中风活心软胶囊通过靶向微小RNA-126诱导缺氧诱导因子-1α/促凋亡调节蛋白BNIP3信号通路促进自噬减轻脑缺血再灌注损伤大鼠神经损伤的作用机制研究

目的探讨中风活心软胶囊通过靶向微小RNA(miRNA)-126诱导缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/促凋亡调节蛋白BNIP3信号通路促进自噬减轻脑缺血再灌注损伤大鼠神经损伤的作用机制。方法选取30只无特定病原体(SPF)级雄性SD大鼠,随机分为空白组、模型组与治疗组,每组10只。采用Zea Longa法建立右侧大脑中动脉缺血(MCAO)大鼠模型。治疗组给予中风活心软胶囊。采用改良神经功能损害评分(mNSS)评估大鼠神经功能缺损情况,透射电镜观察缺血半暗区皮质神经元及自噬囊泡超微结构,蛋白质免疫印迹(WB)法和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法分别检测缺血半暗区皮质雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、HIF-1α蛋白及其mRNA和miR-126的表达水平。结果模型组、治疗组mNSS评分均高于对照组,但治疗组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、治疗组缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1α蛋白表达水平均高于对照组,但治疗组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、治疗组缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1αmRNA表达水平均高于对照组,miR-126表达水平低于对照组,但治疗组mTOR、HIF-1αmRNA表达水平低于模型组,miR-126表达水平高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组缺血半暗区皮质神经元及电镜下自噬囊泡数量明显增加,细胞结构损坏减轻。结论中风活心软胶囊可显著提高脑缺血大鼠缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1α因子表达,其作用机制可能是通过激活miR-126表达进而靶向调控mTOR/HIF-1α信号通路,促进自噬,从而发挥其脑保护效应。

电针水沟穴对大脑中动脉闭塞大鼠脑缺血后微小RNA-126及靶基因的影响

目的观察电针水沟穴对大脑中动脉闭塞（MCAO）大鼠脑缺血后微小RNA-126（miR-126）及其靶基因磷脂酰肌醇-3-激酶调节亚单位（PIK3R2）mRNA、出芽相关蛋白-1（SPRED1）mRNA表达的影响，从血管新生角度探讨电针治疗脑缺血的可能机制。方法将20只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组、假手术组、模型组、治疗组，每组5只。参照改良Longa线栓法复制MCAO大鼠模型，假手术组不插入线拴。制模后治疗组于水沟穴（大鼠唇裂鼻尖下1mm中处，向上斜剌1mm）与右耳根部皮肤接G6805—1A型治疗仪进行电针治疗，1mA电流、2Hz，持续留针30min，连续治疗3d；正常组、假手术组、模型组制模后不进行处理。采用Berderson评分评价大鼠神经功能缺损程度；用实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测miR-126及PIK3R2、SPRED1的mRNA表达。结果与正常组比较，模型组大鼠有不同程度的神经功能缺损，Berderson评分明显增高（分：11．20±1．64比0，P〈0．01），治疗后Berderson评分较模型组明屁降低（分：7．20±1．48比11．20±1．64，P〈0．01）。模型组miR-126、PIK3R2及SPRED1的mRNA表达均较正常组明显升高[miR-126（2^-△△Cr）：1．13±0．48比0．16±0．12．PIK3R2mRNA（2^-△△Cr）：12．03±6．09比0．42±0．33，SPRED1mRNA（2^-△△Cr）：8．77±3．85比0．21±0．40，均P〈0．01]；治疗组miR-126表达较模型组明显升高（2^-△△Cr：1．93±0．81比1．13±0．48），PIK3R2、SPRED1的mRNA表达较模型组明照明显降低[PIK3R2mRNA（2^-△△Cr）：5．78±3．61比12．03±6．09，SPRED1mRNA（2^-△△Cr）：3．90±3．24比8．77±3．85，P〈0．05或JP〈0．01]。结论电针水沟穴能促大鼠脑缺血后神经功能体征的恢复，其机制可能与其调控miR-126及其靶基因从而促进了脑血管新生有关.

