.28比3.85±0.25、1.82±0.18比0.97±0.13]和miR-NC组[0.93±0.03比0.73±0.03、(86.58±6.36)%比(76.59±7.30)%,1062.29±102.78比614.89±75.33、(1917.34±425.35)个比(702.28±111.52)个、4.63±0.28比3.90±0.23、1.82±0.18比0.85±0.16],细胞凋亡率、miR-136-5p表达水平低于胃癌MKN-45细胞组[(1.12±0.79)%比(3.68±1.02)%、1.42±0.38比3.17±0.33]和miR-NC组[(1.12±0.79)%比(3.46±1.04)%、1.42±0.38比3.15±0.36,t=7.102、5.094、21.841、30.816、14.691、13.487、7.210、5.339、22.083、31.294、15.112、13.625、6.369、11.207、7.841、12.564,P<0.05]。miR-136-5p-inhibitor组A值、存活率、单克隆形成数目、穿膜数、ROCK1 mRNA和蛋白表达水平高于miR-136-5p-mimics组,细胞凋亡率、miR-136-5p表达水平低于miR-136-5p-mimics组(t=15.814、19.336、32.519、38.946、21.058、25.427、11.742、10.088,P<0.05)。结论:miR-136-5p上调可以通过ROCK1信号通路抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡。

长链非编码RNA DLEU2通过miR-30a-5p/CD61对人结肠癌SW1116细胞生长和增殖的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸淋巴细胞白血病缺失基因2(LncRNA DLEU2)通过靶向微小核糖核酸(miR)-30a-5p/整合素β3(CD61)对人结肠癌SW1116细胞生长和增殖的影响。方法取人结肠癌细胞株SW1116培养并随机分为si-NC组、si-LncRNA DLEU2组、模拟物阴性对照(miR-NC)组、miR-30a-5p mimics组、miR-30a-5p抑制剂阴性对照(NC inhibitor)+si-LncRNA DLEU2组及miR-30a-5p inhibitor+si-LncRNA DLEU2组,同时设置未转染细胞为空白组;转染48 h后,采用荧光显微镜检测细胞转染效率,四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞LncRNA DLEU2和miR-30a-5p表达、CD61、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、c-Myc mRNA和蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR检测LncRNA DLEU2与miR-30a-5p的靶向关系、miR-30a-5p与CD61的靶向关系;制作雄性胸腺BALB/c裸鼠异种移植瘤模型评估LncRNA DLEU2对肿瘤生长的影响。结果si-NC组、si-LncRNA DLEU2组、miR-NC组、miR-30a-5p mimics组、NC inhibitor+si-LncRNA DLEU2组、miR-30a-5p inhibitor+si-LncRNA DLEU2组转染效率均>85%;与空白组及si-NC组比较,si-LncRNA DLEU2组、NC inhibitor+si-LncRNA DLEU2组增殖抑制率上升(P<0.05),DLEU2表达下降(P<0.05),miR-30a-5p表达增加(P<0.05),CD61、CyclinD1、c-Myc mRNA和蛋白表达减少(P<0.05);与NC inhibitor+si-LncRNA DLEU2组比较,miR-30a-5p inhibitor+si-LncRNA DLEU2组细胞增殖抑制率下降(P<0.05),miR-30a-5p表达下降,CD61、CyclinD1、c-Myc mRNA和蛋白表达上升(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-30a-5p mimics组miR-30a-5p表达、增殖抑制率增加(P<0.05),CD61、CyclinD1、c-Myc mRNA和蛋白表达下降(P<0.05);LncRNA DLEU2可直接靶向调控miR-30a-5p、miR-30a-5p可直接靶向调控CD61,抑制LncRNA DLEU2表达可降低BALB/c裸鼠移植瘤生长(P<0.05)。结论沉默LncRNA DLEU2可抑制人结肠癌细胞株SW1116生长和增殖,其机制可能与靶向miR-30a-5p抑制CD61表达,抑制CyclinD1、c-Myc表达相关。

非小细胞肺癌表皮生长因子受体靶向治疗后病人血清微小RNA-30a-5p和微小RNA-129-5p表达与疗效的关系

目的探讨微小RNA(miR)-30a-5p、miR-129-5p在非小细胞肺癌表皮生长因子受体(EGFR)靶向治疗后病人血清中的表达以及与疗效的关系。方法2020年1月~2022年6月行靶向治疗的非小细胞肺癌EGFR基因突变病人186例,根据病人疗效分为有效组(141例)和无效组(45例)。比较两组血清miR-30a-5p、miR-129-5p水平;多因素logistic回归分析疗效的影响因素;ROC曲线分析血清miR-30a-5p、miR-129-5p水平对非小细胞肺癌疗效的预测价值。结果两组吸烟史、TNM分期比较,差异有统计学意义(P<0.05)。无效组血清miR-30a-5p、miR-129-5p的表达水平低于有效组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,血清miR-30a-5p、miR-129-5p、吸烟史、TNM分期均为非小细胞肺癌疗效的影响因素(P<0.05)。ROC曲线显示,血清miR-30a-5p、miR-129-5p二者联合预测非小细胞肺癌疗效的AUC为0.926,敏感性为91.11%,特异性为83.69%,优于两者各自单独预测(Z二者联合-miR-30a-5P=3.260、Z二者联合-miR-129-5P=3.726,P=0.001、0.000)。结论非小细胞肺癌EGFR靶向治疗后无效组病人血清miR-30a-5p、miR-129-5p水平显著低于有效组,二者联合对非小细胞肺癌EGFR靶向治疗后疗效有较好的预测价值。

