我国微生物限度检查方法验证研究概况(综述)

我国开展药品微生物限度检验始于1972年。《中国药典》1995年版正式收载了药品微生物限度检查法，但标准尚未载入药典。2000年版药典增收了以剂型载入的微生物限度标准，该标准正确有效地规范了药品生产检验和监督的程序，为国家药品监督部门的监督管理、药品检验工作提供了可靠的依据。然而2000年版药典未规定对含抑菌成分的药品进行处理，细菌在低稀释级不生长或少生长而高稀释级才生长的情况并不少见，尤其对于有抑菌作用的中成药，情况比较复杂。因此，2005年版药典规定，进行药品微生物限度检查时，应对所用方法进行验证，以确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，对于具有抑菌作用的品种，

多剂型外用制剂微生物限度方法的研究

目的 以60多种治疗皮肤病的医院外用制剂为基础,研究各种不同剂型外用制剂微生物限度检查的验证方法。方法 依据《中国药典》2020年版四部通则中非无菌产品微生物限度检查指导原则进行方法适用性试验。在加入试验菌方式上从最后加入试验菌改为在配制样品过程中,加在试验用供试液内,模拟样品已受到污染,使试验更接近真实,试验菌的回收率0.5~2.0。在制剂微生物检验验证过程中,需氧菌总数(the total number of aerobic bacteria,TAMC)、霉菌及酵母菌总数(the total number of mold and yeast,TYMC)采用平皿法、薄膜过滤法和中和法进行方法适用性试验,控制菌采用常规法、薄膜过滤法和中和法进行方法适应性试验。结果 根据试验重新建立了医院外用制剂产品的微生物限度的检验方法。各实验菌的回收结果均在0.5~2.0,控制菌检测结果可行。结论 根据《中国药典》2020年版要求,笔者对所列制剂的微生物检验方法进行了方法学验证试验。验证结果表明,该检验方法符合相关规定的要求。

接骨丹片的薄层色谱及微生物限度检查方法适用性实验研究

目的对接骨丹片的薄层色谱和微生物限度检查的方法进行适用性研究。方法采用薄层色谱法(TLC)鉴别接骨丹片中制马钱子和熟大黄;根据微生物限度检查法对接骨丹片的微生物限度进行研究。结果建立的TLC法能检出制马钱子和熟大黄,且斑点清晰,阴性无干扰;建立的微生物限度检查法,经过适用性实验验证,方法可行。结论建立的TLC法及微生物限度检查方法合理可行,可为接骨丹片的质量控制提供实验依据。

赤丹丸微生物限度检查方法适用性研究

目的建立医院制剂赤丹丸的微生物限度检查方法。方法根据四部通则1105-1107,2020年版《中国药典》的规定,采用常规法和稀释法计算赤丹丸中各个菌株的回收比,并对控制菌进行检查。结果赤丹丸有较强的抑菌性,当采用1∶100稀释法时,各试验菌株的回收比均在0.5~2范围内,常规法检出相应的控制菌。结论赤丹丸采用1∶100稀释法用于需氧菌总数、霉菌及酵母菌总数的计数,常规法用于控制菌的检查。

质量标准中微生物限度检查教学模式的探讨

药品微生物限度检查是质量标准中的重要检查项目,药品微生物检验是一门理论与实践并重的学科,是对药品进行质量控制和监督的重要手段。因此,探索和实践规范化的教学模式对于教学工作至关重要。本文从制定教学计划和培训内容出发,采用理论教学和实际操作有效结合、分阶段实操教学策略以及分组与集体教学相结合的方法,使学生在较短时间内掌握检验基本技能,从而开展教学工作。同时,本文探讨了在药品微生物检验教学中对实习学生的教学方式和改进措施,并以此为借鉴,为医院药品微生物检验教学提供新的思路。

基于虚拟仿真技术的微生物限度检查教学资源建设

针对中药饮片微生物限度检查实训教学中遇到的问题,以学生为中心,创设职业情境,设计开发虚拟仿真实训教学软件及配套数字化活页式实训手册。高质量的数字教学资源,能够增强学生学习体验感,引导学生积极探索与思考,提高学生创新能力。