微小RNA-126在食管癌组织中的表达及其对食管癌EC109细胞增殖和迁移的影响

目的探讨微小RNA(mi RNA)-126在食管癌组织中的表达及其对食管癌EC109细胞增殖和迁移的影响。方法收集该院胸外科手术切除且保存完整的食管癌及相应癌旁组织标本30例,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测癌组织和癌旁组织中mi RNA-126 m RNA表达;mi RNA-126 mimi和control转染EC109细胞,设置阴性对照组(转染mi RNA mimic control)、转染组、空白对照组(仅转染试剂),PCR检测转染EC109细胞mi RNA-126表达,转染细胞培养1、3、5 d后MTT检测细胞增殖情况,Transwell小室法检测细胞迁移活力。结果癌组织中mi R-126 m RNA低于癌旁组织(P<0.05);转染EC109细胞后mi RNA-126在阴性对照组和空白对照组表达量均低于转染组(P<0.05);三组转染EC109细胞随着培养时间延长,细胞OD值均逐渐升高(P<0.05),培养第3、5天细胞OD值组间差异显著(P<0.05),其中转染组EC109细胞OD值均低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05);转染EC109细胞迁移活力检测结果显示,转染组OD值低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论食管癌组织中mi RNA-126低表达,并且对食管癌EC109细胞增殖和迁移具有一定抑制作用。

微小RNA-126在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的观察微小RNA-126(miR-126)在结肠癌组织中的表达情况,并分析miR-126的表达与结肠癌患者临床病理特征之间的关系。方法收集2015年1月至2018年9月吉林省人民医院行结肠癌根治术或肠镜下结肠息肉切除术102例患者的手术标本,包括结肠癌70例、腺瘤性息肉32例。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测腺瘤组织、结肠癌及其癌旁组织中miR-126的表达。以结肠癌组织miR-126平均表达值为界,将结肠癌病例分为高表达组和低表达组,分析miR-126表达与患者临床特征及病理参数的关系。结果 miR-126在腺瘤型息肉组织中的表达(0. 75±0. 09)明显低于癌旁组织(1. 00),而在高、中、低分化结肠癌组织中的表达[(0. 47±0. 04)、(0. 36±0. 12)、(0. 29±0. 07)]明显低于腺瘤型息肉组织(P <0. 05或P <0. 01)。以miR-126平均表达值(0. 37±0. 03)为界将结肠癌患者分为高表达组(19例)和低表达组(51例),miR-126的低表达与肿瘤分化程度、TNM分期、是否发生淋巴结转移及远处转移具有明显相关性具有明显相关性(P <0. 05或P <0. 01)。结论 miR-126在结肠癌中低表达,其可能作为抑癌基因与结肠癌的发生和进展有关。

人胃癌组织中微小RNA-126和解整合素-金属蛋白酶9的表达及其与临床病理参数的相关性

目的分析人胃癌组织中微小RNA-126(miR-126)及解整合素-金属蛋白酶9(ADAM9)的表达及其与临床病理参数的相关性,探讨二者与胃癌发生发展的关系。方法收集2020年1月至2022年9月吉林省人民医院收治并经临床和病理组织学确诊为胃腺癌的46例患者手术切除的癌组织及距离癌组织3~5 cm的癌旁组织。采用荧光定量聚合酶链反应法检测胃癌组织和癌旁组织中miR-126及ADAM9 mRNA的表达,免疫组织化学法检测ADAM9蛋白的表达。记录患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、肿瘤分期及转移等基本信息,分析miR-126及ADAM9的表达与胃癌患者临床病理参数的相关性。结果胃癌组织中miR-126 mRNA的相对表达量显著低于癌旁组织[(0.53±0.24)比(1.00±0.00)](t=-8.613,P<0.001),ADAM9 mRNA的相对表达量显著高于癌旁组织[(1.43±0.56)比(1.00±0.00)](t=3.412,P=0.002)。ADAM9在胃癌组织中的阳性率显著高于癌旁组织[73.9%(34/46)比15.2%(7/46)],差异有统计学意义(χ^(2)=29.723,P<0.001)。胃癌组织中miR-126的表达水平与患者肿瘤分化程度、TNM分期以及远处转移有关(均P<0.05)。胃癌组织中ADAM9的表达与患者肿瘤分化程度、淋巴结转移有关(均P<0.05)。结论胃癌组织中miR-126的表达水平下调,ADAM9表达上调,二者之间可能存在负调节作用,且与胃癌的进展及转移关系密切。