微小RNA-199a-5p保护大鼠脑缺血后血-脑屏障完整性

目的探讨微小RNA(miR)-199a-5p保护脑缺血后血-脑屏障(BBB)完整性的机制。方法通过SPF级成年雄性SD大鼠建立永久性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,48只大鼠随机分为假手术组、模型组、MCAO+miR-199a-5p组和MCAO+miR-199a-5p阴性对照组,每组12只。应用Ludmila Belayev 12分评分法评估大鼠的神经行为学表现;采用Evans蓝染色检测脑缺血后BBB的完整性;免疫荧光染色检测脑缺血后细胞凋亡;Western blotting技术检测claudin-5、磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基2(PIK3R2)、p-Akt、Akt和血管内皮生长因子(VEGF)-A的蛋白表达;利用Real-time PCR检测脑缺血半暗带、梗死区miR-199a-5p、claudin-5及VEGF-A表达水平。结果MiR-199a-5p mimic干预增强MCAO大鼠本体感觉和运动能力。MiR-199a-5p降低脑缺血后PIK3R2的表达,激活Akt信号通路,并增加缺血半暗带中claudin-5和VEGF-A的表达。此外,miR-199a-5p减轻了脑缺血后的炎症。MiR-199a-5p降低脑缺血后BBB渗透性,减少神经细胞凋亡。结论MiR-199a-5p可降低缺血性脑卒中后PIK3R2的表达,激活Akt信号通路,降低炎性细胞因子的表达,减轻缺血性脑卒中对BBB的破坏。

2型糖尿病患者血清hsa-miR-30c-5p水平表达对微血管并发症的预测价值研究

目的探讨2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者血清人微小核糖核酸(homo sapiensmicroRNA,hsa-miR)-30c-5p表达对微血管并发症的预测价值。方法选取2021年5月~2022年9月巴中市中心医院收治的T2DM患者205例为糖尿病组,并根据患者微血管并发症情况将糖尿病组进一步分为并发组(n=124)和未并发组(n=81),另选取同期健康体检者205例为对照组,均采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcriptionpolymerasechain reaction,RT-PCR)检测受试者血清hsa-miR-30c-5p表达并进行比较。采用多因素Logistic回归分析影响微血管并发症的因素,绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线预测血清hsa-miR-30c-5p表达对T2DM患者发生微血管并发症的价值。结果并发组、未并发组的血清hsa-miR-30c-5p表达分别为0.58±0.06,0.72±0.08,均低于对照组(0.89±0.21),差异具有统计学意义(t=16.038,7.079,均P=0.001);并发组低于未并发组,差异具有统计学意义(t=14.289,P=0.001)。糖尿病病程[OR(95%CI):3.873(2.976~4.770)]、尿酸[OR(95%CI):2.125(1.211~3.040)]、糖化血红蛋白[OR(95%CI):2.680(1.745~3.616)]均为T2DM患者发生微血管并发症的独立危险因素(均P<0.05),葡萄糖目标范围内时间[OR(95%CI):0.491(0.135~0.846)]、血清hsa-miR-30c-5p[OR(95%CI):0.532(0.146~0.817)]均为T2DM患者发生微血管并发症的保护因素(均P<0.05)。血清hsa-miR-30c-5p表达预测T2DM患者发生微血管并发症的敏感度、特异度、曲线下面积(95%置信区间)分别为81.45%,85.19%,0.802(0.741~0.854)。结论T2DM患者血清hsa-miR-30c-5p表达异常降低,且血清hsa-miR-30c-5p为T2DM患者发生微血管并发症的保护因素,对T2DM患者发生微血管并发症具有一定的预测价值。

激素性股骨头坏死患者微小核糖核酸、骨形态发生蛋白-2、1型纤溶酶原激活物抑制剂表达水平及其临床意义

目的探讨激素性股骨头坏死患者血清微小核糖核酸-672-5p(miR-672-5p)、微小核糖核酸-29b(miR-29b)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、1型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)表达水平及其对激素性股骨头坏死的预测价值。方法选取2020年3月至2023年3月河南科技大学第一附属医院收治的116例激素性股骨头坏死患者作为病例组,根据国际骨循环研究会(ARCO)分期标准将其分为Ⅰ期组(41例)、Ⅱ期组(30例)和Ⅲ期组(45例),另选本院同期125例健康体检者作为对照组。比较病例组和对照组及不同ARCO分期激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、BMP-2、PAI-1水平,利用受试者工作特征(ROC)曲线分析各指标的预测价值。结果病例组患者的血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平高于对照组,血清BMP-2水平低于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅲ期组患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平高于Ⅱ期组和Ⅰ期组,Ⅱ期组高于Ⅰ期组(P<0.05);Ⅲ期组患者血清BMP-2水平低于Ⅱ期组和Ⅰ期组,Ⅱ期组低于Ⅰ期组(P<0.05)。激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平与ARCO分期呈正相关,BMP-2与ARCO分期呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-672-5p、miR-29b、BMP-2、PAI-1预测激素性股骨头坏死的AUC值均大于0.8(P<0.05),表明均具有较高的预测激素性股骨头坏死的效能。结论激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1呈高表达,而血清BMP-2呈低表达,四者均具有较高的预测激素性股骨头坏死的效能。

