老年腔隙性脑梗死患者血清微小RNA-377和微小RNA-137水平及临床意义

目的分析老年腔隙性脑梗死(LI)患者血清微小RNA(miR)-377、miR-137水平及临床意义。方法选择2021年2月至2022年12月哈励逊国际和平医院收治的老年LI患者248例作为LI组,另选择同期来我院体检的健康者110例作为健康组;根据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将老年LI患者248例分为神经缺损组60例(≥2分)和无神经缺损组188例(<2分)。检测血清miR-377、miR-137水平;用Pearson相关性分析和Spearman相关性分析;logistic回归分析老年LI患者神经缺损影响因素;ROC曲线评估血清miR-377、miR-137水平对老年LI及神经缺损诊断的预测价值。结果LI组血清miR-377、miR-137水平低于健康组(P<0.01)。miR-377和miR-137联合评估老年LI的曲线下面积(AUC)为0.782(95%CI:0.735~0.824),高于二者单一检测(P<0.01)。神经缺损组脑动脉硬化、血红蛋白降低、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)1、IL-6、IL-17、C反应蛋白(CRP)、改良的Rankin量表(mRS)评分高于无神经缺损组(P<0.05,P<0.01),血清miR-377、miR-137水平低于无神经缺损组(0.61±0.25 vs 0.89±0.28,0.61±0.24 vs 0.85±0.27,P<0.01)。血清miR-377与miR-137水平呈正相关(P<0.01);血清miR-377、miR-137水平与TNF-α、IL-6、CRP、mRS评分均呈负相关(P<0.01)。miR-377、miR-137、TNF-α、IL-6、CRP是老年LI患者神经缺损的影响因素(P<0.01)。miR-377、miR-137联合评估老年LI患者神经缺损的AUC为0.812(95%CI:0.758~0.859),高于二者单一检测(P<0.05,P<0.01)。结论血清miR-377、miR-137水平在老年LI及其神经缺损患者血清中表达较低,检测其水平具有一定临床预测价值。

炎症性肠病的微小RNA-377、微小RNA-31表达及其与肠道菌群相关性

目的 探讨微小RNA-377(miR-377)、微小RNA-31(miR-31)在炎症性肠病血清中的表达及其与肠道菌群相关性。方法选取2016年5月至2019年6月保定市第一中心医院收治的110例炎症性肠病病人为研究组,其中活动期69例、缓解期41例,同时选取同院体检的健康志愿者60例为对照组;采用qRT-PCR法检测血清miR-377、miR-31的表达量;根据表达量平均值将病人分为miR-377低表达组53例、miR-377高表达组57例、miR-31低表达组57例、miR-31高表达组53例,比较分析miR-377、miR-31表达量与肠道菌群[肠球菌(EC)、酵母菌(SB)、双歧杆菌(BL)、消化球菌(PS)、小梭菌(CD)、肠杆菌(EMB)、葡萄球菌(SP)、拟杆菌(BD)、乳杆菌(LC)、真杆菌(ES)]数量的相关性;采用ELISA法检测血清白细胞介素-34(IL-34)、C反应蛋白(CRP)的水平;采用电化学发光法检测血清降钙素原(PCT)的水平;采用Pearson法分析miR-377、miR-31表达量与IL-34、CRP、PCT水平的相关性。结果 与对照组比较,研究组血清中miR-377、miR-31的表达水平显著升高[(0.96±0.16)比(2.23±0.50)、(0.97±0.24)比(2.39±0.41)](P<0.05),活动期明显高于缓解期[(1.70±0.26)比(2.54±0.30)、(2.02±0.19)比(2.61±0.34)](P<0.05),血清IL-34、CRP、PCT水平显著升高(P<0.05);miR-377与IL-34、CRP、PCT水平呈正相关(r=0.99、0.50、0.86,均P<0.001);miR-31表达量与IL-34、CRP、PCT水平呈正相关(r=0.95、0.64、0.85,均P<0.001);与miR-377低表达组比较,miR-377高表达组SB、BL、LC、EC、BD、PS、SC的数量明显升高(P<0.05),ES的数量明显降低(P<0.05);与miR-31低表达组比较,miR-31高表达组SB、BL、LC、EC、BD、PS、SC的数量明显升高(P<0.05),ES的数量明显降低(P<0.05)。结论 miR-377、miR-31在炎症性肠病血清中的表达水平升高,二者均与炎性反应及肠道菌群有关。

