微生物分离与培养的新方法与新技术

目前自然界中只有极少部分微生物能够得到分离与培养,严重阻碍了对微生物生命活动规律的研究和微生物资源的开发。改进传统的分离与培养方法,采用新型分离与培养技术,提高微生物可培养性,大量培养自然界中存在的微生物,从而更全面、准确地了解微生物细胞的生命规律、获悉微生物群落中各种微生物之间的动态相互作用和相互协调的规律,对环境微生物工艺进行准确地设计、精细地调控和高效地利用。本文综述了微生物分离与培养的最新方法与技术,及其所存在的问题。

青岛蓝丰蓝莓表皮微生物分离与初步鉴定

蓝莓采收后极易受到微生物的侵染而腐烂变质,为明确蓝莓表皮微生物菌相,确定合理的保鲜方式,以青岛地区蓝丰蓝莓为例,对其表皮的微生物进行分离纯化,根据形态学及生理生化鉴定结果对分离得到的微生物进行初步鉴定。结果从蓝丰蓝莓表皮共分离出12株微生物,其中细菌4株,分别为志贺氏菌属、肠杆菌属、短芽孢杆菌属、普通变形菌属;霉菌8株,分别为黄曲霉、黑曲霉、杂色曲霉、圆弧青霉、交链孢霉、毛壳属、桔青霉、毛霉。

Autobact全自动微生物分离培养仪在痰培养中的应用

目的建立Autobac全自动微生物分离培养仪进行痰培养前处理的方法学,了解该方法学与棉签涂痰进行培养的比较情况。方法分别对不同时段内用不同方法进行的痰培养结果进行统计,并对其各类阳性培养结果的分离率进行比较、分析。结果应用棉签涂痰培养的总阳性率为56.2%,应用全自动微生物分离培养仪进行痰培养的阳性分离率49.7%,对二者进行计数资料卡方检验P<0.05,提示二者差异有显著意义。结论棉签涂痰培养结果某种意义上仍然较培养仪有较高的阳性分离率;培养仪有较好的酵母样真菌、嗜血杆菌、肺炎链球菌分离效果。

《微生物分离和鉴别》项目课程的设计与实践

对《微生物分离和鉴别》的课程内容和教学模式进行项目课程改革,根据社会和企业对人才的需求确定项目内容,开发新教材,更新教学方法,以任务驱动教学,注重过程性评价,取得较好的教学效果。

Autobact全自动微生物分离培养仪工作原理、维护保养及故障分析

Autobact系列全自动微生物分离培养系统是带有专用样本采集及分离培养装置的、高度自动化的接种与分离培养系统,该系统可对痰液、尿液、粪便及拭子样本进行自动化的前处理,自动划线接种到培养基上进行分离培养。整个过程无需任何人工操作,确保操作人员的安全,使分离培养过程更加规范和标准,样本处理随机而方便。

Autobact全自动微生物分离培养仪在痰培养中的应用

目的探讨观察Autobact全自动微生物分离培养仪在痰培养中的注意事项和效果。方法按照随机数字表法,选择2012年3—9月184例患者的痰标本,分别按传统方法进行痰培养和Autobact全自动微生物分离培养,对两种方法的阳性率和真菌、细菌的分离率进行比较。结果用Autobact全自动微生物分离培养仪检测184例患者的痰标本,其中有63例为阳性培养物,从63例阳性培养物中分离出95株可疑病原菌,阳性率为51.6%;运用传统的划线法检测184份标本,从55例阳性培养物中分离出56株可疑病原菌,阳性率为30.4%,两者阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05);传统方法在检出时间上较Autobact全自动微生物分离培养仪有所延迟,Autobact全自动微生物分离培养仪15 h内阳性率为53.9%,24 h内阳性率33.3%,48 h内阳性率12.6%,传统方法的15、24、48 h阳性检出率分别为36.3%、16.4%、47.3%,两组对比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Autobact全自动微生物分离培养仪检测系统具有检出率高、需时短、操作便捷等优点,且对检验人员的人身安全有一定保障。

冷却牛肉表面微生物分离、监测与初步鉴定

[目的]对冷却肉表面的微生物进行分离、检测与鉴定,为冷却肉微生物安全评价和预测预报提供技术支撑。[方法]采用基础培养基和选择性培养基对普通冷却牛肉表面主要微生物菌群进行分离、筛选,并利用用API条或VITEK2 Compact进行菌株的初步鉴定。[结果]本研究共分离13株表面微生物,其中G+菌株6株,G—菌株7株;G+菌中2株为乳酸菌属、1株为索丝菌属、3株为李斯特氏菌属;G—菌中4株为肠杆菌科、3株为假单胞菌属。[结论]冷却牛肉表面存在多种致腐败微生物,应对冷却牛肉建立合理的监测、预测及预报系统。

微生物分离与筛选的4种“圈法”

