用微量凝集试验检疫家畜布氏杆菌病

用微量凝集试验检疫家畜布氏杆菌病王川庆，孙海峰，范庆高，李忠勇，王相根，熊书海，左新桐，侯玉泽，宋永军（河南农业大学畜牧兽医系，郑州４５０００２）目前，血清试管凝集反应仍是在布病检疫中应用最广的血清学方法之一。但是，因其采血量大、操作方法落后、反应时...

微量凝集试验检测鸡大肠杆菌抗体方法的建立及应用

建立了检测鸡大肠杆菌(E.coli)抗体的微量凝集试验法,所用抗原由制苗株制得。经方阵试验,抗原最适浓度为40亿菌/ml,反应最佳时间为4小时。攻毒试验表明凝集抗体效价在1:16时免疫鸡保护率耍达50%以上,且凝集抗体水平与保护力呈明显正相关。经E.coli多价油乳剂灭活苗免疫的青年鸡在免疫后42天平均抗体达7.25log2本法敏感性高、特异性强、染色抗原使结果判定更加客观和明显。为鸡大肠杆菌病的流行病学检查及免疫鸡群的抗体监测提供了条件。

微量凝集试验对鸡大肠杆菌O抗原血清型鉴定的研究及初步应用

为改进大肠杆菌血清型鉴定方法，用５株标准菌株在９６孔Ｕ型板上进行微量凝集试验，优选了反应及观察条件：每孔中加５０μＬ菌体抗原（浓度为１．５×１０９－２．０×１０９个菌／ｍＬ）和５０μＬＯ抗原单因子血清（稀释度从１／１０－１／８０）混合，于３７℃反应１．５－２ｈ，阳性结果可在黑色背景上清晰观察到片状凝集。试验各株均与原血清型一致。用此法对１７株来自山东某地的鸡大肠杆菌进行了血清型鉴定，结果Ｏ７８为５株，Ｏ３６５株，Ｏ１３１４株，Ｏ７０３株，与以前用常规方法对该地区菌型鉴定结果相符。

副猪嗜血杆菌新型微量凝集试验抗体检测方法的建立

为建立国内流行血清型副猪嗜血杆菌的新型微量凝集试验抗体检测方法(MAT),本研究以副猪嗜血杆菌4型、5型、12型和13型为抗原,分别对其MAT方法进行了最佳反应条件筛选、特异性、敏感性和重复性试验,以及疫苗免疫样品和临床样本检测。MAT试验结果显示,4型、5型、12型和13型凝集抗原的最佳反应浓度介于1.5×10~9 cfu/mL～2.0×10~9 cfu/mL,最佳反应温度37℃,最佳反应时间为6h～8h。4种型的MAT方法对猪巴氏杆菌病等6种细菌性疾病和猪瘟等5种病毒性疾病阳性血清的检测结果均为阴性,4种方法之间有轻微的交叉反应,但其抗体效价均不高于1∶4 (阴性临界值)。4种型的MAT方法比相应试管凝集方法的敏感性提高了2～4倍,重复性试验结果显示该方法检测副猪嗜血杆菌4种型变异系数均小于10%,重复性良好。利用该方法检测临床样品,并与国家标准套式PCR方法对比,结果显示二者阳性符合率为82.1%。疫苗免疫抗体检测结果显示,4种型的MAT方法均能检测到商品化疫苗免疫猪14 d的血清抗体,可用于疫苗免疫的抗体评价。对临床样品的检测结果显示,断奶仔猪、保育仔猪和经产母猪的总阳性率分别为12.3%、49.3%和69.8%,提示保育期仔猪的合群可能导致了猪群的大量感染。本研究为副猪嗜血杆菌病的疫苗抗体评价和流行病学监测提供了一种简便经济可行的方法。

微量凝集试验检测猪水肿病大肠杆菌抗体研究

作者建立了微量凝集试验检测猪水肿病大肠杆菌抗体方法,对试验反应条件进行选择和优化,抗原最适反应浓度为:染色菌泥与生理盐水之比为1:70～80,最佳反应温度为37℃,最佳反应时间为2～3 h.本方法快速、简便、经济、灵敏度高且特异性强.为猪水肿病的流行病学检查、疫苗研究及免疫猪群抗体监测提供可靠实用的检测技术.

