膀胱癌组织微RNA-212、微RNA-137、微RNA-200表达与临床病理特征的相关性及预测经尿道膀胱肿瘤切除术后复发的效能研究

目的 探讨膀胱癌组织微RNA-212(miRNA-212)、微RNA-137(miRNA-137)、微RNA-200(miRNA-200)表达与临床病理特征的相关性及预测经尿道膀胱肿瘤切除(TURBT)术后复发的效能。方法 选取2017年6月至2021年6月河北燕达医院100例膀胱癌病人,比较癌组织和癌旁组织及不同病理特征病人miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200表达,并根据术后复发情况分为复发组、未复发组。比较两组miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200表达,采用受试者操作特征(ROC)曲线分析miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200预测复发的价值,比较不同miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200表达水平病人复发率。结果 癌组织miRNA-212为2.03±0.56低于癌旁组织4.52±1.18(P<0.05),癌组织miRNA-137、miRNA-200表达分别为2.69±0.45、24.56±7.39,高于癌旁组织的1.28±0.30、7.33±2.21(P<0.05);随着组织学分级、TNM分期递增,miRNA-212表达逐渐降低,miRNA-137、miRNA-200表达逐渐升高(P<0.05);肌层浸润性膀胱癌病人miRNA-212低于非肌层浸润性膀胱癌,miRNA-137、miRNA-200高于非肌层浸润性膀胱癌(P<0.05);复发组miRNA-212(1.73±0.39)低于未复发组(2.28±0.44)(P<0.05),复发组miRNA-137、miRNA-200分别为3.06±0.72、37.96±12.18,高于未复发组2.35±0.40、22.86±7.50(P<0.05);miRNA-212高水平病人复发率低于低水平病人,miRNA-137、miRNA-200高水平病人复发率高于低水平病人(P<0.05)。结论 膀胱癌组织miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200表达与临床病理特征相关,联合检测对TURBT后复发具有良好的预测能力,可作为预测术后复发的一种方案。

微RNA-200家族对程序性死亡配体1的调控及其在非小细胞肺癌中的临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)免疫检查点分子程序性死亡配体1(PD-L1)的表达及其与miRNA-200家族之间的调控关系,阐明PD-L1在NSCLC中的临床意义及调控机制。方法选取138例NSCLC患者癌组织及配对的癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色检测PD-L1表达,qRT-PCR检测miRNA-200家族(miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c、miRNA-429、miRNA-141)的表达水平。培养肺癌A549细胞,通过转染miRNA-200家族5个miRNA模拟物使其过表达,采用蛋白质印迹法检测miRNA-200家族过表达对PD-L1表达的影响,CCK-8实验检测miRNA-200家族过表达对A549细胞增殖活性的影响,荧光素酶报告基因实验验证miRNA-200家族对PD-L1的调控作用。结果138例NSCLC患者癌组织PD-L1总阳性率为58.7%(81/138),高于癌旁组织(3.6%,5/138),差异有统计学意义(P<0.05);PD-L1表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型无关,而与淋巴结转移、脉管侵犯、临床TNM分期有关(P均<0.05)。NSCLC癌组织中miRNA-200家族表达水平均低于癌旁组织(P均<0.01),且PD-L1表达阳性的患者具有更低水平的miRNA-200家族表达水平(P均<0.01)。A549细胞过表达miRNA-200家族能下调PD-L1的表达(P均<0.01),且抑制癌细胞增殖活性(P均<0.01)。荧光素酶报告基因实验证实miRNA-200家族直接负调控PD-L1的表达(P均<0.01)。结论PD-L1高表达预示NSCLC患者预后不良。PD-L1是miRNA-200家族的靶基因,miRNA-200家族表达水平低可能是NSCLC患者高表达PD-L1的重要原因。

微RNA-200b-3p/SOX2基因信号轴调控非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭和迁移的体外研究

目的研究微RNA(miR)-200b-3p对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和潜在的分子机制。方法以人正常支气管上皮细胞HBE为对照,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌细胞H1299、A549和PC14中SOX2 mRNA和miR-200b-3p的表达,免疫印迹检测A549细胞中那个SOX2、Cyclin D1、p21、MMP-2和E-cadherin蛋白表达水平,MTT法检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证miR-200b-3p与SOX2的调控关系。结果与对照组相比,在肺癌细胞H1299、A549和PC14中SOX2的mRNA和蛋白表达量均显著升高(P<0.05),miR-200b-3p表达量均显著下调(P<0.05);过表达miR-200b-3p可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭;miR-200b-3p靶向负调控SOX2的表达;沉默SOX2可抑制肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭;过表达SOX2逆转了过表达miR-200b-3p对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论在体外miR-200b-3p/SOX2信号轴可调控非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭,miR-200b-3p是非小细胞肺癌的潜在分子靶点。