乳腺癌患者血清微小RNA-135b、微小RNA-148a-3p、微小RNA-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果相关性研究

目的:探讨乳腺癌患者血清微小RNA-135b(miR-135b)、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果的相关性。方法:选取116例乳腺癌患者为病例组,均接受新辅助化疗,以21 d为1个周期,共化疗8个周期,根据化疗反应将患者分为耐药组(32例)和敏感组(84例),另选128例体检健康女性为对照组。比较病例组和对照组,耐药组和敏感组血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平。采用Pearson相关性分析血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p水平间的相关性。乳腺癌患者化疗效果的影响因素采用Logistic回归分析。血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p对乳腺癌患者化疗耐药的预测价值通过受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果:与对照组比较,病例组miR-135b、miR-148a-3p水平升高,血清miR-186-5p水平降低(均P<0.05)。耐药组血清miR-135b、miR-148a-3p水平高于敏感组,血清miR-186-5p水平低于敏感组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清miR-135b与miR-148a-3p呈正相关,与miR-186-5p呈负相关,血清miR-148a-3p与miR-186-5p呈负相关(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p是乳腺癌患者化疗效果的影响因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p联合预测化疗耐药的曲线下面积(AUC)高于三者单独预测AUC(均P<0.05)。结论:乳腺癌患者血清miR-135b、miR-148a-3p水平呈高表达,血清miR-186-5p水平呈低表达,三者水平变化与新辅助化疗效果有关,且三者联合检测对患者新辅助化疗耐药的预测价值更高。

微小核糖核酸-125b-5p抑制Caspase 2蛋白酶活性缓解脂多糖诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的研究

目的:MicroRNAs是一种转录后调控靶基因的非编码小RNA,被认为是心脏功能和疾病的重要调节剂,心脏损伤伴随着MicroRNAs表达的动态变化。本研究以脂多糖(LPS)诱导损伤制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,探究miR-125b-5p对Caspase 2蛋白酶活性和LPS诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的影响。方法:采用LPS诱导损伤制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,将miR-125b-5p转染于LPS诱导的H9c2心肌细胞中。RT-PCR检测miR-125b-5p和Caspase 2的表达水平;荧光素酶报告实验确定miR-125b-5p和Caspase 2的靶向关系;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹检测Caspase-2,Caspase-3,Caspase-9,Survivin,Bax/Bcl-2的蛋白表达;试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果:用LPS诱导处理能显著降低miR-125b-5p的表达水平(P<0.05),促进Caspase 2表达(P<0.05)。荧光素酶报告实验表明Caspase 2上存在miR-125b-5p的结合位点,miR-125b-5p能靶向抑制Caspase 2活性(P<0.05)。miR-125b-5p可显著抑制Caspase 2蛋白表达水平(P<0.05)。miR-125b-5p能明显促进H9c2心肌细胞增殖(P<0.05)。miR-125b-5p能显著抑制H9c2心肌细胞凋亡(P<0.05)。同时,miR-125b-5p还能显著抑制裂解的caspase-3、caspase-9和Bax/Bcl-2蛋白水平(P<0.05),促进Survivin的蛋白表达(P<0.05)。miR-125b-5p可明显降低培养液中LDH活性和细胞内MDA、GSH含量、增加胞内SOD活性(P<0.05)。结论:miR-125b-5p通过抑制Caspase 2蛋白酶活性,促进心肌细胞增殖,降低心肌细胞凋亡率,缓解了LPS诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激,表明miR-125b-5p对LPS造成的心肌细胞损伤具有保护作用。

急性缺血性脑血管病患者血清中miR-342-3p和miR-30a-5p表达及临床意义

目的探讨急性缺血性脑血管病患者血清中miR-342-3p和miR-30a-5p的表达及意义。方法选取2022年3月至2023年3月我院收治的急性缺血性脑血管病患者195例作为急性缺血性脑血管病组,另选取同期103例健康体检者作为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-342-3p、miR-30a-5p表达水平;相关性行Spearman法分析诊断价值采用受试者工作特征曲线评估。结果与对照组比较,急性缺血性脑血管病组患者血清的miR-342-3p水平显著升高,miR-30a-5p水平均显著降低(P<0.05);急性缺血性脑血管病组与对照组的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、收缩压、舒张压相比,差异有统计学意义(P<0.05);两组高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)等因素相比,差异无统计学意义(P>0.05)。不同神经功能缺失患者血清miR-342-3p、miR-30a-5p、NIHSS评分差异均有统计学意义(P<0.05),且重度组患者血清miR-342-3p水平、NIHSS评分高于轻度组和中度组,miR-30a-5p低于轻度组和中度组(P<0.05)。血清miR-342-3p水平与NIHSS评分呈正相关(r=0.601,P<0.05);血清miR-30a-5p水平与NIHSS评分呈负相关(r=-0.695,P<0.05)。血清miR-342-3p和miR-30a-5p水平及其联合在诊断急性缺血性脑血管病患者重度神经功能缺失中的曲线下面积(AUC)分别为0.800、0.817、0.877,敏感度分别为68.12%、73.91%、86.96%,两者联合诊断价值高于单独诊断(Z二者联合-miR-342-3p=2.081,P=0.038;Z二者联合-miR-30a-5p=2.026,P=0.043)。结论急性缺血性脑血管病患者血清miR-342-3p血清表达水平升高,miR-30a-5p表达水平降低,二者对急性缺血性脑血管病患者神经功能缺失程度具有一定的诊断价值。