微小RNA-126和血管内皮生长因子在增殖性糖尿病视网膜病变患者视网膜前膜中的表达及意义

目的探讨微小RNA-126(miR-126)和血管内皮生长因子(VEGF)在增殖性糖尿病视网膜病变(PDR)患者视网膜前膜组织中的表达及临床意义。方法选取眼科择期行玻璃体切割手术的PDR患者65例纳入研究组,另选取同期行玻璃体切割手术的特发性黄斑裂孔患者62例纳入对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测2组患者视网膜前膜组织中miR-126、VEGF mRNA表达水平,采用Western blotting法检测VEGF蛋白表达水平,检测患者空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、糖化血红蛋白(HbA1c)水平,采用Pearson相关分析法分析miR-126与VEGF mRNA的相关性及两者与FGB、HbA1c、TG的相关性,并对PDR发生的影响因素进行Logistic多元回归分析。结果研究组患者视网膜前膜组织中miR-126表达水平低于对照组,VEGF mRNA及其蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组患者FBG、TG和HbA1c水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);miR-126与VEGF mRNA呈显著负相关(P<0.05);miR-126与FGB、HbA1c、TG呈显著负相关(P<0.05),而VEGF mRNA与FGB、HbA1c、TG呈显著正相关(P<0.05);Logistic多元回归分析显示,miR-126与VEGF mRNA表达水平均是患者发生PDR的独立影响因素。结论 PDR患者视网膜前膜组织中miR-126表达显著降低,VEGF表达显著升高,miR-126可能通过负性调控VEGF表达而参与PDR的发生发展。

微小RNA-126和微小RNA-155在冠心病合并糖耐量减低患者中的表达及阿卡波糖的干预作用

目的探讨微小RNA(miR)-126和miR-155在冠心病(CHD)合并糖耐量减低(IGT)患者中的表达及阿卡波糖的干预作用.方法纳入CHD患者179例(单纯CHD组115例、CHD合并IGT组64例)和健康志愿者43例(对照组).比较3组受试者的生化指标和血糖相关指标,采用qRT-PCR检测血浆miR-126、miR-155的表达水平.单纯CHD组患者给予CHD常规治疗3个月;CHD合并IGT组患者给予CHD常规治疗和阿卡波糖片口服3个月,比较治疗前后其miR-126和miR-155表达水平等.结果 3组受试者miR-126、miR-155、2hPG、空腹胰岛素浓度(FIns)及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)比较,差异均有统计学意义(P<0.05).单纯CHD组miR-126和miR-155水平均低于对照组(P<0.05).CHD合并IGT组2h PG、FIns、HOMA-IR均高于对照组和单纯CHD组,miR-126和miR-155水平均低于对照组和单纯CHD组(P<0.05).Pearson相关分析结果显示,miR-126和miR-155水平与HOMA-IR及2h PG均呈负相关(P<0.05).二分类logistic逐步回归分析结果显示,HOMA-IR、2h PG、miR-126及miR-155均与CHD合并IGT相关(P<0.05).治疗后CHD合并IGT组患者miR-126和miR-155水平均高于治疗前,2h PG、FIns及HOMA-IR均低于治疗前(P<0.05).结论 CHD合并IGT患者血浆miR-126和miR-155水平下调,可能与胰岛素抵抗相关,而阿卡波糖可增加其水平.