微小RNA-377-3p调控自噬改善脂多糖/D-半乳糖胺诱导的急性肝衰竭的机制研究

目的本研究旨在研究微小RNA-377-3p(miR-377-3p)通过成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)对急性肝衰竭(ALF)自噬和凋亡的影响。方法分别通过D-半乳糖胺(D-GalN)/脂多糖(LPS)和D-GalN/肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导ALF动物模型和细胞凋亡模型。将12只C57BL/6J小鼠分为对照组和模型组,每组6只。将细胞分为对照组、模型组(经D-GalN、TNF-α诱导)、NC mimic组(D-GalN、TNF-α诱导并转染无意义miRNA对照序列)、miR-377-3p mimic组(D-GalN、TNF-α诱导并转染miR-377-3p模拟物)和miR-377-3p mimic+3-MA组(D-GalN、TNF-α诱导并转染miR-377-3p模拟物的同时应用自噬抑制剂3-MA干预)。检测小鼠肝脏组织病理情况、血清中生化参数水平、凋亡相关蛋白、自噬相关蛋白以及各组细胞中miR-377-3p RNA、自噬相关蛋白、FGFR1蛋白表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验检测miR-377-3p和FGFR1靶向结合关系,并采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果苏木素-伊红(HE)染色结果显示,对照组小鼠中央静脉周围肝细胞呈放射状排列,无炎症细胞浸润;模型组小鼠中肝小叶结构破坏,大量肝细胞坏死,周围炎症细胞浸润。5组细胞的凋亡率和自噬蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62的表达比较,差异均有统计学意义(F=88.520、42.760、95.870、62.930,P均<0.001),且miR-377-3p mimic组细胞凋亡率和p62蛋白水平均较模型组显著降低,Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ水平则均显著升高(P均<0.05)。对照组、模型组、NC mimic组、miR-377-3p mimic组FGFR1蛋白表达水平比较,差异具有统计学意义(F=84.670,P<0.001),且miR-377-3p mimic组FGFR1表达水平较模型组显著降低(P<0.05)。对照组、模型组、miR-377-3p mimic组、miR-377-3p mimic+NC组(D-GalN、TNF-α诱导并转染miR-377-3p模拟物和空白载体)和miR-377-3p mimic+FGFR1组(D-GalN、TNF-α诱导并转染miR-377-3p模拟物和FGFR1目的序列载体)自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ和p62的表达水平比较,差异均有统计学意义(F=63.840、61.590、127.800,P均<0.001),且miR-377-3p mimic+FGFR1组较miR-377-3p mimic组LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1水平均降低,p62蛋白水平升高(P均<0.05)。结论miR-377-3p靶向负调控FGFR1的表达,增强L02细胞自噬水平减轻D-GalN/TNF-α诱导的细胞凋亡,发挥ALF的保护作用。

前列腺癌组织LncRNA NEAT1、miR-377表达与患者5年生存情况的关系

目的探究前列腺癌组织长链非编码RNA核富集转录本1(LncRNA NEAT1)、微小RNA-377(miR-377)表达与患者5年生存的关系。方法选取2016年7月至2018年8月在邯郸市中心医院住院治疗的98例前列腺癌患者,检测前列腺癌组织及癌旁组织中LncRNA NEAT1、miR-377表达;记录患者5年内生存情况。分析前列腺癌组织LncRNA NEAT1、miR-377与临床病理特征、患者5年生存的关系以及二者的相关性,分析影响患者5年内生存的危险因素及LncRNA NEAT1、miR-377对患者5年内生存的预测价值。结果与癌旁组织比较,前列腺癌组织LncRNA NEAT1显著升高、miR-377显著降低(P<0.05);Ⅲ~Ⅳ期、Gleason评分>7分、血清前列腺特异性抗原(PSA)>10μg/L的患者前列腺癌组织LncRNA NEAT1分别高于Ⅰ~Ⅱ期、Gleason评分≤7分、血清PSA≤10μg/L的患者,miR-377分别低于Ⅰ~Ⅱ期、Gleason评分≤7分、血清PSA≤10μg/L的患者(P<0.05);前列腺癌组织LncRNA NEAT1与miR-377表达呈负相关(P<0.05);LncRNA NEAT1高表达、miR-377低表达患者5年累积生存率分别显著低于LncRNA NEAT1低表达、miR-377高表达患者(P<0.05);与生存组比较,死亡组前列腺癌组织LncRNA NEAT1显著升高,miR-377显著降低(P<0.05);前列腺癌组织LncRNA NEAT1高表达、miR-377低表达、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、Gleason评分>7分、血清PSA水平>10μg/L均是影响前列腺癌患者5年内生存的独立危险因素(P<0.05);前列腺癌组织LncRNA NEAT1和miR-377二者联合预测患者5年内生存的曲线下面积高于LncRNA NEAT1、miR-377各自单独预测(P<0.05)。结论前列腺癌组织LncRNA NEAT1呈高表达、miR-377呈低表达,对患者5年内生存具有较高的预测价值。