异氟烷调控微小核糖核酸-150-5p减轻缺氧/复氧引起的心肌细胞损伤的研究

目的:通过体外构建缺氧/复氧模型(HR),探讨microRNA-150-5p在异氟烷(ISO)介导的心肌损伤中的保护作用。方法:选取人心肌细胞H9c2体外培养,培养好的心肌细胞分为对照组、HR组以及不同浓度ISO处理组。HR组心肌细胞在不同浓度的ISO中预处理。通过实时荧光定量PCR检测miR-150-5p含量。CCK-8实验和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡水平的变化,酶联免疫吸附实验检测心肌损伤标志物CK-MB,cTnI和LDH的变化。最后,双酶素荧光素酶报告基因对miR-150-5p靶基因进行验证。结果:与对照组相比,miR-150-5p在缺氧心肌细胞中显著降低(P<0.05)。同时,HR组心肌细胞增殖能力显著降低,凋亡细胞数目增加,心肌损伤指标CK-MB,cTnI和LDH升高(P<0.05)。但当用1%ISO处理后缓解了HR引起的心肌细胞损伤,细胞的增殖能力显著升高,凋亡细胞数目降低,心肌损伤指标CK-MB,cTnI和LDH降低(P<0.05)。ISO处理时转染miR-150-5p抑制剂则降低了ISO对心肌细胞损伤的缓解作用,细胞增值能力下降,凋亡细胞数目增加,心肌损伤指标浓度增加(P<0.05)。最后荧光素酶报告实验证实了PDCD4可能是miR-150-5p的靶基因。结论:miR-150-5p参与ISO缓解HR引起的心肌细胞损伤。

血清微小RNA-106b-5p、RNA-30a-5p水平与结直肠癌患者预后的关系及其诊断价值

目的分析结直肠癌患者血清微小RNA-106b-5p(miR-106b-5p)、miR-30a-5p表达水平与结直肠癌患者预后的关系及其诊断结直肠癌的临床价值。方法选取2013年1月—2014年12月安徽省安庆市第一人民医院肿瘤科手术治疗的结直肠癌患者(结直肠癌组)、门诊确诊的结直肠腺瘤患者(结直肠腺瘤组)和同期健康体检者(健康对照组)作为研究对象,各90例,检测其血清miR-106b-5p、miR-30a-5p表达水平,随访结直肠癌患者的预后情况,并以受试者工作特征曲线(ROC)评估血清miR-106b-5p、miR-30a-5p诊断结直肠癌的价值。结果结直肠癌组血清miR-106b-5p表达水平高于结直肠腺瘤组及健康对照组,血清miR-30a-5p表达水平低于结直肠腺瘤组及健康对照组(F=295.073、374.052,P均=0.000);结直肠癌患者血清miR-106b-5p表达在不同肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移及临床分期比较差异有统计学意义(t/P=3.382/0.001、3.130/0.002、3.069/0.003、4.638/0.000),而血清miR-30a-5p表达在不同肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期比较差异有统计学意义(t/P=3.626/0.000、2.605/0.011、3.265/0.002、3.113/0.002);血清miR-106b-5p高表达亚组、miR-30a-5p低表达亚组患者的术后5年总生存率及中位生存时间均分别低于血清miR-106b-5p低表达亚组、miR-30a-5p高表达亚组(χ^2=11.449,12.613,P均<0.01);ROC分析结果表明,血清miR-106b-5p、miR-30a-5p诊断结直肠癌的AUC为0.785、0.692,敏感度为0.824、0.676,特异度为0.794、0.739,约登指数为0.618、0.415。结论血清miR-106b-5p在结直肠癌患者中升高,血清miR-30a-5p在结直肠癌患者中降低,二者均与不良预后有关,具有作为结直肠癌预后预测和诊断生物标志物的潜能。