血浆微小RNA-126与微小RNA-130对急性心肌梗死急诊经皮冠状动脉介入治疗术后的预后评估价值

目的 探讨血浆微小RNA(miR)-126与miR-130对急性心肌梗死急诊经皮冠状动脉介入治疗(PCI)的预后评估价值。方法 选取170例急性心肌梗死患者为病例组,同期60例健康体检人员为对照组,比较病例组与对照组血浆miR-126与miR-130的含量。患者术后随访12个月,根据术后30 d以及术后12个月主要不良心血管事件(MACE)发生情况,将患者分为近期预后不良组(n=26,术后30 d发生MACE)与近期预后良好组(n=144,术后30 d未发生MACE)、远期预后不良组(n=40,术后12个月发生MACE)与远期预后良好组(n=130,术后12个月未发生MACE)。比较近期不同预后组左室射血分数(LVEF)、N端脑钠肽前体(NT-ProBNP)、肌钙蛋白T(cTnT)表达水平差异。比较近期不同预后组和远期不同预后组的miR-126与miR-130相对表达水平的差异。采用Pearson相关法分析指标的相关性;受试者工作特征曲线分析miR-126与miR-130相对表达水平对近期、远期预后结局的预测效能。结果 病例组血浆miR-126相对表达水平低于对照组,miR-130相对表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。近期预后不良组LVEF低于近期预后良好组,NT-ProBNP、cTnT表达水平高于近期预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。近期预后不良组患者血浆miR-126相对表达水平低于近期预后良好组,而miR-130的相对表达水平高于近期预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。远期预后不良组患者血浆miR-126相对表达水平低于远期预后良好组,而miR-130的相对表达水平高于远期预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关法分析显示,miR-126相对表达水平与LVEF呈正相关,与NT-ProBNP、cTnT呈负相关(P<0.05);miR-130的相对表达水平与LVEF呈负相关,与NT-ProBNP、cTnT呈正相关(P<0.05)。血浆miR-126与miR-130的相对表达水平对患者近期预后有一定诊断效能(P<0.05),但评估患者术后12个月MACE预后的敏感度、特异度较低(P>0.05)。结论 血浆miR-126与miR-130可作为早期诊断急性心肌梗死的有效指标因子,但无法作为患者远期预后评估的生物学标志物。

微小RNA-126抑制间质转化中内皮祖细胞的增殖与迁移

目的探讨微小RNA-126(mi R-126)对间质转化中的血管内皮祖细胞(EPC)增殖与迁移的影响。方法分离大鼠骨髓源内皮祖细胞,转化生长因子β1(TGF-β1)诱导EPC的间质转化,慢病毒转染建立mi R-126过表达EPC,通过MMT法检测EPC的增殖,细胞划痕实验与Transwell法检测细胞迁移能力。结果 TGF-β1成功诱导EPC间质转化,mi R-126抑制间质转化中EPC损伤细胞间距的缩短,抑制Transwell小室膜下单位面积的细胞数量。结论 mi R-126过表达抑制间质转化中EPC的增殖与迁移。

微小RNA-126基因在CD4＋T细胞介导小鼠自身免疫性肠炎中的作用

目的研究微小RNA-126(micro RNA-126,miR-126)基因敲减(knock down,KD)对CD4^+T细胞介导的自身免疫性结肠炎模型的影响并探讨其意义。方法常规利用DSS溶液喂养野生型(WT)和miR-126基因敲减(miR-126KD)小鼠,诱导急性自身免疫性结肠炎模型。HE染色观察小鼠结肠组织病理变化;FACS检测CD4^+T细胞的比例变化及其表面活化分子CD62L、CD44的表达;MACS分选出WT和miR-126KD小鼠脾脏中CD4^+CD62L+T细胞,CFSE染色标记后,分别经尾静脉转输给WT小鼠,再诱导自身免疫性结肠炎模型;HE染色观察结肠组织病理变化;FACS检测CFSE阳性CD4^+T细胞表面活化分子CD62L、CD44的表达变化。结果与对照组相比,miR-126KD小鼠肠组织绒毛缺失不完整,黏膜上皮出现较大溃疡,炎性细胞浸润增加;FACS结果显示,miR-126KD组小鼠CD4^+T细胞比例和总数显著上调(P<0.01);且高表达CD44,低表达CD62L;过继转输实验结果显示,miR-126KD小鼠CD4^+T细胞转输组结肠组织损伤加重;同时,CFSE+细胞高表达CD44,低表达CD62L。结论 miR-126基因敲减加重葡聚糖硫酸钠所致肠炎的病变程度。