MicroRNA-377和组蛋白甲基转移酶SMYD3在肝细胞癌中的表达及两者的相关性

目的:探讨microRNA-377(miR-377)与组蛋白甲基转移酶SMYD3在肝癌中的表达规律及与肝癌的相关性.方法:利用实时定量PCR分别检测不同肝组织及肝细胞系中miR-377表达水平,应用实时定量PCR和Western blot分别检测不同肝组织及肝细胞系中SMYD3 mRNA和蛋白水平的表达情况.通过转染miR-377模拟物上调其在肝癌细胞株HepG2中表达后,应用实时定量PCR、Western blot分别检测转染前后HepG2中SMYD3 mRNA和蛋白表达的变化.结果:MiR-377 mRNA在人肝癌旁组织和肝癌组织中的表达较正常肝脏明显降低(0.331±0.059,0.139±0.064 vs 0.874±0.178,均P<0.05);在HepG2中的表达较L-02明显降低(0.145±0.021vs0.868±0.194,P<0.05).SMYD3 mRNA和蛋白质在人肝癌旁组织和肝癌组织中的表达较正常肝脏明显升高(mRNA:3.836±0.137,5.836±0.965vs1.235±0.332;蛋白:0.381±0.020,0.484±0.030vs0.252±0.015;均P<0.05).SMYD3 mRNA和蛋白质在肝癌细胞系HepG2中的表达较正常肝细胞系L-02明显升高(mRNA:0.845±0.047vs0.348±0.134;蛋白:0.575±0.008vs0.259±0.007,均P<0.05).转染miRNA-377模拟物上调HepG2中miR-377表达后转染组SMYD3 mRNA和蛋白表达较空白组和阴性对照组均明显下降(mRNA:0.125±0.010 vs 0.857±0.163,0.779±0.167;蛋白:0.092±0.026 vs 0.347±0.040,0.383±0.054,均P<0.05).结论:miRNA-377在肝癌中表达明显下调,其靶基因SMYD3表达上调;表达下调的miRNA-377丧失对SMYD3表达的抑制可能是肝癌发生的重要机制.

子痫前期孕妇胎盘组织中miR-377-3p、血小板凝血酶蛋白1 mRNA表达分析

目的 观察子痫前期(PE)孕妇胎盘组织中微小RNA-377-3p(miR-377-3p)和血小板凝血酶蛋白1(THBS1)的表达变化,分析二者与PE发病的关系。方法 选择PE孕妇65例纳入PE组,其中重度PE 30例、轻度PE 35例;选择同期正常分娩孕妇40例纳入对照组。采用实时荧光定量PCR法检测两组孕妇胎盘组织中的miR-377-3p和THBS1 mRNA,分析miR-377-3p、THBS1 mRNA表达与PE孕妇临床病理参数的关系,采用双荧光素酶实验验证miR-377-3p对THBS1 mRNA的调控作用。结果 PE组孕妇胎盘组织中miR-377-3p表达低于对照组,且轻度患者低于重度患者(P均<0.05);PE组THBS1 mRNA表达高于对照组,且轻度患者高于重度患者(P均<0.05)。PE组胎盘组织中miR-377-3p表达与收缩压、舒张压和24 h尿蛋白呈负相关(r分别为-0.339、-0.530、-0.541,P均<0.05),与血小板计数呈正相关(r=0.439,P<0.05);THBS1 mRNA表达与收缩压、舒张压和24 h尿蛋白呈正相关(r分别为0.397、0.306、0.467,P均<0.05),与血小板计数呈负相关(r=-0.289,P<0.05)。miR-377-3p与THBS1存在潜在的互补结合位点,miR-377-3p可负向调节THBS1 mRNA表达。结论 PE孕妇胎盘组织中miR-377-3p表达下调、THBS1 mRNA表达上调,二者异常表达可能与PE严重程度及妊娠结局有关;miR-377-3p可能通过靶向调控THBS1 mRNA表达影响PE的发生发展。