奶牛布鲁氏菌病微量凝集试验诊断方法的建立

为探索操作简便、快速、实用的奶牛布病诊断方法,本研究建立了奶牛布鲁氏菌病(布病)诊断96孔V型板微量凝集方法,并优化了试验条件。结果显示,抗原的最佳稀释浓度为1∶20,反应最适温度为37℃,反应时间为24h;为验证本研究建立的微量凝集方法的准确性,对120份奶牛布病虎红平板凝集试验阳性血清样品进行微量法凝集和试管凝集试验,结果显示,微量法与虎红平板凝集试验的符合率为83.3%,试管法与虎红平板凝集试验符合率为80.0%。提示,微量凝集试验可以作为试管凝集试验的替代方法,应用于规模化奶牛场布病的诊断和检疫。

鸡大肠杆菌改良微量凝集试验抗原的制备及试验条件优化

本研究对微量凝集试验进行了改良,改进了抗原的制备方法,优选了检测鸡血清中大肠杆菌抗体的微量凝集试验的条件,经方阵试验,抗原最适浓度为70亿/ml,反应最适温度为37℃,最适反应时间为4～5h。结果表明改良后的微量凝集试验具有良好的敏感性和特异性,阳性结果和凝集图案清晰,易于观察。本试验具有敏感、特异、快速、简便、定性又定量的特点,便于推广应用。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌微量凝集试验方法的建立及初步应用

为建立一种快速检测动物源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法,本研究以MRSA耐药性决定蛋白PBP2a的抗血清为检测抗体,通过对抗原浓度及反应温度等进行优化,确定最佳的反应条件后,建立了快速检测MRSA的微量凝集试验方法,并进行了敏感性、特异性、重复性试验以及药敏纸片法比较试验。其中,微量凝集试验最低检出MRSA的浓度为40亿/mL,该方法对MRSA的凝集反应具有良好的特异性,试验结果具有较好的重复性。采用该检测方法对分离自鸡、猪、家兔及小鼠的75株金黄色葡萄球菌进行检测,检出MRSA株占57.3%,经过与药敏纸片法检测进行比较,符合率为92%。该方法快速、准确、简单易行,适于临床或基层应用。

微量凝集试验与酶联免疫吸附试验检测军团菌抗体的比较

目的比较微量凝集试验(MAT)与酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中嗜肺型军团菌(Legionella pneumophila,Lp)抗体的优缺点。方法用MAT法和ELISA法检测400份南京地区公共场所从业人员的血清标本中嗜肺军团菌抗体,采用描述流行病学方法进行分析。结果 MAT法检出阳性标本51份,阳性率为12.75%,ELISA法共检出阳性标本47份,总阳性率为11.75%,差异无统计学意义(χ2=0.186,P>0.05),结果高度一致(k=0.930,u=32.75)。ELISA法检出LpIgM阳性标本28份,阳性率为7.00%,与MAT法检测结果差异有统计学意义(χ2=7.430,P<0.05);ELISA法检出Lp-IgG阳性42份,阳性率为10.50%,与MAT法检测结果差异无统计学意义(χ2=0.986,P>0.05);ELISA法检出Lp-IgM和LpIgG阳性率差异无统计学意义(χ2=3.188,P>0.05)。结论 ELISA法快速、操作简便,与MAT法检测嗜肺军团菌抗体结果高度一致,可应用于大批量标本检测。

狐狸阴道加德纳氏菌病微量凝集试验血清学诊断方法研究

在虎红平板凝集抗原研制成功的基础上，又建立了微量凝集试验（Ｍｉｃｒｏ－ａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎｔｅｓｔ，ＭＡＴ）血清学诊断方法，对狐狸阴道加德纳氏菌（ＧａｒｄｎｅｒｅｌｌａｖａｇｉｎａｌｉｓｏｆＦｏｘ，ＧＶＦ）病进行血清抗体检测，试验结果表明，该抗原复重性好，阳性检出率为９４．３％，敏感度比虎红平板凝集抗原高５．１倍，两方法符合率为９５％，在确定的试验标准中，微量凝集抗原无交叉反应，是诊断狐狸阴道加德纳氏菌感染的又一血清学特异方法。

牛、羊布鲁氏菌病试管凝集试验与微量凝集试验检测方法的比较

血清学检测方法因其快速、安全、高效等特点被广泛应用于布鲁氏菌病的检测和诊断。本文通过对保存的226份牛、羊血清样品同时使用试管凝集法与微量凝集试验进行检测并比较分析其在诊断中的意义。结果显示,微量法与试管法两者的符合率为97.79%,两种检测方法无统计学差异。但微量法的阳性检出率要高于试管法,同时由于微量法具有操作简便、快捷及结果判定更为直观、简单等优点,因此,微量凝集试验更适宜在我国基层布鲁氏菌病大量样本监测、诊断中推广应用。

用微量凝集试验检测鸡弯杆菌性肝炎抗体

鸡弯杆菌性肝炎是由空肠弯杆菌所引起的青年鸡和产蛋鸡［１］的以肝脏肿大、出血变性、坏死［２，３］、发病率高、死亡率低为特征的一种细菌性传染病。在恶劣环境和其它疾病情况下往往引起鸡弯杆菌性肝炎的暴发与流行，致使小鸡发育迟缓，青年鸡开始迟延，成年鸡产蛋下降...