急性缺血性卒中患者静脉溶栓后血清微小RNA-874-3p、微小RNA-181a-5p及Wnt/β-catenin信号通路与神经功能预后的关系

目的探讨急性缺血性卒中(acute ischemic stroke,AIS)患者静脉溶栓后血清微小RNA(microRNA,miRNA)-874-3p(miR-874-3p)、miRNA-181a-5p(miR-181a-5p)与Wnt/β-catenin信号通路和神经功能预后的关系。方法前瞻性连续纳入2021年3月—2022年12月深圳市龙华区中心医院接受静脉溶栓治疗的AIS患者进入AIS组,选取同期体检健康者进入对照组。检测并比较两组血清miR-874-3p、miR-181a-5p及外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中Wnt/β-catenin相对表达水平,采用Pearson相关性分析AIS患者血清miR-874-3p、miR-181a-5p表达与Wnt/β-catenin信号通路的相关性。所有AIS患者出院后均随访3个月,根据mRS评分将完成随访的患者分为神经功能预后良好组和神经功能预后不良组,比较两组患者血清miR-874-3p、miR-181a-5p相对表达水平。采用多因素logistic回归方程分析AIS患者神经功能预后的影响因素。结果本研究中,AI S组纳入185例患者,平均(62.8±7.3)岁;对照组纳入65例体检健康者,平均(63.4±6.9)岁。与对照组相比,AIS组血清miR-874-3p(1.02±0.21 vs.1.46±0.23,P<0.001)相对表达水平及PBMC中Wnt mRNA(2.41±0.64 vs.4.59±1.13,P<0.001)、β-catenin mRNA(1.19±0.18 vs.2.34±0.73,P<0.001)相对表达水平均低于对照组,血清miR-181a-5p(1.95±0.32 vs.1.27±0.27,P<0.001)相对表达水平高于对照组;Pearson相关性分析显示,AIS患者血清miR-874-3p表达与PBMC中Wnt mRNA(r=0.562,P<0.001)、β-catenin mRNA(r=0.611,P<0.001)表达呈正相关,miR-181a-5p表达与PBMC中Wnt mRNA(r=-0.586,P<0.001)、β-catenin mRNA(r=-0.595,P<0.001)表达呈负相关。AIS组中,神经功能预后良好104例,预后不良81例,预后不良率为43.78%;神经功能预后不良组血清miR-874-3p相对表达水平显著低于神经功能预后良好组(0.79±0.20 vs.1.20±0.22,P<0.001),miR-181a-5p相对表达水平显著高于神经功能预后良好组(2.26±0.31 vs.1.71±0.24,P<0.001);神经功能预后不良组年龄([65.48±7.45)岁vs.(62.29±7.21)岁,P=0.004]、发病至入院时间([4.36±1.03)h vs.(3.79±1.15)h,P=0.001]、入院时NIHSS评分([6.81±2.45)分vs.(4.67±1.76)分,P<0.001]及Hcy水平([13.34±4.12)μmol/L vs.(11.75±3.46)μmol/L,P=0.005]均高于神经功能预后良好组;多因素logistic回归结果显示,年龄偏高(OR 1.056,95%CI 1.005~1.108,P=0.029)、发病至入院时间延长(OR 1.125,95%CI 1.008~1.256,P=0.035)、入院时NIHSS评分高(OR 1.220,95%CI 1.093~1.362,P<0.001)、miR-874-3p低表达(OR 0.632,95%CI 0.498~0.803,P<0.001)及miR-181a-5p高表达(OR 1.506,95%CI 1.209~1.875,P<0.001)是导致AIS神经功能预后不良的危险因素。结论AIS组患者血清miR-874-3p表达下降,miR-181a-5p表达升高,均与Wnt/β-catenin信号通路相关,血清miR-874-3p、miR-181a-5p水平是患者神经功能预后的影响因素。

miR-30a-5p、SOCS-3在复发性口腔溃疡患儿血清中的表达及其对再复发的预测价值

目的探讨微小RNA(miR)-30a-5p与细胞因子信号转导抑制因子-3(SOCS-3)在复发性口腔溃疡(ROU)患儿血清中的表达水平及其对再复发的预测价值。方法选取2020年1月至2022年3月石家庄市第二医院收治的610例ROU患儿作为研究组,同时期在该院进行体检的610例健康儿童为对照组。采用酶联免疫吸附试验检测血清SOCS-3表达水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-30a-5p表达水平。研究组患儿痊愈后进行1年随访,根据其是否复发分为复发组与未复发组。采用多因素Logistic回归分析ROU患儿再复发的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清SOCS-3与miR-30a-5p单独及二者联合检测对ROU患儿复发的预测价值。结果与对照组比较,研究组血清SOCS-3表达水平降低,miR-30a-5p表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组ROU患儿随访1年无病例脱落,复发组纳入120例患儿,未复发组纳入490例患儿。复发组有ROU家族史、饮食类型偏荤、牙刷刷毛偏硬、合并消化系统疾病比例及病程、血清TNF-α、IL-2水平均高于未复发组,每天刷牙次数≥2次、每天睡眠时间≥8 h比例及血清SOCS-3表达水平均低于未复发组,miR-30a-5p表达水平高于未复发组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组性别、年龄、每次刷牙时间、学习压力情况比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,饮食类型偏荤、牙刷刷毛偏硬、合并消化系统疾病、血清TNF-α、IL-2水平升高、miR-30a-5p表达水平升高均是ROU患儿再复发的危险因素(P<0.05),每天刷牙次数≥2次、每天睡眠时间≥8 h、血清SOCS-3表达水平升高均为ROU患儿再复发的保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清SOCS-3、miR-30a-5p表达水平单独及联合预测ROU患儿再复发的曲线下面积(AUC)分别为0.827、0.805、0.900,二者联合预测的AUC高于二者单独预测的AUC(Z=2.067、2.520,P<0.05)。结论ROU患儿血清SOCS-3表达水平降低、miR-30a-5p表达水平升高,且再复发患儿血清SOCS-3表达水平更低,miR-30a-5p表达水平更高,二者均对ROU患儿再复发具有预测效能,且联合预测效果更好。