复方冬凌草含片微生物限度检查方法学研究

目的建立适用于复方冬凌草含片的微生物限度检查方法,以保证其质量和安全性。这个方法要能测量需氧菌的数量、霉菌和酵母菌的数量,并且限制菌中的肠道埃希菌。方法根据《中华人民共和国药典(2020年版)》第四部分中通用规则1107的规定,本研究对该方法的适应性和回收效率进行了评估和测试。试验中,本研究采用常规法和稀释法,对复方冬凌草含片样品进行菌落计数。结果复方冬凌草含片具有显著的抑菌作用。利用标准方法进行测试,结果显示,复方冬凌草对各种细菌如青色链状真菌(pseudomonas aeruginosa)、枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)及白色念珠菌(candida albicans)等有良好的抑制作用。同时,对黑色发霉体与酿酒酵母也有较好的控制能力。然而通过降低浓度的方法检测时,无论是需要空气的微生物还是发酵类生物都呈现出了较低水平,即低于或接近于0.5的比例值上限。在控制菌检查中,采用常规法检出了阳性菌。结论成功地建立了一种适用于复方冬凌草含片微生物限度检查的稀释法。该方法能可靠地评估复方冬凌草含片的微生物质量,并为其合规生产提供了可行的检测方案。

复方丹参片微生物限度检查方法的建立

目的建立复方丹参片微生物限度检验方法。方法参照《中国药典》(2000版)、《药品微生物检验手册》和《中国药品检验标准操作规范》(2000版)收载的微生物限度检验方法,建立复方丹参片微生物限度检查方法。结果实验证明采用薄膜过滤法对复方丹参片进行微生物限度检查,能充分滤除药品中抑菌物质,有效检出该药品中污染存活的细菌;该方法的阳性对照菌的平均回收率为82.1%。结论建立了适用于复方丹参片微生物限度检验的薄膜过滤法,该法能有效地消除药品中抑菌物质的干扰,其检出率高。

微波灭菌对中药汤剂微生物限度的影响

目的考察不同微波灭菌参数对汤剂微生物限度的影响,以探讨其应用于汤剂灭菌的可行性。方法选取14组汤剂(普通方、含动物药方、含矿物药方、含后下药方,共四类)煎煮后密封包装,冷却至25℃后使用900W微波炉进行灭菌。以灭菌时间为控制条件分为两组:灭菌60s组与90s组,灭菌后室温储存,于第1,3,7,14,21,30天进行性状观察,并依据《中国药典》(2020版)进行微生物限度检测。结果第1、3天,灭菌后的14组汤剂均合格;第7天,灭菌60s、90s组合格汤剂分别为12组、13组;第14、21天两种灭菌时长下合格汤剂分别为10组、9组;第30天,灭菌60s、90s组合格汤剂分别为7组、8组。灭菌90s组需氧菌含量均显著低于灭菌60s(P<0.05),霉菌和酵母菌含量部分组显著低于灭菌60s组(P<0.05),其余组无显著性差异(P>0.05);相同煎煮、灭菌和储存条件下,不同类别汤剂的含菌量均无显著性差异(P>0.05)。结论经微波灭菌60s、90s置于室温储存30天后分别有50.0%、57.1%的汤剂微生物限度符合药典规定,其具体使用规律有待进一步探讨。

于氏解郁调肝散微生物限度检测方法考察

(目的)建立于氏解郁调肝散的微生物限度检测方法,加强于氏解郁调肝散的质量控制。(方法)依据2020版《中国药典》中非无菌制剂微生物限度检测法进行方法适用性考察。(结果)采用1∶1000稀释法测定需氧菌总数,采用1∶10稀释法测定霉菌和酵母菌总数,各实验菌回收率在0.5~2之间;三种控制菌大肠埃希菌、沙门菌、耐胆盐革兰阴性菌均可采用常规接种法,结果符合要求。(结论)研究建立的微生物限度检测方法,准确、重复性好,可用于于氏解郁调肝散的质量控制,为完善于氏解郁调肝散的质量标准提供了重要数据支持。

午时茶颗粒微生物限度检查方法的验证

按照《中华人民共和国药典》(2020年版四部)要求,采用平皿倾注法(1∶10,1∶20,1∶50,1∶100)和常规培养基体积直接接种法对午时茶颗粒进行微生物计数方法和控制菌检查方法适用性试验,通过计算3批次的试验菌回收比值筛选需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数计数方法.当采用平皿倾注法(1∶10)时,各试验菌回收比值均在0.5~2.0范围内.控制菌阳性对照组生长良好,经革兰氏染色显微镜检查和生化鉴定试验,符合试验菌形态学和生化特性.研究建立的方法准确可行,重现性好,可用于午时茶颗粒的微生物限度检查.