LncRNA SNHG1通过miR-377-3p/AKT2轴对宫颈癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1(lncRNA SNHG1)对宫颈癌(CC)细胞增殖、凋亡和迁移的调控机制。方法体外培养人CC细胞系SiHa、Hela、CaSki和人正常宫颈上皮细胞HUCEC,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中SNHG1、微小RNA-377-3p(miR-377-3p)和丝氨酸/苏氨酸激酶2(AKT2)mRNA的表达水平。将SNHG1小分子干扰RNA(si-SNHG1)转染Hela细胞构建SNHG1敲低细胞,并在SNHG1敲低细胞系中下调miR-377-3p表达进行验证。实验分为对照组(NC组)、si-NC组、si-SNHG1组、si-SNHG1+miR-377-3p inhibitor阴性对照组(inhibitor-NC)、si-SNHG1+miR-377-3p inhibitor组。转染48 h后,RT-qPCR检测转染效果;Western Blot检测细胞AKT2蛋白表达水平;MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;划痕愈合实验检测细胞迁移能力。双荧光素酶报告基因检测和RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)分析Hela细胞中SNHG1、miR-377-3p和AKT2的调控作用。裸鼠异种移植瘤实验、免疫组织化学染色探究敲低SNHG1对CC细胞体内生长的影响。结果与HUCEC细胞相比,不同CC细胞系中SNHG1和AKT2 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),miR-377-3p表达水平显著降低(P<0.05);敲低SNHG1表达可显著上调miR-377-3p的表达水平,下调AKT2的mRNA和蛋白水平,降低Hela细胞的增殖活性、迁移与侵袭能力,并诱导细胞凋亡(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测和RIP实验证实SNHG1可靶向负调控miR-377-3p的表达,AKT2是miR-377-3p的靶标。裸鼠异种移植瘤实验结果显示,敲低SNHG1可显著抑制体内移植瘤生长(P<0.05);下调miR-377-3p可显著减弱敲低SNHG1对Hela细胞增殖、迁移和侵袭能力并可抑制体内移植瘤生长(P<0.05)。结论SNHG1可能通过海绵miR-377-3p调节AKT2表达,参与CC进展。

结肠癌患者血清miR-139-3p和miR-377-3p表达水平及肠道菌群的变化及其与复发转移的关系

目的分析结肠癌患者血清miR-139-3p和miR-377-3p表达水平与临床病理的关系、肠道菌群的变化及其与复发转移的关系。方法选取2019年3月至2021年3月入该院接受根治术治疗的结肠癌患者共126例作为结肠癌组,另选取同期在该院接受体检的体检健康者共83例作为健康对照组。观察两组血清miR-139-3p和miR-377-3p的表达水平及肠道菌群状态情况,对比不同临床特征的结肠癌患者血清指标表达水平,对比不同复发转移情况的结肠癌患者肠道菌群的变化情况,分析结肠癌患者血清miR-139-3p和miR-377-3p表达水平与其临床病理及肠道菌群表达的相关性。结果结肠癌组血清miR-139-3p和miR-377-3p较健康对照组均呈更高表达,差异有统计学意义(均P<0.05);结肠癌组术前、术后的双歧杆菌数量均低于健康对照组,大肠杆菌数量均高于健康对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);结肠癌组中发生复发转移、低分化、临床分期处于Ⅲ期的患者血清miR-139-3p和miR-377-3p呈更高表达,差异有统计学意义(均P<0.05);Spearman相关系数分析显示,血清miR-139-3p、miR-377-3p表达水平与结肠癌患者临床分期、复发转移均呈正相关,与临床分化程度呈负相关(均P<0.05);复发转移组患者双歧杆菌数量较未复发转移组明显更低,大肠杆菌数量较未复发转移组相比明显升高,差异有统计学意义(均P<0.05);Pearson相关系数分析显示,血清miR-139-3p、miR-377-3p与结肠癌患者大肠杆菌数量呈正相关,上述两项指标与双歧杆菌数量呈负相关(均P<0.05)。结论结肠癌根治术后双歧杆菌属高表达和大肠杆菌属低表达意味着结肠癌患者复发转移风险更低,血清miR-139-3p和miR-377-3p与结肠癌患者临床分期、肿瘤分化程度、复发转移及肠道菌群变化均密切相关,后续临床针对结肠癌患者可通过监测上述两项血清指标及肠道菌群来辅助评估患者临床病情严重程度,对优化完善诊疗方案、降低患者复发转移风险具有积极作用。