miR-200a、AFP-L3和NLR在接受肝动脉插管化疗栓塞术治疗的肝癌患者中的临床意义及预后的相关性

目的探究微RNA-200a(miR-200a)、甲胎蛋白异质体(AFP-L3)及中性粒细胞计数与淋巴细胞计数比值(NLR)在行肝动脉插管化疗栓塞术(TACE)治疗的肝癌患者的临床意义与预后的相关性。方法前瞻性纳入2020年1月至2021年1月在广州医科大学附属中医医院行TACE治疗的肝癌患者110例作为研究组,另按2∶1随机抽选同期接受健康体检的健康志愿者55名作为对照组。比较两组间的miR-200a、AFP-L3、NLR水平,比较不同临床特征患者的miR-200a、AFP-L3和NLR水平差异。并对研究组随访(随访至2023年6月止),根据其生存预后情况分为预后不良组(n=45)和预后良好组(n=65),对预后不良组和预后良好组的miR-200a、AFP-L3和NLR水平进行分析。并采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清miR-200a、AFP-L3和NLR水平对患者预后不良的预测效能。结果研究组的血清miR-200a相对表达水平为1.73±0.12,低于对照组(4.88±0.32),AFP-L3和NLR水平分别为(18.33±3.35)%、2.44±0.54,均高于对照组[(3.66±1.12)%、1.55±0.36],差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组不同性别患者血清miR-200a、AFP-L3和NLR水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);TNM分期Ⅳ期、低分化、肿瘤直径≥5 cm、肝硬化患者中血清miR-200a相对表达水平均显著低于TNM分期Ⅲ期、高分化、肿瘤直径<5 cm、无肝硬化患者,而TNM分期Ⅳ期、低分化、肿瘤直径≥5 cm、肝硬化患者中血清AFP-L3和NLR水平均显著高于TNM分期Ⅲ期、高分化、肿瘤直径<5 cm、无肝硬化患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。预后不良组患者的血清miR-200a为1.35±0.21,低于预后良好组(1.99±0.36),AFP-L3和NLR水平分别为(24.21±2.98)%、3.23±0.54,均高于预后良好组[(14.26±3.11)%、1.89±0.45],差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析显示,miR-200a、AFP-L3和NLR水平对患者预后不良的预测价值较高,其AUC值分别为0.796、0.791、0.798,联合应用预测其预后不良的AUC值为0.815,高于各指标单独预测。结论miR-200a、AFP-L3和NLR水平在行TACE治疗的肝癌患者中异常表达,并与肝癌的发生、发展密切相关;miR-200a、AFP-L3和NLR水平对肝癌预后不良的预测价值较高,各指标联合应用能够更准确地预测患者的预后情况,可作为预后的预测指标应用于临床。

LncRNA MALAT1调控miR-200b-3p/HK2对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及糖酵解的影响

目的:长链非编码RNAs(long non-coding RNAs,lncRNAs)参与多种癌症进展,但lncRNAs肺腺癌转移相关转录子1(metastasis associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的生物学作用尚不清楚。本研究探讨lncRNA MALAT1调控微RNA(microRNA,miR)-200b-3p/己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)对NPC细胞增殖、侵袭、迁移及糖酵解的影响。方法:将NPC细胞系CNE-2分为对照组、小干扰(si)-阴性对照(negative control,NC)组、si-MALAT1组、si-MALAT1+抑制剂(inhibitor)-NC组、si-MALAT1+miR-200b-3p inhibitor组,real-time PCR检测各组细胞MALAT1、miR-200b-3p表达;细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)、流式细胞术、蛋白质印迹法和分光光度法分别检测细胞增殖、凋亡、HK2蛋白表达及糖代谢水平;双荧光素酶实验验证MALAT1、miR-200b-3p和HK2的关系。结果:与对照组、si-NC组比较,si-MALAT1组CNE-2细胞中miR-200b-3p表达升高、MALAT1、HK2表达降低,细胞增殖能力降低,细胞凋亡升高,葡萄糖消耗、乳酸生成均降低(均P<0.05);与si-MALAT1组、si-MALAT1+inhibitor-NC组比较,si-MALAT1+miR-200b-3p inhibitor组miR-200b-3p表达降低,MALAT1、HK2表达升高,细胞增殖能力升高、细胞凋亡降低,葡萄糖消耗、乳酸生成均升高(均P<0.05)。MALAT1与miR-200b-3p、miR-200b-3p与HK2之间存在靶向调控关系。结论:沉默表达MALAT1可能通过上调miR-200b-3p来下调HK2表达,从而抑制CNE-2细胞增殖、迁移与侵袭及其糖酵解水平,其有望成为NPC治疗的潜在靶点。