微小RNA-126在血管内皮细胞中的生物学功能

内皮细胞在维持血管完整性、再生及创伤修复等方面发挥重要作用,微小RNA-126特异地存在于不同来源的内皮细胞内,通过对相应mRNA及蛋白表达发挥调控作用,进而调节心血管的生长发育及损伤修复。

微小RNA-126靶向调控血管内皮生长因子对新生大鼠缺氧-缺血性脑病神经元损伤的影响

目的探讨微小RNA-126(miR-126)靶向调控血管内皮生长因子(VEGF)对新生大鼠缺氧-缺血性脑病(HIE)神经元损伤的影响。方法选择清洁级新生7日龄SD雄性大鼠随机分为4组,假手术组(A组)、HIE组(B组)、HIE+阴性对照组(C组)和HIE+miR-126过表达组(D组),每组18只。建立HIE模型后进行大鼠神经功能缺损评分及脑组织含水量测定;采用HE染色光学显微镜下观察各组大鼠脑海马组织CA1区病理形态学改变;采用Real-time PCR检测大鼠脑组织miR-126和VEGF的表达水平;采用免疫组织化学法检测各组大鼠脑海马组织CA1区VEGF蛋白表达情况;采用双荧光素酶靶标实验验证miR-126与VEGF基因的靶向关系;采用流式细胞术检测脑海马组织神经元凋亡水平;采用Western blotting检测各组大鼠脑组织剪切Caspase-3(cleaved-Caspase-3)蛋白表达水平。结果 A组大鼠无神经功能损伤,神经行为学评分为0分,脑组织无损伤;B组和C组大鼠神经行为学评分分别为(2.50±0.55)分和(2.33±0.82)分,脑组织损伤明显;D组大鼠神经行为学评分为(1.50±0.55)分,脑组织损伤有改善;与A组相比,B组、C组和D组大鼠神经行为学评分(P<0.05)及脑组织含水量(P<0.05)升高;与B组相比,D组大鼠神经行为学评分(P<0.05)及脑组织含水量(P<0.05)降低。与A组相比,B组和C组大鼠脑组织miR-126的表达水平均显著降低,VEGF mRNA和蛋白表达水平、脑海马组织神经元凋亡率及脑组织cleavedCaspase-3的表达水平均显著升高(P<0.05);与B组相比,D组大鼠miR-126的表达水平均显著升高,VEGF mRNA和蛋白表达水平、脑海马组织神经元凋亡率及脑组织cleaved-Caspase-3的表达水平均显著降低(P<0.05)。荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-126和VEGF能够靶向结合。结论过表达miR-126后可降低脑海马组织神经元凋亡水平,改善HIE的发展,其作用机制可能与miR-126靶向抑制VEGF基因表达有关。

微小RNA-126及内皮素-1与阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征合并冠心病的相关性

目的探讨微小RNA-126（miR-126）及内皮素（ET）-1与阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）合并冠心病（CHD）的相关性。方法依据睡眠呼吸暂停低通气指数（AHI）水平，将80例CHD患者分为OSAHS组（AHI≥5次／小时）36例和非OSAHS组（AHI〈5次／小时）44例。分别对两组患者进行多导睡眠监测并记录AHI，采用Gensini评分评估其冠状动脉狭窄程度，采用实时聚合酶链反应（Real-timePCR）检测血清miR-126的表达量，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清ET—1的表达量。采用Pearson相关分析OSAHS组患者Gensini评分、血清ET-1、miR。126及AHI之间的相关性。结果OSAHS组患者血清miR-126的表达量低于非OSAHS组，血清ET．1的表达量和AHI均高于非OSAHS组（P〈0．05），而两组间Gensini评分比较差异无统计学意义（P〉0．05）。Pearson相关分析结果显示，OSAHS组患者的Gensini评分与血清ET-1（r=0．519，P=0．008）、AHI（r=0．580，P=0．003）呈正相关，且血清ET-1与AHI呈正相关（r=0．676，P=0．001）；血清miR．126与ET．1（r=-0．368，P=0．034）、AHI均呈负相关（r=-0．384，P=0．041）。Gensini评分与血清rniR-126之间无相关性（r=-0．168，P=0．235）。结论OSAHS合并CHD患者血清miR-126和ET-1的表达量异常，表达量下降的血清miR-126可能通过负反馈机制上调ET-1的表达量。