结直肠癌患者血清miR-21-5p、miR-377-3p表达与Wnt/β-catenin信号通路和预后的关系分析

目的研究结直肠癌(CRC)患者血清微小RNA(miR)-21-5p、miR-377-3p表达及与Wnt/β-连环蛋白(catenin)通路及预后的关系。方法选取2017年1月—2018年1月中国人民解放军联勤保障部队第九八九医院肿瘤科收治的CRC患者92例作为CRC组,医院同期健康体检者60例作为健康对照组。检测血清miR-21-5p、miR-377-3p表达量及Wnt/β-catenin通路指标Wnt3a、β-catenin、c-myc、细胞周期素D1(Cyclin D1)mRNA表达量。Pearson相关分析miR-21-5p、miR-377-3p与Wnt3a、β-catenin、c-myc、Cyclin D1 mRNA表达的相关性。比较不同临床病理特征CRC患者血清miR-21-5p、miR-377-3p表达差异。Kaplan-Meier曲线及Logrank检验分析不同血清miR-21-5p、miR-377-3p表达CRC患者预后的差异。多因素Cox回归分析CRC患者预后的影响因素。结果与健康对照组比较,CRC组患者血清miR-21-5p、Wnt3a、β-catenin、c-myc、Cyclin D1 mRNA表达量显著升高,miR-377-3p表达量显著降低(t/P=29.202/<0.001、52.006/<0.001、45.973/<0.001、39.196/<0.001、23.119/<0.001、38.120/<0.001)。血清miR-21-5p与Wnt3a、β-catenin、c-myc、Cyclin D1 mRNA表达呈正相关(r/P=0.404/<0.001、0.410/0.002、0.529/<0.001、0.378/<0.001),miR-377-3p与Wnt3a、β-catenin、c-myc、Cyclin D1 mRNA表达呈负相关(r/P=-0.347/0.007、-0.408/<0.001、-0.450/<0.001、-0.419/<0.001)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期和伴淋巴结转移CRC患者血清miR-21-5p表达明显高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期和无淋巴结转移患者,而血清miR-377-3p表达明显低于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期和无淋巴结转移患者,差异具有统计学意义(t/P=19.741/<0.001、18.534/<0.001、11.799/<0.001、17.639/<0.001)。血清miR-21-5p高表达患者3年生存率低于低表达患者(χ^(2)/P=17.700/<0.001),miR-377-3p低表达患者3年生存率低于高表达患者(χ^(2)/P=21.380/<0.001)。多因素Cox回归分析显示,肿瘤TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、伴淋巴结转移、miR-21-5p升高是CRC患者预后的独立危险因素[OR(95%CI)=1.875(1.322~2.662)、1.662(1.163~2.374)、1.847(1.366~2.500)],miR-377-3p升高是CRC患者预后的独立保护因素[OR(95%CI)=0.518(0.363~0.739)]。结论CRC患者血清miR-21-5p表达升高,miR-377-3p表达降低,两者可通过调控Wnt/β-catenin通路促进CRC的肿瘤进展,可作为辅助评估CRC患者预后的肿瘤标志物。

急性淋巴细胞白血病患者miR377-和SMYD3表达水平与临床预后意义

目的探讨急性淋巴细胞白血病患者微小RNA-377(miR-377)和SET及MYND结构域包含蛋白3(SMYD3)表达水平及临床预后意义。方法选择2016年3月至2020年6月该院收治的135例急性淋巴细胞白血病患者作为观察组,同时选择同期120例体检健康者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测研究对象外周血miR-377、SMYD3表达水平。随后比较不同组别、不同临床特征及不同疗效的患者miR-377、SMYD3表达水平差异,并采用Kaplan-Meier法和多因素Cox回归模型分析miR-377、SMYD3与急性淋巴细胞白血病患者预后的关系。结果观察组miR-377表达水平低于对照组,SMYD3表达水平高于对照组(P<0.05)。miR-377高表达组患者的危险度分型,白细胞计数(WBC)(入院时、入院1月后),乳酸脱氢酶(LDH)(入院时、入院1月后),骨髓原幼细胞比例均明显低于miR-377低表达组(P<0.05)。SMYD3高表达组患者的危险度分型,WBC(入院时、入院1月后),LDH(入院时、入院1月后),骨髓原幼细胞比例均明显高于SMYD3低表达组(P<0.05)。完全缓解(CR)组miR-377、SMYD3表达水平与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),miR-377表达水平从低到高依次为未缓解(NR)组、部分缓解(PR)组、CR组、对照组(P<0.05),SMYD3表达水平从高到低依次为NR组、PR组、CR组、对照组(P<0.05)。miR-377高表达组总生存率(65.33%)明显高于miR-377低表达组(41.67%)(P<0.05),SMYD3高表达组总生存率(41.94%)明显低于SMYD3低表达组(65.75%)(P<0.05)。多因素Cox回归模型分析显示,危险度分型、WBC、LDH、骨髓原幼细胞比例、miR-377、SMYD3均为影响急性淋巴细胞白血病患者预后的危险因素(P<0.05)。结论急性淋巴细胞白血病患者miR-377呈低表达水平,SMYD3呈高表达水平,且二者表达水平与患者临床特征、疗效及预后均密切相关,因此可作为评估患者临床预后的有效指标。