复方银唑散的含量测定及微生物限度检查方法学验证

目的建立反向高效液相色谱法同时测定复方银唑散中磺胺嘧啶银和酮康唑的含量并探讨其微生物限度检查方法。方法色谱柱为Agilent C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:0.07%三乙胺(A,冰醋酸调节pH至5.07)-甲醇(B),梯度洗脱:0~6 min,A80%;6~8 min,A80%~22%;8~21 min,A保持22%;21~22 min,A22%~80%,流速1.0 mL/min,检测波长:240 nm,柱温:30℃。采用培养基稀释法作为需氧菌总数、霉菌及酵母菌总数计数方法并按《中国药典》2020年版四部通则微生物限度检查法对控制菌检查法进行验证。结果磺胺嘧啶银在0.02964~0.06915 g/L浓度范围下与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),酮康唑在0.03054~0.07126 g/L浓度范围下与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9998),磺胺嘧啶银和酮康唑的平均回收率分别为101.5%(n=6,RSD=0.33%)和98.8%(n=6,RSD=0.65%)。采用培养基稀释法,各试验菌的回收率均在0.5~2.0。结论所建立的高效液相色谱法定量准确、专属性良好,可用于同时测定复方银唑散中磺胺嘧啶银和酮康唑的含量。采用培养基稀释法对复方银唑散进行微生物限度检查可行。

15种医院口腔抑菌制剂微生物限度检查方法的建立

目的建立15种医院口腔抑菌制剂的微生物限度检查方法。方法以醋酸氯己定口崩片、醋酸氯己定洗剂、复方替硝唑溶液、碘甘油、甲醛甲酚涂剂、硼酸甘油涂剂、人工唾液、脱敏糊剂、干髓糊剂、锌麝酚醛糊剂、牙周塞糊剂、甲硝唑膜、复方克林霉素膜、多聚甲醛新失活剂、多聚甲醛牙髓失活剂为样品(制剂1-15),按2020年版《中国药典(四部)》通则1105,1106,1107项下方法,采用平皿法、薄膜过滤法和培养基稀释法,对5种常见菌(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉)进行回收试验,并进行控制菌(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌)检查方法适用性试验。结果制剂1-5、9-11、14-15需氧菌总数检查均采用薄膜过滤法,其余制剂均采用平皿法;制剂1-3、6-8、12-13霉菌和酵母菌检查均采用平皿法,其余制剂均采用薄膜过滤法,试验菌回收比均在0.5~2.0范围内;控制菌检查,制剂1-3、5、9-11、14-15均采用薄膜过滤法,其余制剂均采用培养基稀释法,试验组相应阳性菌均能正常检出。结论所建立的方法适用于此15种医院口腔抑菌制剂的微生物限度检查。

基于机器学习的中药制剂中间体微生物限度快速预判研究

通过比较随机森林(RF)、支持向量机(SVM)、主成分分析-支持向量机(PCA-SVM)与卷积神经网络(CNN)的模型性能,获得了基于表面增强拉曼光谱(SERS)技术的微生物限度快速预判最优模型,为中药制剂中间体的微生物限度快速预判提供了新方法。首先合成Au@Ag@SiO_(2)复合纳米材料作为SERS增强基底,随后使用双层膜过滤法制备中药制剂中间体待测样本,并对样本抗菌活性进行考察。最后采集30批中药制剂中间体样本的SERS光谱,并分别建立RF、SVM、PCA-SVM与基于ResNet架构的CNN快速预判模型。结果表明,所建立的CNN模型的准确度、精确度、召回率均为100.0%,F1分数为1.0,受试者操作特征曲线(ROC)显示CNN模型对中药制剂中间体需氧菌总数(TAMC)、霉菌和酵母菌总数(TYMC)的快速预判能力均高于其他3种算法,能对待测样品微生物限度进行有效预判,对不合格样品进行有效风险预警,从而提高对中药生产过程中间体微生物的质量控制水平。

2种军队医院制剂微生物限度检查方法的建立

目的建立新肾炎胶囊和炎黄保肾胶囊2种军队医院制剂方便有效的微生物限度检查方法,并对该方法进行验证。方法按《中国药典》2020年版(四部)通则1105、1106检查法,采用中和法(中和剂为10 mol·L^(-1) NaOH)进行方法适用性试验,计算试验菌回收比值。结果采用中和剂10 mol·L^(-1) NaOH调节pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液的pH值为8.0,并结合培养基稀释法,可消除新肾炎胶囊和炎黄保肾胶囊的抑菌作用,使各试验菌回收比值均在0.5~2.0,符合《中国药典》要求。结论中和法(中和剂为10 mol·L^(-1) NaOH)可用于2种医院制剂的微生物限度检查。