微小RNA-126与冠心病发生发展关系的研究进展

微小RNA(miRNAs)是一类高度保守的内源性非编码小分子单链RNA,能通过特异性识别靶基因mRNA,在翻译水平调节基因表达,从而调节细胞分化、生长发育、增殖与凋亡、激素分泌等各种过程。现已经发现多种miRNA,其中微小RNA-126(miR-126)主要存在于血管内皮细胞和血小板当中,与血管的生成、发育、修复功能密切相关,与高血压、冠心病、心力衰竭等心血管疾病密切相关。其中,冠心病即将成为危害全人类健康的头号致死杀手,其诊断和治疗备受关注。本文就miR-126在冠心病发生发展过程中的作用进行系统综述。

结肠癌微小RNA-126的表达情况及其与高尔基体磷酸化蛋白3的关系

目的探讨结肠癌微小RNA-126(miR-126)的表达情况及其与高尔基体磷酸化蛋白3(GOLPH3)的关系。方法选取10例结肠癌及相应正常结肠上皮组织标本,检测miR-126的表达水平。将miR-126的模拟物和阴性对照(N.C.)分别转染至HCT116细胞,48 h后检测细胞中GOLPH3 mRNA和蛋白的表达情况。采用生物学信息方法预测miR-126和GOLPH3是否在存在靶向作用关系。构建p-GOLPH3 3'-UTR和p-GOLPH3 3'-UTR mut两种报告基因质粒,与miR-126模拟物进行共转染结肠癌细胞HCT116,同时以未转染的HCT116细胞为空白对照,仅转染N.C.的HCT116细胞为阴性对照组,检测各组细胞的荧光强度。结果结肠癌组织中miR-126的相对表达水平低于相应正常结肠上皮组织(P<0.05),转染miR-126模拟物的结肠癌细胞HCT116的GOLPH3 mRNA及蛋白表达水平均低于转染N.C.的结肠癌细胞HCT116。生物信息学分析结果提示miR-126与GOLPH3存在靶向作用关系。与空白对照组及阴性对照组比较,p-GOLPH3-3'UTR组的荧光值降低(P<0.05),但p-GOLPH3-3'UTR mut组的荧光值变化差异无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-126在结肠癌组织中表达下调,其通过调控GOLPH3在结肠癌细胞中的表达可能是结肠癌的发病机制之一。

冠状动脉粥样硬化性心脏病血浆微小RNA-126的表达水平及其临床意义

目的:探讨微小RNA(miRNA)-126在冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者血浆中的表达情况及临床意义。方法:收集2015年2月至2015年6月在山西医科大学第一医院心内科住院的114例冠心病患者(冠心病组)和40例健康者(对照组)的血浆,将冠心病组分为急性心肌梗死组(AMI组,n=40)、不稳定型心绞痛组(UA组,n=38)、稳定型心绞痛组(SA组,n=36)3个亚组,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测各组血浆miRNA-126的表达水平,并分析各组间的表达差异。结果:AMI组miR-126的相对表达水平(0.65±0.53)与对照组(1.0)、UA组(0.93±0.68)、SA组(0.96±0.55)相比明显下降,差异有统计学意义(P均<0.05);UA组、SA组与对照组相比有下降趋势,但差异无统计学意义(P均>0.05).结论:血浆miR-126在冠心病患者中的表达存在差异,miR-126在AMI患者中表达明显下降,可能成为诊断AMI的新型标志物。