长链非编码RNA UBE2Q1-AS1对食管癌细胞增殖和迁移的调节作用及机制实验研究

目的:观察长链非编码RNA(lncRNA)UBE2Q1-AS1对食管癌细胞增殖和迁移的影响,并探讨UBE2Q1-AS1发挥调节作用的分子机制。方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测食管癌EC9706、Eca109、KYSE-510、TE-13细胞和永生化食管上皮HET-1A细胞中UBE2Q1-AS1的表达。将KYSE-510细胞分为si-NC组和si-UBE2Q1-AS1组,分别转染si-NC质粒和si-UBE2Q1-AS1质粒。集落形成实验检测各组KYSE-510细胞增殖活性。细胞划痕实验检测各组KYSE-510细胞的迁移能力。双荧光素酶报告系统验证UBE2Q1-AS1与微小RNA(miR)-377-3p的靶向关系。RT-qPCR检测各组KYSE-510细胞中miR-377-3p相对表达量。蛋白质印迹法(Western blot)检测各组KYSE-510细胞中同源盒蛋白A1(HOXA1)、纤连蛋白(Fibronectin)、叉头相关转录因子C2(FOXC2)、粒状蛋白质2同源物(GRHL2)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白的相对表达量。结果:与HET-1A细胞比较,UBE2Q1-AS1在食管癌细胞中表达均升高(P<0.01)。si-UBE2Q1-AS1组KYSE-510细胞增殖活性低于si-NC组(P<0.01)。si-UBE2Q1-AS1组KYSE-510细胞迁移能力低于si-NC组(P<0.01)。UBE2Q1-AS1与miR-377-3p间存在靶向关系(P<0.01)。si-UBE2Q1-AS1组KYSE-510细胞中miR-377-3p表达水平高于si-NC组(P<0.01)。与si-NC组比较,si-UBE2Q1-AS1组KYSE-510细胞中HOXA1、Fibronectin、FOXC2蛋白表达降低,GRHL2和E-cadherin蛋白表达升高(均P<0.01)。结论:在食管癌细胞中,UBE2Q1-AS1表达上调,敲低UBE2Q1-AS1可能通过调节miR-377-3p/HOXA1轴抑制食管癌细胞增殖和迁移。

miR-377和FNBP1 mRNA在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及临床意义

目的检测弥漫大B细胞淋巴瘤组织中微小RNA-377(miR-377)和形成素结合蛋白1(FNBP1)信使核糖核酸(mRNA)表达及其在发病过程中的作用及临床意义。方法选取2015年2月—2018年3月聊城市人民医院血液科确诊的弥漫大B细胞淋巴瘤患者130例为观察组,同期选取在医院就诊的淋巴结反应性增生患者55例为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测弥漫大B细胞淋巴瘤组织和淋巴结反应性增生组织中miR-377、FNBP1 mRNA表达水平;分析二者之间的相关性及与患者临床病理参数之间的关系;使用Kaplan-Meier曲线分析弥漫大B细胞淋巴瘤患者3年总生存率;Cox回归模型分析影响弥漫大B细胞淋巴瘤患者预后的因素。结果观察组miR-377表达水平显著低于对照组,FNBP1 mRNA表达水平显著高于对照组(t/P=7.366/0.000、14.162/0.000)。miR-377低表达亚组临床Ⅲ~Ⅳ期、病理非生发中心型、有全身症状患者比例明显高于miR-377高表达亚组(χ^(2)/P=6.660/0.010、5.004/0.025、6.635/0.010),FNBP1 mRNA低表达亚组临床Ⅲ~Ⅳ期、病理非生发中心型、有全身症状患者比例明显低于FNBP1 mRNA高表达亚组(χ^(2)/P=9.076/0.003、18.593/0.000、10.916/0.001)。miR-377与FNBP1 mRNA表达水平呈负相关(r/P=-0.355/0.000)。治疗后3年总生存率比较,miR-377高表达亚组高于miR-377低表达亚组,FNBP1 mRNA高表达亚组低于FNBP1 mRNA低表达亚组(χ^(2)/P=4.964/0.026、4.550/0.033)。miR-377低表达、FNBP1 mRNA高表达、临床分期Ⅲ~Ⅳ期是影响弥漫大B细胞淋巴瘤患者预后的独立危险因素[OR(95%CI)=2.001(1.412~2.836)、1.855(1.278~2.692)、1.594(1.136~2.237)]。结论弥漫大B细胞淋巴瘤组织中miR-377表达明显降低,FNBP1 mRNA表达明显升高,且其表达与患者预后密切相关,miR-377和FNBP1 mRNA可作为弥漫大B细胞淋巴瘤病情评估及不良预后预测的潜在生物学指标。