妊娠期糖尿病患者血清LncRNA DANCR和miR-33a-5p水平表达对妊娠结局预测价值研究

目的 探讨妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)患者血清长链非编码核糖核酸分化拮抗非蛋白编码RNA (long noncoding RNA differentiation antagonizing nonprotein coding RNA,LncRNA DANCR)、微小RNA-33a-5p (miR-33a-5p)水平表达对妊娠结局的预测价值。方法 选取2021年8月~2023年2月于衡水市第四人民医院产检和分娩的154例GDM患者为GDM组,并根据妊娠结局分为良好结局组(n=115)和不良结局组(n=39);同期收集24周葡萄糖耐量试验正常的149例健康孕产妇作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清LncRNA DANCR和miR-33a-5p水平;采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清LncRNA DANCR和miR-33a-5p预测GDM患者不良妊娠结局的价值;采用Pearson相关性分析GDM不良妊娠结局患者血清LncRNA DANCR,miR-33a-5p与空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、稳态模式评估法计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的相关性;Logistic回归分析GDM患者不良妊娠结局的影响因素。结果 GDM组血清LncRNA DANCR水平(0.69±0.15)显著低于对照组(1.01±0.22),miR-33a-5p (1.59±0.40)及不良妊娠结局总发生率(25.34%)显著高于对照组(1.02±0.23,5.36%),差异具有统计学意义(t/χ^(2)=14.835,15.140,23.011,均P<0.05)。不良妊娠结局组血清LncRNADANCR水平(0.50±0.14)显著低于良好结局组(0.75±0.18),miR-33a-5p (2.00±0.58),FBG (8.97±0.66mmol/L),FINS (18.63±1.31pmol/ml)和HOMAIR (7.42±0.98)显著高于良好结局组(1.45±0.26,8.01±0.59mmol/L,14.32±1.29pmol/ml,5.10±0.86),差异具有统计学意义(t=7.895~17.961,均P<0.05)。LncRNA DANCR,miR-33a-5p单独及二者联合预测GDM患者不良妊娠结局的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.820,0.819和0.897。GDM不良妊娠结局患者血清LncRNA DANCR与FBG,FINS,HOMA-IR呈负相关(r=-0.498,-0.513,-0.509,均P<0.05),miR-33a-5p与FBG,FINS,HOMA-IR呈正相关(r=0.517,0.494,0.507,均P<0.05)。LncRNA DANCR是影响GDM患者不良妊娠结局的保护因素(OR=0.804,95%CI:0.693~0.933,P=0.004),miR-33a-5p是影响GDM患者不良妊娠结局的危险因素(OR=2.747,95%CI:1.444~5.225,P=0.002)。结论 GDM不良妊娠结局患者LncRNADANCR降低,miR-33a-5p升高,二者均是不良妊娠结局的影响因素。

miR-891a-5p及miR-383-5p与激素受体阳性早期乳腺癌术后发生远处转移的关系探讨

目的探讨微小RNAs(miRNAs,miR)-891a-5p及miR-383-5p与激素受体(HR)阳性早期乳腺癌术后发生远处转移的关系。方法62例HR阳性早期(T1~2N0M0期)乳腺癌患者,根据术后是否出现远处转移分为远处转移组(28例,出现远处转移)和未远处转移组(34例,未出现远处转移)。收集两组的临床乳腺癌标本,并检测组织的miRNAs表达水平。比较两组miR-891a-5p、miR-383-5p、miR-1295a表达水平,分析miR-891a-5p、miR-383-5p、miR-1295a对乳腺癌远处转移的诊断效能;比较两组miR-661、miR-296-3p、miR-128-3p表达水平,分析miR-891a-5p、miR-383-5p、miR-1295a表达水平与无远处转移生存率(DMFS)之间的关系。结果远处转移组miR-891a-5p、miR-383-5p、miR-1295a表达水平明显较未远处转移组减少,差异倍数分别为-2.519、-1.812和-1.443;远处转移组miR-891a-5p表达(1.099±0.899)明显低于未远处转移组的(2.768±2.194)(P<0.05)。miR-891a-5p低表达(<1.12)预测远处转移的敏感度和特异度分别为71.4%和82.4%,曲线下面积(AUC)为0.825(P=0.0000<0.01);miR-383-5p低表达(<1.15)预测远处转移的敏感度和特异度分别为53.4%和85.3%,AUC为0.738(P=0.0013<0.01);而miR-1295a低表达(<2.08)预测远处转移的敏感度和特异度分别为82.1%和50.0%,AUC仅为0.677(P=0.0175<0.05)。在诊断效能上,miR-891a-5p诊断乳腺癌远处转移的AUC、敏感度、阳性预测值、阴性预测值均优于miR-383-5p,miR-1295a诊断效能最差,表明miR-891a-5p、miR-383-5p低表达能预测HR阳性早期乳腺癌的远处转移。远处转移组的miR-661、miR-296-3p、miR-128-3p表达水平均低于未远处转移组,差异具有统计学意义(P<0.05)。62例患者的随访时间为59~131个月,中位随访时间为81个月。miR-891a-5p低表达患者的中位DMFS时间为48个月,5年DMFS仅为38.5%,低于miR-891a-5p高表达的86.1%(P<0.01)。miR-383-5p低表达患者的中位DMFS时间为52个月,5年DMFS为35.0%,低于miR-383-5p高表达的73.8%(P<0.01);miR-1295a低表达患者的中位DMFS时间为65个月,miR-1295a高、低表达患者的5年DMFS无明显差别(P>0.05)。结论miR-891a-5p、miR-383-5p有可能成为HR阳性乳腺癌的一个有价值的预后相关的生物标志物和治疗肿瘤的靶点。