紫杉醇联合miR-200b对胃腺癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的影响

目的体外观察紫杉醇联合应用miR-200b模拟物(miR-200b mimics)对抑制胃癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的影响。方法分别单独应用miR-200b转染细胞(200b组)及50nmol/L紫杉醇单独处理胃癌SGC-7901细胞(紫杉醇组),并联合应用上述两者(联合组),同时设转染无义序列组和对照组。通过流式细胞技术检测细胞的凋亡水平和周期分布情况,克隆形成实验检测细胞的增殖能力,Transwell侵袭实验和细胞划痕实验观测细胞的侵袭迁移能力,Western-blot检测E2F3蛋白的表达水平。结果与单药组相比,联合组早期凋亡率显著升高;克隆形成率显著降低,穿过Transwell小室的细胞数目显著减少;划痕48h后的细胞迁移能力明显降低;E2F3蛋白在200b组及联合组中表达水平降低(均P<0.001)。联合组阻滞于G2/M期细胞的比例高于200b组、无义序列组及对照组,但和紫杉醇组比较差异无统计学意义。结论 miR-200b可能通过降低E2F3表达增强紫杉醇对胃癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的抑制作用。

甲基化调节miR-200b的表达及其对胃癌MGC-803细胞增殖侵袭能力的影响

目的体外研究基因mi R-200b发生甲基化的不同程度及其表达量的差异对胃癌细胞MGC-803增殖、侵袭、凋亡及对上皮间质转化的影响。方法以正常胃黏膜上皮细胞GES-1、胃癌细胞MGC-803为研究对象,提取细胞总RNA,逆转录后进行实时荧光定量PCR检测2种细胞系中mi R-200b的表达量;亚硫酸氢钠修饰PCR(BSP)法检测mi R-200b启动子区甲基化水平。用不同浓度5-氮杂胞苷(5′-Aza-Cd R)药物处理MGC-803细胞72 h后,同法检测mi R-200b的表达量及启动子区甲基化水平变化。根据上述实验结果选择合适的药物作用浓度和时间即(10μmol/L,72 h)作为处理组。通过Transwell侵袭实验观测细胞侵袭能力;流式细胞技术检测细胞周期及凋亡的分布情况;Western-blot检测上皮间质转化(EMT)相关指标E-cadherin、N-cadherin、ZEB1、Slug、基质金属蛋白酶(MMP)9等的表达水平。结果 mi R-200b在GES-1中表达量较MGC-803高(P=0.022)。启动子区甲基化水平则与之相反(P=0.034)。药物不同浓度作用后的MGC-803细胞系mi R-200b表达量有随浓度升高而升高的趋势,作用浓度为10μmol/L时mi R-200b启动子区甲基化水平较对照组低(P=0.043)。与对照组相比,处理组细胞晚期凋亡数增多;G0/G1期细胞数显著增多,S期显著减少;穿过Transwell小室细胞数显著减少;Western-blot实验表明E-cad-herin表达量升高,N-cadherin、ZEB1、Slug、MMP9表达量降低。结论 mi R-200b启动子区甲基化程度的不同可以影响其表达量,而mi R-200b表达量的异常又与胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭能力密切相关。

miR-200a与肝癌发生发展关系的研究进展

微RNA(miR)-200a为miR-200家族的主要成员之一,其在肝癌中低表达,在肝癌的发生、发展中发挥关键作用;同时,其在肝癌的早期诊断、预后判断等方面的临床应用价值也得到了证实。目前对miR-200a与肝癌关系的研究取得了一定进展,但对其生物学功能的相关研究仍不足,其相应的调控机制同样需要深入研究。该文就miR-200a在肝癌中的生物学功能相关研究进展作一综述,以期为进一步探索肝癌诊断和治疗新途径提供依据。

miR-200c在CIK细胞诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对胃癌细胞凋亡的影响,探讨微RNA-200c(miR-200c)在此过程中的作用。方法实时荧光定量RT-PCR检测胃癌细胞(MKN-45、BGC-803)miR-200c表达,流式细胞术检测胃癌细胞凋亡。构建包含miR-200c作用位点的psiCHECK2-FAP-1 3’-UTR,转染胃癌细胞,双荧光素酶报告基因试剂盒检测胃癌细胞Fas相关磷酸酯酶-1(FAP-1)荧光素酶活性。结果 CIK细胞促进MKN-45细胞miR-200c表达[(2.10±0.25)倍,P<0.05]及凋亡(P<0.01),而miR-200c inhibitor能够拮抗此过程(P<0.05)。另外,miR-200c mimics诱导胃癌细胞凋亡(P<0.05),BGC-803细胞也发现相似趋势。miR-200c直接作用于FAP-1基因3’-UTR区,且CIK细胞降低胃癌细胞荧光素酶活性[MKN-45细胞:(49.67±2.36)%,P<0.01;BGC-803细胞:(43.86±4.41)%,P<0.01]。结论 CIK细胞通过上调miR-200c促进胃癌细胞凋亡,为CIK细胞治疗胃癌提供新的数据。