miR-377过表达对胶质母细胞瘤细胞增殖、凋亡、迁移的影响及机制

目的探讨微小RNA-377(miRNA-377)过表达对胶质母细胞瘤细胞增殖、凋亡、迁移的影响,并探讨其作用机制。方法常规培养胶质母细胞瘤细胞系A172、U373、U87、U251及正常脑胶质细胞系HEB。用qRTPCR法检测细胞中miR-377的表达。将U251细胞随机分为miR-377组、miR-CON组及Blank组,分别转染miR-377mimics、Scramble及空白对照,用qRT-PCR法检测转染效率。用MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术测定细胞凋亡能力,用细胞划痕实验检测细胞迁移能力。用Western blotting法检测细胞内组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)和E26转录因子1(ETS-1)蛋白表达。结果转染24 h,miR-377组miR-377相对表达量高于miR-CON组、Blank组(P均<0. 05),转染成功。与miR-CON组、Blank组比较,转染72、96 h miR-377组细胞增殖能力低(P均<0. 05),细胞凋亡率高(P均<0. 05),细胞划痕愈合率低(P均<0. 05)。miR-377组HDAC9、ETS-1蛋白相对表达量均低于miRCON组、Blank组(P均<0. 05)。结论 miR-377过表达可抑制胶质母细胞瘤细胞增殖、迁移,并促进其凋亡,其机制可能与下调HDAC9、ETS-1蛋白表达有关。

血清miR-377、α-SMA水平在急性肾功能衰竭患者治疗前后变化及对转化慢性肾脏病的预测价值

目的分析血清微小RNA-377(miR-377)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平在急性肾功能衰竭(ARF)患者治疗前后的变化情况,评价血清miR-377、α-SMA对ARF转化慢性肾脏病(CKD)的预测价值。方法选取ARF患者157例为研究对象,另选取同期健康体检者157例为对照。比较ARF患者治疗前后与健康对照者血清miR-377、α-SMA水平,统计3个月后CKD发病率。收集并比较是否发生CKD的ARF患者一般资料,采用logistic回归方程对ARF转化CKD进行多因素分析,通过受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-377、α-SMA对ARF转化CKD的预测价值。结果ARF患者治疗前及治疗2周血清miR-377、α-SMA水平均高于健康对照者,且ARF患者治疗前血清miR-377、α-SMA水平高于治疗2周(P<0.05)。随访3个月,157例ARF患者共出现CKD 54例,CKD发生率为34.39%(54/157);年龄、合并高血压、肾损伤分期、肾小球滤过率、治疗前及治疗2周血清miR-377、α-SMA水平与ARF患者转化CKD有关(P<0.05)。血清miR-377(95%CI为1.793~5.036,OR=3.005,P=0.001)、α-SMA(95%CI为2.786~7.118,OR=4.453,P<0.001)水平是ARF患者转化CKD的影响因素(P<0.05);血清miR-377、α-SMA水平联合预测ARF转化CKD的AUC为0.930,对应敏感度为77.78%、特异度为94.17%。结论治疗前ARF患者血清miR-377、α-SMA水平异常升高,治疗后有所降低;血清miR-377、α-SMA水平联合检测预测ARF转化CKD风险具有较高价值,可作为ARF转化为CKD的预警因子。