微小RNA-126基因敲减对CD4^+T细胞体外功能的影响

目的研究微小RNA-126(microRNA-126,miR-126)基因敲减(knock down,KD)后对CD4^+T细胞体外功能的影响并探讨其意义。方法 MACS分选miR-126 KD小鼠脾脏CD4^+CD62L^+T细胞,ConA刺激48h后,Real-time PCR技术检测细胞内miR-126成熟体表达水平;FACS分别检测CD4^+T细胞表面活化分子CD69、CD62L、CD44和增殖相关分子Ki-67,以及细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17表达变化;Annexin V/PI双染色法检测CD4^+T细胞的凋亡情况。结果与野生型(wide-type,WT)小鼠相比,miR-126KD小鼠的CD4^+T细胞中miR-126成熟体表达显著下调(P<0.001);miR-126 KD小鼠CD4^+T细胞活化后CD62L的表达比例显著减少(P<0.01),而CD69、CD44的比例显著增加(P<0.05);同时Ki-67^+的比例也明显增加(P<0.05);此外,miR-126 KD小鼠CD4^+T细胞的INF-γ表达比例显著上调(P<0.001),IL-4的比例显著下调(P<0.01),而IL-17的比例没有明显变化(P>0.05);最后,CD4^+T细胞的凋亡比例显著减少(P<0.05)。结论 miR-126基因敲减后CD4^+T细胞的活化、增殖和相关细胞因子分泌均明显增强,为后续深入探讨miR-126在免疫应答中的作用及机制提供前期实验基础。

血浆循环微小RNA-126微小RNA-155与老年冠心病患者冠状动脉支架内再狭窄的相关性分析

目的:检测老年冠心病患者血浆循环微小RNA-126(miR-126)和微小RNA-155(miR-155)的表达情况,并探讨二者表达水平与患者行经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后发生支架内再狭窄(ISR)发生的相关性。方法:选取2017年8月至2019年9月在本院经冠状动脉造影确诊为冠心病并行PCI的老年患者135例作为研究对象,术后1年复查冠状动脉造影,并根据是否发生ISR分为再狭窄组(n=39)和非再狭窄组(96)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各受试者血浆循环miR-126和miR-155表达水平;通过研究对象工作特征曲线(ROC)评估血浆循环miR-126和miR-155表达水平在老年冠心病患者行PCI术后发生ISR的诊断价值;采用Logistic回归分析老年冠心病患者行PCI术后发生ISR的影响因素。结果:再狭窄组血浆循环miR-126、miR-155表达水平均显著低于非再狭窄组(P<0.05)。ROC结果显示:血浆循环miR-126、miR-155诊断老年冠心病患者行PCI术后发生ISR的AUC分别为0.843、0.708,截断值分别为3.158、1.424,此时对应灵敏度分别为74.0%、59.4%,特异度分别为82.1%、76.9%;血浆循环miR-126、miR-155联合检测老年冠心病患者行PCI术后发生ISR的AUC为0.864,此时对应灵敏度和特异度分别为79.2%、84.6%。Logistic分析显示,血浆循环miR-126、miR-155低表达是影响老年冠心病患者行PCI术后发生ISR的独立危险因素。结论:循环miR-126、miR-155在老年冠心病行PCI术后发生ISR患者血浆中表达水平明显降低,两者参与老年冠心病患者行PCI术后ISR的发生及发展,提示血浆循环miR-126、miR-155可能作为老年冠心病患者行PCI术后发生ISR的早期诊断及病情评估的潜在生物学指标。