血清miR-129-5p、miR-103a-3p在重症肺炎并发脓毒症患者中的水平及意义

目的探讨微小RNA(miR)-129-5p和miR-103a-3p在重症肺炎并发脓毒症患者血清中的水平及意义。方法收集2021年1月至2022年12月在该院接受治疗的128例重症肺炎并发脓毒症患者(重症肺炎并发脓毒症组)作为研究对象,根据患者入院28 d内的生存情况分为生存组(n=75)和死亡组(n=53);另选取同期在该院体检的128例健康志愿者作为对照组。比较各组血清miR-129-5p、miR-103a-3p及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平;采用多因素Logistic回归分析影响重症肺炎并发脓毒症患者预后的因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-129-5p、miR-103a-3p水平对重症肺炎并发脓毒症患者预后的预测价值。结果与对照组相比,重症肺炎并发脓毒症组血清miR-129-5p、miR-103a-3p水平明显降低,TNF-α、IL-6、HMGB1水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。死亡组血清miR-129-5p、miR-103a-3p水平明显低于生存组,TNF-α、IL-6、HMGB1水平明显高于生存组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-129-5p、miR-103a-3p水平升高是重症肺炎并发脓毒症患者死亡的保护因素(P<0.05),TNF-α、IL-6、HMGB1水平升高是重症肺炎并发脓毒症患者死亡的危险因素(P<0.05)。血清miR-129-5p、miR-103a-3p单项及联合检测预测重症肺炎并发脓毒症患者死亡的曲线下面积(AUC)分别为0.799(95%CI:0.719~0.865)、0.845(95%CI:0.770~0.903)、0.923(95%CI:0.862~0.963),2项联合检测预测的AUC大于血清miR-129-5p、miR-103a-3p单项检测(Z=3.270,P=0.001;Z=2.843,P=0.005)。结论重症肺炎并发脓毒症患者血清miR-129-5p和miR-103a-3p水平下调,二者联合检测对重症肺炎并发脓毒症患者死亡有较高的预测价值。

结直肠癌组织miR-330-5p、PTBP1的表达与病理参数和预后的关系

目的分析结直肠癌组织微小核糖核酸-330-5p(miR-330-5p)、多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)的表达与病理参数及预后的关系。方法选取2018年1月—2020年5月南通市中医院肛肠科收治的结直肠癌患者101例,收集术中部分癌组织及其癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测miR-330-5p、PTBP1 mRNA表达。通过Targetscan数据库预测miR-330-5p与PTBP1的结合位点,分析miR-330-5p、PTBP1 mRNA在结直肠癌组织不同临床病理参数中的差异;采用K-M法绘制其生存曲线;多因素Cox回归分析患者预后影响因素。结果与癌旁组织比较,结直肠癌组织miR-330-5p表达降低,PTBP1 mRNA表达升高(t/P=24.000/<0.001、19.233/<0.001)。miR-330-5p与PTBP1存在结合位点,二者在结直肠癌组织表达呈负相关(r/P=-0.679/<0.001)。与低分化程度、TNMⅢ期、有淋巴结转移比较,中高分化程度、TNMⅠ~Ⅱ期、无淋巴结转移结直肠癌组织miR-330-5p升高、PTBP1 mRNA表达降低(t/P=2.490/0.014、2.479/0.015,2.837/0.006,2.953/0.004,3.319/0.001、3.307/0.001)。101例结直肠癌患者3年总生存率为83.17%(84/101)。miR-330-5p高表达组、PTBP1 mRNA低表达组3年总生存率分别高于miR-330-5p低表达组、PTBP1 mRNA高表达组(χ^(2)/P=6.466/0.011、11.697/0.001)。结直肠癌患者死亡的独立危险因素为低分化、TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移和PTBP1 mRNA≥1.50,独立保护因素为miR-330-5p≥0.57[OR(95%CI)=3.642(1.278~10.381)、3.817(1.375~10.598)、4.013(1.418~11.351)、2.684(1.025~7.029)、0.338(0.129~0.890)]。结论结直肠癌组织miR-330-5p低表达和PTBP1 mRNA高表达,与分化程度、TNM分期、淋巴结转移和预后有关。

小儿原发性肾病综合征患者血清和尿液miR-30a-5p水平增加及临床意义

目的 检测分析原发性肾病综合征（NS）患儿血清全基因组微小核糖核酸（miRNA）表达谱,验证其中表达上调的miR-30a-5p,探讨其作为NS分子诊断指标的可能性.方法 收集南京军区南京总医院2010～2011年期间33例住院NS患儿未经治疗前血清和尿液样本,同时以30例年龄、性别匹配的健康儿童作对照.用高通量的TaqMan低密度芯片技术分别检测NS患儿和健康儿童的混合血清全基因组miRNA的表达量,再用TaqMan实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法对在患儿血清中表达上调的miR-30a-5p进行验证,同时测定miR-30a-5p在尿液中的含量.结果 低密度芯片结果显示,30种miRNA在患儿血清中的表达量是健康儿童的2倍以上,其中miR-30a-5p为正常对照的104倍.qRT-PCR检测证实,miR-30a-5p在患儿血清中的含量4.34±0.08,显著高于对照组1.00±0.02（Z=5.916,P〈0.000 1）,在患儿尿液中的水平也明显升高（3.44±0.05 vs 1.00±0.04）（Z=3.312,P=0.001）.用于诊断NS的血清miR-30a-5p ROC曲线下面积（AUCROC）为0.960（95% CI,0.915～1.000）,敏感度和特异度均为98.3%.相关性分析显示,血清或尿液中的miR-30a-5p含量与患儿年龄、性别、肾功能及血脂水平均无明显关联（P〉0.05）.结论 NS患儿血清miRNA表达谱与健康儿童有明显差异,miR-30a-5p在患儿血清及尿液中水平显著升高,与NS密切相关,是NS潜在的分子诊断指标.