探讨了微生物分离与筛选的4种重要方法:抑菌圈法、透明圈法、变色圈法及生长圈法。这些方法通过不同的机制形成独特的圈状结构,实现对目标微生物的有效分离与筛选。比较分析了各方法的原理、应用场景及优势,并探讨了它们在教材和试题中的应用情况,旨在为相关教与学提供参考。

创新型实验教学项目建设的探索——土壤微生物分离实验

武汉大学生命科学学院微生物学实验教学中注重创新型实验教学项目的建设,创新型土壤微生物分离实验项目建设是培养学生创新能力的一次实践。从武汉大学校园和国家级自然保护区神农架采集土壤样品,分离土壤细菌、放线菌和霉菌。让学生了解土壤微生物数量测定的基本方法,学习了解平板计数的基本操作技术。在引申实验过程中又有机地结合与贯穿了微生物学的无菌操作技术、显微镜技术、纯培养技术、分离纯化技术等各项技术及最新的分子生物学研究方法和技术。本实验的创新点有三:首先,实验从室内延伸到室外;其次,从本科生的常规土壤微生物的分离实验衍生到科研实验(新菌种的分离、鉴定);最后,使共性教学衍生为个性化培养。

根际土壤微生物最佳分离条件筛选研究

试验采用培养基筛选、不同直径玻璃珠撞击，以及化学分散剂和振荡时间等4个因素的正交设计对细菌、真菌、放线菌分离特性进行了研究。同时，对放线菌的分离还增加了土样热处理温度及热处理时间两个因素的单因素试验。研究结果表明：细菌分离培养条件的最佳组合是：土壤浸提液＋牛肉膏蛋白胨培养基＋大玻璃珠（Φ=5～7mm，55粒）＋摇床振荡90min；真菌分离培养条件的最佳组合是：马丁氏培养基＋大玻璃珠＋1％胆酸钠＋摇床振荡60min；放线菌分离培养条件的最佳组合是：土壤浸提液＋高氏培养基＋25℃处理＋大玻璃珠＋1％焦磷酸钠＋摇床振荡60min。部分因素的单独重复验证试验其变化规律与正交试验结果基本一致。

基于微生物分离培养的超级杂交水稻深两优5814种子内生细菌多样性研究

采用传统微生物分离培养方法研究了超级杂交水稻深两优5814种子内生细菌群落多样性。结果表明,深两优5814种子内生菌包含49个操作分类单元(OTU),分属厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)及放线菌门(Actinobacteria)类群。第1优势菌属为芽孢杆菌属(Bacillus),丰度为37.5%,第2优势菌属为Fictibacillus,丰度为12.5%,第3优势菌属为克雷伯氏菌属(Klebsiella),丰度为7.5%。相比采用克隆文库的非培养方法,传统微生物分离培养方法获得的种子内生菌更丰富。

大庆盐碱土中微生物的分离及芽孢杆菌的鉴定

采用平板稀释法对大庆地区盐碱土壤中微生物进行分离,并对所获得的芽孢杆菌进行分离纯化,利用生理生化指标、菌落形态和芽孢形态进行分类鉴定。在所取土样中分离到细菌、放线菌和霉菌,其中芽孢杆菌的菌落数占总菌落数的43.87%。经初步鉴定得到7株不同的芽孢杆菌,分别为Bacllus alcalophilus,B.subtilis,B.laterosporus,B.brevis,B.lichenif ormis,B.cir-culans,B.globisporus。其中B.brevis为优势菌株。

马里亚纳海沟不同深度水样微生物分离与多样性分析

【背景】马里亚纳海沟挑战者深渊是地球表面最深点,认识其微生物群落结构和分离培养的微生物对挖掘新的微生物资源具有重要意义。【目的】对马里亚纳海沟不同深度水样进行细菌分离培养,并与这些样品的微生物群落结构进行比较,认识进一步要分离培养的微生物类型。【方法】采用不同培养基对马里亚纳海沟两个站位不同深度水样进行细菌分离培养,并通过Illumina MiSeq高通量测序分析各个水样的细菌和古菌的群落结构。【结果】从来自两个站位不同深度的6个水样样品中分离获得783株细菌,属于4个门6个纲28个属。其中,变形菌门占主导地位,67.8%的菌株属于γ-变形菌纲。分离获得的菌株主要属于亚硫杆菌属、假单胞菌属和交替假单胞菌属,它们在这些样品中广泛分布,且在高通量测序结果中也能检测到。高通量测序结果表明除浅层样品优势微生物为蓝细菌外,其他样品以变形菌门占主导;不同深度样品的微生物群落结构存在较大差异。【结论】马里亚纳海沟不同深度水样中不仅分离培养出了相对丰度较高的一些细菌属,也分离得到一些相对丰度较低的微生物类型。从马里亚纳海沟水样中分离培养获得的细菌菌株资源将用于功能微生物和功能酶挖掘等相关研究,这有利于深渊微生物资源挖掘。