加味真武汤通过调控miR-377表达水平对糖尿病肾病的影响

目的 探讨加味真武汤通过调控miR-377表达水平对糖尿病肾病(DN)细胞炎症水平和免疫功能的影响及分子机制.方法 选取40只SPF级雄性大鼠,对其中30只大鼠进行腹腔注射链脲佐菌素,建立大鼠DN模型,并随机分为模型对照组、加味真武汤低剂量组、加味真武汤高剂量组,每组各10只.同时设置空白对照组(10只).建立HK-2细胞的DN模型,分为miR-NC+DN组(将miR-NC转染至建模后的HK-2细胞)、miR-377+DN组(将miR-377转染至建模后的HK-2细胞)、anti-miR-NC+DN组(将anti-miR-NC转染至建模后的HK-2细胞)、an-ti-miR-377+DN组(将anti-miR-377转染至建模后的HK-2细胞)、加味真武汤+miR-NC+DN组(将miR-NC转染至建模后的HK-2细胞,再用高剂量加味真武汤处理)、加味真武汤+miR-377+DN 组(将miR-377转染至建模后的HK-2细胞,再用高剂量加味真武汤处理).采用实时荧光定量PCR检测miR-377表达水平;采用酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)水平;采用流式细胞仪检测CD4^(+)、CD8^(+)和Th1水平.结果 与空白对照组比较,模型对照组的TNF-α、IL-6、IL-8、CD4^(+)、miR-377水平升高,CD8^(+)和Th1水平降低,差异均有统计学意义(均P<0.001);与模型对照组比较,加味真武汤低剂量组、加味真武汤高剂量组的TNF-α、IL-6、IL-8、CD4^(+)、miR-377水平降低,CD8^(+)和Th1水平升高,差异均有统计学意义(均P<0.001).与miR-NC+DN组比较,miR-377+DN组的TNF-α、IL-6、IL-8水平以及CD4^(+)水平升高,CD8^(+)和Th1水平降低(均P<0.001);与anti-miR-NC+DN组比较,anti-miR-377+DN组的TNF-α、IL-6、IL-8水平以及CD4^(+)水平降低,CD8^(+)和Th1水平升高(均P<0.001).与加味真武汤+miR-NC+DN组比较,加味真武汤+miR-377+DN组的TNF-α、IL-6、IL-8水平以及CD4^(+)水平降低,CD8^(+)和Th1水平升高(均P<0.001).结论 加味真武汤通过抑制miR-377表达减轻DN细胞炎症水平,增强患者的免疫功能,值得临床推广应用.

血清外泌体微小RNA-338在食管癌中的表达及临床意义

目的观察血清外泌体微小RNA-377(miR-377)在食管癌(EC)中的表达水平,并探讨其临床意义。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测OE33、Eca9706细胞株、5例EC癌组织中miR-377表达水平。选取2016年4月至2019年3月经山东第一医科大学附属济南人民医院确诊并住院治疗的EC患者40例作为观察组,另选取同期本院体检健康者40例作为对照组,RT-qPCR检测血清外泌体中miR-377表达水平。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清血管内皮生长因子(VEGF)水平;采用χ^(2)检验分析EC患者血清外泌体中miR-377、血清VEGF水平与临床病理特征的关系;Pearson法分析EC患者血清外泌体中miR-377、血清VEGF表达相关性;受试者工作特征(ROC)曲线预测miR-377、VEGF表达水平对EC的诊断价值。结果与正常食管上皮细胞株HEEC细胞中miR-377表达水平(1.07±0.20)比较,OE33、Eca9706癌细胞中miR-377表达水平(0.74±0.21和0.68±0.19)显著降低(F=6.604,P<0.05);与癌旁组织中miR-377表达水平(1.10±0.23)比较,癌组织中miR-377表达水平(0.69±0.18)显著降低(t=3.319,P<0.05);观察组血清外泌体中miR-377表达水平(0.76±0.22)明显低于对照组血清外泌体中miR-377表达水平(1.04±0.25,t=5.318,P<0.05),血清VEGF表达水平[(22.79±4.79)pg/ml]明显高于对照组血清VEGF表达水平(16.71±3.44)pg/ml,t=6.521,P<0.05;EC患者血清外泌体中miR-377及血清VEGF表达水平与TNM分期、分化程度和淋巴结转移均有关(miR-377:χ^(2)=6.172、8.780、13.864,P<0.05;VEGF:χ^(2)=6.839、5.402、6.114,P<0.05);EC患者血清外泌体中miR-377与血清VEGF表达呈负相关(r=-0.641,P<0.05);血清外泌体中miR-377诊断EC的ROC曲线下面积为0.835(95%CI:0.684~0.933),灵敏度为69.50%,特异性为88.20%;血清VEGF诊断EC的ROC曲线下面积为0.909(95%CI:0.775~0.977),灵敏度为89.65%,特异性为76.50%;miR-377联合VEGF诊断EC的ROC曲线下面积为0.949(95%CI:0.829~0.994),灵敏度为95.70%,特异性为88.21%。