微量凝集试验用大肠杆菌O50、O60、O117、O131定型血清的研制

为进一步完善中国大肠杆菌菌体微量凝集试验定型血清库,改良微量凝集试验用大肠杆菌O抗原定型血清的制备工艺,本试验选取大肠杆菌O50、O60、O117、O131血清型进行定型血清制备方法的探究。首先用大肠杆菌不同血清型的参考菌株制备灭活抗原,而后多次免疫家兔以采血获得粗血清,用微量凝集试验的方法确定不同粗血清的交叉凝集素及凝集效价,再通过交叉凝集素吸收法结合血清稀释法消除非特异性凝集,最终研制出特异性良好的微量凝集试验用大肠杆菌O抗原定型血清。本研究确定了大肠杆菌O50、O60、O117、O131定型粗血清的主要交叉凝集素,最终成功研制出特异性良好的微量凝集试验用大肠杆菌O50、O60、O117、O131定型血清共4种,凝集效价在1∶256至1∶2048之间,其中微量凝集试验用大肠杆菌O50、O60定型血清无交叉凝集素,为单因子定型血清,微量凝集试验用大肠杆菌O117、O131定型血清存在1~2种非特异性的交叉凝集素O14和O107。本研究作为大肠杆菌O抗原定型血清制备工艺摸索过程中的重要部分,为完善中国大肠杆菌菌体微量凝集试验定型血清库,进一步改良微量凝集试验用大肠杆菌O抗原定型血清的制备方法提供了重要理论依据。

微量凝集试验检测鸡霍乱抗体的研究

试验优选了检测鸡血清中多杀性巴氏杆菌抗体的微量凝集试验条件,改进了抗原的制备方法。结果表明,改进后的微量凝集试验具有良好的敏感性和特异性,凝集图案清晰,易于观察;试验还证实了鸡血清中的抗体凝集效价与其对强毒菌株攻击的保护作用一致,初步认为,鸡霍乱抗体的免疫临界线为1:28。

应用微量凝集试验检测鸡抗猪大肠杆菌抗体方法的探索

本试验建立了用微量凝集试验检测鸡抗猪大肠杆菌抗体的方法。经方阵试验，抗原最适浓度为４０亿菌／ｍｌ，最佳反应温度为３７℃，３～４小时观察结果为宜。本方法具有较高的敏感性和特异性，可用于监测免疫猪大肠杆菌疫苗鸡群的抗体水平。

微量凝集试验诊断牛肺疫的研究 Ⅲ.扩大区域诊断试验与剖检符合率

应用微量凝集试验对浙江、甘肃和上海等地的奶牛、耕牛、黄牛和牦牛共计10303头进行扩大区域诊断试验的结果表明,微凝试验只出现2头阳性,补反出现7头阳性和9头疑似反应.从血检与剖检符合率看,在供剖检的10头牛当中,第一次血检时,有补反阳性牛4头和疑似牛2头,微凝阳性牛2头以及双阴性牛2头;经3个月后第二次血检全数阴转;经病原学和病理学检验皆为阴性结果。从而证明,微量凝集试验的特异性优于补体结合试验,适于牛肺疫普查应用.

用微量凝集试验检测布氏杆菌抗体的研究

本文报道了用微量凝集试验代替经典的试管法检测牛布氏杆菌抗体。在96孔“V”型血凝板上,将血清样本(25ul)进行倍比稀释,加入1:4(40亿个菌/ml)稀释的标准菌体抗原,混匀后,置37℃下反应4小时,即可观察结果。本法快速、灵敏、节省材料、简化操作程序,适应于群体大样本快速分析。试验表明:用本法检测样本的阴/阳临界效价为1:4,也即当血清凝集(++)价在1:8以上者即判为阳性。通过与试管法比较表明:二种方法对138份血清的阳性检出率毫无显著性差异(P>0.01,X^2=0.00)。

微量凝集试验诊断铁路运输育肥牛布氏杆菌病的探讨

应用试管凝集(TA)试验诊断牛布氏杆菌病,在国内外仍然是一项现行法定的血清学诊断方法。但由于此法操作烦琐,且有使用诊断液量大,反应时间长等缺陷,常给检疫工作带来某些不便。为此,我们开展了微量凝集(MA)试验诊断牛布氏杆菌病方法的探讨。