散结粉微生物限度检查方法学研究

文章旨在构建散结粉的微生物限度检查方法,依据《中国药典》2020版四部通则1105、1106中的实验方法展开研究。当需氧菌总数的计数采用常规法(1∶10供试液,m/V),霉菌和酵母菌总数的计数采用稀释法(1∶50供试液,m/V)进行时,回收率为0.5~2.0,而当控制菌检查采用常规检查法进行时,阳性对照组生长良好,阴性对照组无菌落生长。由此可知,联合使用常规法和稀释法的微生物计数法可以有效消除散结粉中微生物的抑菌作用,有利于检出潜在污染微生物。

微生物限度检查能力验证组织及解读

目的通过组织非无菌药品微生物限度检查能力验证,掌握云南省药品生产企业和药检机构的检验检测能力,并通过对不满意结果的分析讨论,提高参加实验室该项目的检验检测能力和质量管理水平。方法根据中国合格评定国家认可委员会(CNAS)相关文件要求,定性项目以制备值阳性或阴性为指定值,计数项目以对数中位值作为指定值,采用稳健统计方法,Z值作为评定参数,4个项目全部为满意的,总结论为满意,反之则为不满意,仅部分项目满意的为部分满意。结果全省共152家实验室参加本次能力验证,其中116家满意,占76.31%;33家部分满意,占21.71%;3家不满意,占1.97%。按实验室性质统计药检机构满意率为88.23%;药品生产相关机构满意率为74.81%。结论参加实验室的非无菌药品微生物限度检查的检测能力较好,能够保证该项目的顺利开展和结果的准确、有效。少数实验室的检测能力和质量管理水平有待改进提高。

复方氟康唑乳膏微生物限度检查方法的建立

为了建立复方氟康唑乳膏的微生物限度检查方法,试验采用2020年版《中国兽药典(一部)》附录1105、1106和1107。以5种菌为试验菌,选择平皿法和薄膜过滤法进行微生物计数法方法适用性检查。以金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌为试验菌,采用培养基稀释法和薄膜膜过滤法进行控制菌方法适用性检查。结果表明:缓冲液中加入1%聚山梨酯80,并预热至40℃,制备1∶10供试品溶液,可使供试品均匀分散。微生物计数法:常规平皿法不能消除其抑菌活性,方法不成立,进一步采用薄膜过滤法,总冲洗量为800 mL,进行微生物计数时,5种菌的菌液回收比值均在0.5~2之间,方法符合要求。控制菌检查:常规培养基稀释法,培养基量增大至800 mL,药物加菌组没有检出对应的试验菌,进一步使用薄膜过滤法,总冲洗量为500 mL,供试液加菌组和菌液对照组均检出对应的试验菌。说明复方氟康唑乳膏具有较强的抑菌活性,进行微生物计数和控制菌检查时,供试液需采用薄膜过滤法消除其抑菌活性,按照2020年版《中国兽药典》规定,成功建立了该产品的微生物检查方法。

养胃膏的微生物限度检查方法适用性研究

目的建立医院制剂养胃膏的微生物限度检查方法并对建立的方法进行适用性验证。方法根据《中华人民共和国药典》2020版四部1105、1106和9202非无菌产品微生物限度检查指导原则,建立养胃膏的微生物限度检查方法并对建立的方法进行适用性验证。结果养胃膏采用培养基稀释法,制备1∶10供试液,接种量0.2 mL/平皿,平行5平皿,进行霉菌及酵母菌总数计数检查;制备1∶50供试液,接种量0.2 mL/平皿,平行5平皿,进行需氧菌总数计数检查;污染试验菌的回收比值均在0.5~2范围。大肠埃希菌采用1∶10供试液检查;沙门菌采用1∶5供试液检查;试验组和阳性菌液组在培养基中均检出试验菌。结论建立的养胃膏微生物限度检查方法具有良好的适用性,适用于养胃膏的微生物限度检查。

明胶空心胶囊的微生物限度检查方法适用性试验研究

目的:对明胶空心胶囊进行微生物限度检查方法适用性试验研究,为药品企业制订药用胶囊壳的质量控制验收标准以及胶囊生产企业建立明胶空心胶囊的微生物限度检查方法提供参考。方法:依据《中国药典》2020年版四部通则1105、1106,对30批明胶空心胶囊进行计数方法和控制菌检查方法的适用性试验。结果:需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数均采用平皿法,控制菌大肠埃希菌有28批采用常规法,2批采用培养基稀释法,控制菌沙门菌有27批采用常规法,3批采用培养基稀释法。有2批明胶空心胶囊对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门菌等细菌有着异常强的抑菌作用。结论:不同生厂厂家的明胶空心胶囊抑菌作用有一定差异,需进一步完善和规范明胶空心胶囊的微生物限度检查方法及其质量安全控制标准。