分泌型卷曲相关蛋白4、微小RNA-126-5p在三阴乳腺癌组织中表达及与临床病理特征的关系

目的探究分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)、微小RNA-126-5p在三阴乳腺癌组织中表达及与临床病理特征的关系。方法选取2014年10月至2016年10月在沧州市人民医院接受手术切除治疗的三阴乳腺癌病人78例作为研究对象,取其癌组织及癌旁组织(距离肿瘤边缘5 cm),以SP免疫组化法检测SFRP4表达情况,以RT-qPCR分析法检测miR-126-5p水平。收集病人资料,分析SFRP4、miR-126-5p表达与三阴乳腺癌病人临床病理特征的关系。以Spearman等级相关性分析SFRP4、miR-126-5p表达的相关性。绘制K-M生存曲线分析病人生存状态,行Cox多因素分析影响三阴乳腺癌病人预后的因素。结果三阴乳腺癌组织中SFRP4阳性率[53.85%(42/78)]明显高于癌旁组织[37.18%(29/78)](P<0.05),miR-126-5p表达0.78±0.21明显低于癌旁组织1.00±0.00(P<0.05)。对纳入病人进行临床病理特征分析,结果显示,SFRP4表达与淋巴结转移[78.13%(25/32)比36.96%(17/46)]、肿瘤浸润程度[65.12%(28/43)比22.86%(8/35)]、细胞增殖抗原Ki-67表达[83.33%(20/24)比40.74%(22/54)]有关(P<0.05),而与年龄、肿瘤大小、TNM分期、组织学分级无关(P>0.05)。miR-126-5p与淋巴结转移[81.25%(26/32)比30.43%(14/46)]、Ki-67表达[70.83%(17/24)比42.59%(23/54)]有关(P<0.05),而与年龄、肿瘤大小、TNM分期、组织学分级及肿瘤浸润程度无关(P>0.05)。行Spearson相关性分析,结果显示,SFRP4、miR-126-5p在三阴乳腺癌组织中具有相关性(P<0.05)。对病人进行为期5年的随访,生存63例,死亡15例。miR-126-5p低表达组病人生存28例,死亡12例,miR-126-5p高表达组生存35例,死亡3例,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);SFRP4阳性组病人生存29例,死亡13例;SFRP4阴性组病人生存34例,死亡2例,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。行多因素Cox分析,结果显示,有淋巴结转移、Ki-67阳性、miR-126-5p低表达、SFRP4阳性为影响三阴乳腺癌病人预后的独立危险因素(P<0.05)。结论三阴乳腺癌组织中miR-126-5p呈低表达,SFRP4阳性率高,两者表达具有相关性,可作为预测三阴乳腺癌病人预后的重要指标。

微小RNA-126对胃癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响及其机制

目的探讨微小RNA(miR)-126对胃癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响及其可能机制。方法将胃癌细胞株SGC-7901分为miR-126过表达组(miR-126-mimic组)、miR-126过表达阴性对照组(miR-126-mimic-NC组)、miR-126沉默组(miR-126-inhibitor组)、miR-126沉默阴性对照组(miR-126-inhibitor-NC组),转染相应慢病毒,检测各组细胞miR-126的表达情况。采用CCK-8试验、平板克隆实验检测miR-126对SGC-7901细胞增殖的影响,采用划痕实验、Transwell实验分别检测miR-126对SGC-7901迁移及侵袭能力的影响,并检测各组细胞中高尔基体磷蛋白3(GOLPH3)、磷脂酰肌醇-3激酶调控亚基2(PI3KR2)、蛋白激酶B 1(Akt1)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的mRNA及蛋白表达水平,以及磷酸化Akt1(p-Akt1)磷酸化mTOR(p-mTOR)的蛋白表达水平。结果(1)miR-126-mimic组miR-126的表达水平高于miR-126-mimic-NC组,miR-126-inhibitor组miR-126的表达水平低于miR-126-inhibitor-NC组(均P<0.05)。(2)24 h、48 h、72 h时,miR-126-mimic组的吸光度值、愈合率均低于miR-126-mimic-NC组,克隆数、迁移细胞数、穿膜细胞数少于miR-126-mimic-NC组,而miR-126-inhibitor组以上指标高于或多于miR-126-inhibitor-NC组(均P<0.05)。(3)miR-126-mimic组GOLPH3、PI3KR2、Akt1、mTOR的蛋白及mRNA表达水平,以及p-Akt1、p-mTOR的蛋白表达水平均低于miR-126-mimic-NC组,而miR-126-inhibitor组以上指标均高于miR-126-inhibitor-NC组(均P<0.05)。结论miR-126可通过GOLPH3靶向调控PI3K/Akt/mTOR通路,从而影响胃癌细胞的增殖、侵袭及转移能力。