自然界中难分离培养微生物的分离和应用

采用在分离培养基中添加自然来源的抽提液,或加入一些特殊化合物,使其中处于Viable but non-culturable(VBNC)状态的微生物恢复其生长繁殖能力,从而得到分离。实验结果发现甜菜碱、丙酮酸钠、SOD以及过氧化氢酶可使分离到的微生物种类及菌落总数明显增加。还采用固液结合的方法来分离那些在普通平板培养基上不能形成肉眼可见菌落的那些微小菌落的微生物。采用这几种方法从4份土壤样品中共分离得到52株放线菌,103株细菌,17株真菌。对其中的放线菌和真菌进行了生物活性的测定,得到多株具有抗菌活性的微生物,经过多次复筛的平均阳性率为4．325％,略高于用常规方法分离得到的微生物。因此证明有效的分离方法将为今后微生物药物的筛选和药用微生物菌种的保藏提供更丰富的来源。

基于微流控技术的微生物细胞梯度稀释分离方法

随着微流控分析技术的快速发展,集成化的微流控芯片在满足实验高通量的同时,还在微生物细胞分离领域呈现出独特的优势。本研究基于微流控技术,制备了以聚二甲基硅氧烷(PDMS)、玻片为材料的细菌细胞梯度稀释分离芯片。该芯片的核心是通过一系列复杂的梯度网络来实现对细菌悬液的连续稀释,最终被分离的细菌细胞进入通道末端的存储孔内。结果显示,该方法能分离出的最少细菌细胞数低于10个。此芯片平台操作简单、耗时短、成本低,为微生物单细胞研究提供了新的途径。

导致酱油胀袋微生物的分离与鉴定

春、夏两季是酱油胀袋的高发时期,导致酱油胀袋的原因大多数是由微生物引起的。文中利用高糖培养基、营养琼脂培养、MRS培养基、马铃薯蔗糖培养基来分离产自浙江绍兴地区的已胀袋酱油中的微生物。结果仅用营养琼脂培养基从样品中分离、纯化出了7株细菌,编号:k1、k2、k3、k4、k5、k6、k7;没有在胀袋酱油中分离到酵母菌和霉菌。经产气实验证实只有k2菌株能在酱油中产气,根据《伯杰氏细菌鉴定手册》对k2菌株的菌体和菌落形态特征、生理生化特征等进行系统分析,初步鉴定k2菌株为巨大芽孢杆菌。

口腔未培养微生物分离培养策略的研究进展

口腔微生物是人体微生物组的重要组成部分,其群落组成丰富且独特。现有研究显示,口腔微生物与龋病、牙周炎等口腔健康问题有直接的联系,因而具有重要的研究价值。随着高通量测序技术的发展,人们对口腔中未培养微生物多样性的认识不断加深,这进一步催生对微生物分离培养技术需求的增加。为此,本文将围绕口腔未培养微生物及其分离培养策略的研究进展,首先介绍口腔中未培养微生物的研究现状;其次分析口腔微生物分离培养中可能的限制因素;最后综述微生物分离培养技术发展及其在口腔未培养微生物研究中的应用。全文旨在为口腔未培养微生物的分离培养提供思路和技术参考。

臭豆腐卤水微生物群落及其接种发酵

对样品臭豆腐卤水中微生物分离,应用传统微生物鉴定、细菌16S r RNA鉴定,探索不同微生物种属组成结构对臭豆腐品质作用以及风味的影响。分离鉴定了臭豆腐卤水中的主要细菌为漫游球菌(Vagococcus carniphilus)、嗜冷杆菌属(Psychrobacter sp.)、沙克乳杆菌(Lactobacillus sakei)、地衣芽孢杆菌(Enterococcus avium)、鸟肠球菌(Enterococcus devriesei),并在无菌条件下采用纯菌种以及混合菌种直接进行豆腐发酵。单一菌种发酵比混合菌种发酵的臭卤所制得的臭豆腐总体感官评价结果偏低。除空白发酵结果以外,菌株St2(嗜冷杆菌)发酵的臭豆腐样品总体评价最差。菌株St5(鸟肠球菌)发酵所得的臭豆腐样品色泽较好,香气成分也较浓郁。

单细胞分选技术在微生物分离与培养中的应用与展望

自然界相当多的微生物是未培养的,对这些“微生物界暗物质”进行研究,对于研究微生物的进化过程,充分利用微生物资源具有重要意义。对未培养微生物的分离与培养已成为当前国际研究热点,本文对显微操作、荧光活化分选、微流控分选、光镊技术、激光诱导向前转移等可用于微生物分离与培养的技术原理、发展历程进行简单介绍,对比分析了每种分选技术的优点与不足,重点阐述了激光诱导向前转移技术应用于微生物分离的技术优势,并进一步对未来应用于未培养微生物的研究进行了初步展望。

土家豆豉中微生物的初步研究

本文对两种不同发酵类型的土家豆豉的微生物进行初步研究。结果表明:细菌型的土家豆豉以长杆菌、短杆菌杆菌属的细菌为主;霉菌型的土家豆豉有毛霉、根霉、曲霉和青霉四种类型,随着培养基和温度的不同而不同。