miR-30a-5p靶向调控TRIM31表达对结直肠癌细胞5-氟尿嘧啶耐药的逆转作用及其机制

目的:探讨miR-30a-5p靶向三结构域蛋白31(TRIM31)基因对结直肠癌(CRC)细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的影响,并阐明其作用机制。方法:收集27例5-FU化疗敏感(5-FU/S组)CRC患者和23例5-FU化疗耐药(5-FU/R组)CRC癌患者的CRC组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测癌组织中miR-30a-5p和TRIM31 mRNA表达水平,Pearson相关分析法分析miR-30a-5p和TRIM31 mRNA表达的相关性。体外培养人CRC 5-FU耐药细胞HT-29/5-FU细胞及其亲本HT-29细胞,MTT法检测2种细胞增殖活性并计算半数抑制浓度(IC50)和耐药指数(RI),RT-qPCR法检测2种细胞中miR-30a-5p和TRIM31 mRNA表达水平,Western blotting法检测2种细胞中TRIM31蛋白表达水平。将HT-29/5-FU细胞分为空白对照组、mimics NC组(转染miR-30a-5p阴性对照mimics NC)、miR-30a-5p mimics组(转染miR-30a-5p mimics)、miR-30a-5p mimics+vector组(转染miR-30a-5p mimics和阴性对照空载体)和miR-30a-5p mimics+TRIM31组(转染miR-30a-5p mimics和TRIM31过表达载体)。RT-qPCR法检测各组HT-29/5-FU细胞中miR-30a-5p和RTIM31 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组HT-29/5-FU细胞中TRIM31蛋白表达水平,MTT法检测各组HT-29/5-FU细胞增殖活性,流式细胞术检测各组HT-29/5-FU细胞凋亡率,双荧光素酶报告基因系统验证miR-30a-5p与TRIM31的靶向关系。结果:与5-FU/S组比较,5-FU/R组患者CRC组织中miR-30a-5p表达水平降低(P<0.01),TRIM31 mRNA表达水平升高(P<0.01),miR-30a-5p和TRIM31 mRNA表达水平呈负相关关系(R2=0.885,P<0.01)。与HT-29细胞比较,HT-29/5-FU细胞中miR-30a-5p表达水平降低(P<0.01),TRIM31 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01)。HT-29/5-FU细胞和HT-29细胞的IC50值分别为(104.41±0.22)和(9.82±0.31)mg·L^(-1),RI值为12.42。与空白对照组和mimics NC组比较,miR-30a-5p mimics组HT-29/5-FU细胞中miR-30a-5p表达水平升高(P<0.01),TRIM31蛋白表达水平降低(P<0.01),HT-29/5-FU细胞增殖活性明显降低(P<0.01),HT-29/5-FU细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。与miR-30a-5p mimics组比较,miR-30a-5p mimics+TRIM31组HT-29/5-FU细胞中TRIM31蛋白表达水平升高(P<0.01),HT-29/5-FU细胞增殖活性明显升高(P<0.01),HT-29/5-FU细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。双荧光素酶报告基因系统证实TRIM31是miR-30a-5p的靶基因。结论:miR-30a-5p通过靶向TRIM31基因表达增强CRC耐药细胞对5-FU的敏感性。

血清miR-330-5p、miR-34a-5p、VEGF水平与急性缺血性脑卒中患者脑侧支循环分级的相关性

目的分析血清微小RNA-330-5p(miR-330-5p)、miR-34a-5p、血管内皮生长因子(VEGF)水平与急性缺血性脑卒中患者脑侧支循环分级的相关性。方法选取2019年7月—2021年1月在石家庄市第三医院神经内科住院治疗且建立脑侧支循环的急性缺血性脑卒中患者104例为研究组,数字减影血管造影(DSA)检测脑侧支循环情况,根据开放层次分为一级侧支循环亚组(一级亚组)36例,二级侧支循环亚组(二级亚组)51例,三级侧支循环亚组(三级亚组)17例,同期选取医院健康体检者40例为健康对照组。检测血清miR-330-5p、miR-34a-5及VEGF水平,Pearson法分析急性缺血性脑卒中患者血清miR-330-5p、miR-34a-5p与VEGF水平的相关性,受试者工作特征曲线(ROC)评价血清miR-330-5p、miR-34a-5p、VEGF水平对急性缺血性脑卒中患者三级脑侧支循环建立的预测价值。结果研究组血清miR-330-5p、miR-34a-5p、VEGF水平均高于健康对照组(t/P=17.045/0.000、26.347/0.000、6.736/0.000);一级亚组、二级亚组、三级亚组血清miR-330-5p、miR-34a-5p、VEGF水平依次升高(F/P=54.260/0.000、161.507/0.000、11.309/0.000);Pearson分析结果显示,急性缺血性脑卒中患者血清miR-330-5p、miR-34a-5p与VEGF水平均呈正相关(r/P=0.674/0.000、0.624/0.000);ROC分析结果显示,血清miR-330-5p、miR-34a-5p、VEGF水平及三者联合预测急性缺血性脑卒中患者三级脑侧支循环建立的曲线下面积(AUC)分别为0.874、0.903、0.870、0.951,三者联合诊断效能更高。结论血清miR-330-5p、miR-34a-5p、VEGF水平随急性缺血性脑卒中患者脑侧支循环分级增加而升高,对三级脑侧支循环的建立有一定的预测价值。